UNIVERSIDAD PEDRO RUIZ GALLOMICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS I
MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS I
UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUZ GALLO LAMBAYEQUE Facultad de
Ciencias Biolgicas
PRACTICA N 08 NUMERACIN, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE
Staphylococcus aureus
DOCENTE: Dra. Graciela Albino CornejoALUMNO:Tarrillo Dvila,
Miguel ngel
Lambayeque, Ciclo 2015 I
INTRODUCCINDesde su descubrimiento por el mdico Alexander Ogston
en 1880, Staphylococcus aureus es considerado un patgeno con gran
potencial para causar mltiples infecciones en el humano y en los
animales. S. aureus es la especie tipo del grupo, considerada la ms
virulenta, responsable de un amplio espectro de enfermedades, que
van desde infecciones de la piel y tejidos blandos hasta
infecciones graves que amenazan con la vida. El impacto de las
cepas de S. aureus sobre la salud es la resistencia que puede
presentar a mltiples antibiticos, sobre todo a la meticilina. A
travs de los aos se ha incrementado la tasa de morbilidad y
mortalidad a pesar del gran nmero de antibiticos disponibles que
existen. S. aureus forma parte de la flora normal del humano, entre
25 y 50% de la poblacin sana est colonizada por esta bacteria,
constituyendo un riesgo por su diseminacin.Una de las
intoxicaciones alimentarias que se presentan con mayor frecuencia
es la originada por la ingestin de la enterotoxina que se forma en
los alimentos cuando en los mismos se multiplica ciertas cepas de
Staphylococcusaureus. La toxina recibe el nombre de enterotoxina
porque produce gastroenteritis o inflamacin de la mucosa que
reviste el tracto gastrointestinal.Se trata de un estafilococ
tpico, que se presenta en acmulos parecidos a los racimos de uvas,
en parejas o en forma de cadenas cortas.Para el recuento de
Staphylococcusaureus que sea coagulasa positiva, se han propiciado
diversos medios especficos. Estos medios difieren especialmente en
los agentes selectivos que contienen entre los que destacan el
selenito potsico, el cloruro de litio, azida sdica y lisina y
Polimixina B; aunque tambin se utilizan concentraciones elevadas de
NaCl.Los fundamentos para realizar el recuento de S. aureus en los
alimentos son: Analisis de alimentos sospechosos de haber producido
intoxicacin alimentaria por presencia de S. aureuscoagulasa
positiva. El riesgo en que el alimento sospechoso puede producir
intoxicacin alimentaria se mantiene por condiciones que permitan la
produccin y formacin de toxinas. Para demostrar que ha tenido lugar
una contaminacin peligrosa posterior a la elaboracin de
alimentos.OBJETIVOS Realizar el aislamiento y la identificacin de
Staphyloccus aureus en muestras de queso. Realizar el recuento de
colonias de Staphyloccus aureus. Confirmar la presencia y
determinar la calidad higinica del alimento.
MARCO TEORICOStaphylococcus aureus es un buen indicador de los
mtodos de limpieza y desinfeccin utilizados en las industrias y su
presencia en alimentos no es adecuado y su presencia puede implicar
intoxicacin alimentaria aunque es necesaria la demostracin de la
enterotoxina.Los medios a base de yema de huevo S. aureus utiliza
la Lipovitelina, manifestando la aparicin de zonas aclaradas
parcialmente de un polvo blanco que procede de la formacin de sales
de calcio y magnesio, adems de los cidos grasos liberados.
Prueba de coagulasa:
El plasma citratado de conejo (o humano) se mezcla con un
volumen igual de caldo de cultivo o colonias en crecimiento sobre
agar y se incuba a 37 C. Se incluye como control un tubo de plasma
mezclado con caldo estril. Si se forma con cogulos en 1 a 4 horas
la prueba es positiva.Los estafilococos coagulasa positivo se
consideran patognicos para los humanos, no obstante los
estafilococos positivos de los perros (S. intermedius) muy pocas
veces causan enfermedades en humanos.Los estafilococos son capaces
de crecer en presencia de cloruro de sodio al 7.5 por 100, que
inhibe muchas bacterias, y se han usado medios selectivos que
contienen sal junto con manitol, y a veces rojo de fenol como
indicador cido-bsico, para aislar estafilococos de muestras muy
contaminadas con otras bacterias.Schalm (1948) ha comprobado que
las cepas estafiloccicas toxgeno coagulasa positiva producen
reacciones tpicas en al prueba de Hotis con muetras de leche. Estos
grmenes producen colonias adherentes verdes, pardo-verdosas,
marrones o rojizas, con centros blancos, tras la incubacin de la
leche durante 16 a 20 horas. Despus de nueva incubacin (40 horas)
se digiere la leche.MATERIALESMuestra: Queso. Materiales de
laboratorio: Frasco papilla estril Gradilla Mechero Tubos de
dilucin Placas Medios de cultivo: Agar Baird Parker Agar
Vogel-Johnson Agar yema de huevo azida Agar DNasa. Caldo
triptosaDiluyente: Agua peptonadaHuevo crudoPROCEDIMIENTO1.
DilucionesPesar 3 gr de la muestra (queso fresco) y agregar 27 mL
del diluyente (agua peptonada + 2% de citrato de sodio) y
homogenizar. Esta ser la dilucin 10-1. Diluir hasta 10-3.
2. SiembraCon ayuda de una esptula de Drigalsky, sembrar en
superficie en Agar Baird Parker 0.1 mL (2 placas porcada
dilucin).
Incubar a 35 37C por 24 48 horas.3. LecturaObservar colonias
negras, medianas, brillantes y con halo.4. Identificacin Tincin
Gram Prueba de Coagulasa Prueba de TermonucleasaRESULTADOSSiembra
por superficie en Agar Baird Parker
Colonias de un promedio de 2mm de dimetro, convexas, brillantes,
reductoras de telurito (centro negro) y presentan un halo.
Tincin Gram
Cocos gram positivos aislados.
CONCLUSIONES No se logr el aislamiento de Staphylococcus aureus
en queso fresco. Se concluy que el alimento es de buena calidad
higinica, por que se el alimento es apto para el consumo
humano.
CUESTIONARIO1. Cul es el fundamento de la Prueba de
Termonucleasa?La deteccin de la desoxirribonucleasa termoestable
estafiloccica (termonucleasa) en los alimentos, se utiliza como una
prueba indirecta de la presencia de grandes cantidades de
Staphylococcusaureus en los alimentos, as como de la posible
formacin de enterotoxina estafiloccica. La produccin de esta enzima
se inhibe en anaerobiosis y se estimula por la presencia de oxgeno,
requiere iones calcio para su actividad enzimtica, posee un pH
ptimo de 8,6 y se precipita de cultivos fluidos con sulfato de
amonio. Su termoestabilidad (resiste temperatura de 130 C por 16,6
min.) es la nica asociacin con el crecimiento de S.aureus. Esta
relacin ha motivado el desarrollo de diferentes mtodos para
detectar esta enzima en el alimento y utilizarla como pesquisaje en
los alimentos susceptibles a la contaminacin de S. aureus. El azul
de toluidina (0.1 M) presente en el medio vira a rosa por accin del
pH formado por la enzima endonucleasas.2. Fundamento de la Prueba
de Coagulasa.La cual es una enzima producida por la mayora de los
Staphylococcus presentes en infecciones producidas por este
microorganismo, esta enzima es termoestable y se presenta como
cierto nmero de determinantes antignicos, varios de los cuales
pueden ser producidos por una misma cepa
staphylococica.Staphylococcus aureus posee dos tipos de
coagulasa:a) Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping
factor" que est unida a la pared celular. Esta acta directamente
sobre el fibringeno provocando la formacin de cogulos o grumos
cuando se mezcla una suspensin bacteriana con plasma citratado
(test en lmina).b) Una exocoagulasa o coagulasa libre que acta
mediante la activacin de un factor (CRF), formndose un complejo
coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibringeno producindose un
cogulo de fibrina (test en tubo).3. Fundamente la formacin de halo
en el agar Baird Parker
La yema de huevo empleada en el medio sirve para evidenciar la
accin bacteriana sobre la lecitina y sobre la lipovitelina
(lipoprotena) y es responsable de la opacidad del medio. Cuando los
estafilococos utilizan la lipovitelina reducen el tamao de la
molcula, le restan opacidad al medio, por lo que quedan reas claras
bajo y alrededor de las colonias. El precipitado opaco se debe a la
formacin de sales de calcio y magnesio de los cidos grasos
liberados cuando acta la lecitina de la yema de huevo, accin que se
manifiesta solo despus de 24 horas y que podra estar en algunas
cepas de S. aureus.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Koneman Diagnstico Microbiolgico 6ta Edicion Paranmerica.
Rodrguez E. (2005)Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de
Laboratorio. Universidad de Costa Rica.
REFERENCIAS LINKOGRAFICAS
http://www.britanialab.com/productos/253_hoja_tecnica_es.pdf
http://www.minag.gob.pe/portal/download/pdf/pre-publicaciones/2013/reg-leche-prod-lacteos.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U3c_PruebasBioquimicas_17461.PDF