STERİL VÜCUT SIVILARINDA HÜCRE SAYIM KAMARASI VE SYSMEX UF-1000İ
CİHAZI İLE LÖKOSİT SAYIM SONUÇLARININ KARŞILAŞTIRILMASI
DR. MERVE ÖZKAN1 ,DR.SERAP YAĞCI1, DR.MİHRİBAN YÜCEL1, DR. BEDİA DİNÇ1
1SAĞLIK BİLİMLERİ ÜNİVERSİTESİ ANKARA SAĞLIK UYGULAMA VE ARAŞTIRMA MERKEZİ, TIBBİ MİKROBİYOLOJİ LABORATUVARI,
ANKARA
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
SUNUM PLANI
GİRİŞ AMAÇ
GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR
TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
FLOW SİTOMETRİ (AKAN HÜCRE ÖLÇER)
Flow Sitometri • Akan bir sıvının
içerisindeki hücrelerin veya biyolojik partiküllerin fiziksel ya da kimyasal özelliklerinin incelenmesi
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
HÜCRELERİN DEĞERLENDİRİLMESİ
BOYUT
ŞEKİL SİTOPLAZMİK GRANÜLARİTE
DNA-RNA İÇERİĞİ
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
Forward Scatter Channel(FSC)
• Yaklaşık büyüklük
Side Scatter Channel(SSC)
• Yaklaşık granülarite ve iç yapı
Floresans(FL-1/2/3)
• Yaklaşık floresan miktarı
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
KULLANIM ALANLARI
Hücre ölümü, hücresel özelikler, proliferasyon
Hücre canlılık analizi
Hücre döngüsünün incelenmesi
Mikroorganizma sayısı, tür analizi
İlaç alım ölçümleri
İmmünofenotipleme
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• KAN
• KEMİK İLİĞİ
• BOS
• EKLEM SIVISI
• PERİTON SIVISI
• PLEVRA SIVISI
• ALVEOLER LAVAJ SIVISI
• İDRAR
• DOKU BİYOPSİ ÖRNEKLERİ…
FLOW SİTOMETRİ CİHAZI İLE
ANALİZ EDİLEBİLECEK
ÖRNEKLER
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
BOS’TA BEYAZ KÜRE SAYILARI
NORMAL: 0-5/mm3
BAKTERİYEL MENENJİT:5-20000/mm3
VİRAL MENENJİT:20-2000/mm3
TÜBERKÜLOZ MENENJİTİ:5-2000/mm3
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
Bailey&Scotts’s Diagnostic Microbiology 13th Edition(7-902)
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
PERİTON
• Periton sıvısında mililitrede 300’e kadar lökosit bulunması normaldir.
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
Bailey&Scotts’s Diagnostic Microbiology 13th Edition(7-902)
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
AMAÇ
• Steril vücut sıvılarında hızlı inceleme !!!
– Makroskobik, biyokimyasal, hücre sayımı, hücre analizi
• Hücresel analiz İnflamasyon, enfeksiyon, travma ayırıcı tanısında önemli
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• Steril vücut sıvılarında hücre sayımı için önerilen altın standart yöntem hücre sayım kamarasında mikroskobik sayım yapılmasıdır.
– Objektiflik? Zaman? Deneyim?
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
Mikroskobik sayım Sysmex UF-
1000i(Sysmex Co.,Kobe Japonya)
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
GEREÇ VE YÖNTEM
• Şubat 2017-Temmuz 2017 tarihleri arasında hastalardan Ankara Eğitim ve Araştırma Hastanesi Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı’na gönderilen 158 steril vücut sıvısı
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
HASTALARIN YAŞ ARALIĞI 0-88
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
CİNSİYET
KADIN 95 (%60,127)
ERKEK 63(%39,873)
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
158 Steril Vücut Sıvısı
Periton Sıvısı(n=88)
BOS(n=65) Eklem
Sıvısı(n=3) Plevra
Sıvısı(n=2)
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
ÖRNEKLERİN KLİNİKLERE GÖRE DAĞILIMI
PERİTON DİYALİZİ 64 (%40,50) ÇOCUK SAĞLIĞI VE HASTALIKLARI SER. 3(%1,89)
YENİDOĞAN YBÜ 25(%15,82) ACİL ÇOCUK POLK. 3(%1,89)
NEFROLOJİ SERVİSİ 16(%10,12) ORTOPEDİ VE TRAVMATOLOJİ POLK. 2(%1,26)
BEYİN VE SİNİR CERRAHİ YBÜ 13(%8,22) GASTROENTEROLOJİ SERVİSİ 1(%0,63)
NÖROLOJİ SERVİSİ 7(%4,43) ACİL YBÜ 1(%0,63)
İÇ HASTALIKLARI SERVİSİ 7(%4,43) ANESTEZİ VE REANİMASYON YBÜ 1(%0,63)
ÇOCUK YBÜ 5(%3,16) GENEL CERRAHİ SERVİSİ 1(%0,63)
ACİL AMELİYATHANE CERRAHİ YBÜ 4(%2,53) ACİL SERVİS(İLK MÜDAHALE) 1(%0,63)
BEYİN VE SİNİR CERRAHİ SERVİSİ 4(%2,53)
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• Örnekler eş zamanlı olarak Sysmex UF-1000i(Sysmex Co., Kobe Japonya) cihazında çalışıldı.
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
• Gelen örnekler deneyimli laboratuvar teknisyeni tarafından Neubauer sayım kamarasında ışık mikroskobunda x400 büyütmede sayıldı.
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• Sysmex UF-1000i 2 kanal – Sediment kanalı RBC
– Bakteri kanalı WBC, TNC ( çekirdekli hücreler) • Floresan boyama ve RBC lizisi sonrası
• Sonuç Hücre sayıları, histogram, scattergram
• BF(Body Fluid) modu 398 µl
• 25 örnek/saat
• 1 örnek 3 dk
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• Cihaz her açılışında cihazda yüksek ve düşük kontrol solüsyonları çalışıldı.(UF II kontrol materyal)
• İdrar modunda açılan cihaz vücut sıvısı moduna geçerken oto yıkama ve aksan kontrolü yapmaktadır(Kontaminasyonu önlemek ve vücut sıvıları idrardan daha visköz sıvılar olduğundan kanallardaki akış hızını hzılandırmak için).
• Aynı zaman vücut sıvısı modunda çalışırken aşırı yüklenmeyi önlemek ve doğru sonuçlar alabilmek için her bir veya iki örnekte bir oto yıkama yapıldı.
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
İSTATİSTİKSEL ANALİZ
• Pearson korelasyon analizi
• Sonuçların uyumu Sınıf içi korelasyon katsayısı(SKK)
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
BULGULAR
• Lökosit açısından Periton örneklerde Sysmex ve DM nin korelasyonu r=0,794 (Pozitif yönde yüksek ilişkili)
• Lökosit açısından BOS örneklerde Sysmex ve DM nin korelasyonu r=0,450 (Pozitif yönde orta düzey ilişkili)
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• Lökosit açısından Eklem örneklerde Sysmex ve DM nin korelasyonu r=0,985 (Pozitif yönde yüksek ilişkili)
• Lökosit açısından bütün örneklerde Sysmex ve DM nin korelasyonu r=0,817 (Pozitif yönde yüksek ilişkili)
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
TARTIŞMA
• Steril vücut sıvılarının incelenmesinde referans yöntem sayım kamarasında mikroskobik sayım
Değerlendiren kişiye göre sonuçlarda değişkenlik
Zaman alıcı
Emek yoğun
Deneyimli personel(7/24)
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• Sysmex UF-1000İ
Hızlı
Güvenilir
Bakteri ve maya ? (BF modu)
Lökositlerde PMNL-MNL ayrımı?
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• Nikolaos ve ark. (2008) 161 BOS Sysmex UF-1000i / UF100 ve mikroskobik analiz
ve lökosit sayımlarının karşılaştırılması
Sysmex UF100 cihazında lenfositlerin lökosit olarak sınıflandırılması ile hemorajik ve ventriküler drenajla elde edilen örneklerin çalışılmasında problem(plateletler ve hücre debrisleri)
Sysmex UF-1000i cihazında bu problemler gözlenmemektedir.
Sonuçlar mikroskobik analiz ile uyumlu ve korele (p=0.734)
Menenjitin bakteriyel, viral, fungal ayırıcı tanısında yararlı
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
Nikolaos E.N., Delanghe J.R., Evaluation of Sysmex UF-1000i for use in cerebrospinal fluid analysis, Clinica Chimica Acta, 392(2008) 30-33
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• Buoro ve ark. (2015)
67 BOS Sysmex UF-1000i(BF) ve mikroskobik analiz ile yapılan sayımlarda lökosit sayılarının karşılaştırılması
Lökosit sayıları uyumlu(r=0.99)
Sonuçlar uyumlu, otomatize sistemle hızlı ve güvenilir tanı
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
Buoro S., Esposito S.A., Alessio M.G., Crippa A., Ottomano C., Lippi G., Automates Cerebrospinal Fluid Cell Counts Using the New Body Fluid Mode of Sysmex UF-1000i, Journal of Clinical Laboratory Analysis 00: 1-11(2015)
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• Li ve ark. (2014)
198 BOS Sysmex XE-5000(BF) ve mikroskobik analizle yapılan lökosit sayım sonuçlarının karşılaştırılması
Sysmex XE-5000 PMNL-MNL ayrımı +
Sayım sonuçları uyumlu(r=0.833)
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
Li A., Grönlund E., Brattsand G., Automated white blood cell counts in cerebrospinal fluid using the body fluid mode on the platform Sysmex XE-5000, Scandinavian Journal of Clinical & Laboratory Investigation, 2014; 74: 673-680)
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
• 71 steril vücut sıvısı BOS(n=35), periton sıvısı(n=12), plevra sıvısı(n=11), eklem sıvısı(n=10), dren sıvısı(n=1), perikard sıvısı(n=1), safra sıvısı(n=1)
Makroskobisi pürülan olan yedi örnekte cihaz ve mikroskobik değerlendirme arasında sapan değerler
Sapandeğerler varken SKK 0,128 (p=0,139).
Sapan değerler çıkarıldığı zaman SKK 0,963 (p<0,001).
• Pürülan olmayan örneklerde Sysmex UF-1000i otomatize akım sitometrisi cihazı alternatif yöntem olarak kullanılabilir. Pürülan örneklerde hücre sayımı mutlaka sayım kamarası kullanılarak mikroskobik olarak gerçekleştirilmelidir.
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
SONUÇ
• Sysmex UF-1000i cihazının lökositleri PMNL ve MNL olarak gruplandıramaması cihazın mikroskobik incelemenin yerini almasını zorlaştırmaktadır.
• Aynı zamanda vücut sıvısı modunda bakteri ve maya hücrelerini sayabilme özelliğinin eklenmesi daha doğru bir değerlendirme olanağı sunacaktır.
• Ama rutinin dışında da acil, personel sıkıntısı olan durumlarda hızlı ve güvenilir sonuçlar verebilir.
GİRİŞ AMAÇ GEREÇ VE YÖNTEM
BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA
TEŞEKKÜR EDERİM.
4.ULUSAL KLİNİK MİKROBİYOLOJİ KONGRESİ, 8-12 KASIM 2017, ANTALYA