CHUẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG SINH HỌC PHÂN TỬ 1 Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Bộ môn Công nghệ sinh học Lớp DH06SH Bài tiểu luận: KIỂM TRA ĐỘ NHẠY VÀ ĐỘ ĐẶC HIỆU CỦA PHƯƠNG PHÁP PCR ĐA MỒI TRONG PHÁT HIỆN SALMONELLA GÂY BỆNH TIÊU CHẢY Giáo viên hướng dẫn: Nguyễn Ngọc Hải Sinh viên thực hiện: Trịnh Xuân Thảo MSSV: 06126142 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 10/2009
19
Embed
Tr Đạ ọ ố ồ B c L - dulieu.tailieuhoctap.vndulieu.tailieuhoctap.vn/books/khoa-hoc-ky-thuat/cong-nghe-sinh-hoc/... · CHUẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG SINH
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
CHUẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG SINH HỌC PHÂN TỬ
1
Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Bộ môn Công nghệ sinh học
Lớp DH06SH
Bài tiểu luận:
KIỂM TRA ĐỘ NHẠY VÀ ĐỘ ĐẶC HIỆU
CỦA PHƯƠNG PHÁP PCR ĐA MỒI TRONG PHÁT HIỆN SALMONELLA GÂY BỆNH
TIÊU CHẢY
Giáo viên hướng dẫn: Nguyễn Ngọc Hải Sinh viên thực hiện: Trịnh Xuân Thảo MSSV: 06126142
Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 10/2009
CHUẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG SINH HỌC PHÂN TỬ
2
MỤC LỤC
I. ĐẶT VẤN ĐỀ
II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU:
1. Giới thiệu về salmonella và phương pháp chuẩn doán:
a.Đặc diểm hình thái của salmonella:
b. Phân loại salmonella
c. Các phương pháp chuẩn đoán salmonella
2. Mục tiêu nghiên cứu :
1. Xác định độ nhạy của PCR đa mồi xác định Salmonella trực tiếp
từ phân.
2. Xác định độ đặc hiệu của PCR đa mồi xác định Salmonella trực
tiếp từ phân.
Ưu điểm của PCR đa mồi:
III. ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
1. Đối tượng nghiên cứu
2. Vật liệu
2.1. Vật liệu dùng cho nuôi cấy và xác định vi khuẩn
2.2. Sinh phẩm, hoá chất, dụng cụ và máy móc dùng trong PCR
3. Phương pháp nghiên cứu
3.1. Độ nhạy của PCR đa mồi xác định Salmonella trực tiếp từ phân.
a.Qui trình tách chiết ADN trực tiếp từ phân
b. Xác định độ nhạy của hệ thống PCR đa mồi
3.2. Độ đặc hiệu của PCR đa mồi
3.3. Đánh giá chất lượng sản phẩm PCR
4. Xử lý số liệu
IV. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
1. Xác định độ nhạy của PCR đa mồi
CHUẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG SINH HỌC PHÂN TỬ
3
2. Xác định độ đặc hiệu của PCR đa mồi
V. BÀN LUẬN
1. Độ nhạy của PCR đa mồi
2. Xác định độ đặc hiệu của hệ thống PCR đa mồi
VI. KẾT LUẬN
- Độ nhạy - Độ đặc hiệu
VII. Tài liệu tham khảo
CHUẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG SINH HỌC PHÂN TỬ
4
KIỂM TRA ĐỘ NHẠY VÀ ĐỘ ĐẶC HIỆU CỦA
PHƯƠNG PHÁP PCR ĐA MỒI TRONG PHÁT HIỆN
SALMONELLA GÂY BỆNH TIÊU CHẢY
I. ĐẶT VẤN ĐỀ
- Tiêu chảy là một trong những vấn đề quan trọng về sức khỏe toàn cầu,
đặc biệt đối với trẻ em trên toàn thế giới. Tiêu chảy chiếm vị trí thứ hai về tỷ
lệ tử vong ở trẻ em dưới 5 tuổi do mắc các bệnh nhiễm khuẩn (chỉ sau nhiễm
khuẩn đường hô hấp), ở các nước đang phát triển, có ít nhất 1 tỷ trường hợp
tiêu chảy hàng năm và số tử vong là 5 đến 7 triệu. Trung bình một năm một trẻ
mắc 3,3 lần tiêu chảy. Tại Việt nam, một số nghiên cứu cho biết, số lần bị tiêu
chảy trong một năm đối với một trẻ từ 2,2 - 6 lần. Tại các nước công nghiệp
phát triển, tiêu chảy vẫn còn phổ biến ở trẻ em và người già. Có nhiều nguyên
nhân dẫn đến tiêu chảy, trong đó vi khuẩn đóng vai trò quan trọng.Tiêu chảy
còn là nguyên nhân quan trọng gây suy dinh dưỡng, ảnh hưởng đến sự tăng
trưởng và phát triển của trẻ. Salmonella là một vi khuẩn có phạm vi lây lan
rộng, sống trong ruột của chim, loài bò sát và động vật có vú. Nó có thể lây
sang người qua nhiều loại thức ăn từ động vật. Những bệnh do chúng gây ra
(salmonellosis) tiêu biểu gồm sốt, tiêu chảy và đau bụng. Ở những người có
sức khỏe kém hay hệ miễn dịch suy yếu, nó có thể xâm nhập vào máu và gây
ra những bệnh nhiễm khuẩn nguy hiểm. Salmonella là một căn nguyên gây
tiêu chảy đã được đề cập trong nhiều nghiên cứu. Salmonella có thể gây bệnh
cho người, động vật hoặc cả cho người và động vật. Một số loài Salmonella
CHUẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG SINH HỌC PHÂN TỬ
5
hay gây bệnh thường gặp là S. typhi, chỉ gây bệnh cho người, là căn nguyên
gây bệnh thương hàn quan trọng nhất. S. paratyphi A, chỉ gây bệnh cho người,
là căn nguyên gây bệnh thương hàn, tỷ lệ ở nước ta đứng sau S. typhi. S.
paratyphi B, chủ yếu gây bệnh ở người. Tại các nước châu Âu, tỷ lệ vi khuẩn
này cao hơn ở Việt Nam. S. paratyphi C, vừa có khả năng gây bệnh thương
hàn vừa có khả năng gây viêm dạ dày-ruột và nhiễm khuẩn huyết. Thường gặp
ở các nước Đông Nam Châu Á. S. typhimurium và S.enteritidis vừa có khả
năng gây bệnh cho người vừa có khả năng gây bệnh cho động vật. Chúng là
nguyên nhân chủ yếu của bệnh nhiễm khuẩn nhiễm độc thức ăn do
Salmonella. S. choleraesuis là căn nguyên thường gặp trong nhiễm khuẩn
huyết do Salmonella ở nước ta.
II. Tổng quan tài liệu:
2. Giới thiệu về salmonella và phương pháp chuẩn đoán:
a.Đặc diểm hình thái của salmonella:
Salmonella là trực khuẩn Gram (-), kích thước trung bình 3,0 x 0,5 µm,
có nhiều lông ở xung quanh thân, trừ S.gallinarum và S.pullorum (gây bệnh ở
gà vịt).
Salmonella được phân lập từ các đại thực
bào nhiễm độc
CHUẨN ĐOÁN BỆNH GIA SÚC, GIA CẦM BẰNG SINH HỌC PHÂN TỬ
6
Salmonella là vi khuẩn hiếu kỵ khí tùy tiện, phát triển được trên các
môi trường nuôi cấy thông thường, có thể mọc trên một số môi trường có chất
ức chế chọn lọc được dùng trong phân lập vi khuẩn này từ phân.
- Trên môi trường lỏng: sau
5-6h nuôi cấy, vi khuẩn làm đục nhẹ
môi trường, sau 18h môi trường đục
đều.
- Trên môi trường thạch
thường: khuẩn lạc tròn, lồi, bóng,
không màu hoặc màu trắng xám.
- Trên môi trường phân lập
SS: khuẩn lạc có màu hồng.
Salmonella không lên men lactose, lên men đường Glucose thường sinh
hơi. Sử dụng được citrat ở môi trường Simomons. Catalase (+), oxidase (-).