SKRIPSI NEVA MELINDA MAULANASARI KAJIAN IN SILICO TOKSISITAS GOLONGAN ANTIBIOTIK DAN INTERAKSINYA DENGAN RESEPTOR PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2017
SKRIPSI
NEVA MELINDA MAULANASARI
KAJIAN IN SILICO TOKSISITAS GOLONGAN
ANTIBIOTIK DAN INTERAKSINYA DENGAN
RESEPTOR
PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
2017
ii
Lembar Pengesahan
KAJIAN IN SILICO TOKSISITAS GOLONGAN
ANTIBIOTIK DAN INTERAKSINYA DENGAN
RESEPTOR
SKRIPSI
Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada
Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Muhammadiyah Malang
2017
Oleh :
NEVA MELINDA MAULANASARI
NIM : 201310410311239
Disetujui Oleh :
Pembimbing I
Sovia Aprina Basuki, S.Farm., M.Si., Apt
NIP UMM. 1140804052
Pembimbing II
Engrid Juni Astuti, M.Farm., Apt
NIP UMM. 11216120589
iii
Lembar Pengujian
KAJIAN IN SILICO TOKSISITAS GOLONGAN
ANTIBIOTIK DAN INTERAKSINYA DENGAN
RESEPTOR
USULAN SKRIPSI
Telah diuji dan dipertahankan di depan tim penguji pada tanggal
7 April 2017
Oleh:
NEVA MELINDA MAULANASARI
NIM : 201310410311239
Disetujui Oleh :
Penguji II
Engrid Juni Astuti, M.Farm., Apt
NIP UMM. 11216120589
Penguji I
Sovia Aprina Basuki, S. Farm., M. Si., Apt
NIP UMM. 1140804052
Penguji III
Siti Rofida, S.Si., M.Farm., Apt
NIP UMM. 11408040453
Penguji IV
Andri Tilaqza, S.Farm., M.Farm., Apt
iv
KATA PENGANTAR
Bismillahirrohmanirrohim
Puji syukur Alhamdulillah penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas
berkat, rahmat dan hidayah-Nya yang berlimpah sehingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi yang berjudul “Kajian In Silico Toksisitas Golongan
Antibiotik Dan Interaksinya Dengan Reseptor” untuk memenuhi salah satu
syarat menggapai Sarjana Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas
Muhammadiyah Malang.
Penulis menyadari bahwa dalam proses penulisan skripsi ini banyak
mengalami kendala, namun berkat bantuan dan kerjasama dari berbagai pihak dan
berkah dari Allah SWT sehingga kendala-kendala yang dihadapi tersebut dapat
diatasi. Skripsi ini penulis persembahkan kepada mama dan ayah tercinta yang
selalu memotivasi penulis dalam mencapai gelar Sarjana Farmasi. Penulis
mengucapkan terima kasih dan pernghargaan kepada :
1. Bapak Yoyok Bekti Prasetyo, S.Kep., Ns., M.Kep., Sp.Kom selaku Dekan
Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang yang
memberikan kesempatan penulis belajar di Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Muhammadiyah Malang.
2. Ibu Nailis Syifa’, S.Farm., Apt., M.Sc. selaku Ketua Program Studi Farmasi
Universitas Muhammadiyah Malang, yang telah memberi motivasi dan
kesempatan penulis belajar di Program Studi Farmasi Universitas
Muhammadiyah Malang.
3. Ibu Sovia Aprina Basuki S.Farm., M.Si., Apt selaku pembimbing I dan ibu
Engrid Juni Astuti, M.Farm., Apt selaku pembimbing II atas kesabaran,
ketulusan, dan keikhlasan meluangkan waktu, tenaga, dan pikiran dalam
memberikan bimbingan, motivasi, arahan, pembelajaran, dan saran-saran
yang sangat berharga kepada penulis selama menyusun skripsi.
4. Ibu Siti Rofida, S.Si.,M.Farm., Apt selaku dosen penguji I dan Bapak Andri
Tilaqza, S.Farm., M.Farm., Apt. Selaku dosen penguji II yang telah
memberikan saran dan masukan selama menyusun skripsi.
v
5. Biro Skripsi yang telah banyak membantu penulis dalam hal administrasi
skripsi.
6. Seluruh staff pengajar Fakultas Ilmu Kesehatan Jurusan Farmasi Universitas
Muhammadiyah Malang, yang telah memberikan ilmu yang bermanfaat
sehingga dapat diaplikasikan pada penulisan skripsi ini.
7. Ayahanda Muhammad Usman dan mama Tutwuri Sulistyo Ningtyas tercinta
yang selalu memberikan kepercayaan, motivasi dan mengirimkan doa kepada
penulis sehingga penulis bisa menjadi sarjana Farmasi.
8. Kakek tercinta Bapak Kirman dan Bulek asih yang selalu mendukung penulis
dalam menyusun skripsi, yang selalu menanyakan kapan penulis wisuda dan
kapan segera melanjutkan studi Apoteker.
9. Adik kandung tercinta Kego Dwi Alisyabana dan Lailatul Fitria Ningrum
yang selalu menghibur penulis dan memberi semangat penulis saat menyusun
skripsi.
10. Jodii Arlan Kurnia seseorang yang selalu menemani dan mendengarkan keluh
kesah penulis, selalu memberikan nasihat terbaik, memberi dukungan dan
menemani penulis saat menyusun skripsi.
11. Mbak Siska Hermawati yang sudah penulis anggap seperti kakak sendiri dan
Khoirun Nisa’ teman KKN yang selalu menemani serta menghibur penulis
dalam menyusun skripsi.
12. Teman-teman skripsi In Silico Marlina Winda, Hani Rahmania dan S Wanda
yang telah berjuang bersama penulis dalam menyelesaikan skripsi.
13. Seluruh teman – teman farmasi 2013 yang telah membantu penulis dalam
memberikan informasi selama menyusun skripsi
14. Seluruh Staff UMM Medical Center bu iin, bu rahma, bu mega, bu laila, bu
catur dan banyak staff lainnya yang selalu membimbing penulis selama di
UMC dan mendukung penulis dalam menyusun skripsi ini.
15. Dan semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu .
16. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari sempurna,
oleh karena itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun.
Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi almamater dan masyarakat umum
Malang, 7 April 2017
Penulis
ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................... ii
LEMBAR PENGUJIAN ........................................................................................ iii
KATA PENGANTAR ............................................................................................. iv
RINGKASAN ....................................................... Error! Bookmark not defined.
ABSTRAK ............................................................. Error! Bookmark not defined.
ABSTRACT ............................................................. Error! Bookmark not defined.
DAFTAR ISI ............................................................................................................. ix
DAFTAR TABEL ..................................................................................................... xi
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN............................................................................................ xiii
DAFTAR SINGKATAN ........................................................................................ xiv
BAB I PENDAHULUAN ................................. Error! Bookmark not defined.
1.1 Latar Belakang ............................... Error! Bookmark not defined.
1.2 Rumusan Masalah ......................... Error! Bookmark not defined.
1.3 Tujuan Penelitian........................... Error! Bookmark not defined.
1.4 Manfaat Penelitian ....................... Error! Bookmark not defined.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...................... Error! Bookmark not defined.
2.1 Antibiotik ....................................... Error! Bookmark not defined.
2.1.1 Penggolongan antibiotik .... Error! Bookmark not defined.
2.1.2 Toksisitas antibiotik ........... Error! Bookmark not defined.
2.2 Hubungan Obat dengan Reseptor . Error! Bookmark not defined.
2.3 Gugus Karsinogen, Mutagen dan Mekanismenya Error! Bookmark not defined.
2.4 Uji Toksisitas .................................. Error! Bookmark not defined.
2.4.1 In silico ................................. Error! Bookmark not defined.
2.4.2 In vitro .................................. Error! Bookmark not defined.
2.4.3 In vivo ....................................................................................... 19
2.5 Perangkat lunak .................................................................................. 19
2.3.1 Perangkat Lunak ChemDraw ................................................. 19
Halaman
x
2.3.2. Perangkat Lunak Toxtree ... Error! Bookmark not defined.
2.3.3. Perangkat Lunak Molegro Virtual Docker (MVD) Error! Bookmark not defined.
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL ......... Error! Bookmark not defined.
3.1 Kerangka Konseptual Penelitian ... Error! Bookmark not defined.
BAB IV METODE PENELITIAN ................... Error! Bookmark not defined.
4.1 Jenis Penelitian ................................ Error! Bookmark not defined.
4.2 Tempat dan Waktu Penelitian ........ Error! Bookmark not defined.
4.3 Alat dan Bahan Penelitian .............. Error! Bookmark not defined.
4.3.1 Alat Penelitian ...................... Error! Bookmark not defined.
4.3.2 Bahan Penelitian ........................... Error! Bookmark not defined.
4.4 Prosedur Penelitian ......................... Error! Bookmark not defined.
4.4.1 Prediksi Toksisitas Senyawa Antibiotik Menggunakan
Toxtree ................................. Error! Bookmark not defined.
4.4.2 Prediksi Interaksi Obat dengan Reseptor Menggunakan
Molegr Virtual Docker (MVD) Error! Bookmark not defined.
BAB V HASIL PENELITIAN .......................... Error! Bookmark not defined.
5.1 Toksisitas Karsinogenik dan Mutagenik Senyawa Antibiotik
Berdasarkan Perangkat Lunak Toxtree Error! Bookmark not defined.
5.2 Hasil Prediksi Interaksi Obat dengan Reseptor Menggunakan
Molegro Virtual Docker (MVD) .. Error! Bookmark not defined.
BAB VI PEMBAHASAN .................................... Error! Bookmark not defined.
BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 71
7.1 Kesimpulan ......................................................................................... 71
7.2 Saran .................................................................................................... 71
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................... 73
xi
DAFTAR TABEL
Tabel
II.1 Metode dan Kategori Toxtree ....................................................................... 20
IV.1 Jumlah Senyawa Antibiotik yang Diteliti Menggunakan Perangkat Lunak
Toxtree. ......................................................... Error! Bookmark not defined.
V.1 Data Hasil Senyawa Kelompok Kontrol ........ Error! Bookmark not defined.
V.2 Data Hasil Pengujian Toxtree ........................ Error! Bookmark not defined.
V.3 Hasil Analisis Gugus Penyebab Karsinogenik dan Mutagenik Antibiotik
dengan Perangkat Lunak Toxtree .................. Error! Bookmark not defined.
V.4 Mekanisme Aksi Gugus Toksikofor Genotoksik Menurut Error! Bookmark not defined.
V.5 Mekanisme Aksi Gugus Toksikofor Nongenotoksik Menurut Error! Bookmark not defined.
V.6 Daftar Validasi Internal Reseptor Menggunakan Perangkat Lunak MVD Error! Bookmark not defined.
V.7 Hasil Analisis Docking dengan Menggunakan Perangkat Lunak Molegro
Virtual Docker ............................................. Error! Bookmark not defined.
Halaman
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2.1 Mekanisme karsinogen genotoksik dan non-genotoksik (Luch, 2005) ...........
Error! Bookmark not defined.
2.2 Skematis untuk in silico farmakologi (Ekins et al., 2007) ........................ 18
3.1 Kerangka Konseptual Penelitian .............. Error! Bookmark not defined.
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Daftar Riwayat Hidup ........................................................................................ 77
2 Surat Pernyataan ................................................................................................. 78
3 Daftar SMILES Obat Antibiotik untuk Pengujian Toxtree .................................. 79
4 Gugus Fungsi Penyebab Karsinogenik dan Mutagenik dengan Menggunakan
Perangkat Lunak Toxtree .................................................................................... 87
5 Hasil Analisis Menggunakan Perangkat Lunak Molegro Virtual Docker ............ 125
6 Gambar Mekanisme Aksi Gugus Toksikofor............................................. 168
xiv
DAFTAR SINGKATAN
WHO : World Health Organization
FDA : Food Drug Administration
IUPAC : International Union of Pure and Applied Chemistry
SMILES : The Simplifed Molecular Input Entry System
MVD : Molegro Virtual Docker
IARC : International Agency Research on Cancer
ICU : Intensive Care Unit
BPOM : Badan Pengawas Obat dan Makanan
CNS : Central Nervous System
DNR : Daunorubicin
DXR : Doxorubicin
EEG : Electroencephalogram
GABA : γ-aminobutyric acid
TMP-SMX : Trimetoprim-Sulfamethoxazole
DNA : Deoxyribonucleic Acid
CMRS : Complete Mouth Radiographic Series
NOAEL : No Observed Effect Levels
SCOEL : Scientific Commite on Occupational Exposure Limits
LOAEL : Lowest Observed Adverse Effect Levels
OEL : Occupational Exposure Limits
JRC : Joint Research Centre
QSAR : Quantitative Structure – Activity Relationship
NCBI : National Center for Biotechnology Information
PDB : Protein Data Bank
RCSB : Research Collaboratory for Structural Bioinformatics
NMR : Nuclear Magnetic Resonance
RMSD : Root Mean Square Deviation
PBP : Protein Binding Penicillin
PPARs : Peroxisome Proliferator Activated Receptor
PPRE : Peroxisome Proliferator Response Element
73
DAFTAR PUSTAKA
Alikhani, A., and Salehifar, E., 2012. An Unreported Clindamycin Adverse
Reaction: Wrist Monoarthritis. Iranian Journal of Pharmaceutical
Research. Vol. 3 No. 11, P. 959-962.
Ambwani S, Mathur AK., 2006. Rational Drug Use. Health Administrator XIX.
Antoniou A, Raynaud P, Cordi S, Zong Y, Tronche F, Stanger BZ, Jacquemin P,
Pierreux CE, Clotman F, Lemaigre FP., 2009. Intrahepatic bile ducts
develop according to a new mode of tubulogenesis regulated by the
transcription factor SOX9. Gastroenterology , vol 33 No 136, p. 2325.
Bárdi, Bobok, I.,Olah,V.A., Kappelmayer, J., and Kiss, C., 2007. Anthracycline
Antibiotics Induce Acute Renal Tubular Toxicity in Children with Cancer.
Pathology Oncology Research , Volume 13 (3), pp. 249-253.
Bello, B., and Wudil, A.M., 2012. Hepatoprotective Effect of Daucus Carota
Aqueous Root Extract Against Isoniazid and Rifampicin Induced
Hepatotoxicity in Rats. International Journal of Pharma and Bio
Sciences, 3(1), p. 7.
Benigni, R., and Bossa, C., 2006. Structural Alert of mutagens and carcinogens.
Current Computer Drug Design, Vol 2. No. 2, P. 169-176.
Benigni, R., Bossa, C., Tcheremenskaia, O., and Worth, A., 2009 .Development
of Structural Alerts for The in vivo Micronucleus Assay in Rodents. EUR
23844 EN.
Benigni, R., Bossa, C., and Tcheremeskaia, O., 2012. Nongenotoxic
Carcinogenicity of Chemicals: Mechanism of Action and Early Recognition
through a New Set of Structural Alerts. Chemical Reviews.
BPOM, 2014. Pedoman Uji Toksisitas Nonklinik secara in vivo. Jakarta :
BPOM.
ChemDraw Ultra. 2013. http://www.cambridgesoft.com/ensemble_for_
Chemistry/chemdraw/. Diakses tanggal 7 Juli 2016.
Dogan, M., Firinci, F., Balci, Y.I., Gurses, D., Polat, A., Ozdemir, O.MA., Enli,
Y., Akbulut, M., and Sahin, B., 2014. Cardioprotective Effect of
Clarithromycin on Doxorubicin-Induced Cardiac Toxicity in Rats.
International Journal of Hematology and Oncology , Vol. 24.
Eisenbrand, G., Pool-Zobel., Baker, V., Balls, M., Blaauboer, B.J., Boobis, A.,
Carere, A., Kevekordes, S., Lhuguenot, C.J., Pieters, R., and Kleiner, J.,
74
2002. methode of in vitro toxicology. Food and Chemical Toxicology, vol.
40, p. 193-236.
Ekins, S., Mestres, J., and Testa, B., 2007 . In Silico Pharmacology for Drug
Discovery : Methods for Virtual Ligand Screening and Profiling. British
Journal of Pharmacology , Volume 152 , pp. 9-20.
Etminan, M., Westerberg, D.B., Kozak, K.F., Guo, Y.M., and Carleton, C.B.,
2016. Risk of Sensorineural Hearing Loss With MAcrolide Antibiotics; A
Nested Case-Control Study. Laryngoscope.
Fernandes, M.B., Goncalves, J.E., Scotti, M.T., Olivera, A.A de., Tavares, L.C.,
and Storpirtis, S., 2012 . Caco-2 Cells Cytotoxicity of Nifuroxaside
Derivatives with Potential Activity Against methicillin-Resistant
Staphylococcus aureus (MRSA). ELSIVIER , Volume 26, pp. 535-540.
Fielden, R.M., and Kolaja, L.K., 2008. The role of early in vivo toxicity testing in
drug discovery toxicology. Expert OPin. Drug Saf, Vol. 2 No. 7, p. 107-
110.
Fraser, T.N., Avellaneda, A.A., Graviss, E.A., and Musher, D.M., 2012 . Acute
Kidney Injury Associated with Trimethoprim/ Sulfamethoxazole. Journal
Antimicrobial Chemotherapy , p. 7.
Fuoco, D., 2015. Cytotoxicity Induced by Tetracyclines via Protein
Photooxidation. HIndawi , p. 10 pages.
Golan, E.D., Tashjian, H.A., Amstrong, J.E., and, Amstrong, W.A., 2008.
Principles of Pharmacology. Ed. 2st, Philadelphia: Lippincott Williams
& Wilkins., pp. 3; 567-601.
Harvey, A.R., dan Champe, C.P., 2009. Farmakologi Ulasan Bergambar. Edisi ke-
4, Jakarta: Buku Kedokteran EGC.
Huth,M.E., Ricci, A.J., and Cheng, A.G., 2011. Mechanisms of Aminoglycoside
Ototoxixity and Targets of Hair Cell Protection. Hindawi , p. 19.
Jack M. Lynn, M., 1949 . Sulfonamide Toxicity. Medical Progress , Volume 70
(1) , pp. 48-56.
Kamath, A., 2013. Fluoroquinolone Induced Neurotoxicity: A Review. Journal of
Advanced Pharmacy Education & Research. Vol 3. Issue 1.
Kerridge, D., 1979. The Polyene Macrolide Antibiotics. Postgraduate Medical
Journal, Volume 55, pp. 653-656.
Keyser, F. H., Bienz, K.A., Eckert, J., and Zinkernagel, R.M., 2005. Medical
Microbiologi. New York: Thieme Stuttgart.
75
Kazius, J., McGuire, R., and Bursi, R., 2005. Derivation and Validation of
Toxicophores for Mutagenicity Prediction. J.Med. Che, No 48, P. 312-320.
Lambert, DG., 2004. Drug and Reseptor. Continuing Education in Anaesthesia,
Critical Care & Pain. Vol. 4 No. 34.
Luch, M., 2005. Nature and Nurture - Lessons from Chemical
Carcinogenesis. Medscape.
http://www.medscape.com/viewarticle/499098_4, Diakses 10 September
2016.
Marie F. Grill, and Maganti, R. K., 2011. Neurotoxic effects associated with
antibiotic use : management consideration. British Journal of Clinical
Pharmacology.
Molegro Virtual Docker 5.0, 2011, Molegro Virtual Docker User Manual,
http://clcbio.com/wp-content/uploads/2012/09/MVD_Manual.pdf, Diakses
Tanggal 10 Juli 2016.
Neal, J.M., 2012. Medical Pharmacology at a Glance. Ed. 7st, UK: John Wiley
& Sons, Ltd., pp. 80-84.
Noori, R.H., and Spanagel, R., 2013. In Silico pharmacology: drug design and
discovery's gate to the future. SpringerOpen Journal, Vol. 1 No. 1.
Onkara, P., Kumar, S.A., Kanakaraju, S., Prasanna, B., Pydisetty, Y., and
Chandramouli, G.V.P., 2013. Molecular Docking Studies, Synthesis and
Anti-Bacterial Properties of New Mannich Bases. International Journal of
Pharma and Bio Sciences, Vol. 2 NO. 4, p. 263-270.
Ouderkirk, P.J., Nord, A.J., Turett, S.G., and Kislak, W.J., 2003. Polymyxin B
Nephrotoxicity and Efficacy against Nosocomial Infections Caused by
Multiresistant Gram-Negative Bacteria. Antimicrobial Agents and
Chemotherapy. Vol. 8 No. 47, p 2659.
Parasurahman, R., 2011. Toxicological Screening. Journal of Pharmacology
and Pharmacotherapeutics, Vol. 2, Issue 2.
Patel, I. Muqtedar., J, Surinder,. 2012. Toxicity assessment of Linezolid and the
beneficial effects of human erythropoietin in mice. Pelagia Research
Library. Vol 2 (6) : 2172-2181.
PubChem. 2004. https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/about.html, Diakses tanggal 4
September 2016.
76
Racaniello, R. Vincent., 2004. Emerging Infectious Diseases. JCI.
Rekha, VV.B., T.Santha., and Jawahar, MS.,2015. Rifampicin-induced Renal
Toxicity During Retreatment of Patients with Pulmonary Tuberculosis.
JAPI, Volume 53, pp. 811-813.
Schooneveld., and Trevor Van., t.thn. Fosfomycin : Review and Use Criteria. The
Nebraska Medical Center .
Siswandono., dan Soekardjo, B., 2008. Kimia Medisinal. Edisi ke-2. Cetakan ke-
2. Surabaya : Airlangga University Press.
Song,H., Fares, M., Maguire, K.R., Siden, A., and Potacova, Z., 2014. Cytotoxic
Effects of Tetracycline Analogues (Doxycycline, Minicycline and COL-3)
in Acute Myeloid Leukemia HL-60 Cells. PLOS ONE, pp. 1-19.
Stepa, R.A., Felten, E.S., and Brenzel, S., 2016. Carcinogenic, Mutagenic,
Reprotoxic (CMR) Subtances. The Cooperation Centre
(Kooperationsstelle), Hamburg. http://OSHwiki.eu, Diakses tanggal 29
Agustus 2016.
Tkachenko, K.M, Zupanets, I.A., Shebeko, S.K., Otrishko, I.A., and Grintsov,
Ye.F., 2015. The Comparative Study of The Acute Toxicity of Tetracycline.
The Pharma Innovation, Volume 4(3), pp. 08-11.
Thomsen, R., M.H. Christensen, 2006, MolDock: A New Technique for High-
Accuracy Molecular Docking, J. Med. Chem., volume 49, pp. 3315-3321.
Toxtree V.2.6.13., 2015. Joint Research Centre. Institute for Health and
Consumer Protection , http://toxtree.sf.net, Diakses tanggal 7 Juli 2016.
Turton, J.A., Andrews, C.M., Havard, A.C., and Williams, T.C., 2002. Studies on
the Haemotoxicity of Chloramphenicol Succinate in the Dunkin Hartley
Guinea Pig. Volume 83, pp. 225-238.
Van de Waterbeemd, H., Carter, R.E., Grassy, G., Kubinyi, K., Martin, Y.C.,
Tute, M.S., Willett, P., 1997. Glossary of Terms Uses in Computational
Drug Design (IUPAC Recommendations 1997), P 1137.
Weininger, D., 1988. SMILES, a chemical language and information system. 1.
Introduction to methodology and encoding rules. Chem. Inf. Model. 28,
31–36.
WHO. 2002. Archives by disease. http://www.who.int/csr/don/archive/
disease/en/.
WHO. 2006. Public Health. Innovation and Intellectul Property Right. 68.