UNIVERSITE DE YAOUNDE 1 FACULTE DE MEDECINE ET DES SCIENCES BIOMEDICALES MG2/PH2/MD2 Travaux pratiques de bactériologie (révisions) Dr Toukam M. / Dr Gonsu H. 25/05/22 1
UNIVERSITE DE YAOUNDE 1FACULTE DE MEDECINE ET DES SCIENCES BIOMEDICALES
MG2/PH2/MD2
Travaux pratiques de bactériologie(révisions)
Dr Toukam M. / Dr Gonsu H.
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Microscope optique: schéma annoté
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Microscope optique
1. Système de support Embase/ socle/pied Potence Tête inclinée à 30° Platine Revolver porte-objectif
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Microscope optique
2. Système de grossissement Objectifs Oculaires3. Système d’éclairage Source lumineuse (lampe électrique ou
miroir) Condenseur Diaphragme Filtre
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Microscope optique
4. Système de réglage Vis macrométrique ou crémaillère Vis micrométrique Vis de montée et de descente du
condenseur Barrette d’ouverture du
diaphragme
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Coloration de Gram
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Coloration de Gram
1- Principe Le violet de Gentiane colore la bactérie en violet.
L’alcool décolore la bactérie ayant une paroi possédant une mince couche de peptidoglycane (Gram - )
• Le contre colorant(fuchsine) colore la bactérie
décolorée en rose.
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Coloration de Gram
2- Mode opératoire Recouvrir la préparation de violet de Gentiane, laisser
agir 15 secondes Éliminer le violet de gentiane en rinçant avec le lugol
(faire agir le lugol 2 fois de 15 secondes) Sans rincer, décolorer aussitôt à l’ alcool-acétone par un
mouvement de bascule jusqu’à ce que l’alcool-acétone n ’entraîne plus de violet et soit incolore
Laver rapidement à l’eau courante Recolorer avec la fuchsine diluée quelques secondes Rincer abondamment, puis sécher.17/04/23 8
Coloration de Gram
3- Lecture
Observer à l’immersion objectif 100x, les bactéries Gram + apparaissent violettes et les bactéries Gram – apparaissent roses
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Coloration de Ziehl Neelsen
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Coloration de Ziehl Neelsen
1.PrincipeLa fuchsine basique de Ziehl est soluble dans les lipides de la paroi des
mycobactéries . Cette solubilité préférentielle ( cœfficient
de partage ) résiste à l'action des acides et de l'alcool .
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Coloration de Ziehl Neelsen
2- Mode opératoire
Réaliser un frottis et le fixer (ni trop fin ni trop épais)
Faire agir à chaud de la fuchsine phéniquée concentrée
- placer un morceau de coton sur le fer à lutter - l’humecter d’éthanol à 95° - flamber l’éthanol Chauffer la lame par dessous jusqu’à émission de
vapeurs blanches de phénol en ajoutant si nécessaire de la fuchsine afin d’éviter que le frottis se dessèche.(durée de chauffage 10 minutes)
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Coloration de Ziehl Neelsen
2. Mode opératoire (suite)
Laver soigneusement le frottis Placer dans un bain d’ acide nitrique au 1/3 ou
sulfurique au ¼ pendant 5 minutes Laver Placer dans un bain d’éthanol à 95° pendant 2 minutes Laver, égoutter Colorer au bleu de méthylène phéniquée pendant 5
minutes Laver Sécher17/04/23 13
Coloration de Ziehl Neelsen
3- Lecture
Observer à l’immersion objectif 100x
les BAAR(Bacilles Acido-Alcoolo Résistants) apparaissent roses alors que les autres microorganismes sont bleus.17/04/23 14
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EXERCICES
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D1: Microscope optique : annoter ce schéma
4
27
3
6
8
95
10
1
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D2
1- Indiquer le type de coloration
2- Décrire - la morphologie des
bactéries observées - leur mode de
groupement
3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable17/04/23 18
D3
1- Indiquer le type de coloration
2- Décrire - la morphologie des
bactéries observées - leur mode de
groupement
3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable17/04/23 19
D4
1- Indiquer le type de coloration
2- Décrire - la morphologie
des bactéries observées
- leur mode de groupement
3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable17/04/23 20
D5
1- Indiquer le type de coloration
2- Décrire - la morphologie
des bactéries observées
- leur mode de groupement
3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable17/04/23 21
D6
1- Indiquer le type de coloration
2- Décrire - la morphologie des
bactéries observées - leur mode de
groupement
3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable
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D7
1- Indiquer le type de coloration
2- Décrire - la morphologie des
bactéries observées - leur mode de
groupement
3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable
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D8
1- Indiquer le type de coloration
2- Décrire - la morphologie des
bactéries observées - leur mode de
groupement
3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable
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