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Máster Interuniversitario en Zootecnia y Gestión Sostenible:
ganadería ecológica e integrada.
Instituto de Estudios de Postgrado
Universidad de Córdoba
J. De la Fuente INIA – Reproducción Animal y
Conservación Recursos Zoogenéticos
[email protected]
REPRODUCCIÓN ASISTIDA EN EL VACUNO DE LECHE Obtención y Evaluación
Córdoba, Marzo 2012
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TRANSFERENCIA DE EMBRIONES BOVINOS
SELECCIÓN DE DONANTES
SUPEROVULACIÓN
MANIPULACIÓN:
OBTENCIÓN EVALUACIÓN
CONSERVACIÓN
TRANSFERENCIA
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- Catéteres de diferentes grosores:
De 2 vías
De 3 vías
- Aislamiento de embriones:
Por decantación
Por filtración
- Sondas de obtención:
De caucho
De silicona
- Vainas sanitarias de IA
- Dilatador de cervix de acero inoxidable
- Posterior traslado a placas Petri de plástico
- Manipulación embrionaria con diferentes útiles de plástico o de vidrio
- Introducción en pajuelas de plástico para su congelación o TE
OBTENCIÓN DE EMBRIONES
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LOCALIZACION FISIOLOGICA DE LOS EMBRIONES EN EL UTERO
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ESQUEMA DE LA RECOLECCION: INTRODUCCION DEL PBS CON JERINGA
Bolsa con PBS
Jeringa para Introducir PBS
Válvula anti reflujo
Conexión en “Y”
Filtro Em-Con
Jeringa para aire
Sonda Rush o Foley
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ESQUEMA DE LA RECOLECCION INTRODUCCION DEL PBS POR GRAVEDAD
ANESTESIA EPIDURAL
SONDA DE RECOLECCION CON BALON DE SUJECCION
FILTRO DE RECOLECCION
CERVIX (Cuello del
Utero) AIRE
PBS PARA LA RECOLECCION
EMBRIONES
OVARIO
UTERO
Fuentes S. y De la Fuente J.
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ELABORACIÓN DE MEDIOS
COMPOSICIÓN (D-PBS) para colectas: 1 L H2O (Bidestilada) ó (Desionizada y Desmineralizada)
gr/L
ClNa ………………………………. 8
ClK ……………………………….. 0,200
Cl2Ca (2H2O) …………………….. 0,1325
PO4KH2 …………………………... 0,200
Cl2 Mg (6H2O) …...………………. 0,100
PO4Na2H …………………………. 1,150
Piruvato Na …......……………….. 0,36
Glucosa..... ……………………….. 1
Penicilina / Estreptomicina.…….. 100ui/100mg
o Sulfato de Kanamicina............... 25mg/li.
OTROS: *Suero Fetal........………. 1-2%
* ó BSA .………………… 0,2%
MEDIO BASE (LAVADO)= PBS pH = 7,3+0,4; OSMOLARIDAD = 285 - 300 miliosmoles/Kg.
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TRANSFERENCIA DE EMBRIONES BOVINOS
SELECCIÓN DE DONANTES
SUPEROVULACIÓN
MANIPULACIÓN:
OBTENCIÓN EVALUACIÓN
CONSERVACIÓN
TRANSFERENCIA
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VALORACIÓN MORFOLÓGICA SEGÚN
IETS: ESTADO DE DESARROLLO
CODIGO ESTADO DIAS
1
2
NO FERTILIZADO
DE 2 A 12 CELULAS
2-4
3 MORULA 5-6
4 MORULA COMPACTADA 6-7
5 BLASTOCISTO TEMPRANO 7
6 BLASTOCISTO 7-8
7 BLASTOCISTO EXPANDIDO 8
8 BLASTOCISTO ECLOSIONADO 8-10
6
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TRANSFERENCIA DE EMBRIONES:
OBTENCIÓN Y CLASIFICACIÓN DE EMBRIONES
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1 DIA
2 DIA 3-4 DIA 5-6 DIA (2) (2) (3)
CRONOLOGIA DEL DESARROLLO EMBRIONARIO
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7 DIA 7 DIA 7 DIA
8 DIA 8-9 DIA 9-10 DIA
CRONOLOGIA DEL DESARROLLO EMBRIONARIO
(4) (4) (5-6)
(7) (8) (8-9)
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VALORACIÓN MORFOLÓGICA SEGÚN
IETS
– ESFERICIDAD E INTEGRIDAD ZONA PELÚCIDA
– FORMA GENERAL
– OPACIDAD
– ESTRUCTURAS VISIBLES:
• TROFOBLASTO
• BOTÓN EMBRIONARIO
• BLASTOCELE
– ESTADO DE AGREGACIÓN DE LAS CÉLULAS
– DIFERENCIAS DE TAMAÑO ENTRE CÉLULAS
– PRESENCIA DE CÉLULAS SEPARADAS EN EL
ESPACIO PERIVITELINO
– INTEGRIDAD DE LAS CÉLULAS
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ZONA PELUCDA PERIMETRO = 140 - 170
ESPESOR = 25
BLASTOMEROS = 40
ESPACIO PERIVITELINO
CARACTERISTICAS DEL EMBRION DE 7 DIAS
MORULA COMPACTADA
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ZONA PELUCDA PERIMETRO = 140 - 170
ESPESOR = 25
ESPACIO PERIVITELINO
BLASTOMEROS = 40-60
BLASTOCELE
TROFOBLASTO
CARACTERISTICAS DEL EMBRION DE 7 DIAS
BLASTOCISTO (joven blastocisto)
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VALORACIÓN MORFOLÓGICA SEGÚN
IETS: CLASIFICACIÓN POR CALIDAD
CODIGO ESTADO OBSERVACIONES
1
2
EXCELENTE
BUENOS
APTOS PARA CONGELAR
3 REGULARES/
MALOS
NO APTO PARA CONGELAR
4 NO
FECUNDADOS
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CALIDAD EMBRIONARIA
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CALIDAD EMBRIONARIA
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EMBRIONES INVIABLES
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EMBRIONES INVIABLES
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VALORACION EMBRIONARIA
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ETIQUETADO DE EMBRIONES
E0101 // 11 // 2000176247 IZTUETA BLAC X MERRY // 16-11-01 // ETGS // 1 4 1
RAZA
EQUIPO DE TE FECHA DE LA RECOLECCIÓN CRIOPROTECTOR
EDAD CALIDAD
Nº EMB.
• CON JUNCOS IDENTIFICADORES • EN LA PROPIA PAJUELA
• CON OTRA PAJUELA
IDENTIFICACIÓN DONANTE X SEMEN UTILIZADO
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MANIPULACIÓN Y VALORACIÓN DE
EMBRIONES
VALORACION MORFOLOGICA
SEGUN IETS
CONGELACION
INTRODUCCION EN MEDIO DE
CONGELACION:
10% GLICEROL Ó
1.5M ETILENGLICOL (TD)
10 LAVADOS EN PBS+ 0.4% BSA
+ TRATAMIENTO CON TRIPSINA 0.25%
INTRODUCCION
PBS+0.4% BSA
LOCALIZACION
RECOLECCION
TE
Fin