-
UNIVERSITAS INDONESIA
UJI ANTIHIPERTENSI CAMPURAN EKSTRAK ETANOL HERBASELEDRI (Apium
graveolens[Jacq.] Lag) DAN DAUN TEMPUYUNG
(Sonchus arvensis L.) SEBELUM DAN SESUDAH PURIFIKASI
TESIS
IKE YULIA WIENDARLINA0706172506
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAMPROGRAM MAGISTER
ILMU KEFARMASIAN
DEPOKDESEMBER 2010
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
UNIVERSITAS INDONESIA
UJI ANTIHIPERTENSI CAMPURAN EKSTRAK ETANOL HERBASELEDRI (Apium
graveolens[Jacq.] Lag) DAN DAUN TEMPUYUNG
(Sonchus arvensis L.) SEBELUM DAN SESUDAH PURIFIKASI
TESIS
Diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar
Magister Farmasi
IKE YULIA WIENDARLINA0706172506
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAMPROGRAM MAGISTER
ILMU KEFARMASIAN
DEPOKDESEMBER 2010
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
iv
KATA PENGANTAR
Puji syukur saya panjatkan kepada Allah SWT, karena atas berkat
dan rahmat-Nya,
saya dapat menyelesaikan tesis ini. Penulisan tesis ini
dilakukan dalam rangka
memenuhi salahsatu syarat untuk mencapai gelar Magister Jurusan
Farmasi pada
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Indonesia. Saya
menyadari bahwa, tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai
pihak, dari masa
perkuliahan sampai pada penyusunan tesis ini, sangatlah sulit
bagi saya untuk
menyelesaikan tesis ini, oleh karena itu saya mengucapkan
terimakasih kepada :
(1) Prof. Dr.Endang Hanani, MS dan Dra. Azizahwati, MS,Apt
selaku dosen
pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga dan pikiran
untuk
mengarahkan saya dalam penyusunan tesis ini.
(2) Prof. Dr. Effionora Anwar, MS selaku Ketua Program S2 Ilmu
Kefarmasian
F-MIPA UI, serta seluruh karyawan Departemen Farmasi F-MIPA
UI.
(3) Pihak Fakultas Kedokteran Hewan dan Pusat Studi Biofarmaka
IPB, Program
Studi Farmasi F-MIPA Unpak, Bogor serta Laboratorium Fitokimia
Jurusan
Farmasi F-MIPA UI, yang telah banyak membantu dalam usaha
memperoleh
data yang saya perlukan.
(4) Orang tua dan keluarga saya yang telah memberikan dukungan
material dan
moral dan
(5) Sahabat yang telah banyak membantu saya dalam menyelesaikan
tesis ini.
Akhir kata, saya berharap Allah SWT berkenan membalas segala
kebaikan semua
pihak yang telah membantu. Semoga tesis ini membawa manfaat bagi
pengembangan
ilmu.
Depok, 27 Desember 2010
Penulis
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
vi
ABSTRAK
Nama : Ike Yulia WiendarlinaProgram Studi : Magister Ilmu
FarmasiJudul : Uji Antihipertensi Campuran Ekstrak Etanol Herba
Seledri (Apium
graveolens[Jacq.] Lag) dan Daun Tempuyung (Sonchus arvensis
L.)dengan Campuran Ekstrak Yang Sudah di Purifikasi.
Herba seledri (Apium graveolens[Jacq.] Lag) dan daun tempuyung
(Sonchus arvensis L.)telah lama digunakan sebagai obat
antihipertensi. Penelitian ini bertujuan untukmengetahui aktivitas
antihipertensi dari campuran kedua ekstrak tersebut sebelum
dansesudah purifikasi. Pada penelitian ini digunakan 8 kelompok
tikus jantan galur Sprague-Dawley, masing-masing kelompok terdiri
dari 4 ekor tikus. Kelompok 1 sebagai kontrolnormal diberi larutan
CMC 0,5 %, kelompok 2 diberi larutan NaCl 2 %, kelompok 3(0,02 g
ekstrak herba seledri dan 0,15 g ekstrak daun tempuyung), kelompok
4 (0,036 gekstrak herba seledri dan 0,206 g esktrak daun
tempuyung), kelompok 5 (0,045 g ekstrakherba seledri dan 0,25 g
ekstrak daun tempuyung), kelompok 6 (purifikasi kelompok
4),kelompok 7 (purifikasi kelompok 5), kelompok 8 sebagai herbal
pembanding (0,141 gTensigard) Parameter yang diukur adalah volume
urin, tekanan darah, arteri, sistolik dandiastolik tikus, campuran
ekstrak diberikan pada hari ke 15 sampai hari ke 30.
Hasilpenelitian menunjukkan kelompok 7 mengalami penurunan
aktivitas hipertensi,mendekati aktivitas kelompok 4 dan kelompok 8,
pemberian sediaan uji tidakmempengaruhi sekresi urin tikus.
Kata kunci : Apium graveolens[Jacq.] Lag , Sonchus arvensis
L.,antihipertensi, purifikasi.
xiii + 115 halaman : 17 gambar,9 tabelDaftar Pustaka : 70 (tahun
1964 sampai2010)
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
vii
ABSTRACT
Name : Ike Yulia WiendarlinaStudy Program : Magister of
PharmacyTitle : Comparison antihypertension activity from the
mixture extract
Celery herbs (Apium graveolens[Jacq.] lag) and Sonchi
folium(Sonchus arvensis L.) before and after purification.
Celery herbs (Apium graveolens[Jacq.] lag) and Sonchi folium
(Sonchus arvensis L.)were used as antihypertension herbal medicinal
for long time ago. Comparison ofantihypertension activity from the
mixture extract before and after purification has beendone, used
eight groups of Sprague-Dawley strain mail rats, each group
containing fourrats.Group 1 as normal control were given 0,5 % CMC
solution, group 2 were given 2 %NaCl solution, group 3 (0,02 g of
celery herbs extract and 0,15 g of sonchi foliumextract), group 4
(0,036 g of celery herbs extract and 0,206 g of sonchi folium
extract),group 5 (0,045 g of celery herbs extract and 0,25 g of
sonchi folium extract), group 6(group 4 after purification), group
7 (group 5 after purification) and group 8 as thecomparison (0,141
g of Tensigard).The mixture of extract were given on 15th until
30th.The parameter are, urine excretion and the blood pressure of
rats including arteri,systolic, and diastolic. The result showed
group 7 has decreased antihypertension effectnearly group 4 and
group 8, the mixtured of extract did not have the significant
activityon urine excretion.
Key word : Apium graveolens[Jacq.] Lag , Sonchus arvensis L.,
antihypertension,purification.xii+115 pages : 17 pictures; 9
tablesBibliography : 70 (1964-2010)
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDULHALAMAN PERNYATAAN ORISINALITASLEMBAR
PENGESAHANKATA PENGANTARLEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA
ILMIAHABSTRAKABSTRACTDAFTAR ISIDAFTAR GAMBARDAFTAR TABELDAFTAR
LAMPIRAN
BAB I PENDAHULUAN ………………………………………………..1.1 Latar Belakang
……………………………………………….1.2. Tujuan Penelitian …………………………………………….1.3.
Hipotesis ……………………………………………………..
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
................................................................2.1.
Apium graveolens [Jacq] Lag
..................................................
2.1.1. Klasifikasi Tanaman ………………………………….2.1.2. Deskripsi
Tanaman …………………………………...2.1.3. Kandungan Kimia ……………………………………2.1.4.
Efek Farmakologi …………………………………….2.1.5. Efek Samping dan Efek Tidak
Dikehendaki …………
2.2. Sonchus arvensis Linn ………………………………………..2.2.1. Klasifikasi
Tanaman ………………………………….2.2.2. Deskripsi Tanaman
…………………………………..2.2.3. Kandungan Kimia ……………………………………2.2.4. Efek
Farmakologi …………………………………….2.2.5. Efek Samping
………………………………………...
2.3. Klorofil dan Sifat-sifatnya ……………………………………2.3.1. Struktur
kimia
klorofil..................................................
2.4. Hipertensi …………………………………………………….2.4.1. Definisi dan
klasifikasi ……………………………….2.4.2. Etiologi (Hadiyanto, 2002)
…………………………..2.4.3. Implikasi-implikasi Terapeutik (Katzung, 2001)
.......2.4.4. Pendekatan Pada Penderita Hipertensi (Katzung,
2001) ………………………………………………….2.4.5. Mekanisme Kerja
…………………………………….2.4.6. Pengukuran Tekanan Darah (Hadiyanto,
2009.,
Kelompok Kerja Ilmiah,
1993).....................................2.4.7. Induksi pada Hewan
Percobaan (Kelompok Kerja
Ilmiah, 1993; Wresdining Tyas, 2007)
........................2.5. Ekstraksi
...................................................................................
iiiiiiivvviviiviiixixiixiii
1133
444455888991010101214141515
1618
22
2424
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
ix
2.6 Kromatografi
............................................................................2.6.1
Kromatografi Lapis Tipis
................................................
2.7 Flavonoid
..................................................................................
BAB III METODE PENELITIAN
............................................................3.1
Lokasi
.......................................................................................3.2
Alat
............................................................................................3.3
Bahan
.........................................................................................
3.3.1 Simplisia
..........................................................................3.3.2
Hewan
Coba.....................................................................3.3.3
Bahan kimia
....................................................................
3.4 Cara Kerja
.................................................................................3.4.1
Metode penelitian
............................................................3.4.2
Rancangan Penelitian
......................................................3.4.3
Persiapan Hewan Coba
...................................................3.4.4 Preparasi
Ekstrak
............................................................3.4.5
Penetapan Dosis
..............................................................3.4.6
Pembuatan Sediaan
Uji....................................................3.4.7
Pembuatan CMC 0, 5 %
..................................................3.4.8 Pembuatan
Larutan Natrium Klorida 2 % ......................3.4.9 Purifikasi
Ekstrak
............................................................
3.5 Pengujian terhadap simplisia dan ekstrak
.................................3.5.1 Parameter non spesifik
...................................................3.5.2 Parameter
spesifik
..........................................................3.5.3 Uji
Kandungan Kimia Ekstrak
.......................................3.5.4 Pola Kromatogram
Dengan Metode Kromatografi Lapis
Tipis
................................................................................3.6
Purifikasi Campuran Ekstrak Seledri dan Tempuyung .............3.7
Pelaksanaan Percobaan
.............................................................3.8
Pemeriksaan Tekanan Darah Tikus …………………………..3.9 Pengamatan
...............................................................................3.10
Analisis Data
...........................................................................
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN …………………………………4.1.Hasil
..........................................................................................
4.1.1 Pembuatan Serbuk Simplisia
………………..................4.1.2.Pembuatan Ekstrak
……………...……………..............4.1.3.Pengujian Terhadap Simplisia dan
Ekstrak Herba
Seledri dan Daun Tempuyung
........................................4.1.4.Pengamatan Volume
Urin Tikus......................................4.1.5.Pengamatan
Tekanan Darah Sistolik (TDS) ...................4.1.6.Pengamatan
Tekanan Darah Arteri (TDA) ………..…...4.1.7. Pengamatan Tekanan Darah
Diastolik (TDD) ….…….
4.2. Pembahasan …………………………………………….……
BAB V KESIMPULAN …………………………………………………..5.1. Kesimpulan
…………………………………………………..5.2. Saran
........................................................................................
252627
313131313131313232323232333435353536363738
404041424343
45454545
465152545557
636363
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
x
Daftar Pustaka
................................................................................................Lampiran
.......................................................................................................
6571
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Apium graveolens [Jacq] Lag
...............................................Gambar 2.2 Struktur
Kimia Apigenin …………………………………..Gambar 2.3 Struktur Kimia Apiin
………………………………………Gambar 2.4 Struktur Kimia Kumarin
…………………………………...Gambar 2.5 Sonchus arvensis L
...............................................................Gambar
2.6 Struktur Kimia 7-glukosilluteolin (cynaroside)
....................Gambar 2.7 Struktur Kimia Klorin
...........................................................Gambar
2.8 Klorofil a dan b
.....................................................................Gambar
2.9 Klorofil c1
.............................................................................Gambar
2.10 Klorofil c2
.............................................................................Gambar
2.12. Klorofil d
..............................................................................Gambar
2.12 Cara Kerja Diuretik Tiazid
....................................................Gambar 2.13
Renin Angiotensin Aldosteron System
.................................Gambar 2.14 Kerangka Dasar
Flavonoid ...................................................Gambar
2.15 Struktur Kimia Golongan Flavonoid
....................................Gambar 4.1 Pola kromatogram
ekstrak herba seledri, fasa gerak hexan
: etil asetat (2:3) pada sinar ultraviolet panjang gelombang366
nm, dengan alat Reprostar
..............................................
Gambar 4.2 Pola kromatogram ekstrak daun tempuyung
setelahdihidrolisis dengan asam asetat glasial, fasa gerak
kloroform: metanol (11:1) pada sinar ultraviolet panjang
gelombang366 nm, dengan alat Reprostar
.............................................
4677910121313141419212829
49
49
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
xii
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Perbedaan Struktur Klorofil
......................................................Tabel 2.2
Klasifikasi Tekanan Darah Manusia Dewasa Pada JNC 7 ……Tabel 2.3
Sifat Berbagai Golongan Flavonoid
............................................Tabel 3.1 Pembagian
Kelompok Perlakuan Hewan Coba ...........................Tabel 4.1
Kandungan Kimia Ekstrak
..........................................................Tabel 4.2
Data Volume Urin Tikus (mL), n = 4 ekor tikus ………………Tabel 4.3 Data
Tekanan Darah Sistolik (mm Hg), n = 4 ekor tikus ...........Tabel
4.4 Data Tekanan Darah Arteri Rata-Rata (mm Hg), n = 4 ekor
tikus ……………………………………………………………Tabel 4.5 Data Tekanan Darah
Diastolik (mm Hg), n= 4 ekor tikus ……
12153042485152
5455
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran I. Gambar ………………………………………………..Lampiran II. Tabel
………………………………………………….Lampiran III. Hasil Determinasi Tanaman
.........................................Lampiran IV. Skema Proses
Ekstraksi Simplisia ...............................Lampiran V.
Deskriptif (Gambaran Umum Data) Berat Badan
Tikus
.............................................................................Lampiran
VI. Deskriptif (Gambaran Umum) Volume Urin Tikus .....Lampiran VII.
Analysis Of Variance Tekanan Darah Sistolik ………Lampiran VIII.
Arteri …………………………………………………Lampiran IX. Analysis Of Variance TDD
……………………………Lampiran X. Uji Beda : Arteri ……………………………………….Lampiran
XI. Uji Beda : Diastolik
......................................................Lampiran XII.
Uji Beda : TDS
...............................................................
70768889
909396100105109113118
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
1 Universitas Indonesia
BAB IPENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Hipertensi merupakan penyakit kardiovaskuler yang lazim,
ditandai
dengan kenaikan tekanan darah di atas normal, yaitu tekanan
darah di atas
nilai 140/90 mm Hg, pengukuran ini didasarkan pada tekanan darah
sistolik
dan diastolik. Penyebab tekanan darah meningkat adalah akibat
peningkatan
denyut jantung, peningkatan resistensi (tahanan) dari pembuluh
darah tepi
dan peningkatan volume aliran darah. Kenaikan tekanan darah ini
dapat
disebabkan antara lain oleh faktor usia, karena pada usia lanjut
pembuluh
darah cenderung menjadi kaku dan elastisitasnya berkurang,
akibatnya
pembuluh darah menjadi sklerosis (aterosklerosis) dan
meningkatkan
resistensi dinding pembuluh darah, hal ini akan memicu jantung
untuk
meningkatkan denyutnya agar aliran darah dapat mencapai seluruh
tubuh dan
mengakibatkan terjadinya hipertensi (Azwar, 2010).
Kenaikan tekanan darah secara kronis dapat meningkatkan
resiko
kerusakan pembuluh-pembuluh darah pada ginjal, jantung dan otak,
serta
dapat mengakibatkan insiden gagal ginjal, penyakit koroner,
gagal jantung
dan stroke. Hipertensi dapat diatasi dengan penurunan tekanan
darah secara
farmakologis yang efektif, karena itu pengobatan hipertensi yang
terkontrol
baik tetap merupakan tujuan pengobatan (Hadiyanto, 2009;
Katzung, 2001).
Pengobatan hipertensi dapat dilakukan dengan menggunakan
obat-obat
yang berasal dari bahan alam atau dengan obat-obat sintetis,
tetapi pada saat
ini kecenderungan masyarakat untuk menggunakan obat-obatan yang
berasal
dari bahan alam meningkat, karena banyak yang beranggapan
bahwa
penggunaan obat dari bahan alam lebih aman dibandingkan obat
sintesis,
walaupun obat-obatan ini belum terbukti secara klinis, tapi
lebih berdasarkan
pengalaman empiris, tanaman yang sering digunakan sebagai
obat
antihipertensi contohnya adalah seledri (Apium graveolens
[Jacq.] Lag) yang
mengandung apigenin dan mempunyai aktivitas sebagai vasodilator,
tetapi
bila digunakan berlebihan dapat menurunkan tekanan darah secara
tajam
bahkan dapat menimbulkan syok. Tanaman lain yang dapat
digunakan
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
2
Universitas Indonesia
sebagai antihipertensi adalah tempuyung (Sonchus arvensis L.)
yang bersifat
diuretik lemah, kandungan zat aktif dalam tempuyung antara lain
flavonoid
kaemferol, luteolin-7-O-glukosida, apigenin-7-O-glukosida dan
senyawa lain
seperti kumarin dan asam fenolat.
Berdasarkan sifat-sifat seledri dan tempuyung, kombinasi
keduanya
diharapkan dapat menghasilkan obat antihipertensi yang lebih
baik (Nien
et al.,1991; Dalimarta, 2000; Joint Mender, 2010).
Klorofil adalah pigmen pemberi warna hijau yang terdapat
pada
kloroplast sel tanaman, sebagian besar klorofil terdapat pada
daun sehingga
sering disebut sebagai zat hijau daun. Tidak hanya pada daun,
klorofil juga
terdapat pada jaringan tanaman yang berwarna hijau, misalnya
pada akar dan
batang yang berwarna hijau dalam jumlah terbatas. Klorofil
bersifat non polar
sehingga tidak larut dalam air dan dapat terjadi agregasi bila
dicampur
dengan air (Chandra et al., 2010; Saptono dkk, 2010).Klorofil
mempunyai
inti magnesium, dalam Differing Forms of Magnesium Supplement
(2010)
disebutkan bahwa suplemen yang mengandung magnesium dalam
dosis
tinggi dapat menyebabkan denyut jantung yang tidak teratur,
diare dan
mengurangi nafsu makan.
Pada penelitian ini dilakukan pengujian aktivitas
antihipertensi
campuran ekstrak etanol herba seledri dan daun tempuyung, serta
campuran
kedua ekstrak tersebut yang telah dipurifikasi dengan cara
penyaringan
menggunakan pelarut air, terhadap tikus putih jantan yang telah
dibuat
hipertensi. Sebagai pembanding digunakan obat herbal standar
yang sudah
beredar di pasaran, purifikasi diharapkan dapat menghasilkan
campuran
ekstrak yang mempunyai aktivitas hipertensi lebih baik daripada
campuran
ekstrak sebelum dipurifikasi.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
3
Universitas Indonesia
1.2. Tujuan Penelitian.
Mengetahui perbedaan aktivitas antihipertensi dari campuran
ekstrak
etanol herba seledri (Apium graveolens [Jacq.]Lag) dan daun
tempuyung
(Sonchus arvensis L.) sebelum dan sesudah dipurifikasi.
Mengetahui aktivitas diuretik dari campuran ekstrak etanol
herba
seledri (Apium graveolens [Jacq.]Lag) dan daun tempuyung
(Sonchus
arvensis L.) sebelum dan sesudah dipurifikasi.
1.3. Hipotesis
Purifikasi dapat memberikan perbedaan aktivitas antihipertensi
dan
aktivitas diuretik dari campuran ekstrak etanol herba seledri
(Apium
graveolens [Jacq.]Lag) dan daun tempuyung (Sonchus arvensis
L.)
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
4 Universitas Indonesia
BAB IITINJAUAN PUSTAKA
2.1. Apium graveolens [Jacq.] Lag (Tjitrosoepomo, 1997)
2.1.1. Klasifikasi Tanaman
Dunia : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Sub divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Bangsa : Umbelliflorae/Apiales
Suku : Umbelliferae/ Apiaceae
Marga : Apium
Jenis : Apium graveolens [Jacq.] Lag
Sinonim : Apium graveolens L.
2.1.2. Deskripsi Tanaman
Gambar 2.1 Apium graveolens [Jacq.] Lag
Apium graveolens [Jacq.] Lag merupakan tumbuhan terna,
tumbuh
tegak, tinggi sekitar 50 cm dengan bau aromatis yang khas.
Batang
bersegi, beralur, beruas, tidak berambut, bercabang banyak,
berwarna
hijau pucat. Daun majemuk menyirip ganjil dengan anak daun 3-7
helai.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
5
Universitas Indonesia
Anak daun bertangkai yang panjangnya 1-2,7 cm, helaian daun
tipis dan
rapuh, pangkal dan ujungnya runcing, tepi beringgit,
panjangnya
2,7-5 cm, pertulangan menyirip, berwarna hijau keputih-putihan.
Bunga
majemuk berbentuk payung 8-12 buah, kecil-kecil berwarna putih,
mekar
secara bertahap. Buahnya buah kotak, berbentuk kerucut,
panjang
1-1,5 mm, berwarna hijau kekuningan.
2.1.3. Kandungan Kimia
Apium graveolens [Jacq.] Lag banyak mengandung senyawa aktif
dengan kandungan utama flavonoid apiin dan apigenin, minyak
atsiri
dengan komponen utama isokarlofilen, stearaldehid, senyawa
kumarin
dengan komponen utama umbelliferon (Badan POM RI, 2004).
2.1.4. Efek Farmakologi
Apium graveolens [Jacq.] Lag herba memiliki efek hipotensi,
baik
pada penderita hipertensi maupun pada hewan uji yang dibuat
hipertensi.
Fraksi etanol memiliki efek menurunkan tekanan darah yang tidak
terlalu
besar tetapi stabil (Depkes RI, 2000a). Efek hipotensif herba
berkaitan
dengan efek apigenin sebagai vasodilator primer. Tekanan
darah
umumnya mulai turun setelah satu hari pengobatan, diikuti
dengan
meningkatnya volume urin yang dikeluarkan (Nien et al.,
1991).
Seledri dilaporkan memiliki efek antirematik, obat penenang,
diuretik ringan dan antiseptik pada saluran kemih, juga telah
digunakan
untuk radang sendi, encok, terutama untuk rheumatoid (Bisset,
1994).
Pada tikus, efek sedatif dan aktifitas antispasmodik telah
dilaporkan untuk
komponen phthalide (Duke, 1985). Minyak biji seledri
dilaporkan
memperlihatkan efek bakteriostatik (Kar, 1971).
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
6
Universitas Indonesia
2.1.4.1 Apigenin
Gambar 2.2 Struktur Kimia Apigenin (KEGG Encyclopedia, 2010)
Apigenin adalah senyawa aktif dalam seledri yang termasuk
dalam
kelas flavon, berupa kristal jarum kuning yang tidak larut dalam
air, agak
larut dalam etanol panas, larut dalam larutan alkalis, apigenin
adalah
aglikon dari apiin.
Apigenin yang terdapat pada tanaman seledri, diketahui
memiliki
banyak khasiat, beberapa penelitian melaporkan khasiat apigenin,
antara
lain :
Mencherini et al., (2007) menyebutkan bahwa apigenin
berkhasiat
sebagai antiradang.
Liu et al., (2008) menyebutkan bahwa apigenin mempunyai
aktivitas
sebagai antiinfluenza.
Ko et al., (1991) menyebutkan bahwa apigenin dapat
menghambat
kontraksi cincin arteri tikus, jadi dapat bersifat sebagai
vasodilator.
Torkin et al., (2005) menyebutkan bahwa apigenin mampu
mencegah
pertumbuhan dan menimbulkan apoptosis dari sel neuroblastoma
pada
manusia.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
7
Universitas Indonesia
2.1.4.2 Apiin
Gambar 2.3 Struktur Kimia Apiin (ChEBI, 2010)
Apiin adalah senyawa aktif yang terdapat pada tanaman
seledri,
merupakan suatu glikosida, aglikon dari apiin adalah
apigenin.
Seperti apigenin, apiin juga dilaporkan memiliki banyak
khasiat,
diantaranya adalah :
Mencherini et al., (2007) menyebutkan bahwa apiin, seperti
halnya
apigenin mempunyai khasiat sebagai antiradang.
Occhiuto et al., (2006) menyebutkan bahwa apiin berkhasiat
sebagai
antiaritmia dan antiiskemi.
2.1.4.3 Kumarin
Gambar 2.4 Struktur Kimia Kumarin (Friedli ,2010)
Kumarin adalah suatu senyawa benzo-alpha- pyrones (lakton
dari
asam o-hidroksinamat) yang terbentuk dari jalur sikimat. Kumarin
dalam
tanaman memiliki satu gugus hidroksil atau gugus metoksi pada
C7,
substitusi ini terdapat pada scopoletin, aesculetin dan
umbelliferon yang
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
8
Universitas Indonesia
terdapat dalam jumlah besar pada tumbuhan dan sering terdapat
dalam
bentuk glikosida (Friedli,2010).
Kumarin mempunyai bau yang mirip dengan vanilla dan terdapat
pada
banyak tanaman antara lain pada wortel dan seledri.
Kumarin disebutkan mempunyai aktivitas, antara lain :
Sebagai antiradang, antiodema, meningkatkan kekebalan tubuh,
antihipertensi, dismenorae dan sebagai antikanker (Mills et al.,
2000).
Arora and Mathur (1963) menyebutkan bahwa kumarin bersifat
sebagai antikoagulan.
Peneliti lain (Teixeria et al.,) menyebutkan bahwa kumarin
bersifat
sebagai antioksidan.
2.1.5 Efek Samping dan Efek Tidak Dikehendaki
Apium graveolens [Jacq.] Lag dikontraindikasikan untuk
pasien
penderita inflamasi ginjal karena minyak esensialnya dalam
jumlah
tertentu menghasilkan efek iritasi pada epithelial.
Kandungan
furanokumarin dapat menyebabkan fotodermatitis atau alergi, tapi
hal ini
jarang sekali terjadi (Czygan et al., 1994).
2.2 Sonchus arvensis L. (Steenis, 1997)
2.2.1. Klasifikasi Tanaman
Dunia : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Sub divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Bangsa : Asterales
Suku : Asteraceae
Marga : Sonchus
Jenis : Sonchus arvensis L.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
9
Universitas Indonesia
2.2.2. Deskripsi Tanaman
Gambar 2.5 Sonchus arvensis L.
Sonchus arvensis L. merupakan terna tahunan, tinggi 1-2 m,
akar
tunggang yang kokoh, batang berusuk, bergetah putih. Daun
bagian
bawah terpusar membentuk roset, bentuk lonjong dan lanset,
berlekuk
menjari atau berlekuk tidak teratur, pangkal daun berbentuk
panah atau
jantung, ujung daun bercuatan pendek, panjang daun 6-48 cm,
lebar
daun 10 cm, daun bagian atas lebih kecil, duduknya berjauhan
dan
bergantian serta memeluk batang. Perbungaan berbentuk bonggol
yang
bergantung dalam malai, bonggol bunga berukuran 2-2,5 cm,
panjang
gagang bonggol 1-8 cm, mahkota bunga panjangnya 2-2,5 cm,
mula-
mula berwarna kuning terang, lama kelamaan berwarna merah
kecoklatan. Biji panjang 4-4,5 mm, berusuk.
2.2.3. Kandungan Kimia
Sonchus arvensis L. mengandung senyawa flavonoid dengan
kandungan utama 7-glukosilluteolin, komponen lain
7-glukosilapigenin,
kaemferol, senyawa kumarin dan garam kalium (Badan POM RI,
2004).
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
10
Universitas Indonesia
2.2.4. Efek Farmakologi
2.2.4.1 Cynaroside
Gambar 2.6 Struktur Kimia 7-glukosilluteolin
(cynaroside)(Chemical Book,2010)
Cynaroside adalah senyawa aktif yang banyak terdapat dalam
tanaman
tempuyung, termasuk flavonoid golongan flavon.
Penelitian yang pernah dilakukan menyebutkan bahwa
cynaroside
berkhasiat sebagai antikolesterol (Gebhart, 2002). Odontuya
(2005)
menyebutkan bahwa cynaroside berkhasiat sebagai antiradang.
2.2.5. Efek Samping
Tanaman tempuyung (Sonchus arvensis L.) sampai saat ini
belum
diketahui efek sampingnya.
2.3. Klorofil dan Sifat-sifatnya
Klorofil adalah suatu kelompok pigmen yang terdapat didalam
kloroplas
tanaman dan menyerap cahaya sebagai energi untuk berlangsungnya
proses
fotosintesis. Sebagian besar klorofil terdapat pada daun
sehingga disebut zat
hijau daun. Klorofil terdapat juga pada seluruh jaringan tanaman
yang berwarna
hijau seperti pada batang, akar, buah dan biji dalam jumlah
terbatas. Jika diamati
lebih lanjut ternyata klorofil memiliki struktur yang mirip
dengan struktur
hemoglobin, perbedaannya terletak pada atom pusat dari molekul,
klorofil
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
11
Universitas Indonesia
mempunyai atom pusat Magnesium (Mg) sedangkan hemoglobin
mempunyai
atom pusat besi (Chandra et al., 2010; Bahri , 2007). Magnesium
yang terdapat
dalam klorofil bersifat sebagai relaksan otot, bekerja sebagai
kalsium antagonis
pada otot jantung dan ujung syaraf, serta menghambat pelepasan
hormon
paratiroid yang mengakibatkan penurunan kadar kalsium dan
menimbulkan
relaksasi otot. Magnesium juga bersifat menghambat pelepasan
katekolamin
sehingga bersifat sebagai antikejang dan vasodilator (Osalusi et
al., 2008).
Klorofil bersifat non polar sehingga tidak larut dalam air, bila
terdapat air,
akan menyebabkan klorofil yang terdapat di dalamnya mengalami
proses
agregasi. Proses agregasi tersebut disebabkan pusat logam
magnesium yang
bersifat nukleofilik dapat membentuk ikatan hidrogen dengan air
yang bersifat
elektrofilik, kemudian satu atom hidrogen yang lain akan
mengikat monomerik
klorofil lain atau senyawa lain seperti protein atau pigmen lain
sehingga akan
membentuk agregat. Jika jumlah air cukup banyak, maka ikatan
tersebut akan
terus menerus dan akan membentuk agregat yang lebih besar
(Saptono, 2010).
Penggunaan klorofil dalam jangka panjang dapat mengakibatkan
diare, mual dan
muntah, maka tidak dianjurkan untuk wanita hamil dan wanita yang
sedang
menyusui, pada beberapa orang dapat menimbulkan reaksi alergi
(Healthline,
2010).
Berdasarkan sifat klorofil yang non polar, maka pada penelitian
ini
dilakukan purifikasi campuran ekstrak seledri dan tempuyung
dengan
penyaringan menggunakan pelarut air, untuk melihat apakah
klorofil dapat
mengurangi aktivitas antihipertensi dari campuran ekstrak
tersebut, karena
klorofil dapat membentuk agregat yang mungkin bisa menghambat
proses
adsorpsi dari campuran ekstrak herba seledri dan ekstrak daun
tempuyung.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
12
Universitas Indonesia
2.3.1. Struktur Kimia Klorofil.
Klorofil adalah suatu pigmen klorin yang mempunyai beberapa
rantai
samping yang berbeda, yang paling banyak terdapat dalam
tumbuhan
adalah klorofil a yang ditemukan oleh Hans Fischer pada tahun
1940.
Klorofil a dan b banyak terdapat pada tumbuhan tingkat
tinggi,
klorofil a dan c banyak terdapat pada alga cokelat, sedangkan
klorofil a dan
d banyak terdapat pada alga merah.
Gambar 2.7 Struktur Kimia Klorin (Real, 2010)
Penelitian selanjutnya menghasilkan bermacam-macam klorofil
seperti yang terdapat pada tabel 2.1.
Tabel 2.1 Perbedaan Struktur Klorofil (Citizendia Dictionary,
2010)
Chlorophyll a Chlorophyll bChlorophyllc1
Chlorophyllc2
Chlorophyll d Chlorophyll f
Molecularformula
C55H72O5N4Mg C55H70O6N4Mg C35H30O5N4Mg C35H28O5N4Mg C54H70O6N4Mg
C55H70O6N4Mg
C2 group -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -CHO
C3 group -CH=CH2 -CH=CH2 -CH=CH2 -CH=CH2 -CHO -CH=CH2
C7 group -CH3 -CHO -CH3 -CH3 -CH3 -CH3
C8 group -CH2CH3 -CH2CH3 -CH2CH3 -CH=CH2 -CH2CH3 -CH2CH3
C17 group-CH2CH2COO-Phytyl
-CH2CH2COO-Phytyl
-CH=CHCOOH
-CH=CHCOOH
-CH2CH2COO-Phytyl
-CH2CH2COO-Phytyl
C17-C18bond
Single Single Double Double Single Single
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
13
Universitas Indonesia
Gambar 2.8 Klorofil a dan b (Bil 226-Lecture 10)
Gambar 2.9 Klorofil c1(Mc Graw Hill Encyclopedia, 2010)
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
14
Universitas Indonesia
Gambar 2.10 Klorofil c2 (Museum of Learning,2010)
Gambar 2.11 Klorofil d (Citizendia Dictionary,2010)
2.4. Hipertensi
2.4.1.Definisi dan Klasifikasi
Hipertensi adalah kenaikan tekanan arterial di atas nilai
relatif
normal.Tekanan darah di atas nilai 140/90 mm Hg dikatakan
tekanan darah
tinggi (hipertensi), pengukuran tekanan darah didasarkan pada
pengukuran
tekanan darah sistolik dan diastolik. Klasifikasi tekanan darah
manusia
dewasa, menurut The Joint National Committee on the
Prevention,
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
15
Universitas Indonesia
Detection, Evaluation and Treatment of High Blood Pressure ke 7
(JNC7)
dalam Hadiyanto (2009) dapat dilihat pada tabel 2.2.
Tabel 2.2 Klasifikasi Tekanan Darah Manusia Dewasa Pada JNC
7
Klasifikasi Tekanan Darah TDS(mmHg)
TDD(mmHg)
NormalPre hipertensiHipertensi stadium 1Hipertensi stadium 2
160
danatauatauatau
100
2.4.2.Etiologi (Hadiyanto, 2009)
Berdasarkan etiologinya, hipertensi dibagi atas hipertensi
esensial
dan hipertensi sekunder.
a. Hipertensi esensial, juga disebut hipertensi primer atau
idiopatik,
adalah hipertensi yang tidak jelas penyebabnya, lebih dari 90 %
kasus
hipertensi termasuk dalam kelompok ini. Penyebab hipertensi
esensial
adalah multifaktor yang terdiri dari faktor lingkungan dan
genetik.
Faktor genetik ini dapat berupa sensitivitas terhadap garam
natrium,
kepekaan terhadap stres, peningkatan terhadap vasokonstriktor
dan
resistensi insulin. Paling sedikit ada tiga faktor lingkungan
pemicu
hipertensi, yaitu makan garam (natrium) berlebih, stres dan
obesitas.
b. Hipertensi sekunder prevalensinya hanya 5-8 % dari seluruh
penderita
hipertensi. Hipertensi sekunder dapat disebabkan karena
penyakit
ginjal (hipertensi renal), penyakit endokrin (hipertensi
endokrin), obat
dan penyakit lain.
2.4.3. Implikasi-implikasi Terapeutik (Katzung, 2001)
Terapi antihipertensi pada umumnya tidak langsung ditujukan
pada
penyebab khusus, tetapi bergantung pada pengaruhnya terhadap
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
16
Universitas Indonesia
mekanisme fisiologis normal yang meregulasi tekanan darah.
Terapi
antihipertensi diberikan pada pasien yang asimtomatis, terapi
tersebut tidak
dapat langsung meredakan rasa tidak nyaman, tetapi
keuntungannya
terletak pada pencegahan penyakit dan kematian pada masa yang
akan
datang. Masalah yang dihadapi adalah kepatuhan pasien pada
terapi, karena
pemberian obat antihipertensi biasanya dalam suatu regimen dan
jangka
waktu yang lama, sehingga banyak pasien merasa tidak nyaman
karena
harus terus menerus minum obat. Pemberian obat antihipertensi
tidak sama
pada setiap pasien, karena setiap penderita hipertensi
mempunyai
karakteristik sendiri, sehingga tidak ada model tunggal
pengobatan yang
sesuai untuk digunakan penderita hipertensi secara umum.
2.4.4.Pendekatan pada penderita Hipertensi (Katzung, 2001)
2.4.4.1. Modifikasi Gaya Hidup
Terapi non farmakologik untuk hipertensi dapat dilakukan
dengan cara :
a. Mengurangi berat badan.
b. Diet rendah garam dan lemak jenuh, tingkatkan konsumsi
buah-
buahan, sayur-sayuran, kurangi produk lemak.
c. Olah raga
d. Berhenti merokok
e. Kurangi konsumsi alkohol yang berlebihan (>30 mL alkohol
per
hari)
Terapi non farmakologik dapat menurunkan tekanan darah
sama dengan obat antihipertensi, disamping itu dapat mencegah
onset
dan atau progresivitas hipertensi. Sensivitas setiap pasien
berbeda-
beda, misalnya dengan mempertahankan berat badan normal dan
meningkatkan aktivitas fisik dapat menurunkan tekanan darah
pada
hampir semua individu yang kurang aktivitas atau kelebihan
berat
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
17
Universitas Indonesia
badan, sedangkan pembatasan asupan natrium dapat menurunkan
tekanan darah pada penderita hipertensi yang termasuk ’salt
sensitive’.
Terapi non farmakologik relatif aman dibandingkan dengan
pemakaian obat-obatan, tetapi mempunyai keterbatasan, yaitu
reduksi
darah kecil dan kurangnya kepatuhan pasien dalam
mengkonsumsi
obat antihipertensi.
2.4.4.2 Pengobatan dengan Obat Antihipertensi
(Hadiyanto,2009)
Pengobatan antihipertensi bertujuan untuk menurunkan
tekanan darah di bawah 140/90 mm Hg. Pada pengobatan awal
dapat
digunakan monoterapi dengan satu obat, jika perlu dosis
dapat
ditingkatkan secara gradual sampai pada tingkat efektivitas atau
timbul
efek samping terbatas. Walaupun monoterapi dapat
meningkatkan
kepatuhan pasien, dua per tiga pasien memerlukan lebih dari satu
jenis
obat. Jika digunakan dua atau lebih jenis obat, harus dipilih
obat
dengan mekanisme fisiologik yang berbeda, misalnya lebih
menguntungkan mengkombinasikan diuretik dengan vasodilator
daripada menggunakan dua jenis obat yang sama-sama bekerja
mengurangi kontraksi otot polos.
Pemilihan obat pada hipertensi esensial selain perlu
diperhatikan
umur, ras, riwayat penyakit kardiovaskuler, merokok, obesitas
dan
juga aktivitas yang berkurang (sedentary life), juga perlu
diperhatikan
adanya penyakit lain seperti penyakit ginjal, penyakit jantung
iskemik,
gagal jantung, stroke terdahulu atau diabetes, masing-masing
faktor
tersebut harus dipertimbangkan.
Diuretik dapat diindikasikan sebagai terapi awal pada
hipertensi
tanpa komplikasi,biasanya dikombinasikan dalam dua atau lebih
jenis
obat. Penggunaan obat multipel biasanya menimbulkan kerja
sinergistik, sehingga memungkinkan pengurangan dosis obat dan
juga
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
18
Universitas Indonesia
mengurangi efek samping. Jika diuretik tidak dapat digunakan
atau
terdapat indikasi mendesak (compelling indication), maka
pergantian
dengan obat lain dipertimbangkan untuk monoterapi atau
dikombinasikan dengan diuretik.
2.4.5. Mekanisme Kerja
a. Diuretik
Diuretik adalah obat yang bekerja untuk meningkatkan volume
urin
pada ginjal karena menyebabkan ekskresi natrium dan mengurangi
volume
darah dengan menghambat transport elektrolit di dalam tubulus
renal,
karena itu sering disebut natriuretik. Diuretik yang paling
sering digunakan
adalah diuretic golongan tiazid, diuretik loop dan antagonis
reseptor
aldosteron (Katzung, 2001).
Tiazid menghambat kotransporter natrium/kalium/klorida pada
ginjal
dan menimbulkan diuresis, natriuresis dan kaliuresis, bermanfaat
terutama
pada penderita dengan fungsi ginjal yang baik dan merupakan
diuretik
yang paling banyak digunakan pada penderita hipertensi, diuretik
ini
menurunkan tekanan darah melalui ekskresi natrium dan air.
Pada
pemberian pertama kali pada pasien, obat ini mengurangi volume
darah
sehingga curah jantung berkurang. Pemberian obat ini dalam
jangka waktu
beberapa minggu atau bulan, dapat menurunkan tekanan darah
perifer,
oleh karena itu dapat digunakan untuk pengobatan jangka panjang
(gambar
2.12). Penurunan tahanan perifer disebabkan karena reduksi
natrium dalam
sel otot polos, sehingga mengurangi kontraksi otot sebagai
respon terhadap
zat vasopressor (Hadiyanto, 2009).
Diuretik loop bekerja menghambat transpor elektrolit pada ginjal
dan
bermanfaat pada penderita dengan gangguan ginjal dan yang
resisten
terhadap tiazid. Diuretik loop mempunyai efek diuresis yang
lebih kuat
daripada tiazid, tapi masa kerjanya lebih singkat, jadi
pemberian dosis
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
19
Universitas Indonesia
dilakukan dua kali atau lebih dalam sehari. Kedua sediaan ini
dapat
menyebabkan berkurangnya ion kalium, untuk mengatasinya
dapat
diberikan diuretik hemat kalium yang bekerja sebagai antagonis
reseptor
aldosteron pada ginjal, dapat menghambat reabsorpsi natrium
sehingga
tidak terjadi hipokalemia, diuretik hemat kalium dapat
menimbulkan
natriuresis dan mempunyai sifat hipotensif ringan
(Hadiyanto,2009).
Gambar 2.12 Cara Kerja Diuretik Tiazid
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
20
Universitas Indonesia
b. Simpatolitik
Sistem saraf simpatis memegang peranan penting dalam
mengatur
tekanan darah. Simpatolitik dapat menurunkan tekanan darah
melalui
hambatan terhadap pusat vasomotor di otak dengan mengurangi
tonus
simpatis secara sentral. Secara perifer simpatolitik dapat
bekerja terhadap
neurotransmiter pada ganglion presinaptik atau postsinaptik,
atau pada
reseptor yang diaktivasi epinefrin dan norepinefrin.
Simpatolitik yang
sering digunakan dalam pengobatan hipertensi adalah antagonis
reseptor
adrenergik-β dan agonis reseptor-α2 yang bekerja di sentral
(Hadiyanto,
2009).
Antagonis reseptor adrenergik-β (β-blocker) digunakan secara
luas
dalam pengobatan hipertensi karena obat ini relatif aman dan
efektif pada
pasien. Obat ini jarang menimbulkan efek samping dan dapat
dikombinasikan dengan obat antihipertensi lainnya untuk
mendapatkan
penurunan tekanan darah lebih besar. Sebagai obat antihipertensi
β-blocker
bekerja dengan mengurangi curah jantung, menghambat pelepasan
renin
dan produksi angiotensin II, blokade terhadap presinaptik
α-adrenoseptor
yang meningkatkan pelepasan norepinefrin dari terminal saraf
simpatis dan
mengurangi aktivitas vasomotor sentral (Hadiyanto,2009)
Agonis reseptor-α2 adalah suatu simpatolitik yang bisa bekerja
sentral
atau bekerja di perifer, simpatolitik yang bekerja secara
sentral mengurangi
aktivasi rangsangan saraf simpatis yang dimediasi oleh aktivasi
reseptor
adrenergik-α2 di susunan saraf pusat, sedangkan yang bekerja di
perifer
dapat menurunkan tekanan darah dengan mengganggu sintesis,
penyimpanan dan atau pelepasan norepinefrin dari terminal saraf
simpatis
(Hadiyanto, 2009).
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
21
Universitas Indonesia
c. Penghambat Angiotensin
Penghambat angiotensin termasuk ACE inhibitor (penghambat
enzim
konversi angiotensin) dan angiotensin receptor blocker (ARB)
diindikasikan untuk pengobatan hipertensi dengan penyakit
kardiovaskuler
dan diabetes. ACE inhibitor dapat menurunkan tekanan darah
dengan
menghambat konversi angiotensin I menjadi angiotensin II.
Angiotensin
inhibitors dapat menurunkan kadar angiotensin II plasma dan
sangat
penting dalam pengobatan hipertensi, karena angiotensin II
berperan dalam
sejumlah respon yang dapat meninggikan tekanan arterial dan
fungsi renal,
sehingga angiotensin II memberikan kontribusi terhadap
patogenesis
hipertensi, penyakit arterial, gagal jantung dan penyakit renal
diabetik.
(Hadiyanto, 2009).
Gambar 2.13 Renin Angiotensin Aldosteron System
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
22
Universitas Indonesia
Gambar di atas menunjukkan pelepasan renin merangsang
konversi
angiotensinogen (dari hati) menjadi angiotensin I, yang
selanjutnya
dikonversi ke angiotensin II oleh angiotensin converting enzyme
(ACE).
Angiotensin II menyebabkan vasokontriksi, pelepasan aldosteron
dari
korteks adrenal dan retensi natrium, akibatnya tekanan darah
meningkat
dan terjadi penurunan renin, sehingga terjadi proses homeostatis
(Page
et al.,2006).
d. Vasodilator ( Penghambat Kanal Kalsium)
Vasodilator langsung menurunkan tekanan darah dengan
merelaksasi
otot polos vaskular sehingga mendilatasi pembuluh darah
resistans dan
pada berbagai tingkat meningkatkan kapasitans pula. (Hadiyanto,
2009).
Mekanisme kerja penghambat kanal kalsium adalah hambatan
terhadap masuknya kalsium ke dalam otot jantung dan otot polos
arteri.
Hambatan terhadap otot jantung menyebabkan efek inotropik
negatif dan
terhadap otot polos menyebabkan relaksasi, dengan mengurangi
kontraktilitas otot jantung dan otot polos, obat ini dapat
digunakan sebagai
obat antihipertensi dan antiangina, juga menyebabkan depresi
otot jantung
(Hadiyanto,2009; Katzung, 1998).
2.4.6. Pengukuran Tekanan Darah (Hadiyanto, 2009; Kelompok Kerja
Ilmiah,
1993)
Pengukuran tekanan darah dilakukan untuk menilai kesehatan
kardiovaskuler, termasuk skrining hipertensi dan monitoring
pengobatan
pasien hipertensi. Pengukuran dilakukan secara tidak langsung,
karena itu
cara pengukuran sangat penting untuk memastikan pengukuran yang
benar,
dapat dipercaya dan menuntun pengobatan. Ketepatan dalam
pengukuran
darah secara berulang merupakan dasar penegakan diagnostik
sekaligus
keputusan dalam pengobatan. Pengukuran tekanan darah dilakukan
dalam
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
23
Universitas Indonesia
posisi pasien duduk bersandar dengan meletakkan tangan di atas
meja atau
berbaring.
Dengan menggunakan manset sesuai dengan ukuran lengan,
manset
kemudian dililitkan pada lengan atas kira-kira 2 cm di atas
siku, kemudian
meletakkan stetoskop di atas arteri brakialis. Tekanan dinaikkan
dengan
memencet alat pompa sampai 20-30 mm Hg di atas tekanan
sistolik,
kemudian tekanan diturunkan dengan kecepatan 2 mm Hg per detik
sambil
mendengar bunyi Korotkoff. Turbulensi aliran darah dalam arteri
brakialis
menyebabkan bunyi Korotkoff yaitu bunyi yang dihasilkan oleh
gelombang
pulsasi arteri, saat munculnya bunyi Korotkoff dicatat sebagai
tekanan
sistolik dan saat hilangnya bunyi Korotkoff dicatat sebagai
tekanan
diastolik.
Pengukuran tekanan darah pada hewan bisa secara langsung dan
tidak
langsung, yang sering dilakukan adalah cara langsung. Hewan
dianestesi
terlebih dahulu, kemudian ke dalam arteri karotid dimasukkan
sebuah
kanula yang dihubungkan dengan alat manometer untuk
mengetahui
tekanan darahnya.
Pengukuran tekanan darah pada hewan secara tidak langsung
dapat
dilakukan dengan menggunakan alat” Rat tail blood pressure
monitoring
system”, cara kerjanya mirip dengan pengukuran tekanan darah
pada
manusia, dimana hewan coba (tikus) dimasukkan ke dalam tempat
yang
seukuran badannya, kemudian didiamkan selama 10 menit supaya
hewan
percobaan tenang, setelah itu ekor tikus dimasukkan ke dalam
cuff (mirip
manset) dan tekanan dinaikkan sampai di atas tekanan sistolik,
tekanan
diturunkan perlahan-lahan dan alat pada monitor akan mulai
bekerja,
tekanan sistolik dapat dibaca pada grafik yang keluar dari alat
monitor.
Alat ini mempunyai kelebihan yaitu hewan coba tidak perlu
dibunuh dan
hasil pengukuran cukup akurat.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
24
Universitas Indonesia
2.4.7. Induksi Pada Hewan Percobaan (Kelompok Kerja Ilmiah,
1993;
Wresdining Tyas, 2007)
Untuk penapisan terarah aktivitas farmakologik antihipertensi,
dapat
digunakan tikus yang hipertensif. Keadaan hipertensi pada hewan
dapat
dibuat dengan induksi pada hewan percobaan. Ada berbagai cara
untuk
menginduksi, antara lain dengan pemberian larutan Natrium
Klorida
(NaCl) 2-2,5 % pada tikus, dimana setelah 6 minggu rata- rata
tekanan
darahnya meningkat. Pada hipertensi renal hewan coba dapat
diinduksi
dengan cara menjepit atau mengikat arteri renalis tikus.
Hipertensi renal
juga dapat terjadi apabila dilakukan penekanan pada ginjal
dengan cara
membungkusnya dengan selofan.
2.5. Ekstraksi
Di dalam Depkes RI (2000b) disebutkan bahwa ekstraksi adalah
kegiatan
penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah
dari bahan-
bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair, sedangkan
ekstrak adalah
sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif
dari
simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang
sesuai,
kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau
serbuk
yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa sehingga memenuhi baku
yang
ditetapkan (Depkes, 1995).
Metode ekstraksi dapat dilakukan dengan beragam cara,
salahsatunya
dengan menggunakan metode maserasi, yaitu ekstraksi cara dingin,
dilakukan
dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari,
kemudian
dilakukan pengocokan beberapa kali secara kontinyu yang
bertujuan untuk
mencapai konsentrasi yang seimbang, sehingga proses pelarutan
zat aktif yang
terdapat di dalam sel tanaman akan berlangsung lebih cepat,
proses ini
dilakukan berulang kali sampai terjadi keseimbangan antara
larutan di luar
dengan di dalam sel.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
25
Universitas Indonesia
2.6 Kromatografi
Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan campuran
berdasarkan
perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu.
Metode
kromatografi dipakai secara luas untuk pemisahan analitik dan
preparatif,
hampir setiap campuran kimia mulai dari yang berbobot molekul
rendah sampai
tinggi, dapat dipisahkan menjadi komponen-komponennya dengan
beberapa
metode kromatografi.
Jenis pemisahan, baik pemisahan analitik maupun preparatif
tidak
didasarkan pada ukuran cuplikan, tapi lebih didasarkan untuk
keperluan khusus.
Kromatografi analitik biasanya digunakan pada tahap permulaan
untuk semua
cuplikan dan kromatografi preparatif hanya dilakukan bila
diperlukan fraksi
murni dari campuran (Gritter et al., 1991).
Pemisahan kromatografi dilakukan dengan memperhatikan
sifat-sifat
fisika umum dari suatu molekul, seperti :
a. Kecenderungan molekul untuk melarut dalam cairan
(kelarutan).
b. Kecenderungan molekul untuk melekat pada permukaan serbuk
halus
(adsorpsi, penjerapan).
c. Kecenderungan molekul untuk menguap atau berubah ke dalam
bentuk uap
(keatsirian).
Pada sistem kromatografi, campuran yang akan dipisahkan,
ditempatkan
dalam keadaan sedemikian rupa sehingga komponen-komponennya
harus
menunjukkan dua dari ketiga sifat tersebut (Gritter et al.,
1991).
2.6. 1 Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi lapis tipis adalah suatu teknik pemisahan
campuran
berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam
medium
tertentu. Komponen- komponen zat aktifnya dipisahkan antara dua
buah
fasa yaitu fasa diam yang akan menahan komponen dan fasa gerak
yang
akan melarutkan dan membawa komponen zat aktif. Komponen
yang
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
26
Universitas Indonesia
mudah tertahan pada fasa diam akan tertinggal pergerakannya
dibandingkan dengan komponen yang mudah larut dalam fasa
gerak.
Menurut Stahl (1985), fasa diam dapat berupa fasa polar maupun
non
polar, diantaranya silika gel, alumina, kieselguhr, magnesium
silikat,
selulosa dan resin. Silika gel merupakan fasa diam yang dapat
digunakan
sebagai fasa polar maupun non polar. Sebagai fasa polar,
merupakan
silika yang dibebaskan dari air, bersifat sedikit asam,
sedangkan sebagai
fasa non polar digunakan silika yang dilapisi dengan senyawa non
polar,
misalnya lemak, parafin, atau lilin.
Fasa gerak ialah medium penggerak dan terdiri atas satu atau
beberapa pelarut. Sistem pelarut ini harus berupa campuran
sesederhana
mungkin, maksimum tiga komponen pelarut. Jarak pengembangan
senyawa pada kromatogram biasanya dinyatakan dengan Rf atau hRf
,
yaitu perbandingan antara jarak tempuh komponen aktif senyawa
dari
titik awal dengan jarak tempuh fasa gerak.
Rf = Jarak titik pusat bercak dari titik awalJarak garis depan
dari titik awal
Angka Rf berjangka antara 0,00 dan 1,00, hanya ditentukan
dua
desimal, sedangkan hRf adalah angka Rf dikalikan faktor 100
(h)
sehingga menghasilkan nilai berjangka 0 sampai 100. Jika dipilih
10 cm
sebagai jarak pengembangan, maka Rf dikalikan 10 menjadi harga
hRf,
karena Rf merupakan fungsi sejumlah faktor, angka ini dipakai
sebagai
petunjuk saja, untuk menunjukkan letak suatu senyawa pada
suatu
kromatogram digunakan hRf (Stahl, 1985).
Untuk mendeteksi senyawa yang terdapat pada kromatogram,
dapat
dilakukan dengan berbagai cara, antara lain :
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
27
Universitas Indonesia
a. Fluoresensi dengan lampu UV.
Cara ini merupakan alat deteksi yang paling sederhana, jika
senyawa
menunjukkan penyerapan di daerah UV gelombang pendek
(radiasi
utama pada kira-kira panjang gelombang 254 nm) atau jika
senyawa
itu dapat dieksitasi ke fluoresensi radiasi UV gelombang pendek
dan
atau gelombang panjang (365 nm).
b. Deteksi dengan pereaksi kimia.
Bila senyawa tidak terdeteksi dengan menggunakan sinar UV,
maka
dapat digunakan pereaksi kimia dengan cara penyemprotan
untuk
menampakkan bercak senyawa, pertama dilakukan tanpa
pemanasan
dan bila perlu dapat dilakukan pemanasan karena pembentukan
warna
yang optimum seringkali memerlukan peningkatan suhu dalam
waktu
yang tertentu.
c. Deteksi biologi.
Deteksi biologi dapat dilakukan untuk senyawa-senyawa yang
secara
khas mempunyai aktivitas fisiologi tertentu. Prosedur tersebut
meliputi
deteksi langsung pada pelat KLT dan pengerokan bercak
kromatogram, kemudian dialihkan ke deteksi biologi.
2.7 Flavonoid
Flavonoid adalah senyawa yang terdiri dari C6-C3-C6, terdiri
atas dua inti
fenolat yang dihubungkan dengan tiga satuan karbon. Cincin A
memiliki
karakteristik bentuk hidroksilasi phloroglusinol atau resorsinol
dan cincin B
biasanya 3’,4’,5’ terhidroksilasi.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
28
Universitas Indonesia
Gambar 2.14 Kerangka Dasar Flavonoid (Friedli,2010)
Flavonoid umumnya terdapat dalam tumbuhan dan merupakan zat
warna
tumbuhan, jarang terdapat sebagai senyawa tunggal, pada umumnya
terdapat
dalam bentuk campuran dan terikat pada gula sebagai glikosida
dan aglikon
flavonoid. Gugus hidroksil selalu terdapat pada karbon no. 5 dan
no. 7 pada
cincin A, pada cincin B gugusan hidroksil atau alkoksil terdapat
pada karbon
no. 3´ dan no. 4´.
Senyawa ini terdapat dalam semua tumbuhan berpembuluh, tetapi
hanya
beberapa kelas yang tersebar lebih banyak dalam tanaman,
misalnya flavon dan
flavonol, sedangkan isoflavon dan biflavonol hanya terdapat pada
beberapa suku
tumbuhan (Harborne, 1987). Pada saat ini lebih dari 2000 jenis
flavonoid yang
terdapat dalam bentuk bebas (aglikon) sisanya terdapat dalam
bentuk O atau C
glikosida.
Flavonoid merupakan senyawa fenol, sehingga larut dalam air
(bersifat
polar), bila diberi senyawa yang bersifat basa atau ammonia,
akan berubah warna
sehingga mudah dideteksi pada kromatogram atau dalam larutan.
Flavonoid
mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi, oleh karena itu
menunjukkan
pita serapan yang kuat pada daerah spektrum UV dan spektrum
tampak.
Menurut Sirait (2007) semua flavonoid, merupakan turunan senyawa
induk
flavon dan dikenal sekitar 11 kelas flavonoid, yaitu : flavon,
flavonol, flavanon,
flavanonol, isoflavon, calkon, dihidrokalkon, auron,
antosianidin,katekin, flavan-
3,4-diol
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
29
Universitas Indonesia
Gambar 2.15 Struktur Kimia Golongan Flavonoid (Sirait,2007)
Dari klasifikasi di atas, ada 3 kelas yang paling banyak
terdapat di alam, yaitu
flavon, flavonol dan flavonon.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
30
Universitas Indonesia
Tabel 2.3 Sifat Berbagai Golongan Flavonoid
Golongan Flavonoid Penyebaran Ciri khasAntosianin Zat warna
merah tua,
merah, biru kehijauandan biru pada bunga,daun dan jaringan
lain
Larut dalam air, λmaks 515-545nm..
Flavonol Merupakan co-pigmen pada bunga,tersebar luas padadaun
berwarna kuning
Sesudah dihirolisis oleh asam,bercak berwarna kuning
terangdengan sinar UV padakromatogram maks 350-386 nm.
Flavon Seperti flavonol Sesudah dihidrolisis oleh asam,bercak
berwarna coklat padakromtaogram maks 330-350 nm
Calkon Zat warna kuningpada bunga, kadangterdapat pada
jaringanlain.
Memberikan warna merahdengan ammonia maks 370-410nm
Iso flavon Sering terdapat dalamakar, hanya terdapatdalam
familiaLeguminosae. Tidakberwarna
Tidak ada reaksi yang khas.
Flavonoid mempunyai banyak kegunaan, antara lain :
1. Bagi Tumbuhan :
a. Untuk menarik serangga, yang membantu proses penyerbukan.
b. Untuk menarik perhatian binatang yang membantu penyebaran
biji.
2. Bagi manusia :
a. Dosis kecil, flavon bekerja sebagai stimulan pada jantung,
hesperidin
mempengaruhi pembuluh darah kapiler.
b. Flavon terhidroksilasi bekerja sebagai diuretik dan sebagai
antioksidan
pada lemak.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
31 Universitas Indonesia
BAB IIIMETODE PENELITIAN
3.1 Lokasi
Penelitian dilakukan di 3 tempat, proses ekstraksi dilakukan
di
Laboratorium Fitokimia Farmasi FMIPA UI, Uji karakteristik
kimia
dilakukan di Pusat Studi Biofarmaka IPB, pengukuran tekanan
darah
dilakukan di Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Hewan
IPB.
3.2 Alat
Shaker, rotary evaporator (Janke & Kunkel), waterbath (Lab
line), tanur
(Thermolyne), oven (Jumo), bejana kromatografi (Camag), lempeng
silica gel
60 F2544, sonde lambung, kandang metabolit, Rat Tail Blood
Pressure
Monitoring System (Harvard), Reprostar (Camag).
3.3 Bahan
3.3.1 Simplisia
Simplisia herba seledri varietas besar dengan panjang 30-40
cm
diperoleh dari pasar Bogor, daun tempuyung diperoleh dari
kebun
F-MIPA UI dan sekitarnya, Depok. Kedua tanaman ini dideterminasi
di
Kebun Raya Bogor.
Obat herbal pembanding yang digunakan adalah Tensigard yang
diperoleh dari Apotik Bogor Baru, Bogor.
3.3.2 Hewan Coba
Hewan yang digunakan dalam percobaan adalah tikus putih
jantan
(Rattus novergicus) galur Sprague-Dawley yang berumur kurang
lebih
2 bulan dan berbobot antara 135-225 gram, diperoleh dari
Fakultas
Kedokteran Hewan IPB.
3.3.3 Bahan Kimia
Pelarut dan bahan kimia yang digunakan dalam penelitian ini
yaitu
pelarut teknis etanol 96 % yang telah didestilasi, aquadest,
pelarut p.a
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
32
Universitas Indonesia
antara lain asam klorida (Merck), asam sulfat (Merck), n-
heksan
(Merck), metanol (Merck), n-butanol (Merck), kloroform
(Merck),
asam asetat glasial (Merck)
3.4 Cara Kerja
3.4.1 Metode Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental
3.4.2 Rancangan Penelitian
Rancangan penelitian menggunakan Rancang Acak Lengkap
(RAL) dengan 9 kelompok perlakuan. Jumlah ulangan tikus yang
digunakan dalam setiap kelompok ditentukan berdasarkan rumus
Federer :
(t-1) (n-1) ≥ 15
Dimana, t = jumlah kelompok perlakuan hewan coba
n = ulangan tikus
beda perlakuan kelompok adalah 8 (t=8), jumlah minimum tikus
yang
diperlukan untuk masing-masing kelompok yaitu 3 ekor, dalam
penelitian ini digunakan 4 ekor tikus untuk tiap kelompok
sehingga
tikus yang dibutuhkan untuk seluruh kelompok yaitu n ≥ 4x8 ≥ 32
ekor
tikus.
3.4.3 Persiapan Hewan Coba
Hewan coba diaklimatisasi terlebih dahulu selama kurang
lebih
dua minggu di laboratorium Farmakologi FKH IPB agar dapat
menyesuaikan diri dengan lingkungan baru.
3.4.4 Preparasi Ekstrak (Wresdining Tyas,2007; Depkes RI,
2000a)
Ekstrak herba seledri dan daun tempuyung dibuat dengan cara
maserasi dalam botol coklat yang terpisah, dengan pelarut yang
sesuai
sampai seluruh serbuk terendam. Maserasi dilakukan secara
total
dengan penggantian pelarut setiap 24 jam, sampai filtrat tidak
berubah
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
33
Universitas Indonesia
warna lagi. Serbuk simplisia sebanyak 1500 gram, dibagi dalam
empat
buah botol coklat dimaserasi dengan 1 L pelarut pada hari
pertama,
kemudian dilakukan penggantian pelarut yang baru sebanyak 750
mL
pada hari-hari berikutnya. Pelarut yang digunakan adalah etanol
30 %
untuk seledri dan etanol 50 % untuk tempuyung.
Maserasi dilakukan dengan pengocokan berulang-ulang setiap
jam
nya sebanyak 6 kali pengocokan, kemudian didiamkan selama 24
jam
Ekstrak hasil maserasi dipekatkan dengan rotary evaporator
sampai
volumenya menjadi sepertiga volume awal, selanjutnya ekstrak
tersebut
dipekatkan lagi dengan waterbath pada suhu 50o C sampai
menjadi
ekstrak kental yang siap pakai (kadar air di bawah 10 %).
Kemudian
masing-masing ekstrak disimpan dalam lemari pendingin 4-11o
C
dalam wadah tertutup rapat.
3.4.5 Penetapan Dosis
Dosis yang digunakan yaitu dosis normal, berdasarkan hasil
penelitian sebelumnya (Wresdining Tyas, 2007) diperoleh dosis
sbb :
a. Campuran 1, 75 % dari dosis awal (0,02 g ekstrak seledri dan
0,15
g ekstrak tempuyung/200 g bb tikus)
b. Campuran 2, dosis awal (0,036 g ekstrak seledri dan 0,206
g
ekstrak tempuyung/200 g bb tikus).
c. Campuran 3, 125 % dari dosis awal (0,045 g ekstrak seledri
dan
0,25 g ekstrak tempuyung/200 g bb tikus)
d. Campuran 4/Purifikasi 2 ( Campuran 2 yang dipurifikasi
dengan
penyaringan menggunakan pelarut aquadest).
e. Campuran 5/Purifikasi 3 (Campuran 3 yang dipurifikasi
dengan
penyaringan menggunakan pelarut aquadest)
g. Sediaan herbal pembanding Tensigard (0,141 g tensigard /200 g
bb
tikus).
Perhitungan dosis di atas adalah hasil konversi dari
penelitian
sebelumnya, yaitu untuk rendemen seledri 26,92% dan rendemen
tempuyung 34,01 % (Wresdining Tyas, 2007). Pada percobaan
ini
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
34
Universitas Indonesia
diperoleh rendemen seledri sebesar 25,11 % dan rendemen
tempuyung
28,20 %, jadi perhitungan dosisnya dikonversikan sesuai
dengan
rendemen sekarang, contoh :
Dosis campuran 1 (0,034 mg ekstrak seledri dan 0,171 mg
esktrak
tempuyung/ 200 g bb tikus), maka dosis yang diperlukan :
Ekstrak seledri : 26,92/25,11 x 0,034 mg = 0,036 mg /200 g
tikus
Ekstrak tempuyung : 34,01/28,20 x 0,171 mg = 0,206 mg/ 200 g
tikus
Jadi untuk dosis awal digunakan dosis 0,036 mg ekstrak seledri
dan
0,206 mg ekstrak tempuyung.
Perhitungan herbal standard (Tensigard)
Komposisi obat herbal yang digunakan sebagai pembanding
yaitu
Tensigard , setelah dilakukan keseragaman bobot, diperoleh :
Dalam 1 kapsul 262,12 mg mengandung :
92 mg ekstrak seledri (Apium graveolens)
28 mg ekstrak daun kumis kucing (Orthosiphons staminae)
Dosis pengobatan pada manusia 3x1 kapsul/ hari
Perhitungan dosis untuk tikus :
Perhitungan dosis untuk tikus menggunakan rumus konversi
dari
Lawrence & Bacharach (1964) dan rumus faktor keamanan dari
Lu
(1995), yaitu :
Tikus dengan berat badan 200 gram, faktor farmakokinetik
/faktor
keamanan 10 dan faktor konversi dari manusia ke tikus =
0,018.
Banyak obat herbal yang dibutuhkan :
0,262 x 0,018 x 10 x 3= 0, 141 g/200 g BB tikus per hari
3.4.6 Pembuatan Sediaan Uji.
Masing-masing ekstrak kental herba seledri dan daun
tempuyung
ditimbang sesuai jumlah yang dibutuhkan ke dalam tempat yang
sama,
kemudian campuran tersebut disuspensikan ke dalam CMC 0,5 %
sesuai dengan dosis yang akan diberikan, caranya sediaan
digerus
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
35
Universitas Indonesia
dengan CMC 0,5 % dan diencerkan perlahan-lahan sambil
dihomogenisasi hingga mencapai volume suspensi yang
diinginkan.
Suspensi ini dimasukkan ke dalam beberapa botol kecil dan
disimpan didalam freezer selama percobaan , hal ini dilakukan
untuk
menjaga stabilitas suspensi tersebut , satu hari sebelum
diberikan pada
hewan coba, satu botol suspensi dikeluarkan dari freezer dan
disimpan
di lemari pendingin. Pemberian pada hewan coba dilakukan secara
oral
dengan menggunakan teknik sonde.
3.4.7 Pembuatan CMC 0, 5 %
Sebanyak 500 mg CMC ditimbang seksama, kemudian ditaburkan
secara merata pada lumpang yang berisi air panas kurang lebih 20
kali
berat CMC, didiamkan selama 10 menit hingga CMC mengembang,
lalu digerus homogen dan ditambahkan aquadest sampai
mencapai
volume 100 mL.
3.4.8 Pembuatan Larutan Natrium Klorida 2 %
Sebanyak 2 gram natrium klorida ditimbang seksama, kemudian
dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL, ditambahkan aquadest
sedikit
demi sedikit sampai tanda batas, dikocok berulangkali hingga
larutan
menjadi homogen.
Pemberian larutan natrium klorida 2 % pada hewan coba
dilakukan
secara oral dengan menggunakan teknik sonde, sebanyak 2 ml tiap
200
gram bb tikus.
3.4.9 Purifikasi Ekstrak
Sebanyak 1,48 g ekstrak herba seledri dan 11,17 g ekstrak
daun
tempuyung (Campuran 1), 2,67 g ekstrak herba seledri dan 15,33
g
ekstrak daun tempuyung (Campuran 2) dan 3,375 g ekstrak
herba
seledri dan 19,50 g ekstrak daun tempuyung (Campuran
3)ditimbang
seksama. Masing-masing campuran ekstrak dimasukan ke dalam
mortar, kemudian ditambahkan 25 ml aquadest dan digerus,
disaring
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
36
Universitas Indonesia
berulang kali sampai filtrat tidak berwarna lagi, aquadest
yang
dibutuhkan adalah 600 ml. Filtrat yang diperoleh dikeringkan
dengan
menggunakan alat freeze dryer selama 48 jam sampai diperoleh
ekstrak
kering. Pada saat akan digunakan serbuk ekstrak tersebut
dibuat
suspensi dengan CMC 0,5 % dan diencerkan sampai volume yang
diinginkan. Sediaan ini dibuat untuk pemakaian selama 14
hari,
disimpan dalam beberapa botol kecil dan tertutup rapat
kemudian
ditaruh di freezer, sehari sebelum digunakan dikeluarkan dari
freezer
dan ditaruh di lemari pendingin sampai ekstrak siap
digunakan.
3.5 Pengujian terhadap simplisia dan ekstrak
3.5.1 Parameter Non Spesifik
3.5.1.1 Kadar Air
Prosedur penentuan kadar air simplisia dan ekstrak dilakukan
dengan menggunakan alat moisture balance. Sebanyak 1 gram
simplisia/ekstrak disimpan di atas punch, kemudian diratakan
sampai
menutupi permukaan punch, lalu ditutup, kemudian alat
dinyalakan,
maka kadar air akan tertera secara otomatis pada alat setelah
proses
penentuan kadar air selesai.
3.5.1.2 Kadar Abu Total
Lebih kurang 2-3 gram simplisia dan ekstrak ditimbang seksama
,
masukkan ke dalam krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara
. Zat
dipijar dalam tanur dengan suhu 600oC hingga arang habis,
lalu
didinginkan dalam desikator dan ditimbang. Kadar abu
dihitung
terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes RI,
2000b).
3.5.1.3 Kadar Abu yang Tidak Larut Asam.
Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu, dilarutkan dalam
25
mL asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut
dalam
asam disaring melalui kertas saring bebas abu dan dipijar hingga
bobot
tetap, kemudian ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam
asam
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
37
Universitas Indonesia
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes
RI,
2000b).
3.5.1.4. Penetapan Susut Pengeringan
Lebih kurang 2 gram ekstrak ditimbang seksama dalam wadah
yang telah ditara. Keringkan pada suhu 105oC selama 5 jam
dan
ditimbang. Pengeringan dilanjutkan pada jarak 1 jam sampai
perbedaan
antara 2 penimbangan berturut-turut tidak lebih dari 0,25 %
(Depkes
RI, 2000b).
3.5.2 Parameter spesifik
3.5.2.1 Identitas
Parameter identitas simplisia dinyatakan dengan menguraikan
deskripsi tata nama meliputi nama simplisia, nama latin
tanaman,
bagian tanaman yang digunakan dalam bahasa Indonesia.
3.5.2.2 Organoleptik
Parameter ini dilakukan dengan menggunakan pancaindera dalam
mendeskripsikan bentuk, bau dan warna simplisia/ekstrak
tersebut.
3.5.2.3 Senyawa Terlarut Dalam Pelarut Tertentu
a. Kadar Senyawa yang Larut Dalam Air.
Sebanyak 2 gram ekstrak dimaserasi selama 24 jam dengan 100
mL air-kloroform (1:1) menggunakan labu bersumbat sambil
berkali-
kali dikocok selama 6 jam pertama dan kemudian didiamkan selama
18
jam, kemudian disaring dan 20 mL filtrat diuapkan hingga kering
dalam
cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara dan residu
dipanaskan
pada suhu 105°C hingga bobot tetap. Kadar dihitung dalam
persen
senyawa yang larut dalam air terhadap ekstrak awal (Depkes RI,
1995).
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
38
Universitas Indonesia
b. Kadar Senyawa yang Larut Dalam Etanol
Sebanyak 2 gram ekstrak dimaserasi selama 24 jam dengan 100
mL etanol 95% menggunakan labu bersumbat sambil sekali-kali
dikocok selama 6 jam pertama, kemudian didiamkan selama 18
jam.
Saring dengan cepat untuk menghindari penguapan etanol, setelah
itu
20 mL filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan dangkal
berdasar
rata yang telah ditara, residu dipanaskan pada suhu 105°C hingga
bobot
tetap. Kadar dihitung dalam persen senyawa yang larut dalam
etanol
95 % terhadap ekstrak awal (Depkes RI, 1995).
3.5.3 Uji Kandungan Kimia Ekstrak
3.5.3.1 Uji Alkaloid
Sebanyak 500 mg ekstrak dilarutkan dalam 10 mL kloroform dan
4
tetes amonium hidroksida kemudian disaring dan filtratnya
dimasukkan
ke dalam tabung reaksi bertutup. Ekstrak kloroform dalam
tabung
reaksi dikocok dengan 6 mL asam sulfat 2 M dan lapisan
asamnya
dipisahkan ke dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan asam
ini
diteteskan pada lempeng kaca, bila ditambahkan pereaksi Meyer
akan
menimbulkan endapan putih, dengan pereaksi Wagner akan
menimbulkan warna coklat, sedangkan dengan pereaksi
Dragendorf
akan menimbulkan endapan berwarna merah jingga (Depkes RI,
1995).
3.5.3.2 Uji Triterpenoid dan Steroid
Sebanyak 500 mg ekstrak dilarutkan dalam 250 mL etanol panas
(50°C) kemudian hasilnya disaring ke dalam pinggan porselein
dan
diuapkan sampai kering. Residu ditambah eter dan ekstrak eter
di
pindahkan ke dalam lempeng tetes, kemudian ditambahkan 3
tetes
anhidrida asetat dan 1 tetes asam sulfat pekat (uji
Liebermann-
Bourchard). Warna merah atau ungu menunjukkan adanya
triterpenoid
dan warna hijau menunjukkan adanya steroid (Depkes RI,
1995).
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
39
Universitas Indonesia
3.5.3.3 Uji Saponin dan Flavonoid
Sebanyak 500 mg ekstrak dimasukkan ke dalam gelas piala,
kemudian ditambahkan 100 mL air panas dan dididihkan selama
5
menit, setelah itu disaring dan filtratnya digunakan untuk
pengujian.
Saponin diuji dengan cara 10 mL filtrat dalam tabung reaksi
dikocok
selama 10 detik, kemudian dibiarkan selama 10 menit, adanya
saponin
ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil. Uji
saponin
dilakukan dengan cara 10 mL filtrat dimasukkan ke dalam
tabung
reaksi, ditambah 0,5 g serbuk magnesium, 2 mL alkohol
klorhidrat
(campuran asam klorida 37 % dan etanol 95 % 1:1) dan 20 mL
amil
alkohol, kemudian dikocok dengan kuat, terbentuknya warna
merah,
kuning, jingga pada lapisan alkohol menunjukkan adanya
flavonoid
(Depkes RI, 1995).
3.5.3.4 Uji Kuinon
Sebanyak 500 mg ekstrak ditambahkan 100 mL air panas,
didihkan
selama 5 menit dan disaring, 10 mL filtrat yang dihasilkan
kemudian
ditambah beberapa tetes larutan natrium hidroksida 0,1 N,
terbentuknya
warna merah menunjukkan adanya kuinon (Depkes RI, 1995).
3.5.3.5 Uji Tanin
Sejumlah 0,2 g fraksi aktif dimasukan dalam tabung reaksi
dan
ditambahkan 10 mL air panas, didihkan selama 5 menit, saring
dengan
kertas saring dinginkan kemudian dibagi menjadi dua bagian.
Kedalam
larutan pertama ditambahkan larutan besi (III) klorida,
terbentuknya
warna biru tua atau hijau kehitaman menunjukkan adanya
senyawa
golongan tannin. Kedalam larutan kedua ditambahkan pereaksi
Stiasny
( formaldehid 30% : asam klorida p (2:1),kemudian dipanaskan
dalam
penangas air terbentuknya endapan warna merah muda menujukan
adanya tanin katekuat. Selanjutnya endapan disaring, filtrate
dijenuhkan
dengan natrium asetat, ditambahkan larutan besi (III)
klorida
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
40
Universitas Indonesia
terbentuknya warna biru tinta menunjukkan adanya tanin galat
(Fong
et al., 1980).
3.5.3.6 Uji Kumarin
Sebanyak 500 mg ekstrak ditambahkan 10 mL kloroform P
kemudian dipanaskan selama 10 menit, didinginkan dan disaring.
Filtrat
diuapkan , kemudian ditambahkan 10 mL air panas dan didinginkan,
ke
dalam campuran kemudian ditambahkan 0,5 mL ammonia 10 % P,
adanya fluoresensi hijau atau biru pada sinar UV 366 nm
menunjukkan
adanya kumarin (Depkes RI, 1995).
3.5.4 Pola Kromatogram Dengan Metode Kromatografi Lapis
Tipis
Pola kromatogram dilakukan terhadap ekstrak metanol seledri
dan
ekstrak metanol tempuyung , juga terhadap fraksi air seledri dan
fraksi
air tempuyung.
Ekstrak ditotolkan pada lempeng kromatografi Silica gel 60
F254
yang telah diaktifkan, kemudian dicoba dengan berbagai fasa
gerak,
antara lain n-heksan-etil asetat (1:1, 1:2, 1:4, 2:3), kloroform
– metanol
(1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 dan seterusnya sampai perbandingan
14:1),
n-butanol-asam asetat glasial-air (7:1:2, 4 :1: 5), etil asetat
: metanol
(4:1), Hexan : etanol (1:9), diklormetan : metanol (9:1), asam
klorida :
asam asetat : air (3:30:10).
3.6 Purifikasi Campuran Ekstrak Seledri dan Tempuyung
Purifikasi dilakukan terhadap campuran ekstrak seledri dan
tempuyung
dengan cara penyaringan menggunakan pelarut air. Campuran
ekstrak
dengan berbagai variasi dosis disaring dengan sejumlah tertentu
pelarut air
secara terpisah sampai filtrat jernih , residu dikeringkan di
udara terbuka dan
ditimbang, sedangkan filtratnya dikeringkan dengan menggunakan
alat freeze
dryer selama 2 hari hingga diperoleh ekstrak kering.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
41
Universitas Indonesia
3.7 Pelaksanaan Percobaan
Dalam percobaan ini tikus dibagi dalam 8 kelompok perlakuan,
masing-
masing kelompok uji menggunakan 4 ekor tikus. Tikus yang
digunakan
adalah tikus normal dan tikus yang dibuat hipertensi. Tikus
hipertensi dibuat
dengan menginduksi tikus dengan larutan natrium klorida 2 %
setiap hari satu
kali pemberian, selama 4 minggu terhadap tikus normal. Setiap
perlakuan
terhadap hewan coba diberi jarak satu jam, hal ini dilakukan
untuk
mengurangi stres pada hewan coba setelah mendapat perlakuan yang
pertama.
Pengukuran tekanan darah dilakukan pada hari ke satu sebelum
diinduksi dengan larutan natrium klorida 2 %, kemudian pada hari
ke
limabelas sebelum pemberian sediaan uji dan pada hari ke
tigapuluh.
Adapun pengelompokannya sebagai berikut :
Kelompok 1 = tikus normal, diberi air minum biasa, pada minggu
ke tiga
disonde dengan CMC 0,5 % selama 14 hari.
Kelompok 2 = tikus disonde dengan larutan natrium klorida 2 %
selama
4 minggu berturut-turut dan disonde larutan CMC 0, 5 % selama 14
hari.
Kelompok 3 = tikus disonde dengan larutan natrium klorida 2 %
selama
4 minggu berturut-turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji
campuran 1
selama 14 hari
Kelompok 4 = tikus disonde dengan larutan natrium klorida 2 %
selama
4 minggu berturut-turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji
campuran 2
selama 14 hari
Kelompok 5 = tikus disonde dengan larutan natrium klorida 2 %
selama
4 minggu berturut turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji
campuran 3
selama 14 hari
Kelompok 6 = tikus disonde dengan larutan natrium klorida 2 %
selama
4 minggu berturut-turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji
purifikasi
campuran 2 selama 14 hari.
Kelompok 7 = tikus disonde dengan larutan natrium klorida 2 %
selama
4 minggu berturut-turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji
purifikasi
campuran 3 selama 14 hari.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
42
Universitas Indonesia
Kelompok 8 = tikus disonde dengan larutan natrium klorida 2 %
selama
4 minggu berturut-turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji
sediaan herbal
selama 14 hari.
Tabel 3.1 Pembagian Kelompok Perlakuan Hewan Coba
Kelompokperlakuan
PerlakuanHari ke
1Hari ke
2-14Hari ke
15Hari ke16-30
Hari ke31
1(Normal)
a+b+c a a+b+c a a+b+c
2(NaCl)
b+c+d d b+c+d d b+c+d
3(Campuran 1)
b+c+d d b+c+d+e d+e b+c+d+e
4(Campuran 2)
b+c+d d b+c+d+e d+e b+c+d+e
5(Campuran 3)
b+c+d d b+c+d+e d+e b+c+d+e
6(Purifikasi 2)
b+c+d d b+c+d+e d+e b+c+d+e
7(Purifikasi 3)
b+c+d d b+c+d+e d+e b+c+d+e
8(Obat herbal)
b+c+d d b+c+d+e d+e b+c+d+e
Keterangan : a = air, b = berat badan, c = volume urin, d = NaCl
2 %, e = sediaan
uji.
3.8. Pemeriksaan Tekanan Darah Tikus
Pengukuran tekanan sistolik tikus dilakukan dengan cara tidak
langsung
dengan menggunakan alat Rat tail blood pressure monitoring
system. Tikus
yang akan diukur dimasukkan ke dalam kandang khusus seukuran
badannya
supaya tidak bisa banyak bergerak, kemudian didiamkan selama 10
menit
supaya tikus tenang, setelah itu ekor tikus dimasukkan kedalam
cuff dan
tekanan dinaikkan sampai di atas tekanan sistolik, tekanan
kemudian
diturunkan perlahan-lahan dan hasilnya dapat diamati pada kertas
grafik yang
keluar dari monitor.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
43
Universitas Indonesia
3.9 Pengamatan
Selama percobaan yang diamati adalah berat badan tikus, volume
urin,
tekanan sistolik tikus, tekanan arteri rata-rata, tekanan
diastolik dihitung
dengan cara tekanan arteri rata-rata dikalikan dua, dikurangi
tekanan sistolik.
3.10 Analisis Data
Data tekanan sistolik tikus, volume urin dan berat badan tikus
yang
diperoleh diuji homogenitasnya dan normalitasnya, selanjutnya
dilakukan
analisis varian satu arah (one way anova) untuk melihat hubungan
antara
kelompok perlakuan. Bila terdapat pengaruh nyata, maka untuk
mengetahui
perbedaan antar perlakuan dilakukan dengan analisis peragam.
Analisis Peragam (Covariance Analysis)
Analisis peragam adalah analisis yang digunakan dalam
perancangan
percobaan yang di dalamnya terdapat peubah pengiring
(concomitant
variable). Peubah pengiring adalah peubah tertentu yang tidak
dapat
dikendalikan, tetapi sangat mempengaruhi peubah respon yang
diamati.
Peubah pengiring ini digunakan untuk mengurangi keragaman
percobaan.
Peubah pengiring yang digunakan dapat lebih dari satu, seperti
dalam regresi.
Oleh karena itu ada yang mengatakan bahwa analisis peragam
merupakan
gabungan dari analisis ragam dan regresi (Gaspersz 1995).
Model linear analisis peragam dalam RAL.
dengan i = 1, …, t dan j = 1, …, n
dimana:
Yij = nilai respon yang dihasilkan perlakuan ke-i dan ulangan
ke-j
µ = nilai rata-rata respon yang sesungguhnya
τi = pengaruh aditif dari perlakuan ke-i
β = koefisien regresi yang menunjukkan ketergantungan Yij pada
Xij
Xij = pengukuran peubah pengiring pada perlakuan ke-i pada
ulangan ke-j
yang berkaitan dengan Yij.
= nilai rata-rata peubah pengiring yang diukur
= komponen galat yang timbul pada ulangan ke-i dan perlakuan
ke-j.
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
44
Universitas Indonesia
Hipotesis yang diuji:
Pengaruh perlakuan
H0 : τi = … = τt = 0 (perlakuan tidak berpengaruh terhadap
respon yang
diamati)
H1 : minimal ada satu i dimana τi ≠ 0 (perlakuan berpengaruh
terhadap respon
yang diamati.
Pengaruh peubah pengiring
H0 : β = 0 (peubah pengiring tidak berpengaruh terhadap respon
yang
diamati)
H1 : β ≠ 0 (peubah pengiring berpengaruh terhadap respon yang
diamati).
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
45 Universitas Indonesia
BAB IVHASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil
4.1.1 Pembuatan Serbuk Simplisia
Simplisia yang digunakan adalah herba seledri yang diperoleh
dari
pasar Bogor, Jawa Barat dan daun tempuyung diperoleh dari kebun
Farmasi,
FMIPA-UI dan sekitarnya, Depok. Masing-masing simplisia
kemudian
dikeringkan dengan menggunakan oven pada temperatur 50°C, lalu
digiling
dan diayak hingga diperoleh serbuk simplisia.
Serbuk simplisia yang diperoleh adalah 1529 gram serbuk
simplisia
herba seledri dari 15 kg herba segar dan 1375 gram serbuk
simplisia daun
tempuyung dari 13,5 kg daun tempuyung segar. Rendemen serbuk
simplisia
herba seledri adalah 10,19 % dan untuk daun tempuyung adalah
10,18 %.
(Lampiran 13).
4.1.2 Pembuatan Ekstrak
Serbuk simplisia herba seledri dimaserasi dengan menggunakan
pelarut
etanol 30 %, sedangkan serbuk simplisia daun tempuyung
menggunakan
pelarut etanol 50 %, maserasi dilakukan berulangkali sampai
filtrat tidak
berwarna , proses maserasi ini membutuhkan waktu satu minggu,
filtrat yang
terkumpul kemudian dipekatkan di atas waterbath dengan suhu 50°C
hingga
diperoleh ekstrak kental, proses pemekatan ini membutuhkan waktu
dua
minggu.
Ekstrak herba seledri yang diperoleh sebanyak 384 gram dari
1529 gram serbuk simplisia dan ekstrak daun tempuyung yang
diperoleh
sebanyak 387,75 gram dari 1375 gram serbuk simplisia. Rendemen
yang
diperoleh untuk herba seledri adalah 25, 11% dan rendemen untuk
daun
tempuyung adalah 28,20 %. (Lampiran 1, Lampiran 2, Lampiran
14).
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
Universitas Indonesia
46
4.1.3 Pengujian Terhadap Simplisia dan Ekstrak Herba Seledri
dan
Daun Tempuyung.
4.1.3.1 Parameter Spesifik.
a. Identitas
Simplisia yang digunakan dalam penelitian ini adalah herba
seledri
yang berasal dari seluruh bagian tanaman kecuali akar dan
daun
tempuyung dengan panjang daun 15-30 cm, keduanya telah
dideterminasi di Pusat Konservasi Tumbuhan-Kebun Raya Bogor,
Jawa
Barat. (Lampiran 27).
b. Organoleptik
Hasil permeriksaan organoleptik pada serbuk simplisia
diperoleh
hasil serbuk simplisia berwarna hijau tua, terasa agak pedas,
bau
aromatis khas, sedangkan serbuk simplisia tempuyung berwarna
hijau
kecoklatan, rasa agak pahit dan kelat. Pemeriksaan organoleptik
pada
ekstrak seledri, berwarna coklat tua, berbau aromatis khas, rasa
agak
pedas, sedangkan ekstrak tempuyung berwarna coklat kehitaman,
bau
khas, rasa agak pahit dan sedikit terasa asin. (Lampiran 1,
Lampiran 2).
c. Penetapan kadar sari yang larut dalam air
Penetapan kadar sari yang larut dalam air menghasilkan kadar
37, 03 % untuk ekstrak herba seledri dan 35,61 % untuk ekstrak
daun
tempuyung. Hal ini menunjukkan senyawa yang larut dalam air
cukup
tinggi, walaupun tidak sesuai dengan ketentuan dalam Depkes
RI
(1995) yang menyebutkan bahwa kadar sari yang larut dalam air
tidak
kurang dari 40 %. (Lampiran 15).
d. Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol.
Hasil percobaan diperoleh kandungan senyawa yang larut dalam
etanol untuk ekstrak herba seledri adalah 12,08 % dan 22,14 %
untuk
ekstrak daun tempuyung, hal ini sesuai dengan ketentuan dalam
buku
Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010
-
Universitas Indonesia
47
Depkes RI (1995) yang mensyaratkan kadar senyawa yang larut
dalam
etanol tidak kurang dari 11 %. (Lampiran 16).
4.1.3.2 Parameter Non Spesifik
a. Penetapan kadar air
Kadar air yang diperoleh untuk simplisia herba seled