Tahap produksi vaksinProduksi vaksin memiliki beberapa tahap.
Proses pembuatan vaksin memiliki langkah-langkah berikut:
Inaktivasi-ini melibatkan membuat persiapan antigen
Pemurnian-antigen terisolasi dimurnikan Perumusan-antigen
dimurnikan dikombinasikan dengan ajuvan, stabilisator dan pengawet
untuk membentuk persiapan akhir vaksin.Menghasilkan antigen dari
mikrobaProduksi awal melibatkan generasi antigen dari mikroba.
Untuk ini virus atau mikroba tumbuh baik pada sel-sel dasar seperti
telur ayam (misalnya di influenza) atau pada sel baris atau
berbudaya manusia sel (misalnya Hepatitis A). Bakteri terhadap
vaksin dikembangkan dapat tumbuh di bioreactors (misalnya
Haemophilus influenzae tipe b). Antigen juga mungkin racun atau
toxoid dari organisme (misalnya difteri atau tetanus) atau mungkin
menjadi bagian dari mikroorganisme juga. Protein atau bagian dari
organisme dapat dihasilkan jamur, bakteri atau sel budaya. Bakteri
atau virus mungkin melemah dengan menggunakan bahan kimia atau
panas untuk membuat vaksin (misalnya vaksin polio).Isolasi
antigenSetelah antigen yang dihasilkan, sangat terisolasi dari
sel-sel yang digunakan untuk menghasilkan itu. Untuk lemah atau
selubung virus pemurnian lebih lanjut tidak mungkin diperlukan.
Protein rekombinan perlu banyak operasi melibatkan kromatografi
ultrafiltration dan kolom untuk pemurnian sebelum mereka siap untuk
administrasi.Ajuvan, stabilisator dan pengawetSetelah antigen
dikembangkan vaksin yang diformulasikan dengan menambahkan ajuvan,
stabilisator dan pengawet. Peran ajuvan adalah untuk meningkatkan
respon imun antigen. Stabilisator meningkatkan kehidupan
penyimpanan, dan pengawet memungkinkan penggunaan multi dosis
cawan.Hal ini sulit untuk mengembangkan dan memproduksi vaksin
kombinasi karena kemungkinan tidak kompatibel dan interaksi antara
antigen dan bahan-bahan lain dari vaksin.Persyaratan-persyaratan
produksi vaksinProduk perlu dilindungi dari udara, air dan
kontaminasi manusia. Lingkungan perlu dilindungi dari tertumpah
antigen
Keluarga VirusBiasanya ada beberapa variasi atau strain dari
virus tertentu. Tergantung pada jumlah variasi, ahli biologi
mengelompokkan virus sesuai jenis atau strainnya. Vaksin sering
dibuat dari lebih dari satu kelompok virus yang berkaitan. Reaksi
pencegahan yang timbul dengan vaksinasi multivalen mungkin akan
menyebabkan kekebalan untuk hampir semua varian kelompok virus,
atau setidaknya untuk varian virus yang seseorang lebih mungkin
terkena. Pilihan spesifik dari kelompok virus untuk digunakan dalam
pembuatan vaksin ditentukan dengan hati-hati dan secara
bersama-sama.Proses Pembuatan VaksinProduksi vaksin antivirus saat
ini merupakan sebuah proses rumit bahkan setelah tugas yang berat
untuk membuat vaksin potensial di laboratorium. Perubahan dari
produksi vaksin potensial dengan jumlah kecil menjadi produksi
bergalon-galon vaksin yang aman dalam sebuah situasi produksi
sangat dramatis, dan prosedur laboratorium yang sederhana tidak
dapat digunakan untuk meningkatkan skala produksi.Benih
VirusProduksi vaksin dimulai dengan sejumlah kecil virus tertentu
(atau disebut benih). Virus harus bebas dari kotoran, baik berupa
virus yang serupa atau variasi dari jenis virus yang sama. Selain
itu, benih harus disimpan dalam kondisi ideal, biasanya beku, yang
mencegah virus menjadi lebih kuat atau lebih lemah dari yang
diinginkan. Benih disimpan dalam gelas kecil atau wadah plastik.
Jumlah yang kecil hanya 5 atau 10 sentimeter kubik, mengandung
ribuan hingga jutaan virus, nantinya dapat dibuat menjadi ratusan
liter vaksin.Freezerdipertahankan pada suhu tertentu. Grafik di
luarfreezerakan mencatat secara terus menerus suhufreezer. Sensor
terhubung dengan alarm yang dapat didengar atau alarm komputer yang
akan menyala jika suhufreezerberada di luar suhu yang
seharusnya.Pertumbuhan VirusSetelah mencairkan dan memanaskan benih
virus dalam kondisi tertentu secara hati-hati (misalnya, pada suhu
kamar atau dalam bak air), sejumlah kecil sel virus ditempatkan ke
dalam pabrik sel, sebuah mesin kecil yang telah dilengkapi sebuah
media pertumbuhan yang tepat sehingga sel memungkinkan virus untuk
berkembang biak.Setiap jenis virus tumbuh terbaik di media
tertentu, namun semua media umumnya mengandung protein yang berasal
dari mamalia, misalnya protein murni dari darah sapi. Media juga
mengandung protein lain dan senyawa organik yang mendorong
reproduksi sel virus. Penyediaan media yang benar, pada suhu yang
tepat, dan dengan jumlah waktu yang telah ditetapkan, virus akan
bertambah banyak.Selain suhu, faktor-faktor lain harus dipantau
adalah pH. pH adalah ukuran keasaman atau kebasaan, diukur pada
skala dari 0 sampai 14. dan virus harus disimpan pada pH yang tepat
dalam pabrik sel. Air tawar yang tidak asam atau basa (netral)
memiliki pH 7. Meskipun wadah di mana sel-sel tumbuh tidak terlalu
besar (mungkin ukuran pot 4-8 liter), terdapat sejumlah katup,
tabung, dan sensor yang terhubung dengannya. Sensor memantau pH dan
suhu, dan ada berbagai koneksi untuk menambahkan media atau bahan
kimia seperti oksigen untuk mempertahankan pH, tempat untuk
mengambil sampel untuk analisis mikroskopik, dan pengaturan steril
untuk menambahkan komponen ke pabrik sel dan mengambil produk
setengah jadi ketika siap.Virus dari pabrik sel ini kemudian
dipisahkan dari media, dan ditempatkan dalam media kedua untuk
penumbuhan tambahan. Metode awal yang dipakai 40 atau 50 tahun yang
lalu yaitu menggunakan botol untuk menyimpan campuran, dan
pertumbuhan yang dihasilkan berupa satu lapis virus di permukaan
media. Peneliti kemudian menemukan bahwa jika botol itu berubah
posisi saat virus tumbuh, virus bisa tetap dihasilkan karena
lapisan virus tumbuh pada semua permukaan dalam botol.
Sebuah penemuan penting dalam tahun 1940-an adalah bahwa
pertumbuhan sel sangat dirangsang oleh penambahan enzim pada
medium, yang paling umum digunakan yaitu tripsin. Enzim adalah
protein yang juga berfungsi sebagai katalis dalam memberi makan dan
pertumbuhan sel.Dalam praktek saat ini, botol tidak digunakan sama
sekali. Virus yang sedang tumbuh disimpan dalam wadah yang lebih
besar namun mirip dengan pabrik sel, dan dicampur dengan
manik-manik, partikel mikroskopis dimana virus dapat menempelkan
diri. Penggunaan manik-manik memberi virus daerah yang lebih besar
untuk menempelkan diri, dan akibatnya, pertumbuhan virus menjadi
yang jauh lebih besar. Seperti dalam pabrik sel, suhu dan pH
dikontrol secara ketat. Waktu yang dihabiskan virus untuk tumbuh
bervariasi sesuai dengan jenis virus yang diproduksi, dan hal itu
sebuah rahasia yang dijaga ketat oleh pabrik.Pemisahan Virus
Ketika sudah tercapai jumlah virus yang cukup banyak, virus
dipisahkan dari manik-manik dalam satu atau beberapa cara. Kaldu
ini kemudian dialirkan melalui sebuah filter dengan bukaan yang
cukup besar yang memungkinkan virus untuk melewatinya, namun cukup
kecil untuk mencegah manik-manik dapat lewat. Campuran ini
sentrifugasi beberapa kali untuk memisahkan virus dari manik-manik
dalam wadah sehingga virus kemudian dapat dipisahkan. Alternatif
lain yaitu dengan mengaliri campuran manik-manik dengan media lain
sehingga mencuci manik-manik dari virus.Memilih Strain VirusVaksin
bisa dibuat baik dari virus yang dilemahkan atau virus yang
dimatikan. Pemilihan satu dari yang lain tergantung pada sejumlah
faktor termasuk kemanjuran vaksin yang dihasilkan dan efek
sekunder. Virus yang dibuat hamper setiap tahun sebagai respon
terhadap varian baru virus penyebab, biasanya berupa virus yang
dilemahkan. Virulensi virus bisa menentukan pilihan; vaksin rabies,
misalnya, selalu vaksin dari virus yang dimatikan.Jika vaksin dari
virus dilemahkan, virus biasanya dilemahkan sebelum dimulai proses
produksi. Strain yang dipilih secara hati-hati dibudidayakan
(ditumbuhkan) berulang kali di berbagai media. Ada jenis virus yang
benar-benar menjadi kuat saat mereka tumbuh. Strain ini jelas tidak
dapat digunakan untuk vaksin attenuated. Strain lainnya menjadi
terlalu lemah karena dibudidayakan berulang-ulang, dan ini juga
tidak dapat diterima untuk penggunaan vaksin. Seperti bubur, kursi,
dan tempat tidur yang disukai Goldilocks, hanya beberapa virus yang
tepat mencapai tingkat atenuasi yang membuat mereka dapat diterima
untuk penggunaan vaksin, dan tidak mengalami perubahan dalam
kekuatannya. Teknologi molekuler terbaru telah memungkinkan
atenuasi virus hidup dengan memanipulasi molekul, tetapi metode ini
masih langka.
Virus ini kemudian dipisahkan dari media tempat dimana virus itu
tumbuh. Vaksin yang berasal dari beberapa jenis virus (seperti
kebanyakan vaksin) dikombinasikan sebelum pengemasan. Jumlah aktual
dari vaksin yang diberikan kepada pasien akan relatif kecil
dibandingkan dengan jumlah medium yang dengan apa vaksin tersebut
diberikan. Keputusan mengenai apakah akan menggunakan air, alkohol,
atau solusi lain untuk injeksi vaksin, misalnya, dibuat setelah tes
berulang-ulang demi keselamatan, steritilitas, dan
stabilitas.Pengontrolan Kualitas
Gaun Tyvek untuk melindungi pekerja yang membuat dan mengemas
vaksinUntuk melindungi kemurnian vaksin dan keselamatan pekerja
yang membuat dan mengemas vaksin, kondisi kebersihan laboratorium
diamati pada seluruh prosedur. Semua transfer virus dan media
dilakukan dalam kondisi steril, dan semua instrumen yang digunakan
disterilisasi dalam autoklaf (mesin yang membunuh organisme dengan
suhu tinggi, dan yang berukuran sekecil kotak perhiasan atau
sebesar lift) sebelum dan sesudah digunakan. Pekerja yang melakukan
prosedur memakai pakaian pelindung yang meliputi gaun Tyvek sekali
pakai, sarung tangan, sepatu bot, jaring rambut, dan masker wajah.
Ruangan pabrik sendiri memakai AC yang khusus sehingga jumlah
partikel di udara minimal.Proses PerizinanDalam rangka untuk
peresepan obat untuk dijual di Amerika Serikat, produsen obat harus
memenuhi persyaratan lisensi yang ketat yang ditetapkan oleh hukum
dan diberlakukan olehFood and Drug Administration(FDA). Semua obat
yang diresepkan harus menjalani tiga tahap pengujian, meskipun data
dari fase kedua kadang-kadang dapat digunakan untuk memenuhi
kebutuhan tahap ketiga.Tahap 1 pengujian harus membuktikan bahwa
obat aman, atau setidaknya tidak ada efek yang tidak diinginkan
atau tak terduga akan terjadi dari pemberiannya. Jika obat dapat
melewati tahap 1 pengujian, di samping harus diuji efektivitasnya
(obat harus memiliki efek apa yang seharusnya). Obat-obatan yang
tidak berguna tidak dapat dijual, atau yang membuat klaim untuk
efek yang sebenarnya tidak dimiliki. Akhirnya, tahap 3 pengujian
ini dirancang untuk mengukur efektivitas obat. Meskipun vaksin
diharapkan memiliki efektivitas hampir 100%, obat-obat tertentu
mungkin dapat diterima bahkan jika mereka mempunyai efektivitas
yang minimal, asalkan dokter yang meresepkan mengetahuinya.Seluruh
proses produksi ditelaah dengan hati-hati oleh FDA dengan
mempelajari catatan prosedur serta mengunjungi tempat produksi itu
sendiri. Setiap langkah dalam proses produksi harus
didokumentasikan, dan produsen harus menunjukkan suatu kontrol yang
tetap untuk proses produksi. Ini berarti bahwa prsedur yang teliti
harus terjaga untuk setiap langkah dalam proses, dan harus ada
instruksi tertulis untuk setiap langkah dari proses. Kecuali dalam
kasus-kasus kesalahan yang memilukan, FDA tidak menentukan apakah
setiap langkah dalam proses benar, tetapi hanya bahwa itu aman dan
cukup terdokumentasi dengan baik untuk dilakukan, seperti yang
ditetapkan oleh produsen.pembuatan vaksin dengan menggunakan
rekayasa genetika. Prinsip-prinsip rekayasa genetika dalam
pembuatan vaksin adalah berikut:1. Mengisolasi (memisahkan) gen-gen
pengebab sakit dari virus atau patogen.2. Menyisipkan gen-gen
tersebut ke dalam sel bakteri atau kultur sel hewan. Sel bakteri
atau sel hewan yang telah disisipi gen itu disebutrekombinan.3.
Rekombinantersebut akan menghasilkan antigen. Selanjutnya
rekombinan akan dikultur sehingga diperoleh antigen dalam jumlah
banyak.4. Antigen itu diektraksi untuk digunakan sebagai
vaksin.Contoh vaksin yang telah dibuat dengan cara ini adalah
vaksin untuk penyakit poliomyelitis,gondong, cacar air,rubela, dan
rabies.Pembuatan vaksin dilakukan melalui rekayasa genetika. Vaksin
dibuat dengan mengisolasi gen yang mengkode antigen dari mikrobia
yang bersangkutan. Gen tersebut disisipkan pada plasmid yang sama
tetapi telah dilemahkan. Mikrobia yang telah disisipi gen tersebut
akan membentukantigen murni. Jika antigen ini disuntikkan pada
tubuh manusia, sistem kekebalan tubuh akan membentuk antibodi yang
berfungsi melawan antigen yang masuk ke dalam tubuh.Proses
pembuatan kultur sel hewan yang digunakan dalam pembuatan vaksin
juga merupakan salah satu kemajuan dalam bioteknologi. Jaringan
vertebrata di beri enzim proteolik misalnya tripsin, sehingga
sel-sel terpisah. Sel-sel itu lalu diberi nutrien tertentu untuk
meletakan sel-sel tersebut di wadah. Sel-sel tersebut akan membelah
secara mitosis membentuk satu lapisan sel. Lapisan sel ini dapat
diperbanyak dengan memberikan bahan kimia yang merangsang
pembelahan sel. Lapisan sel ini (kultur primer), selain untuk
membiarkan virus, juga dapat digunakan untuk membentuk kultur
sekunder.Dari beberapa penerapan kultur sel hewan, produksi vaksin
virus adalah yang tertua. Prosesnya adalah virus ditumbuhkan dalam
kultur sel, misalnya sel dari embrio ayam atau ginjal monyet.
Kemudian, panen dari virus-virus tersebut diekstraksi dengan
penyaringan. Virus tersebut dilemahkan dan dapat disimpan dalam
suhu rendah hingga siap digunakan.