Técnicas de hibridación. Fundamento teórico

Diapositiva 1Técnicas de hibridación.
Fundamento teórico
Hibridació.- Proceso de unión de dos cadenas complementarias de ADN, ARN o de
ADN y ARN para formar una molécula de ácido nucleico de doble cadena
Hybris (latín) .- Animal procreado por distintas especies.
Pirimidinas: C, T, U (ARN)
Purinas: A,G
complementariedad sea inferior al 70% se
considerará como no-homóloga. Ocurre en
condiciones de baja astringencia. El híbrido es
poco estable
- temperatura: la alta temperatura aumenta la
energía cinética de la cadena, la cual se
separa (desnaturaliza) alrededor de los 90º C.
Esto es reversible al bajar la temperatura.
- pH y productos químicos: el pH alto (pH>11
) rompe los puentes de hidrógeno, por lo que
se produce desnaturalización. La
condición de alta astringencia, permitiendo
sólo uniones de gran complementariedad http://www.icampus.ucl.ac.be/courses/SBIM2520/document/genemol/biomolesp
a/la-molecula-de-adn/molecula-ADN.html
- ELECTROFORESIS y BLOTTING: Southern blot, Northern blot
- PCR
- CGH
- ISH: FISH, CISH, SISH
-Blotting: transferencia de ácidos nucleicos o proteinas desde un gel a una
membrana conservando su posición espacial relativa
Suthern blot: ADN
Northern blot: ARN
Western blot: proteínas
Electroforesis: Técnica de separación de moléculas basada en la diferente
capacidad migratoria en un campo eléctrico según su peso molecular y carga
eléctrica.
http://www.icampus.ucl.ac.be/courses/SBIM2520/document/genemol/biomolespa/la-
molecula-de-adn/molecula-ADN.html
pGEM-T
dATP
1,8 Kb
• El gel es teñido con bromuro de etidio y el RNA visualizado en un
transiluminador UV
• Integridad del RNA: presencia y proporcion de los RNA (28 y 18S)
Southern Blot Northern blot
están amplificadas o delecionadas en una muestra por medio de
una hibridación competitiva sobre una extensión de cromosomas o
sondas
- ........................
Avances en la Biología Molecular Avances en la micro y nanotecnología
Avances en la biocomputación Medicina traslacional
TÉCNICAS DE ALTO RENDIMIENTO
“conjunto de elementos similares dispuestos de forma ordenada”
El término microarray o “micromatriz” en biología molecular se suele hacer
sinónimo de “microchip de ADN”
TIPOS
ADN
Tejido
Células
proteínas
anticuerpos
que se colocan sobre un soporte sólido
Tipos: cDNA, oligonucleótidos
- Arrays para CGH
( o todos) los genes
UTILIDAD DE MICROARRAYS DE ADN
- Detección de mecanismos o vías estimulados o reprimidos
en el metabolismo celular (neoplasias o no neoplasias)
- Detección de marcadores tumorales útiles para el diagnóstico y
clasificación de las neoplasia
predicción de respuesta terapéutica de las neoplasia.
- Detección de dianas terapéuticas
“los microarrays de ADN son un método de screening para
estudiar miles de genes a la vez, en vez de uno a uno”
IV. Hibridación in situ
visualización puede realizarse por medios isotópicos ,
enzimáticos o con fluorescencia , siendo evaluada en
un microscopio.
que detecta la alteración genómica o transcripcional
FISH
CISH
específicas de cromosoma
– Utilidad: Valorar la ploidía
• LSI: Locus Specific Identifier
– Utilidad: Amplificación, delección de genes específicos y
traslocaciones
• WCP: Whole Chromosome Painting
• Aneusomía/monosomia:
– GIST (CEP 17/8)
CISH
CISH
SISH
(Nasopharyngeal Carcinoma)
• Detección de virus:
– Epstein Bar: EBER
• Amplificación de un gen: