SKR SKR Í Í NING GENETICKÝCH NING GENETICKÝCH PROGNOSTICKÝCH FAKTOROV U PROGNOSTICKÝCH FAKTOROV U PACIENTOV S PACIENTOV S CHRONICKOU CHRONICKOU LYMFOCYTOVOU LEUK LYMFOCYTOVOU LEUK É É MIOU MIOU M. Leitnerová, D.Ilenčíková Oddelenie onkologickej genetiky, NOÚ Bratislava
24
Embed
SKRÍNING GENETICKÝCH PROGNOSTICKÝCH … · SKRÍNING GENETICKÝCH PROGNOSTICKÝCH FAKTOROV U PACIENTOV S CHRONICKOU LYMFOCYTOVOU LEUKÉMIOU M. Leitnerová, D.Ilenčíková Oddelenie
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
SKRSKRÍÍNING GENETICKÝCH NING GENETICKÝCH PROGNOSTICKÝCH FAKTOROV U PROGNOSTICKÝCH FAKTOROV U
PACIENTOV SPACIENTOV S CHRONICKOU CHRONICKOU LYMFOCYTOVOU LEUKLYMFOCYTOVOU LEUKÉÉMIOUMIOU
klinických prejavovklinických prejavovpriebehu priebehu progresieprogresie ochoreniaochorenia
heterogenita na genetickej heterogenita na genetickej úúrovni rovni šštrukttruktúúrnerne a numericka numerickéé chromozchromozóómovmovéé aberaberááciecie s rs rôznouôznouprognostickou relevanciouprognostickou relevanciou
FamiliFamiliáárny rny vsvs. sporadický typ CLL. sporadický typ CLLFamiliFamiliáárnyrny
2 a viac pacienti s CLL v 1.st. pr2 a viac pacienti s CLL v 1.st. prííbuzenstvebuzenstvevek v vek v ččase ase dgdg: 57,9 : 57,9 ±± 12,112,1sekundsekundáárne primrne primáárne TU:rne TU:
19% (mo19% (moččový mechový mechúúr a r a skvamocelulskvamoceluláárnyrny CaCa kokožže)e)25% do 4 r. po 25% do 4 r. po CLLCLL
transformtransformáácia do NHL cia do NHL –– bez rozdielubez rozdielu
SporadickýSporadickýojedinelý výskyt CLL v RAojedinelý výskyt CLL v RAvek v vek v ččase ase dgdg: 70,1 : 70,1 ±± 11,911,9SekundSekundáárne primrne primáárne TU:rne TU:
8,8%8,8%75% do 4 r. po CLL75% do 4 r. po CLL
transformtransformááciacia do NHL do NHL –– bez rozdielu bez rozdielu
IshibeIshibe NN et al. Leu & Lymfona 2001, 42(1-2), 99-108
FamiliFamiliáárny rny vsvs. sporadický typ CLL. sporadický typ CLL
LynnLynn R. R. GoldinGoldin, , Hematology 2007Hematology 2007
PrognostickPrognostickéé markerymarkery
KonvenKonvenččnnáá cytogenetikacytogenetika
cytogenetickcytogenetickéé metodiky metodiky –– in in vitrovitro stimulstimuláácia CLL cia CLL lymfocytovlymfocytovmitogmitogéénminmidôkaz prdôkaz príítomnosti tomnosti transloktranslokááciciíí
r. 1978 r. 1978 –– žžiadna iadna ššpecifickpecifickáá aberaberáácia u CLL (cia u CLL (MitelmanMitelman and and LevanLevan))r. 1990 r. 1990 –– pridanie pridanie BB--bunkovýchbunkových mitogmitogéénovnov, u 40, u 40--50% pacientov 50% pacientov detekovandetekovanéé
klonklonáálnelne chromozchromozóómovmovéé zmienyzmienyr. 200r. 20000 –– mitogmitogéénn PokeweedPokeweed,, antiCD40, TPA, antiCD40, TPA, cytochalasincytochalasin B,B, 80% aber80% aberááciciíí (D(Dohnerohner et al)et al)r. 2006 r. 2006 -- pridanie ILpridanie IL--4, 4, CpGCpG oligodeoxynukleotidyoligodeoxynukleotidy a ILa IL--22 ((HaserlachHaserlach et.al,2007)et.al,2007)
IdentifikIdentifikáácia prestavby cia prestavby IgHIgH FISHFISH
transloktranslokááciacia IgHIgH ggéénu nu –– nepriaznivý prognostický faktornepriaznivý prognostický faktoridentifikidentifikáácia cia ffúúznehozneho partnera partnera napr. t(14;18) napr. t(14;18) –– Bcl2Bcl2--IgH, t(8;14) IgH, t(8;14) –– MYCMYC--IgH, ..... IgH, ..... identifikidentifikááciacia deldelééciecie varibilnejvaribilnej oblasti oblasti IgHIgH ggéénunu
Ilenčíková,Plank, Lek Obz 57,2009
DelDelééciecie IgHIgH konkonšštantnej oblastitantnej oblasti
del(14)(q24.1q32.33)del(14)(q24.1q32.33)ččastejastejšíší výskyt u atypických CLL (kratvýskyt u atypických CLL (kratšíším prem prežžíívanvaníím pacientov) m pacientov) s s triztrizóómioumiou 12, 12, deldel p53, p53, deldel ATM a rôznymi genetickými aberATM a rôznymi genetickými aberááciamiciamiččastejastejššie s nemutovaným ie s nemutovaným IgHIgH(V)(V)deldelééciecie IgHIgH(C) predpoklad (C) predpoklad intersticiintersticiáálnychlnych deldelééciciíí –– v v klonovýchklonových populpopulááciciáách ch CLL veCLL veľľkostne kostne heterogheterogéénnenne
výskyt izolovanej del(14)(q24.1q32.33) bol výskyt izolovanej del(14)(q24.1q32.33) bol asociaovanýasociaovaný s dobrým s dobrým preprežžíívanvaníím (nezm (nezáávisle od veku, klinickvisle od veku, klinickéého ho ššttáádia a dia a IgHIgH(V) statusu)(V) statusu)participparticipáácia na rozvoji cia na rozvoji ochorenia ochorenia
identifikidentifikáácia cia klonklonáálnejlnej B bunkovej populB bunkovej populáácie cie výsledok je potrebnvýsledok je potrebnéé interpretovainterpretovaťť v kontexte klinických, histologických a v kontexte klinických, histologických a imunofenotypovýchimunofenotypových ddáátt
proteproteíínn -- ččlen rodiny PI3/PI4 len rodiny PI3/PI4 kinkináázzregulreguláátor mnotor množžstva stva „„ downstreamdownstream““ proteproteíínovnov(p53,BRCA1, CHK2, RAD17,RAD9, BS1) (p53,BRCA1, CHK2, RAD17,RAD9, BS1) ATM ATM proteproteíínn//ATRkinATRkináázyzy –– „„kontrolkontrolóóryry““ hlavnýchhlavných bodovbodov bunkovbunkovééhohocyklu cyklu potrebnýchpotrebných pre pre bunkovbunkovúú odpoveodpoveďď na DNA na DNA popošškodeniekodenie a pre a pre gengenóómovmovúú stabilitustabilitu
asociovaný s ochorenasociovaný s ochoreníím m ataxiaataxia teleangiectasiateleangiectasia a a s s niektorýminiektorými autozomautozomáálnelne recesrecesíívnymivnymi ochoreniamiochoreniami del11q22
www.rndsystems.com
triztrizóómiamia chromozchromozóómu 12mu 121515--20% (cytogeneticky) alebo 1620% (cytogeneticky) alebo 16--25 % (FISH) 25 % (FISH) obsahuje viac ako 1400 obsahuje viac ako 1400 proteproteíínn--kkóódujdujúúcichcich ggéénovnov487 487 lokusovlokusov momožžno spojino spojiťť s ochorens ochoreníím u m u ľľududíí
3 a viac 3 a viac aberaberááciciíí2 2 aberaberááciecie1 1 aberaberááciaciaPozitPozit..
442442
PoPoččet pacientovet pacientov
55 %55 %del13qdel13q
7 %7 %del17pdel17p
16 %16 %+12+12
18 %18 %del11qdel11q
DDööhnerhner etet alal. (2000) . (2000)
Döhner et al. (2000): Genomic aberrations and survival in chronic lymphocytic leukemia. N. Engl. J. Med. 343, 1910-1916.
SporadickSporadickéé aberaberááciecie –– MLPA a FISH analýzaMLPA a FISH analýza8/2007 8/2007 –– 4/20104/2010
n = n = 77(2,5%)(2,5%)
n = 4 n = 4 (1,4%)(1,4%)
n = 5 n = 5 (1,7%)(1,7%)
n = 13 n = 13 (4,6%)(4,6%)
n = 6 n = 6 (2,1%)(2,1%)
n = 10 n = 10 (3,6%)(3,6%)
+19+19del10q23 del10q23 (PTEN)(PTEN)
3 x 8q243 x 8q24(MYC)(MYC)
3 x 2p243 x 2p24(MYCN)(MYCN)
del9p21del9p21(CDKN2A/B)(CDKN2A/B)
del6q25del6q25--2626
n = 42 n = 42 (15,1%)(15,1%)
PozitPozit..
del9p21 (CDKN2A/B) del6q25-26
BB--CLL: MLPA vs. FISHCLL: MLPA vs. FISH
InterfInterfáázovzováá FISH (IFISH (I--FISH):FISH):-- šštandardntandardnáá metmetóódada detekcie chromozdetekcie chromozóómových abermových aberááciciííasociovaných s CLLasociovaných s CLL
MLPA MLPA ((MultiplexMultiplex ligationligation--dependentdependent probeprobe amplificationamplification) ) -- novnováá metmetóóda detekcie da detekcie deldelééciciíí a a aplifikaplifikááciciíí ggéénov a nov a chrchr. . lokusovlokusov
MetodickMetodickéé limity MLPA:limity MLPA:-- neschopnosneschopnosťť odlodlíšíšenia enia monomono--alelickejalelickej od od bibi--alelickejalelickej deldelééciecie-- nemonemožžnosnosťť presnej kvantifikpresnej kvantifikáácie pozitcie pozitíívneho nvneho náálezu lezu -- potrebnpotrebnáá kombinkombináácia s metcia s metóódou FISHdou FISH
Výhody MLPA oproti FISH:Výhody MLPA oproti FISH:-- menmenššia ia ččasovasováá a manua manuáálna nlna náároroččnosnosťť-- multiplexnmultiplexnáá reakcia reakcia –– finanfinanččne efektne efektíívnevne-- skrskrííning ning šširirššieho spektra genetických ieho spektra genetických markerovmarkerov u CLL pacientov u CLL pacientov
ZZááverver
MetMetóóda MLPA je da MLPA je menejmenej ččasovoasovo a a manumanuáálnelne nnáároroččnou nou metmetóódoudou a poskytuje a poskytuje detekciu detekciu šširirššiehoieho spektra spektra patognomickýchpatognomických oblastoblastíí asociovaných s Basociovaných s B--CLL v CLL v porovnanporovnaníí s s rutinnerutinne vyvyššetrovanýmetrovaným „„CLL CLL –– panelompanelom““ metmetóódoudou FISH.FISH.