STUDI AWAL : HISTOTEKNIK PERFUSI PBS- FORMALIN DAN GAMBARAN HISTOLOGI ORGAN HEPAR, PANKREAS DAN GINJAL TIKUS STRAIN SPRAGUE DAWLEY Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA KEDOKTERAN Oleh : PUTRI JUNITA SARI 1112103000061 PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA 1436 H/2015 M
66
Embed
STUDI AWAL : HISTOTEKNIK PERFUSI PBS FORMALIN DAN … · spesimen tertentu melalui suatu rangkaian proses hingga menjadi sajian yang siap untuk diamati dan dianalisa. 1,2,3 Perfusi
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
STUDI AWAL : HISTOTEKNIK PERFUSI PBS-
FORMALIN DAN GAMBARAN HISTOLOGI ORGAN
HEPAR, PANKREAS DAN GINJAL TIKUS STRAIN
SPRAGUE DAWLEY
Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA KEDOKTERAN
Oleh :
PUTRI JUNITA SARI
1112103000061
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UIN SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
1436 H/2015 M
ii
iii
iv
v
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum wr.wb.
Alhamdulilahirabbil’alamin, puji serta syukur saya panjatkan kehadirat
Allah SWT, karena atas segala rahmat dan karunia-Nya saya dapat menyelesaikan
penelitian ini. Shalawat serta salam semoga tetap tercurah limpahkan pada Nabi
besar Muhammad SAW, yang membawa cahaya kebenaran sampai akhir zaman.
Penelitian ini tidak dapat terlepas dari bantuan berupa masukan, kritik
maupun saran dari berbagai pihak. Untuk itu penulis menyampaikan rasa terima
kasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Dr. H. Arif Sumantri, SKM, M.Kes selaku Dekan FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta, dr. Achmad Zaki, S.Ked, M.Epid, Sp. OT selaku
Ketua Program Studi Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta, serta seluruh dosen Program Studi Pendidikan
Dokter yang selalu membimbing serta memberikan ilmu kepada saya
selama menjalani masa pendidikan di Program Studi Pendidikan Dokter
FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. Dr. Devy Ariany, M. Biomed dan Ibu Nurlaely Mida Rachmawati, S.Si,
M. Biomed, DMS selaku dosen pembimbing penelitian saya, yang selalu
membimbing, mengarahkan, dan menyemangati saya dalam
menyelesaikan penelitian ini dengan baik. Juga para dewan penguji
3. Kedua orang tua saya yang tercinta, Bpk. Fahrizal dan Ibu Asma Amir
yang selalu memberikan cinta dan kasih sayang, memberikan doa, nasihat,
Gambar 2.7. Gambaran histologis hepar normal ...............................................
Gambar 2.8. Gambaran histologis ginjal normal .............................................
Gambar 2.9. Gambaran histologis ginjal tikus normal ......................................
Gambar 4.1.a Alat perfusi .................................................................................
Gambar 4.1.b Pengaturan sudut pada perfusi ...................................................
Gambar 4.1.c Tanda perfusi sudah optimal .......................................................
Gambar 4.1.d Perfusi selesai .................................................................. Gambar 4.1.a Hepar perfusi PBS-Formalin A 20x ...........................................
Gambar 4.2.b Hepar perfusi PBS-Formalin A 40x (insert: hepatosit) ..............
Gambar 4.3.a Ginjal perfusi PBS-Formalin C 20x ...........................................
Gambar 4.3.b Ginjal perfusi PBS-Formalin C 40x (insert: glomerulus) ..........
Gambar 4.3.c Ginjal perfusi PBS-Formalin C 40x (insert: tubulus) .................
Gambar 4.4.a Pankreas perfusi PBS-Formalin A 20x .......................................
Gambar 4.4.b Pankreas perfusi PBS-Formalin A 40x (insert: Langerhans) .....
Gambar 4.4.c Pankreas perfusi PBS-Formalin A 40x (insert : asinus) ............
Gambar 6.1 Surat Keterangan Tikus Sehat ......................................................
Gambar 6.2 Sampel Penelitian ..........................................................................
Gambar 6.3 Anastesi Hewan Coba ....................................................................
Gambar 6.4 Proses Nekropsi .............................................................................
Gambar 6.5 Proses Perfusi ................................................................................
Gambar 6.6 Proses Dehidrasi ............................................................................
Gambar 6.7 Proses clearing ..............................................................................
Gambar 6.8 Proses Embedding .........................................................................
Gambar 6.9 Proses Blocking .............................................................................
Gambar 6.10 Blok PBS-Formalin .....................................................................
Gambar 6.11 Pemotongan Jaringan ...................................................................
Gambar 6.12 Set Pewarnaan Hematoksilin Eosin .............................................
Gambar 6.13.a Hepar PBS-F A 20x ..................................................................
Gambar 6.1.3.b Hepar PBS-F B 20x .................................................................
Gambar 6.1.3.c. Hepar PBS-F A 40x ................................................................
Gambar 6.13.d. Hepar PBS-F B 40x .................................................................
Gambar 6.14.a Ginjal PBS-F A 20x .................................................................
Gambar 6.14.b Ginjal PBS-F B20x ...................................................................
Gambar 6.14.c Ginjal PBS-F C 20x ..................................................................
Gambar 6.14.d Ginjal PBS-F A 40x (insert: glomerulus) ................................
Gambar 6.14.e Ginjal PBS-F B 40x (insert: glomerulus) .................................
7
7
8
8
9
10
17
18
19
31
31
31
31
33
33
33
34
34
35
35
35
42
43
43
43
43
44
44
44
44
44
44
45
46
46
46
46
47
47
47
47
47
xi
Gambar 6.14.f Ginjal PBS-F C 40x (insert: glomerulus) .................................
Gambar 6.14.g Ginjal PBS-F A 40x (insert: tubulus) .......................................
Gambar 6.14.h Ginjal PBS-F B 40x (insert: tubulus) .......................................
Gambar 6.14.i Ginjal PBS-F C 40x (insert: tubulus) ........................................
Gambar 6.15.a Pankreas PBS-F A 20x .............................................................
Gambar 6.15.b Pankreas PBS-F B 20x .............................................................
Gambar 6.15.c Pankreas PBS-F C 20x ..............................................................
Gambar 6.15.d Pankreas PBS-F D 20x ............................................................
Gambar 6.1.5.e Pankreas PBS-F E 20x .............................................................
Gambar 6.15.f Pankreas PBS-F F 20x ..............................................................
Gambar 6.15.g Pankreas PBS-F G 20x .............................................................
Gambar 6.15.h Pankreas PBS-F H 20x .............................................................
Gambar 6.15.i Pankreas PBS-F A 40x (insert: Langerhans) ............................
Gambar 6.15.j Pankreas PBS-F B 40x (insert: Langerhans dan asinus) ...........
Gambar 6.15.k Pankreas PBS-F C 40x (insert: Langerhans) ...........................
Gambar 6.15.l Pankreas PBS-F D 40x (insert: Langerhans) ...........................
Gambar 6.15.m Pankreas PBS-F E 40x (insert: Langerhans) ...........................
Gambar 6.15.n Pankreas PBS-F F 40x (insert: Langerhans) ............................
Gambar 6.15.o Pankreas PBS-F G 40x (insert: Langerhans dan asinus) ..........
Gambar 6.15.p Pankreas PBS-F H 40x (insert: Langerhans) ...........................
Gambar 6.15.q Pankreas PBS-F A 40x (insert: asinus) ....................................
Gambar 6.15.r Pankreas PBS-F C 40x (insert: asinus) .....................................
Gambar 6.15.s Pankreas PBS-F D 40x (insert: asinus) ....................................
Gambar 6.15.t Pankreas PBS-F E 40x (insert: asinus) .....................................
Gambar 6.15.u Pankreas PBS-F F 40x (insert: asinus) .....................................
Gambar 6.15.v Pankreas PBS-F H 40x (insert: asinus) ....................................
47
48
48
48
49
49
49
49
49
49
49
49
50
50
50
50
50
50
51
51
51
51
51
51
52
52
xii
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1. Daftar preparat jaringan yang diperfusi dengan PBS-Formalin .......
32
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Surat Keterangan Tikus Sehat ........................................................
Lampiran 2 Gambar Proses Penelitan ...............................................................
Lampiran 3 Gambar Preparat ............................................................................
Lampiran 4 Riwayat Penulis .............................................................................
42
43
46
53
1
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Histoteknik adalah metode atau cara untuk membuat sajian histologi dari
spesimen tertentu melalui suatu rangkaian proses hingga menjadi sajian yang siap
untuk diamati dan dianalisa. Sajian histologi yang baik dapat digunakan untuk riset,
guna mempelajari perubahan jaringan dan organ tubuh hewan coba yang mendapat
perlakuan tertentu atau mempelajari pertumbuhan dan perkembangan jaringan atau
organ tubuh tertentu.1,2,3
Teknik perfusi adalah kombinasi antara teknik euthanasia dan fiksasi. Hewan
coba yang telah di euthanasia, akan dialirkan cairan melalui sirkulasi darah. Tindakan
ini bertujuan agar proses fiksasi terhadap organ berlangsung lebih cepat. Dasar dari
teknik ini yaitu menunda proses autolisis pada jaringan secepat mungkin.3,4
Keuntungan dari teknik perfusi ini yaitu cairan perfusi dapat dengan cepat mencapai
setiap sudut jaringan, sehingga jaringan yang dihasilkan kurang lebih sama dengan
saat hewan dalam keadaan hidup.4 Cairan perfusi yang digunakan pada penelitian ini
adalah Phosphate Buffered Saline (PBS)-Formalin. PBS adalah larutan fisiologis
yang bersifat isotonik dan tidak beracun terhadap sel serta bertujuan untuk menjaga
kadar pH dan mempertahankan osmolaritas sel.5 Formalin yang dilarutkan dalam
PBS atau biasa disebut PBS-Formalin merupakan larutan yang direkomendasikan
sebagai pilihan agen fiksasi yang terbaik.6
Institusi pendidikan kedokteran seharusnya mempunyai laboratorium yang
terakreditasi untuk menunjang pembelajaran dan penelitian setiap mahasiswanya.
Faktor yang dapat mempengaruhi dan menentukan validitas suatu penelitian dari
laboratorium yaitu kelengkapan dari peralatannya, kemampuan dan pengalaman dari
operator atau analisanya, petunjuk analisis baku atau SOP yang digunakan, serta
kemampuan mengontrol mutu dan pengendalian mutu terhadap pekerjaan dan hasil
2
analisisnya.7
Studi awal adalah penelitian yang bertujuan untuk mengidentifikasi
gambaran hasil dan dapat mengevaluasi hasil tersebut sehingga nantinya dapat
dijadikan bahan acuan penelitian selanjutnya.8
Laboratorium Animal House di
Fakultas Kedokteran UIN Syarif Hidayatullah Jakarta sejak berdirinya tahun 2005
belum mempunyai SOP yang baku mengenai histoteknik khususnya metode perfusi.
Maka dari itu, tujuan penelitian ini untuk mendapatkan data dalam penyusunan SOP
baku histoteknik yang dapat diterapkan di laboratorium Animal House dan Histologi
kampus FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
1.2 Rumusan Masalah
1. Bagaimanakah teknik perfusi pada tikus di laboratorium Animal House
kampus FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta?
2. Bagaimana gambaran histologi organ hepar, pankreas dan ginjal tikus yang
diperfusi dengan PBS-Formalin?
1.3 Tujuan Penelitian
1.3.1 Tujuan Umum
Mendapatkan data untuk menyusun SOP baku histoteknik yang dapat
diterapkan di laboratorium Animal House dan Histologi kampus FKIK UIN
Syarif Hidayatullah Jakarta
1.3.2 Tujuan Khusus
Mengetahui gambaran histologi organ hepar, ginjal dan pankreas tikus yang
diperfusi dengan PBS-Formalin
1.4 Manfaat Penelitian
1.4.1 Bagi Peneliti
1. Untuk menambah pengetahuan, wawasan, dan keterampilan dalam bidang
histoteknik.
3
2. Sebagai salah satu syarat mendapatkan gelar Sarjana Kedokteran di
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta
1.4.2 Bagi Institusi
1. Untuk menjadi bahan acuan pembuatan SOP histoteknik di Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta sehingga
dapat menjadi rujukan bagi peneliti lain
2. Untuk menjadi bahan acuan untuk penyusunan anggaran pembelian alat
perfusi dengan tujuan dapat menunjang penelitian khususnya tentang
metode perfusi di laboratorium di Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3. Untuk menambah referensi penelitian di Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta sehingga dapat digunakan
untuk penelitian yang lebih dalam oleh peneliti lain.
4. Untuk meningkatkan kualitas laboratorium Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah, khususnya laboratorium Histologi-
Patologi Anatomi.
4
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Landasan Teori
2.1.1 Histoteknik
Histoteknik adalah metode atau cara untuk membuat sajian histologi dari
spesimen tertentu melalui suatu rangkaian proses hingga menjadi sajian yang siap
untuk diamati dan dianalisa. Sajian histologi yang baik dapat digunakan untuk riset,
guna mempelajari perubahan jaringan dan organ tubuh hewan coba yang mendapat
perlakuan tertentu atau mempelajari pertumbuhan dan perkembangan jaringan atau
organ tubuh tertentu.1,2,3
Histoteknik terdiri dari beberapa tahapan proses yang dimulai dari isolasi
jaringan dan diakhiri dengan pewarnaan. Salah satu teknik dalam melakukan isolasi
jaringan adalah perfusi.1,3
Selanjutnya dilakukan fiksasi, dimana proses ini bertujuan
agar organ yang telah dipisahkan dari tubuh hewan coba tidak rusak. Kemudian
dilanjutkan dengan proses dehidrasi. Proses ini bertujuan untuk mengeluarkan seluruh
cairan yang terdapat dalam jaringan yang telah difiksasi sehingga dapat diisi dengan
parafin atau zat lain untuk membuat blok preparat. Kemudian dilanjutkan dengan
proses penjernihan (clearing) yang bertujuan untuk mengeluarkan alkohol dari
jaringan dan menggantikannya dengan suatu larutan yang dapat berikatan dengan
parafin. Selanjutnya dilakukan pembenaman (embedding) yang bertujuan untuk
mengeluarkan cairan pembening (clearing agent) dari jaringan dan diganti dengan
parafin. Selanjutnya blocking, dimana proses ini akan dilakukan menggunakan
parafin yang dicampurkan dengan organ yang telah mengalami proses diatas. Setelah
itu dilakukan pemotongan dan proses pewarnaan. Proses pewarnaan ini menggunakan
zat warna Hematoxylin dan Eosin. Pada hasil pewarnaan akan terlihat sitoplasma dan
inti sel pada setiap potongan organ.1,2,3
5
2.1.2 Teknik Nekropsi
Nekropsi adalah teknik yang digunakan untuk mengetahui penyebab kematian
pada umumnya. Nekropsi ini selain untuk menentukan penyebab suatu kematian,
dapat digunakan juga untuk mengetahui pengaruh suatu penelitian yang dilakukan
terhadap organ hewan coba. Prosedur nekropsi cukup rumit dan membutuhkan teknik
yang tidak mudah dalam pelaksanannya. Nekropsi dilakukan segera setelah kematian
hewan coba agar mencegah terjadinya degenerasi jaringan setelah kematian. Proses
autolisis sel terjadi sesaat setelah kematian. Pertama terjadi pada sel epitel saluran
cerna, dan sumsum tulang belakang. Kemudian dilanjutkan dengan organ hati, limpa,
dan ginjal. Proses ini dipengaruhi juga oleh suhu lingkungan. Semakin tinggi
suhunya, semakin mudah suatu organ berdegenerasi.3
2.1.2. Metode Perfusi
Perfusi adalah metode pada histoteknik untuk mengalirkan cairan fiksasi ke
dalam jaringan dengan waktu yang relatif cepat, sehingga gambaran histologi yang
diperoleh mewakili keadaan sesaat sebelum kematian. Metode ini membutuhkan
peran pembuluh darah yang akan menyalurkan dan memberikan akses ke setiap
jaringan dalam waktu yang cepat. Sel akan memulai proses autolisis segera setelah
proses anoksia (kekurangan oksigen) terjadi. Jadi, semakin cepat larutan fiksatif
sampai ke setiap sel, maka proses autolisis pun semakin cepat berhenti.4,9
Metode perfusi sudah banyak dilakukan di berbagai laboratorium riset. Darah
akan dikeluarkan dan dikuras dengan cara menyuntikkan larutan garam fisiologis
yang dilanjutkan dengan larutan fiksatif. Biasanya larutan yang dipakai adalah
formalin. Cara memasukkan larutan pada metode ini ada 2 macam yaitu, metode
gravitasi dan pompa peristaltik. Metode gravitasi menggunakan bantuan gaya
gravitasi sehingga metode ini paling mudah dilakukan. Namun, hasil yang didapatkan
tidak begitu optimal. Karena apabila ada sel darah yang menyumbat suatu pembuluh
darah kapiler, maka larutan fiksatif tidak dapat sampai pada daerah tersebut secara
bersamaan sehingga tujuan keseragaman hasil akan sulit didapatkan. Sedangkan
6
metode pompa peristaltik yaitu proses mendorong cairannya menggunakan bantuan
pompa peristaltik. Dengan menggunakan metode ini hasil yang didapat akan lebih
maksimal dan keseragaman hasil akan lebih optimal.4,9
Salah satu kelemahan metode perfusi adalah jaringan yang lunak akan
menyusut setelah dilakukan perfusi. Untuk mencegah hal tersebut perlu dijaga
perbandingan jumlah cairan di dalam dan di luar sel. Setiap sel memiliki pompa ion
pada permukaannya, umumnya berupa pompa natrium. Secara kontinu natrium akan
masuk ke dalam sel, dan dipompa keluar agar perbandingan 10:1 antara jumlah di
luar dan di dalam sel tetap terjaga. Segala faktor yang dapat mengganggu
metabolisme energi sel, contohnya pada perlakuan perfusi ini, dapat menyebabkan
rusaknya pompa ion. Akibatnya, sodium, air, dan cairan ekstraselular akan masuk ke
dalam sel hingga keseimbangan konsentrasi zat-zat tersebut di luar dan di dalam sel
tercapai. Hal tersebut menyebabkan sel membengkak dan menutup ruang ekstra
selular. Pada akhir perfusi, permeabilitas membran akan meningkat dan cairan akan
keluar dari sel menuju ke pembuluh darah. Selain itu, ruang ekstraseluler tidak
memompa ulang dan organ akan kolaps kedalam seluruhnya, sehingga pengkerutan
jaringan dapat dihindarkan.4,9
Larutan perfusi dialirkan dengan kecepatan 20-25 ml/menit untuk tikus
dewasa. Teknik perfusi juga menggunakan tekanan awal 80 mmHg dan
dipertahankan sampai larutan perfusi selesai. Selain itu, tekanan dapat ditingkatkan
maksimal sampai 130 mmHg.4,10
Selama perfusi, kecepatan dan tekanan yang
dianjurkan harus dipertahankan agar mencegah kerusakan pada organ yang telah
dilakukan perfusi sehingga hasil gambaran yang didapat tidak sesuai dengan yang
diharapkan.11
2.1.2.1. Langkah-Langkah Metode Perfusi
Siapkan perlengkapan perfusi dan berikan label pada komponen-
komponennya.
7
Gambar 2.1. Peralatan perfusi dengan komponen berlabel dan persiapan perfusi I
(sumber : Fixation and Fixatives : Popular Fixative Solutions, 2012)4
Selanjutnya, persiapkan perlengkapan perfusi. Mulai dengan fixative line.
Siram lubang pipa yang berisi gelembung udara dan isi dengan dapar dengan cara
memasukkan dapar melalui syringe. Tutup katup pada pipa bagian akhir. Letakkan
fixative line ke dalam botol fiksatif tanpa dikenalkan oleh gelembung udara.
Gambar 2.2. Persiapan perfusi II dan peralatan perfusi untuk mengalirkan dapar
(sumber : Fixation and Fixatives : Popular Fixative Solutions, 2012) 4
Persiapan perlengkapan perfusi II. Buka katup pada awal percabangan, yaitu
katup dapar (warna biru) agar cairan dapat mengalir. Siram pipa dengan gelembung
udara dengan dapar yang dimasukkan melalui syringe. Tutup katup pada akhir pipa.
Letakkan pipa pada botol dapar. Tes tekanan untuk memastikan sistem tertutup secara
8
sempurna dengan memompa bulb manometer dan melihat pengukurnya.
Perlengkapan siap untuk melakukan prosedur fiksasi
Gambar 2.3. Preparasi hewan coba (sumber : Fixation and Fixatives : Popular
Fixative Solutions, 2012) 4
Insisi pada lateral melewati integument dan dinding abdomen, dilanjutkan
insisi pada diafragma dan potong daerah tersebut untuk mengekspos jantung.
Kemudian buat potongan paralel pada kedua sisi tulang iga (costae) hingga tulang
scapulae.
Gambar 2.4. Preparasi perfusi pada hewan coba (sumber : Fixation and Fixatives :
Popular Fixative Solutions, 2012) 4
9
Klem ujung sternum dengan hemostat dan letakkan hemostat di atas kepala
tikus. Letakkan jarum perfusi melalui potongan ventrikel menuju aorta asendens
kemudian amankan jarum perfusi dengan 1 set hemostat untuk klem jantung. 1 set
hemostat yang lain dapat digunakan untuk klem aorta, yaitu kira-kira pada ujung
jarum untuk mencegah kebocoran. Selanjutnya gunakan gunting iris untuk membuat
insisi kecil pada akhir posterior ventrikel kiri.
Gambar 2.5. Pengaturan alat dan hewan coba pada proses perfusi dengan dapar
(sumber : Fixation and Fixatives : Popular Fixative Solutions, 2012) 4
Pompa manometer untuk membuat tekanan pada garis (alur). Kemudian buka
katupnya dan sambungkan dengan jarum yang sudah dimasukkan ke dalam jantung
tikus. Pastikan tidak ada gelembung udara di dalam saluran tersebut. Pompa dengan
tekanan 80 mmHg dan jaga tekanan hingga infus dapar selesai.
10
Gambar 2.6. Pengaturan alat dan hewan coba pada proses perfusi dengan larutan
fiksatif (sumber : Fixation and Fixatives : Popular Fixative Solutions,
2012) 4
Ketika dapar akan selesai (200 ml), ganti alur katup dapar sehingga cairan
fiksatif dapat masuk. Tekanan dapat ditingkatkan hingga 130 mmHg.
2.1.3. Perfusi PBS-Formalin
PBS (Phosphate Buffer Saline) adalah larutan fisiologis yang bisa digunakan
dalam prosedur immune-histokimia. Larutan ini bersifat isotonik dan tidak beracun
terhadap sel serta bertujuan untuk menjaga kadar pH dan mempertahankan
osmolaritas sel.5 Saat ini, PBS sudah banyak digunakan sebagai
1. Immunoassays
2. Prosedur immune-histokimia
3. Prosedur mikrobiologi
4. Prosedur kultur jaringan dan sel
5. Pengenceran suatu sampel5
Jika suatu sel difiksasi menggunakan larutan yang hipertonik maka sel
tersebut akan mudah menyusut, sebaliknya apabila sel difiksasi menggunakan larutan
yang hipotonik maka sel tersebut akan membengkak. Maka dari itu, dianjurkan
menggunakan larutan isotonik seperti PBS sebagai larutan fiksasi yang baik.5
11
Formalin merupakan larutan fiksatif, dimana larutan ini digunakan pada
proses fiksasi jaringan. Tetapi pada proses perfusi juga dapat digunakan larutan
formalin yang dikombinasikan dengan PBS, dengan tujuan mendapatkan hasil yang
lebih baik. Formalin yang dilarutkan dalam PBS atau bisa disebut PBS-Formalin
merupakan larutan yang direkomendasikan sebagai pilihan agen fiksatif yang
terbaik.6 Larutan fiksatif saat ini sedang dikembangkan yang sifat racunnya sangat
minimal. PBS-Formalin paling sering digunakan sebagai agen fiksatif karena sifatnya
sebagai agen yang fleksibel. Selain itu, dengan larutan fiksatif PBS-Formalin ini
dapat menjadikan organ yang akan diteliti menjadi lebih lama dapat disimpannya dan
proses autolisisnya sangat minimal.11
2.1.4. Pengolahan Pembuatan Blok
Metode yang digunakan pada penelitian kali ini adalah metode parafin yaitu
metode yang paling sering digunakan. Keuntungan menggunakan metode ini yaitu
pertama, irisan dapat lebih tipis dibandingkan menggunakan metode lainnya yaitu
dapat mencapai ketebalan rata-rata 6 mikrometer. Kedua, irisan yang sifatnya seri
dapat dengan mudah dikerjakan. Ketiga, proses pengerjaannya lebih cepat
dibandingkan dengan metode seloidin (mikrotom beku). Selain keuntungan tentu ada
kerugian dari metode ini yaitu jaringannya akan menjadi keras, mengerut dan mudah
patah serta untuk jaringan yang besar akan sulit dikerjakan dan enzim-enzim akan
larut pada metode ini.1,2
Proses pengolahan pembuatan blok ini dimulai dari fiksasi, pencucian