Sejarah ELISA Sebelum pengembangan ELISA, satu-satunya pilihan untuk melakukan suatu immunoassay adalah radioimmunoassay, teknik menggunakan antigen berlabel radioaktif atau antibodi. Dalam radioimmunoassay, radioaktivitas memberikan sinyal, yang menunjukkan apakah suatu antigen tertentu atau antibodi hadir dalam sampel. Radioimmunoassay pertama kali dijelaskan dalam kertas oleh Rosalyn Sussman Yalow dan Salomo Berson diterbitkan pada tahun 1960. Sebuah mikrobiologi menggunakan enzim suatu Linked tes Assay (ELISA) immunosorbent, dalam rangka untuk mengembangkan metode untuk deteksi cepat antigen p24 HIV dalam sampel darah. Karena radioaktivitas menimbulkan ancaman kesehatan potensial, alternatif yang lebih aman itu dicari. Sebuah alternatif yang cocok untuk radioimmunoassay akan mengganti sinyal non-radioaktif di tempat sinyal radioaktif. Ketika enzim (seperti peroksidase) bereaksi dengan substrat yang sesuai (seperti ABTS atau 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine), perubahan warna terjadi, yang digunakan sebagai sinyal. Namun, sinyal tersebut harus dikaitkan dengan keberadaan antibodi atau antigen, yang mengapa enzim harus dihubungkan dengan antibodi yang sesuai. Proses menghubungkan secara independen dikembangkan oleh Stratis Avrameas dan GB Pierce. Karena itu perlu untuk
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
Sejarah ELISA
Sebelum pengembangan ELISA, satu-satunya pilihan untuk melakukan
suatu immunoassay adalah radioimmunoassay, teknik menggunakan antigen
berlabel radioaktif atau antibodi. Dalam radioimmunoassay, radioaktivitas
memberikan sinyal, yang menunjukkan apakah suatu antigen tertentu atau
antibodi hadir dalam sampel. Radioimmunoassay pertama kali dijelaskan dalam
kertas oleh Rosalyn Sussman Yalow dan Salomo Berson diterbitkan pada tahun
1960. Sebuah mikrobiologi menggunakan enzim suatu Linked tes Assay (ELISA)
immunosorbent, dalam rangka untuk mengembangkan metode untuk deteksi cepat
antigen p24 HIV dalam sampel darah.
Karena radioaktivitas menimbulkan ancaman kesehatan potensial,
alternatif yang lebih aman itu dicari. Sebuah alternatif yang cocok untuk
radioimmunoassay akan mengganti sinyal non-radioaktif di tempat sinyal
radioaktif. Ketika enzim (seperti peroksidase) bereaksi dengan substrat yang
sesuai (seperti ABTS atau 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine), perubahan warna
terjadi, yang digunakan sebagai sinyal. Namun, sinyal tersebut harus dikaitkan
dengan keberadaan antibodi atau antigen, yang mengapa enzim harus
dihubungkan dengan antibodi yang sesuai. Proses menghubungkan secara
independen dikembangkan oleh Stratis Avrameas dan GB Pierce. Karena itu perlu
untuk menghilangkan antibodi atau antigen terikat dengan mencuci, antibodi atau
antigen harus tetap ke permukaan wadah;. Yaitu, immunosorbent telah harus
dipersiapkan. Sebuah teknik untuk mencapai hal ini diterbitkan oleh Wide dan
Jerker Porath pada tahun 1966.
Pada tahun 1971, Petrus Perlmann dan Eva Engvall di Universitas
Stockholm di Swedia, dan Anton Schuurs dan Bauke van Weemen di Belanda
mandiri makalah yang disintesis pengetahuan ini ke dalam metode untuk
melakukan EIA / ELISA.
Pengertian ELISAEnzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) adalah suatu teknik
biokimia yang terutama digunakan dalam bidang imunologi untuk mendeteksi
kehadiran antibodi atau antigen dalam suatu sampel. ELISA telah digunakan
sebagai alat diagnostik dalam bidang medis, patologi tumbuhan, dan juga berbagai
bidang industri. Dalam pengertian sederhana, sejumlah antigen yang tidak dikenal
ditempelkan pada suatu permukaan, kemudian antibodi spesifik dicucikan pada
permukaan tersebut, sehingga akan berikatan dengan antigennya. Antibodi ini
terikat dengan suatu enzim, dan pada tahap terakhir, ditambahkan substansi yang
dapat diubah oleh enzim menjadi sinyal yang dapat dideteksi. Dalam ELISA
fluoresensi, saat cahaya dengan panjang gelombang tertentu disinarkan pada
suatu sampel, kompleks antigen/antibodi akan berfluoresensi sehingga jumlah
antigen pada sampel dapat disimpulkan berdasarkan besarnya fluoresensi.
Penggunaan ELISA melibatkan setidaknya satu antibodi dengan spesifitas untuk
antigen tertentu. Sampel dengan jumlah antigen yang tidak diketahui diimobilisasi
pada suatu permukaan solid (biasanya berupa lempeng mikrotiter polistirene),
baik yang non-spesifik (melalui penyerapan pada permukaan) atau spesifik
(melalui penangkapan oleh antibodi lain yang spesifik untuk antigen yang sama,
disebut ‘sandwich’ ELISA). Setelah antigen diimobilisasi, antibodi pendeteksi
ditambahkan, membentuk kompleks dengan antigen. Antibodi pendeteksi dapat
berikatan juga dengan enzim, atau dapat dideteksi secara langsung oleh antibodi
sekunder yang berikatan dengan enzim melalui biokonjugasi. Di antara tiap tahap,
plate harus dicuci dengan larutan deterjen lembut untuk membuang kelebihan
protein atau antibodi yang tidak terikat. Setelah tahap pencucian terakhir, dalam
plate ditambahkan substrat enzimatik untuk memproduksi sinyal yang visibel,
yang menunjukkan kuantitas antigen dalam sampel. Teknik ELISA yang lama
menggunakan substrat kromogenik, meskipun metode-metode terbaru
mengembangkan substrat fluorogenik yang jauh lebih sensitif.
Aplikasi ELISAELISA dapat mengevaluasi kehadiran antigen dan antibodi dalam suatu
sampel, karenanya merupakan metode yang sangat berguna untuk mendeterminasi
konsentrasi antibodi dalam serum (seperti dalam tes HIV), dan juga untuk
mendeteksi kehadiran antigen. Metode ini juga bisa diaplikasikan dalam industri
makanan untuk mendeteksi allergen potensial dalam makanan seperti susu,
kacang, walnut, almond, dan telur. ELISA juga dapat digunakan dalam bidang
toksikologi untuk uji pendugaan cepat pada berbagai kelas obat.
ELISA adalah tes skrining dahulu banyak digunakan untuk HIV karena
kepekaan tinggi. Dalam ELISA, serum seseorang diencerkan 400 kali lipat dan
diterapkan pada pelat yang antigen HIV yang terpasang. Jika antibodi terhadap
HIV hadir dalam serum, mereka dapat mengikat antigen HIV. Pelat ini kemudian
dicuci untuk menghapus semua komponen lain dari serum. Sebuah "antibodi
sekunder" khusus disiapkan - antibodi yang mengikat antibodi lain - kemudian
diterapkan ke piring, mencuci diikuti oleh yang lain. Ini antibodi sekunder secara
kimiawi terkait di muka untuk enzim.
"Anti IgG manusia" Antibodi Ganda Sandwich ELISA
Dengan demikian, piring akan berisi enzim sebanding dengan jumlah
antibodi sekunder terikat ke piring. Sebuah substrat untuk enzim diterapkan, dan
katalisis oleh enzim mengarah ke perubahan pada warna atau fluoresensi. Hasil
ELISA dilaporkan sebagai nomor; aspek paling kontroversial dari tes ini adalah
menentukan "cut-off" titik antara positif dan hasil negatif. Sebuah titik cut-off
dapat ditentukan dengan membandingkannya dengan standar yang dikenal. Jika
tes ELISA digunakan untuk skrining obat di tempat kerja, konsentrasi cut-off, 50
ng / mL, misalnya, didirikan, dan sampel yang berisi konsentrasi analit standar
akan disiapkan. Diketahui bahwa menghasilkan sinyal yang lebih kuat daripada
sampel dikenal adalah "positif." Mereka yang menghasilkan sinyal lemah, yang
"negatif." Dokter Dennis E Bidwell dan Alister Voller menciptakan tes.
Kegunaan lain dari ELISA meliputi:
1. deteksi antibodi mikobakteri dalam TB.
2. deteksi rotavirus dalam tinja.
3. deteksi penanda hepatitis B dalam serum.
4. deteksi enterotoksin E. coli dalam tinja.
Tipe-tipe ELISAAda beberapa tipe-tipe ELISA, diantaranya adalah sebagai berikut:
1. Indirect ELISA
2. Sandwich ELISA
3. Competitive ELISA
1. Indirect ELISA
(Gambar Mekanisme Indirect ELISA)
Tahap umum yang digunakan dalam indirect ELISA untuk
mendeterminasi konsentrasi antibodi dalam serum adalah:
a) Suatu antigen yang sudah dikenal dan diketahui konsentrasinya ditempelkan pada
permukaan lubang plate mikrotiter. Antigen tersebut akan menempel pada
permukaan plastik dengan cara adsorpsi. Sampel dari konsentrasi antigen yang