Teknik Inkulasi Bakteri

8/18/2019 Teknik Inkulasi Bakteri

1/21

Cara Kerja:

*) Pembuatan media Nutrient Agar/NA (ukurannya 20gr/L)

1.Dimaukkan media NA 12 gram ke da!am beker g!a yg berii "00 m! a#uadet.

2.Di$anakan di $enanga air %am$uran NA & a#uadet am$ai ter!arut (tdk am$ai

mendidi') ambi! teru diaduk 'ingga 'mgen.

.Di$inda'kan ke da!am er!enmeyer dan ditutu$ dg %ttn $!ug.

.

*) Pembuatan media +A (ukurannya ,- gr/L)

1.Dimaukkan media +A 2-.- gram ke da!am beker g!a yg berii "00 m!

a#uadet.

Langka' 2 dt ama $rt yg di ata

.

*) teti!iai edia

1.Dimaukkan er!enmeyer yg ditutu$ %ttn $!ug tadi ke da!am $!atik teri!iai

dan di ikat dg ta!i karet dg ken%ang.

2.emua media yg uda' ia$ untuk diteri!iai dimaukkan ke da!am autk!a.

.enteri!iai media e!ama 120 menit $ada u'u 1213C dan tekanan 2 atm.

,.Ditunggu u'u autk!a turun 'ingga 03C.

.Dibuka $enutu$ autk!a dan ba'an media ia$ digunakan.

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar belakangMedia adalah suatu substrat dimana mikroorganisme dapat tumbuh yang disesuaikan

dengan lingkungan hidupnya. Media kultur berasarkan konsistensinya dibedakan atas

tiga maam! yaitu media air! media semi padat! dan media padat."otal Plate #ount $"P#% merupakan salah satu metode yang dapat digunakan untuk

menghitung &umlah mikroba dalam bahan pangan. Metode hitungan a'an $"P#%

merupakan metode yang paling banyak digunakan dalam analisa! karena koloni dapat

dilihat langsung dengan mata tanpa menggunakan mikroskop. Untuk menghitung total

bakteri dengan metode a'an digunakan Nutrient Agar $NA%."ahap(tahap utama dalam analisa "P# meliputi pembuatan media! pengeneran dan

penanaman bakteri. Dalam pembuatan media ini! media biakan diperlukan untuk

tumbuhnya bakteri yang ditanam. )ehingga media biakan yang baik harus dapat


2/21

menyediakan nutrisi! tempat inkubasi! dan terpenuhinya kebutuhan oksigen yang

diperlukan oleh mikroba.

Pengeneran biasanya menggunakan larutan berupa larutan *os*at bu**er! larutan

garam *isiologis +!, - atau larutan ringer. Dengan pengeneran dapat mengurangi

kepadatan bakteri yang ditanam. )eara umum! metode penanaman dapat dibedakan

atas dua maam yaitu metode tuang $pour plate% dan metode sebar $spread plate%.

"u&uan. Mempela&ari ara isolasi mikroba $memisahkan mikroba dari ampurannya%/. Mempela&ri ara inokulasi $penanaman% mikroba0. Mengenal bentuk1bentuk koloni bakteri $melakukan identi*ikasi mikroba%


3/21

BAB II

"IN2AUAN PU)"A3A

Pengertian dan 4ungsi Media

Dasar makanan yang paling baik bagi pemiaraan baakteri ialah medium yang

mengandung 5at ( 5at organik seperti rebusan daging! sayur ( sayuran! sisa ( sisa

makanan atau ramuan ( ramuan yang dibuat oleh manusia. Medium yang banyak

digunakan dalam peker&aan rutin di laboratorium ialah kaldu air dan kaldu agar.

Medium ini tersusun daripada 6 kaldu bubuk 0 gram! pepton 7 gram! air suling +++

gram $D'id&oseputro! /++7%.

Media adalah suatu substrat untuk menumbuhkan bakteri yang men&adi padat dan tetap

tembus pandang pada suhu inkubasi $Pel5ar et al! ,89%.

Medium adalah suatu bahan nutrisi tempat menubuhkan bakteri di laboratorium

$"ortora! /++:%.

2elaskan Maam ( Maam Media

Menurut D'id&oseputro $,9;%! media dibedakan men&adi 6

• Media air misalnya kaldu.

• Media kental $padat% menggunakan kentang yang dipotong.

• Media yang diperkaya.

• Media yang sintetik berupa ramu(ramuan 5at anorganik.

• Media kering berupa serbuk kering yang dilarutkan dalam air.

• Menurut Pel5ar et al $,89%! media dibedakan men&adi6

Media yang diperkaya komponennya yaitu lumpur! ekstra serum dari tanaman atau

he'an.

• Media selekti* yaitu bagian kimia'i seara spesi*ik untuk NA agar dapat tumbuh bakteri

tanpa adanya halangan dari apapun.

• Media yang berbeda yaitu menyatukan reagen atau 5at kimia di media untuk

menghasilkan pertumbuhan yang baik setelah diinkubasi dan diinokulasi dengan

mengi5inkan / pertumbuhan bakteri yang berbeda.

• Menurut Hadioetomo $/++%! media dibedakan men&adi / menurut komposisi

kimia'inya yaitu mediu sintetik dan medium nonsintetik atau kompleks. Medium sintetik


4/21

dibuat dari bahan kimia yang kemurnian tinggi dan ditentukan dengan tepat! sedangkan

medium non1sintetik tidak diketahui dengan pasti.

2elaskan NA! PDA beserta komposisinya

Menurut Pel5ar et al $,89%! NA $Nutrient Agar% adalah padatan yang bermaksud

membuat media men&adi padat.

3omposisi NA 6

• Ekstra Daging )api 0 gram.

• Pepton 7 gram

• Agar 7 gram

• Air +++ ml. Menurut 4athir $/++,%!

3omposisi PDA6

• /+- E


5/21

dapat dilakukan yaitu dengan ara goresan $streak plate%! ara tuang $pour plate%! ara sebar

$spread plate%! dan mikromanipulator $ Bukle!,,8%.

Persyaratan utama bagi isolasi dan kulti@asi *age adalah harus adanya kondisi optimum untuk

pertumbuhan organisme inangnya. )umber bakterio*age yang paling baik dan paling utama

adalah habitat inang. )ebagai ontoh *age koli yang di&umpai di dalam penernaan dapat

diisolasi dari limbah atau pupuk kandang. Hal ini dilakukan dengan senti*ugasi atau *iltrasi

bahan sumbernya dan penambahan kloro*orm untuk membunuh sel1sel bakterinya $Adams!

/+++%.

Pengembangan dalam a'an petri ada beberapa metode! yaitu6

∗ Metode #a'an =ores $)treak Plate%

Prinsip metode ini yaitu mendapatkan koloni yang benar1benar terpisah dari koloni yang lain!

sehingga mempermudah proses isolasi. #ara ini dilakukan dengan membagi 01; a'an petri.

se steril yang telah disiapkan diletakkan pada sumber isolat ! kemudian menggoreskan ose

tersebut pada a'an petri berisi media steril. =oresan dapat dilakukan 01; kali membentuk

garis horisontal disatu a'an. se disterilkan lagi dengan api bunsen. )etelah kering! ose

tersebut digunakan untuk menggores goresan sebelumnya pada sisi a'an ke dua. Langkah ini

dilan&utkan hingga keempat sisi a'an tergores.

∗ Metode #a'an )ebar $)pread Plate%

"eknik spread plate $a'an sebar% adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme

di dalam media agar dengan ara menuangkan stok kultur bakteri atau menghapuskannya di

atas media agar yang telah memadat! sedangkan pour plate kultur diampurkan ketika media

masih air $belom memadat%. 3elebihan teknik ini adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat

tersebar merata pada bagian permukaan agar.

∗ "eknik Dilusi $Pengeneran%

"u&uan dari teknik ini adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari substratnya ke dalam air

sehingga lebih mudah penanganannya. )ampel yang telah diambil kemudian disuspensikan

dalam a>uades steril. "eknik dilusi sangat penting dalam analisa mikrobiologi karena hampir

semua metode penelitian dan perhitungan &umlah sel mikroba menggunakan teknik ini! seperti

"P# $"otal Plate #ounter%. Ada beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan

teknik penanaman bakteri $inokulasi%! yaitu6

. Menyiapkan ruangan

/. Pemindahan dengan pipet

0. Pemindahan dengan ka'at inokulasi


6/21

Ada beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan teknik penanaman bakteri

$inokulasi% yaitu 6

. Menyiapkan ruangan

?uang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak ter&adi

kesalahan dalam pengamatan atau perobaaan .dalam labotarium pembuataan serum @aksin

dan sebagainya. Inokulasi dapat dilakukan dalam sebuah kotak kaa $enast% udara yang le'at

dalam kotak tersebut dile'atkan saringan melalui suatu &alan agar tekena sinar ultra@iolet

$Pel5ar! ,89%.

/. Pemindahan dengan dengan pipet

#ara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan untuk diambil ml

ontoh yang akan dienerkan oleh air sebanyak ,, ml murni $Pel5ar! ,89%.

0. Pemindahan dengan ka'at inokulasi

U&ung ka'at inokulasi sebaliknya dari platina atau nikel .u&ungnya boleh lurus &uga boleh berupa

kolongan yang diametrnya 10mm. Dalam melakukuan penanaman bakteri ka'at ini terlebih

dahulu dipi&arkan sedangkan sisanya tungkai ukup dile'atkan nyala api sa&a setelah dingin

kembali ka'at itu disentuhkan lagi dalam nyala $Pel5ar! ,89%.

"eknik Inokulasi

Ada beberapa metode yang digunakan untuk mengisolasi biakan murni

mikroorganisme yaitu 6

a. Metode gores

"eknik ini lebih menguntungkan &ika ditin&au dari sudut ekonomi dan 'aktu! tetapi memerlukan

ketrampilan1ketrampilan yang diperoleh dengan latihan. Penggoresan yang sempurna akan

menghasilkan koloni yang terpisah. Inokulum digoreskan di permukaan media agar nutrien

dalam a'aan petri dengan &arum pindah $lup inokulasi%. Di antara garis1garis goresan akan

terdapat sel1sel yang ukup terpisah sehingga dapat tumbuh men&adi koloni $inarni! ,,:%.

#ara penggarisan dilakukan pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. Bila dilakukan

dengan baik teknik inilah yang paling praktis. Dalam penger&aannya terkadang berbeda pada

masing1masing laboratorium tapi tu&uannya sama yaiitu untuk membuat goresan sebanyak

mungkin pada lempeng medium pembiakan $3us Irianto! /++9%. Ada beberapa teknik dalam metode goresan! yakni6


7/21

"eknik =ores "

"eknik =ores 3uadran

teknik =ores )inambung

"eknik =ores ?adian

Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu &enis mikroba dengan

mikroba lain yang berasal dari ampuran bermaam1maam mikroba. Hal ini dapat

dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media padat! sel1sel mikroba akan

membentuk koloni sel yang tetap pada tempatnya $Nur! I. dan Asnani! /++:%.

Dikenal beberapa ara atau metode untuk memperoleh biakan murni dari

suatubiakan ampuran. Dua diantaranya yang paling sering digunakan adalah metode

http://aguskrisnoblog.files.wordpress.com/2011/01/semua.jpghttp://aguskrisnoblog.files.wordpress.com/2011/01/sinambung.jpghttp://aguskrisnoblog.files.wordpress.com/2011/01/kuadran.jpghttp://aguskrisnoblog.files.wordpress.com/2011/01/t.jpg


8/21

a'an gores dan metode a'an tuang. Cang didasarkan pada prinsip pengeneran

dengan maksud untuk memperoleh spesies indi@idu. Dengan anggapan bah'a setiap

koloni dapat terpisah dari satu &enis sel yang dapat diamati $A*rianto! /++;%.

Biakan murni diperlukan dalam berbagai metode mikrobiologis! antara lain

digunakan dalam mengidenti*ikasi mikroba. Untuk mengamati iri1iri kultural mor*ologi!

*isiologi dan serologi dibutuhkan mikroba yang berasal dari satu

spesies $D'id&oseputro! /++7%.

Menurut Hadioetomo $,,0%! ada dua metode yang dilakukan untuk memperoleh

biakan murni yaitu 6

. Metode a'an gores

Metode ini mempunyai dua keuntungan! yaitu menghemat bahan dan 'aktu.

Metode a'an gores yang dilaksanakan dengan baik kebanyakan akan menyebabkan

terisolasinya mikroorganisme yang diinginkan.

/. Metode a'an tuang

#ara lain untuk memperoleh koloni murni dari populasi ampuran mikroorganisme

adalah dengan mengenerkan spesimen dalam medium agar yang telah diairkan dan

didinginkan $ 7+ o# % yang kemudian dia'ankan. 3arena konsentrasi sel1sel mikroba

di dalam spesimen pada umunya tidak diketahui sebelumnya! maka pengeneran perlu

dilakukan beberapa tahap sehingga sekurang1kurangnya satu di antara a'an tersebutmengandung koloni terpisah di atas permukaan ataupun di dalam agar. Metode ini

memboroskan bahan dan 'aktu namun tidak memerlukan keterampilan yang tinggi.

Metode a'an gores memiliki dua keuntungan yaitu menghemat bahan dan

'aktu. Namun untuk memperoleh hasil yang baik diperlukan keterampilan yang

lumayan yang biasanya diperoleh dari pengalaman. Metode a'an gores yang

dilaksanakan dengan baik kebanyakan akan menyebabkan terisolasinya

mikroorganisme seperti yang diinginkan. Dua maam kesalahan yang umum sekali

dilakukan oleh para mahasis'a yang baru mulai mempela&ari mikrobiologi ialah tidak

meman*aatkan permukaan medium dengan sebaik1baiknya untuk digores sehingga

pengeneran mikroorganisme men&adi kurang lan&ut dan enderung untuk

menggunakan inokulum terlalu banyak sehingga menyulitkan pemisahan sel1sel yang

digoreskan $?atna! ,,+%.


9/21

Menurut D'id&oseputro $,8+%! si*at1si*at koloni yang tumbuh pada agar1agar

lempengan! pada agar1agar miring dan pada tusukan gelatin adalah sebagai berikut 6

. )i*at1si*at koloni pada agar1agar lempengan mengenai bentuk! permukaan dan tepi.

Bentuk koloni dilukiskan sebagai titik1titik! bulat berbenang! tak teratur! serupa akar!

serum kumparan. Permukaan koloni dapat datar! timbul mendatar! timbul melengkung!

timbul menembung! timbul membukit dan timbul berka'ah. "epi koloni ada yang utuh!

ada yang berombak! ada yang berbelah1belah! ada yang bergerigi! ada yang

berbenang1benang dan ada yang keriting./. )i*at1si*at koloni pada agar1agar miring. )i*at ini berkisar pada bentuk dan tepi koloni

dan si*at itu dinyatakan dengan kata1kata seperti 6 serupa pedang! serupa duri! serupa

tasbih! serupa titik1titik! serupa batang dan serupa akar.0. )i*at koloni tusukan dalam gelatin. Ada bakteri yang dapat mengenerkan gelatin.

3arena itu! maka bentuk1bentuk koloninya &uga berbeda1beda. Lagipula bentuk koloni

yang tidak dapat mengenerkan gelatin. Bila dilihat dari samping koloni yang tidak

mengenerkan gelatin dapat serupa pedang! tasbih! berton&ol1ton&ol dan ber&on&ot. 2ika

bakteri mampu mengenerkan gelatin! maka bentuk koloninya dapat serupa ka'ah!

serupa mangkuk! serupa orong! pundi1pundi dan berlapis.

)etelah mikroba ditumbuhkan pada media agar tabung maupun a'an dan

estelah inkubasi akan terlihat pertumbuhan bakteri dengan berbagai maam bentuk!

ukuran! si*at! dan berbagai iri khas yang lain. #iri1iri ini akan mengarahkan ke si*at1

si*at mikroba tersebut pada media pertumbuhan! sehingga pengamatan mor*ologi ini

sangat penting untuk diperhatikan $?atna!,,+%.

Bakteri yang memiliki *lagella sering kali membentuk koloni yang menyebar

terutama &ika menggunakan lempengan agar basah! untuk menegah menyebarnya

koloni maka harus digunakan agar benar1benar kering $D&ida! N.! /+++%.


10/21

BAB III

PELA3)ANAAN P?A3"I3UM

a.

Bahan

• Media PDA

• Media EMB

• Media ))A

• Media NB

• Daging

• 3upang

• )elokan

• Latobaillus


11/21

b. Alat

=ambar alat Nama alat

Mikroskop

se

Bunsen

3aa preparat

"abung reaksi

petridish

erlemneyer


12/21

. Prosedur ker&aa. #ara isolasi dengan metode penggoresan $the streak plate tehni>ue%. )iapkan media yang sudah disterilkan dalam petridish yang steril! biarkan hingga dingin/. Ambillah ose suspense dari ampuran dan goreslah kepermukaan media. Maksud

dari goresan ini untuk mendapatkan deretan koloni yang dikehendaki dan memudahkan

isolasi selan&utnya0. Inkubasi selama /;1/8 &am! amati kiloni yang terbentuk;. Isolasikan masing1masing koloni dengan menanamkannya pada masing1masing

medianya7. Isolasi ini diker&akan /10 kali! sampai diperoleh kultur murni9. Bila telah mendapatkan kultur murni! inokulasikan kedalam media agar dalam tabung

reaksib. #ara inokulasi dalam nutrient broth

. Ambilah koloni B subtilis E.oli dengan ose steril $sebelumnya dipi&arkan pada burner

dan didinginkan sebentar%! masukkan kedalam nutrieny broth./. )ebaiknya inokulasi delakukan dekat buener di dalam ruangan steril. "angan kanan

untuk memegang ose dan tangan kiri digunakan untu memgang tabung reaksi steril

yang berisi media nutrient broth steril. )ebelum dan setelah diinokulasi! bibir tabung

reaksi dile'atkan diatas burner! $kapas penutup &angan diletakkan me&a%0. Inkubasi selama /;1;8 &am pada suhu kamar! amati gelembung kekeruhan yang

ter&adi seara makroskopis dan seara mikroskopis

.

#ara inokulasi dalam nutrient agar . Media nutrient agar tegak diinokulasi seara asepti dengan biakan murni bakteri

memakai &arum ose dengan ara menusuk kedalam nutrient agar /. Media nutrient agar miring diinokulasi seara asepti dengan biakan murni bakteri

memakai &arum ose dengan ara menggoreskan bagian atas nutrient agar $goresan

lurus%0. Inokulasi dalam petridish steril dilakukan dengan metode penggoresan atau metode

taburan;. Metode taburan dilakukan sebagai berikut6 sebanyak +ml media nutrient agar dalam

tabung reaksi $yang baru disterilkan diairkan%! didinginkan hingga suhu 7+#!

kemudian diinokulasi seara asepti dengan biakan murni bakteri! kemudia tabung

digo&og dan dituangkan dalam petridish seara asepti. #ara ini biasanya digunakan

untuk menghitung bakteri $metode pour plate%7. Ikubasikan selama /;1;8 &am pada suhu kamar 9. Amatilah koloni1koloni yang tumbuh seara makroskopis mikroskopis.


13/21

BAB IF

HA)IL PEN=AMA"AN

=ambar 3eteranganInokulasi pada media

EMB

∗ Bentuk6

∗ arna6 hi&au metali

∗ Pinggiran $tepi%6

∗ Permukaan ele@asi%6

∗ )truktur dalam6

Inokulasi pada media

NB

∗ Bentuk6

∗ arna6



∗ )truktur dalam6


14/21


PDA

∗ Bentuk6

∗ arna6



∗ )truktur dalam


))A

∗ Bentuk6

∗ arna6



∗ )truktur dalam


15/21

BAB F

PEMBAHA)AN

Isolasi suatu mikroba adalah memisahkan mikroba tersebut dari lingkungannya di alam

bebas dan menumbuhkannya sebagai kultur murni atau biakan murni dalam mediumbuatan. Pada saat isolasi mikroba perlu dilakukan inokulasi mikroba. )ebelum dan

sesudah menginokulasikan mikroba &arum ose yang digunakan harus dipanaskan

terlebih dahulu. Hal ini bertu&uan agar &arum ose yang digunakan bersi*at steril dan

bebas kontaminasi dari mikroorganisme yang tidak diinginkan. )edangkan pada a'an

petri! setelah sampel dimasukan kedalam a'an petri setiap membuka dan menutup

a'an petri harus terlebih dahulu dipanaskan untuk meminimalkan terkontaminasinya

sampel. adah media yang menggunakan a'an petri! pada saat inkubasi mikroba

pada a'an petri selalu dalam posisi terbalik. Hal ini dimaksudkan untuk menegah

mikroba terkena uap air yang dihasilkan pada saat inkubasi. )ehingga kualitas mikroba

tidak rusak atau mengalami gangguan.

"eknik1teknik dalam mengisolasi mikroba terbagi men&adi beberapa metode! yaitu 6

. "eknik Penggoresan $steak plate%

"eknik Penanaman dengan teknik =oresan $)treak% bertu&uan untuk mengisolasi

mikroorganisme dari ampurannya atau merema&akan kultur ke dalam medium baru.

Ada beberapa teknik goresan yang biasa dipakai yaitu 6

A. =oresan )inambung)eperti gambar di ba'ah ini 6

B. =oresan ")eperti gambar di ba'ah ini 6

#. =oresan 3uadran $)treak >uadrant%

http://aguskrisnoblog.files.wordpress.com/2011/01/t.jpghttp://aguskrisnoblog.files.wordpress.com/2011/01/sinambung.jpg


16/21

)eperti gambar di ba'ah ini 6

Prinsip teknik penggoresan yaitu pengeneran dimana goresan pertama paling pekat

kemudian men&adi semakin ener sampai pada goresan ke empat yang terletak

ditengah1tengah media. Bila metode ini dilakukan dengan baik akan menghasilkan

terisolasinya mikroorganisme! dimana setiap koloni berasal dari satu sel.

/. "eknik "aburan $pour plate%

"eknik isolasi mikroba dengan ara menaburkan mikroba pada permukaan media yang

akan digunakan.

0. "eknik )ebar $spread plate%

"eknik isolasi dan mikroba dengan ara menyebarkan mikroba pada permukaan media

yang akan digunakan.

;. "eknik Pengeneran $dilution method%

)uatu sampel dari suatu suspensi yang berupa ampuran bermaam1 maam spesies

dienerkan dalam suatu tabung yang tersendiri. Dari hasil pengeneran ini kemudian di

ambil kira1 kira mL untuk dienerkan lebih lan&ut. 2ika dari pengeneran yang ketiga ini

diambil +! mL untuk disebarkan pada suatu medium padat! kemungkinan besar kita

akan mendapatkan beberapa koloni yang akan tumbuh dalam mdium tersebut! akan

tetapi mungkin &uga kita hanya akan memperoleh satu koloni sa&a. Dalam hal yang

demikian ini dapat kita &adikan piaraan murni. 2ika kita belum yakin! Bah'a koloni

tunggal yang kita peroleh tersebut merupakan koloni yang murni! maka kita dapat

mengulang pengeneran dengan menggunakan koloni ini sebagai sampel.

7. "eknik Miromanipulator Mengambil satu bakteri dengan mikropipet yang ditempatkan dalam mikro manupulator!

kemudian ditempatkan dalam mikromanupulator. 3emudian ditempatkan dalam medium

ener untuk dibiakkan.

Dalam proses isolasi dan kulti@asi dibutuhkan suatu media yang digunakan sebagai

tempat tumbuhnya mikroba. Media yang digunakan berbeda1beda sesuai &enis mikroba

http://aguskrisnoblog.files.wordpress.com/2011/01/kuadran.jpg


17/21

yang ditumbuhkan. Untuk mikroba bakteri digunakan media NA $Nutrient Agar%! untuk

*ungi digunakan Potato Destro


18/21

BAB FI2AAB PE?"ANCAAN

1.

Terangkan cara kerja isolasi mikrobaa. Metode tuang (the pour plate method)

#ara lain untuk memperoleh koloni murni dari populasi ampuran mikroorganisme

adalah dengan mengenerkan spesimen dalam medium agar yang telah diairkan dan

didinginkan $ 7+ o# % yang kemudian dia'ankan. 3arena konsentrasi sel1sel mikroba

di dalam spesimen pada umunya tidak diketahui sebelumnya! maka pengeneran perlu

dilakukan beberapa tahap sehingga sekurang1kurangnya satu di antara a'an tersebut

mengandung koloni terpisah di atas permukaan ataupun di dalam agar. Metode ini

memboroskan bahan dan 'aktu namun tidak memerlukan keterampilan yang tinggi.b.

Metode permukaan (the surface/spread plate method)"eknik spread plate $a'an sebar% adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan

mikroorganisme di dalam media agar dengan ara menuangkan stok kultur bakteri atau

menghapuskannya di atas media agar yang telah memadat! sedangkan pour plate

kultur diampurkan ketika media masih air $belom memadat%. 3elebihan teknik ini

adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat tersebar merata pada bagian permukaan

agar.

2.

Pada inokulasi mikroba, gambarlah hasil pengamatan (mikroskopis / makroskopis)

ebutkan pula spesifikasi dari koloni!koloni "ang saudara amati#a.

$entuk b.

%arnac.

Pinggiran (tepi)d.

Permukaan (ele&asi)e.

truktur dalamBakteri Esheria #oli merupakan kuman dari kelompok gram negati*! berbentuk batang

dari pendek sampai kokus! saling terlepas antara satu dengan yang lainnya tetapi ada

&uga yang bergandeng dua1dua $diplobasil% dan ada &uga yang bergandeng seperti

rantai pendek! tidak membentuk spora maupun kapsula! berdiameter ! ( !7 < /!+ (

9!+ Gm! dapat bertahan hidup di medium sederhana dan mem*ermentasikan laktosa

menghasilkan asam dan gas! kandungan =# DNA ialah 7+ sampai 7 mol - $Pel5ar

dan #han! ,886,;,% . $http6um.a.id% Esherihia oli dapat tumbuh di medium nutrien sederhana! dan dapat

mem*ermentasikan laktosa dengan menghasilkan asam dan gas $Pel5ar dan #han!

http://um.ac.id/http://um.ac.id/


19/21

/++769,%. 3eepatan berkembangbiak bakteri ini adalah pada inter@al /+ menit &ika

*aktor media! dera&at keasaman dan suhu tetap sesuai. $http6ksupointer.om% )elain

tersebar di banyak tempat dan kondisi! bakteri ini tahan terhadap suhu! bahkan pada

suhu ekstrim sekalipun. )uhu yang baik untuk pertumbuhan bakteri ini adalah antara

8+#1;9+#! tetapi suhu optimumnya adalah 0:+#. leh karena itu! bakteri tersebut

dapat hidup pada tubuh manusia dan @ertebrata lainnya $D'id&oseputro! ,:868/%.

"aksonomi Esherihia oli sebagai berikut $D'id&oseputro! ,:86+7%6

Di@isi 6 Protophyta 3elas 6 )hi5omyetesrdo 6 Eubateriales4amili 6 Enterobateriaeae=enus 6 Esherihia)pesies 6 Esherihia oli

Pel5ar dan #han $,8868+,18+% mengatakan Esherihia oli merupakan bagian

dari mikrobiota normal saluran penernaan. Esherihia oli dipindahsebarkan dengan

kegiatan tangan ke mulut atau dengan pemindahan pasi* le'at makanan atau

minuman. Mor*ologi dan iri1iri pembeda Esherihia oli yaitu6 $% merupakan batang

gram negati*! $/% terdapat tunggal! berpasangan! dan dalam rantai pendek! $0% biasanya

tidak berkapsul! $;% tidak berspora! $7% motil atau tidak motil! peritrikus! $9% aerobik!

anaerobik *akultati*! $:% penghuni normal usus! seringkali menyebabkan in*eksi. Esherihia oli dalam usus besar bersi*at patogen apabila melebihi dari &umlah

normalnya. =alur1galur tertentu mampu menyebabkan peradangan selaput perut dan

usus $gastroenteritis% $Pel5ar dan #han! ,8868+,18+%. Bakteri ini men&adi patogen

yang berbahaya bila hidup di luar usus seperti pada saluran kemih! yang dapat

mengakibatkan peradangan selaput lendir $sistitis% $Pel5ar dan #han! ,8867;7%.Esherihia oli dapat dipindahsebarkan melalui air yang teremar tin&a atau air

seni orang yang menderita in*eksi penernaan! sehingga dapat menular pada orang

lain. In*eksi yang timbul pada penernaan akibat dari serangan bakteri Esherihia oli

pada dinding usus menimbulkan gerakan larutan dalam &umlah besar dan merusak

kesetimbangan elektrolit dalam membran muus. Hal ini dapat menyebabkan

penyerapan air pada dinding usus berkurang dan ter&adi diare .$Pel5ar dan #han!

,8868+%.


20/21

BAB FII

3E)IMPULAN

Berdasarkan praktikum yang telah kita dilakukan maka dapat diperoleh kesimpulanbah'a teknik inokulasi merupakan teknik pemindahan bakteri ke dalam media dengan

perlakuan khusus untuk mempertahankan kemurnian dari bakteri tersebut. "eknik

inokulasi dapat dilakukan dengan metode gores pada agar datar $streak plate method%

dan metode gores pada agar miring $streak plate method%. Proses inokulasi harus

benar1benar aseptik atau steril supaya tidak ter&adi kontaminasi oleh mikroorganisme

lain. Pada hasil pengamatan metode gores agar miring terlihat adanya garis 5ig15ag

putih menyebar yang menandakan koloni bakteriE. oli biakan tumbuh. )edangkan

pada metode gores agar datar tidak ditemukan garis 5ig15ag putih yang menandakan

belum tumbuhnya koloni bakteri.


21/21

Teknik Inkulasi Bakteri

Documents