Uji Teratogenik

11

Uji TeratogenikUji Teratogenik

Untuk memprediksi apakah suatu Untuk memprediksi apakah suatu senyawa menimbulkan cacat bawaan senyawa menimbulkan cacat bawaan pada manusiapada manusia

22

Tragedi talidomid 1961Tragedi talidomid 1961

Senyawa kimia dapat menimbulkan efek teratogenik Senyawa kimia dapat menimbulkan efek teratogenik pada hewan cobapada hewan coba

Seb. 1961 senyawa kimia baru tdk secara rutin Seb. 1961 senyawa kimia baru tdk secara rutin dilakukan pemeriksaan teratogenik (bagian dari dilakukan pemeriksaan teratogenik (bagian dari evaluasi keamanan)evaluasi keamanan)

33

Hewan coba yg digunakan :Hewan coba yg digunakan : Dianjurkan pada minimal 2 spesies bintang. Dianjurkan pada minimal 2 spesies bintang.

Kebanyakan tikus atau mencit, dan kelinciKebanyakan tikus atau mencit, dan kelinci

Pilihan strain , sedapatnya strain bebas dr malformasi Pilihan strain , sedapatnya strain bebas dr malformasi spontanspontan

Usia, BB hewan kurang lebih samaUsia, BB hewan kurang lebih sama

Ditempatkan pd kondisi lingkungan yg baik, Ditempatkan pd kondisi lingkungan yg baik, Panas, cahaya, kegaduhan seminimum mgkPanas, cahaya, kegaduhan seminimum mgk

Waktu, cara pemberian , lama paparan obat penting Waktu, cara pemberian , lama paparan obat penting dlm menentukan efek teratogenik pd hewan cobadlm menentukan efek teratogenik pd hewan coba

44

Makanan yg sama.Makanan yg sama.

Biasanya digunakan tiga level dosisBiasanya digunakan tiga level dosis

Dosis tinggi : toksik, tetapi tdk mematikan pd induk Dosis tinggi : toksik, tetapi tdk mematikan pd induk

Dosis rendah memberikan efek klinik Dosis rendah memberikan efek klinik

Dosis intermediate diatara dua dosis lainnyaDosis intermediate diatara dua dosis lainnya

Cara pemberian obat pada hewan coba sama spt Cara pemberian obat pada hewan coba sama spt penggunaannya di klinikpenggunaannya di klinik

Bila oral melalui sonde lambung. Bila oral melalui sonde lambung.

55

Senyawa diberikan pada hari ke 6 -15 kehamilan Senyawa diberikan pada hari ke 6 -15 kehamilan pada tikus dan mencit,pada kelinci hari ke 6-18pada tikus dan mencit,pada kelinci hari ke 6-18

Jumlah hewan coba: pada rodent sekurangnya 20 Jumlah hewan coba: pada rodent sekurangnya 20 ekor betina hamil, pada non-rodent 8-10 betina hamil ekor betina hamil, pada non-rodent 8-10 betina hamil per kelompokper kelompok

Hewan coba dikandangkan masingHewan coba dikandangkan masing

Hewan coba betina dan jantan dikandangkan Hewan coba betina dan jantan dikandangkan bersama hanya utk waktu singkat (1 hari) pd saat bersama hanya utk waktu singkat (1 hari) pd saat tikus/mencit masa proestrus/estrustikus/mencit masa proestrus/estrus

waktu mating perlu ditentukan untuk waktu mating perlu ditentukan untuk menentukan permulaan kehamilanmenentukan permulaan kehamilan

Kopulasi diketahui dg adanya vaginal plug Kopulasi diketahui dg adanya vaginal plug dan sperma pada vaginal smear dan sperma pada vaginal smear

66

Hewan coba dieperiksa tiap hari,Hewan coba dieperiksa tiap hari,

BB ditimbang secara rutin, tiap hari selama BB ditimbang secara rutin, tiap hari selama kehamilankehamilan

Careful handlingCareful handling

Perdarahan per vagina mungkin berhubungan Perdarahan per vagina mungkin berhubungan dg resorpsi, aborsidg resorpsi, aborsi

77

88

Kehamilan harus diakhiri tdk lebih dari satu hari Kehamilan harus diakhiri tdk lebih dari satu hari sebelum perkiraan melahirkansebelum perkiraan melahirkan

Dilakukan sectio caesaria:Dilakukan sectio caesaria: pd mencit hari ke 19, tikus hari ke 21, kelinci hari ke pd mencit hari ke 19, tikus hari ke 21, kelinci hari ke

2929

Induk dimatikan dg eter, fraktur cervical, atau Induk dimatikan dg eter, fraktur cervical, atau suntikan iv magnesium sulfat jenuhsuntikan iv magnesium sulfat jenuh

99

Dihitung dan dicatat jumlah corpus luteum jumlah Dihitung dan dicatat jumlah corpus luteum jumlah fetus hidup, dan resorpsifetus hidup, dan resorpsi

Masing2 fetus ditimbangMasing2 fetus ditimbang

Semua fetus diperiksa utk Semua fetus diperiksa utk malformasi externalmalformasi external

Fetus ditempatkan pada alkohol 70 % utk Fetus ditempatkan pada alkohol 70 % utk pemeriksaan tulang, dan pada cairan Bouin’s utk pemeriksaan tulang, dan pada cairan Bouin’s utk pemeriksaan visceral (selang-seling)pemeriksaan visceral (selang-seling)

Tiap botol diberi nomerTiap botol diberi nomer

1010

Pemeriksaan visceralPemeriksaan visceral

Tikus biasanya dibiarkan selama 2 minggu pd cairan Tikus biasanya dibiarkan selama 2 minggu pd cairan Bouin’s sebelum diperiksaBouin’s sebelum diperiksa

Setelah fetus diperiksa kembali utk malformasi eksternal Setelah fetus diperiksa kembali utk malformasi eksternal dilakukan potongan2 (Freehand,razor-blade sections) dilakukan potongan2 (Freehand,razor-blade sections) dilakukan menggunakan tehnik Wilson (1965).dilakukan menggunakan tehnik Wilson (1965).

Potongan kmd dperiksa dibawah mikroskop utk melihat Potongan kmd dperiksa dibawah mikroskop utk melihat malformasi.malformasi.

Bila perlu dilakukan pemeriksaan histologisBila perlu dilakukan pemeriksaan histologis

1111

Pemeriksaan tulangPemeriksaan tulang

TikusTikus Setelah 2 hari pada alkohol 70 % dilakukan incisi Setelah 2 hari pada alkohol 70 % dilakukan incisi

kecil pada dinding abdomen lalu dimasukkan kecil pada dinding abdomen lalu dimasukkan kembali ke alkohol70 % selama 3 hari. kembali ke alkohol70 % selama 3 hari.

Selanjutnya visceral fetus dikeluarkan diperiksa Selanjutnya visceral fetus dikeluarkan diperiksa abnormalitas visceral . abnormalitas visceral .

Fetus dimasukkan kembali ke alkohol sampai Fetus dimasukkan kembali ke alkohol sampai keesokan harinya dan semalam dalam acetonkeesokan harinya dan semalam dalam aceton

Selanjutnya ditempatkan pada potassium Selanjutnya ditempatkan pada potassium hydroxide/alizarin solution selama 2 hari, lalu hydroxide/alizarin solution selama 2 hari, lalu dicuci dg air dan dibersihkan dg campuran dicuci dg air dan dibersihkan dg campuran ethanol, glycerol dan benzyl alcohol selama 2 ethanol, glycerol dan benzyl alcohol selama 2 harihari

Lalu dipindahkan pd alkohol 70 % utk Lalu dipindahkan pd alkohol 70 % utk pemeriksaanpemeriksaan

Pd beberapa lab utk pemeriksaan tulang rutin Pd beberapa lab utk pemeriksaan tulang rutin dgn X ray, alizarin hanya digunakan bila hasil dgn X ray, alizarin hanya digunakan bila hasil meragukanmeragukan

1212

1313

FDA menganjurkan: 1/3 utk pemeriksaan FDA menganjurkan: 1/3 utk pemeriksaan visceral, 2/3 utk pemeriksaan tulang visceral, 2/3 utk pemeriksaan tulang recommended by the U.S.A. Food & Drugrecommended by the U.S.A. Food & Drug

Utk kelinci : semua fetus diperiksa external, Utk kelinci : semua fetus diperiksa external, visceral, dan tulangvisceral, dan tulang

1414

Categorization of drug risks to the fetus Categorization of drug risks to the fetus (FDA)(FDA)

Category ACategory A Controlled studies in women failControlled studies in women fail to demonstrate to demonstrate a a

risk to the fetus in the first trimester (and there is no risk to the fetus in the first trimester (and there is no evidence of a risk in later trimesters), and the evidence of a risk in later trimesters), and the possibility of possibility of fetal harm appears remote.fetal harm appears remote.

Category BCategory B EEither animal studies have not demonstratedither animal studies have not demonstrated a a

fetal risk but there are fetal risk but there are no controlled studies in no controlled studies in pregnant womenpregnant women, or animal studies have shown an , or animal studies have shown an adverse effect (other than a decrease in fertility) that adverse effect (other than a decrease in fertility) that was not confirmed in controlled studies in women in was not confirmed in controlled studies in women in the first trimester (and there is no evidence of a risk in the first trimester (and there is no evidence of a risk in later trimesters).later trimesters).

1515

Category CCategory C Either studies in Either studies in animals have revealed adverseanimals have revealed adverse

effectseffects on the fetus (teratogenic or embryocidal or on the fetus (teratogenic or embryocidal or other) and there are other) and there are no controlled studies in womenno controlled studies in women, , or studies in women and animals are not available. or studies in women and animals are not available. Drugs Drugs should be given only if the potential benefit should be given only if the potential benefit justifies the potential risk to the fetus.justifies the potential risk to the fetus.

Category DCategory D There is There is positive evidence of human fetal riskpositive evidence of human fetal risk, but , but

the benefits from use in pregnant women may be the benefits from use in pregnant women may be acceptable despite the riskacceptable despite the risk (e.g., if the drug is (e.g., if the drug is needed in a life-threatening situation or for a serious needed in a life-threatening situation or for a serious disease for which safer drugs cannot be used or are disease for which safer drugs cannot be used or are ineffective).ineffective).

1616

Category XCategory X

Studies in animals or human beings have Studies in animals or human beings have demonstrated fetal abnormalitiesdemonstrated fetal abnormalities, or there is , or there is evidence of fetal risk based on human experience or evidence of fetal risk based on human experience or both, and the risk of the use of the drug in pregnant both, and the risk of the use of the drug in pregnant women clearly outweighs any possible benefit. The women clearly outweighs any possible benefit. The drug is drug is contraindicated in women who are or may contraindicated in women who are or may become pregnant.become pregnant.

1717