UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi UICC HPV e CÂNCER CERVICAL CURRÍCULO
Apr 16, 2015
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typingProf. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
UICC
HPV e CÂNCERCERVICALCURRÍCULO
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01 Capítulo 2.d
Triagem e diagnóstico - Análise e tipagem de HPV
Prof. Suzanne Garland MDDiretora de Pesquisa Microbiológica, Chefe de Microbiologia Clínica e Doenças Infecciosas Hospital Real de MulheresMelbourne, Austrália
Associado Prof. Sepehr TabriziCientista de Pesquisa Sênior, Departamento de MicrobiologiaHospital Real de MulheresMelbourne, Austrália
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02 Partículas semelhantes a Vírus (VLP)• Análogos não infecciosos de um vírus patogênico
• VLP-L1 se une in vitro a capsídeos vazios ou “VLPs”
• Produção de VLP não padronizada
- Sistemas diferentes de expressão, métodos preparativos, abordagens de controle de qualidade
- Formatos de identificação variam (direto vs. indireto)
- Sem padrão ouro para estabelecimento de limite para resultado positivo
- Poucas comparações entre laboratórios
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03 Partículas semelhantes a Vírus (VLP)• VLPs podem ser analisadas utilizando técnicas de
microscopia eletrônica
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04 Detecção de anticorpo para HPV
• Anticorpos
- A presença representa infecção passada ou presente
- Pode ser gerado contra proteínas de HPV precoces (E) ou proteínas tardias (L)
- Anticorpos neutralizantes L1 se correlacionam com proteção iniciada por vacina
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05 Detecção de anticorpo para HPV• Vários ensaios foram desenvolvidos para detectar
anticorpos no soro/mucosa
- Teste imunoabsorvente de ligação a enzima (ELISA): medidas de Ig total, neutralizantes e não neutralizantes
- Testes de ligação competitiva, por exemplo, teste Luminex competitivo (cLIA): medidas de Ig neutralizantes a um epítopo apenas, mas a todas as classes de Ig
- Teste de pseudovírus: medidas de Ig neutralizantes total, todas as subclasses
- Western blot
- Radio-imuno precipitação
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06 Detecção de DNA do HPV por microscopia no tecido• Imuno-histoquímica (antígeno específico para o
grupo)
• Exame Papanicolau: detecta células precursoras de câncer
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07 Técnicas de Detecção Molecular para DNA do HPVMétodos de Amplificação
• Amplificação de sinal
- Captura Híbrida (HC2)
• Amplificação Alvo
- Reação em cadeia da polimerase - DNA do HPV por PCR
- RNAm do HPV
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08 Teste de Captura Híbrida 2
• Teste aprovado atualmente pelo FDA
- formato de tubo em 1995; formato de microtitulação em 1999
• Destinado para trabalhar com amostra de célula cervical esfoliada
• Kit de coleta recomendado inclui escova e meio de transporte de amostra
- Coleta de células endo e ectocervicais
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09 Teste de Captura Híbrida 2
• Sensibilidade de 5000 genomas/amostra
• Sonda para detecção de HPV de baixo risco
- HPV dos tipos 6, 11, 42, 43, 44
• Sonda para HPV de alto risco
- HPV dos tipos 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 e 68
• Resultados não específicos ao tipo
• Sem controle para entrada do número de células
• Boa comparação entre laboratórios
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10Reação em cadeia da polimerase• Muito sensível em cerca de 1 a 10 cópias /100.000
células
• Permite o teste de vários tipos de amostra
• Permite o teste de amostras estocadas com qualidade ruim de DNA
• Testes de consenso: geralmente com alvo na região L1
- Conservado
- Primers variam:MY09/MY11SPF1/SPF2PGMY09/PGMY11 GP5+/GP6+
- Detecção de variedade dos sistemas:ELISAdot blot
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11 Diferentes metodologias de PCR• Teste AMPLICOR ® para HPV
• Teste LINEAR ARRAY® para HPV
• Teste de genotipagem INNO-LiPA ®
- Genotipagem de HPV em cortes incluídos em parafina
- Os cortes do tecido podem ser muito antigos e submetidos à degradação do DNA (inclusive durante a extração)
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12 Diferentes metodologias de PCR
• Formulário do chip de DNA do HPV
• Microarray para HPV
• Ensaio de citometria de fluxo
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13 Outras metodologias para detectar os tipos de HPV
• Tecnologia xMAP® da Luminex
• Norchip - Proficiência ao HPV
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14 Limitações e desafios
• Diversa variação de ensaios
• Sensibilidade e especificidade diferentes
• Falha de leitura dos controles disponíveis, GQ, CQ
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15 Uso prático de métodos de teste de DNA para HPVClínico
• Triagem
• Triagem de exame Papanicolau equivocados / com valores limítrofes
• Monitoria de tratamento pós-displasia
Epidemiologia
• Áreas geográficas de vigilância- Prevalência do HPV- Prevalência do genótipo do HPV
Vacina
• Execução pré e pós vacina- Estudos de eficácia para a vacina- Diferentes regiões em todo o mundo
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Obrigado
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