UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE ODONTOLOGÍA UNIDAD CURRICULAR MORFOLOGÍA PREPARACIÓN DE LOS TEJIDOS PARA MICROSCOPÍA ÓPTICA TÉCNICA HISTOLÓGICA Eduvigis Solórzano Eduvigis Solórzano Prof. Agregado Prof. Agregado
UNIVERSIDAD DE LOS ANDESFACULTAD DE ODONTOLOGÍA
UNIDAD CURRICULAR MORFOLOGÍA
PREPARACIÓN DE LOS TEJIDOS PARA MICROSCOPÍA
ÓPTICA
TÉCNICA HISTOLÓGICA
Eduvigis SolórzanoEduvigis SolórzanoProf. AgregadoProf. Agregado
TÉCNICA HISTOLÓGICA
El conjunto de métodos que se utilizan para poner de manifiesto las estructuras celulares por medio del microscopio óptico. Incluye:
* La conservación del aspecto de las estructuras en el organismo.
* La coloración que permite contrastar los elementos tisulares.
El conjunto de métodos que se utilizan para poner de manifiesto las estructuras celulares por medio del microscopio óptico. Incluye:
* La conservación del aspecto de las estructuras en el organismo.
* La coloración que permite contrastar los elementos tisulares.
La Técnica Histológica:
TÉCNICA HISTOLÓGICA
Pasos a seguir:
1. Obtención de la Muestra
2. Fijación
3. Deshidratación
4. Aclaración
5. Inclusión y Corte
6. Coloración y Montaje
7. Observación
TÉCNICA HISTOLÓGICA
1. Obtención de la muestra:
Tejido Humano
Biopsia
Autopsia
OJO!!OJO!!InmediatamenInmediatamente después de te después de
la muertela muerte
OJO!!OJO!!InmediatamenInmediatamente después de te después de
la muertela muerte
TÉCNICA HISTOLÓGICA
1. Obtención de la muestra:
Tejido Animal
Sobreanestesia
Inyección intraperiton
eal
1. Obtención de la muestra:
Tejido Animal
TÉCNICA HISTOLÓGICA
2. Fijación:
Procedimiento mediante el cual se interrumpen todas las modificaciones que sobrevienen con la muerte (cambios post-morten), manteniendo las estructuras celulares lo más parecido a sus características in vivo.
Procedimiento mediante el cual se interrumpen todas las modificaciones que sobrevienen con la muerte (cambios post-morten), manteniendo las estructuras celulares lo más parecido a sus características in vivo.
FIJADORESFIJADORES•Coagulan las proteínas, formado enlaces cruzados entre sus moléculas.• Inactivan enzimas
•Coagulan las proteínas, formado enlaces cruzados entre sus moléculas.• Inactivan enzimas
TÉCNICA HISTOLÓGICA
2. Fijación:
¿Cuales son las ¿Cuales son las características características
de un buen de un buen fijador?fijador?
•Conservar la materia orgánica•Prevenir cambios post-mortem•Bacteriostático, bactericida•Producir fuerza mecánica en el tejido•Alto poder de penetración
•Aumentar la afinidad por los colorantes
TÉCNICA HISTOLÓGICA
2. Fijación:
Fijadores Físicos
•Desecación•Calor seco•Calor Humedo •Frio•Freeze-Drying
•Desecación•Calor seco•Calor Humedo •Frio•Freeze-Drying
Fijadores Químicos
•Simples:
Formol al 10 %
•Compuesto:
Solución de Bouin
•Simples:
Formol al 10 %
•Compuesto:
Solución de Bouin
TÉCNICA HISTOLÓGICA
2. Fijación:
Métodos de Fijación más comunes
Métodos de Fijación más comunes
Perfusión
Inmersión
Sólo animales de experimentación
Sólo animales de experimentación
Más de 24 horasMás de 24 horas
TÉCNICA HISTOLÓGICA
3. Deshidratación:
Proceso mediante el cual se preparan los tejidos, fijados químicamente, para su infiltración en un medio de inclusión, sustituyendo el agua tisular con un solvente orgánico.
Proceso mediante el cual se preparan los tejidos, fijados químicamente, para su infiltración en un medio de inclusión, sustituyendo el agua tisular con un solvente orgánico.
Alcohol
Solvente orgánico de preferencia
TÉCNICA HISTOLÓGICA
3. Deshidratación:
Soluciones acusas de alcohol en concentraciones crecientes hasta el alcohol absoluto Batería de
Deshidratación
Soluciones acusas de alcohol en concentraciones crecientes hasta el alcohol absoluto Batería de
Deshidratación
AlcoholesAlcoholes N°de BañosN°de Baños TiempoTiempo
Alcohol 70%Alcohol 70% 22 11 h. C/ uno h. C/ uno
Alcohol 90 %Alcohol 90 % 22 2 h. C/uno2 h. C/uno
Alcohol 96 %Alcohol 96 % 22 2 horas2 horasToda la nocheToda la noche
Alcohol 100%Alcohol 100% 22 1 h. C/uno1 h. C/uno
TÉCNICA HISTOLÓGICA
4. Aclaración:
Proceso mediante el cual los tejidos embebidos en sustancia anhidra (alcohol absoluto) son incluidos en una solución intermedia miscible en alcohol y en la sustancia de inclusión.
Proceso mediante el cual los tejidos embebidos en sustancia anhidra (alcohol absoluto) son incluidos en una solución intermedia miscible en alcohol y en la sustancia de inclusión.
Agentes aclarantes más utilizados
Agentes aclarantes más utilizados
•Xilol•Benzol•Licor de Hoffman
TÉCNICA HISTOLÓGICA
4. Aclaración:
Batería de AclaraciónBatería de Aclaración
Agente Agente AclaranteAclarante
N°de N°de BañosBaños
TiempoTiempo
Benzol IBenzol I 11 1 hora1 hora
Benzol IIBenzol II 11 1 hora1 hora
Benzol IIIBenzol III 11 1 hora1 hora
TÉCNICA HISTOLÓGICA
5. Inclusión y Corte:
La inclusión permite convertir las estructuras del tejido en elementos firmes con una consistencia compacta evitando, de esta manera, alteraciones tisulares durante el corte.
La inclusión permite convertir las estructuras del tejido en elementos firmes con una consistencia compacta evitando, de esta manera, alteraciones tisulares durante el corte.Sustancia de inclusión de preferencia en
Técnica Histológica
PARAFINPARAFINAA
PARAFINPARAFINAA
TÉCNICA HISTOLÓGICA
5. Inclusión y Corte:
Punto de fusión de la parafina es ± 56°C.
Batería de Inclusión
Batería de Inclusión
Parafina Parafina II
1 hora1 hora
Parafina Parafina II II
1 hora1 hora
Parafina Parafina IIIIII
11½ hora½ hora
ESTUFA
ESTUFA
TÉCNICA HISTOLÓGICA
5. Inclusión y Corte:
¿¿Y como se Y como se solidifica solidifica el tejido el tejido para ser para ser cortado?cortado?
TÉCNICA HISTOLÓGICA
5. Inclusión y Corte:
Barras de LeuckartBarras de Leuckart Cestas de InclusiónCestas de Inclusión
TÉCNICA HISTOLÓGICA
5. Inclusión y Corte:
Microtomo de Rotación
Microtomo de Rotación
TÉCNICA HISTOLÓGICA
5. Inclusión y Corte:
Baño de Flotación Baño de Flotación
1°Montaje
TÉCNICA HISTOLÓGICA
6. Coloración y Montaje:
Las coloraciones histológicas se han desarrollado en función de su capacidad para teñir selectivamente los distintos componentes tisulares.
Las coloraciones histológicas se han desarrollado en función de su capacidad para teñir selectivamente los distintos componentes tisulares.
Técnica de Técnica de coloración de rutina coloración de rutina es:es: Hematoxilina – Hematoxilina –
EosinaEosina
TÉCNICA HISTOLÓGICA
6. Coloración y Montaje:
Hematoxilina – Hematoxilina – EosinaEosina
Hematoxilina: Colorante natural, de tipo progresivo que colorea de azul a púrpura el núcleo y regiones ácidas del citoplasma
Hematoxilina: Colorante natural, de tipo progresivo que colorea de azul a púrpura el núcleo y regiones ácidas del citoplasma
Eosina: Colorante sintético, de tipo regresivo que colorea de rojo a rosado las regiones básicas del citoplasma
Eosina: Colorante sintético, de tipo regresivo que colorea de rojo a rosado las regiones básicas del citoplasma
TÉCNICA HISTOLÓGICA
6. Coloración y Montaje:
Batería de ColoraciónBatería de Coloración
benzol Alcohol70%
Alcohol90%
TÉCNICA HISTOLÓGICA
6. Coloración y Montaje:
Procedimiento Reactivo Tiempo
Desparafinar Benzol 1 baño de 5’
Hidratar Alcohol 90%Alcohol 70%Agua
1 baño de 5’c|u
Colorear Hematoxilina AguaEosina
1 baño de 5-15’1 baño de 20’1 baño de ½-1’
Deshidratar Alcohol 70% Alcohol 90%Alcohol 100%
1 baño de 10’c|u
Aclarar Benzol 1 baño de 20’
TÉCNICA HISTOLÓGICA
6. Coloración y Montaje:
Montaje final
Bálsamo de Canadá + Cubreobjeto
TÉCNICA HISTOLÓGICA
7. Observación:
TÉCNICA HISTOLÓGICA
7. Observación:
TÉCNICA HISTOLÓGICA
7. Observación:Fibras
Colágenas
ÓpticoÓptico
TransmisióTransmisiónn
BarridoBarrido
TÉCNICA HISTOLÓGICA
Métodos de Estudios del diente
Desgaste Materia Inorgánica
Desmineralización Materia Orgánica
DentinaDentina