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PUBLlCACION MISCElANEA N2 5

Remisión de muestras de material Biológico

ISSN 0325 - 9137

I NTAEstación Experimental Regional Agropecuaria RArAEl.A

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REMISION DE MUESTRAS DE MATERIAL BIOLOGICO

Autores ( '" )

Méd. Veto ÁLMEIDA, R. A . . 11 11 ANZIANI, O. S. 11 . 11 MARCOS, E; R.

u II TARABLA, H. D. 11 • 11 VENZANO, A. J. 11 11 VOTTERQ, D. A. J.

('" ) Técnicos de la Estación Experimental Regional Agropecuaria Rafaela

PUBLlCACION MISCELANEA NS! 5

INTA . Repúbl ica Argentina .

Instituto Nacional de T ecnologiá Agropecuaria Estación Experimental Regional Agropecuaria Rafaela

Agosto 1980

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caso en que los análisis solicitados incluyan la determinación de fósforo, magnesio y calcio y el material enviado sea sangre entera sin.anticoagulante, el lapso de tiempo máximo que puede demorar la muestra en ser entregada al laboratorio es de 24 horas luego de la extracción si es conservada a no más de 20°C, o de lo contrario remitir el suero congelado.

Determinación del volumen globular, hemoglobina

La determinación de estos elementos se realiza sobre sangre entera hecha incoagula­ble por distintos agentes ( heparina al 1%, oxalato, citrato, etc. ) .

Una cantidad adecuada de sangre, es aproximadamente 10 a 15 mI. Pueden utilizar­se como recipiente tubos de Kahn, tubos de ensayos o frascos de antibióticos, bien limpios. Se recomienda no llenar completamente el envase, dejando espacio suficien te para facilitar lamezcla de la sangre con el anticoagulante. -

Una vez tapado, el contenido del frasco debe mezclarse suavemente. Este se efectúa inclinando el recipiente desde la posición vertical hasta una horizontal, tomándolo entre los dedos pulgar e íhdi ce.

El envío de estas muestras debe hacerse en recipi entes seguros y que permitan que la sangre llegue refrigerada. La sangre entera no debe enviarse congelada, ya que la congelación daña a los eritrocitos, provocando hemól isis.

Determi naci ones en suero

La determinación de los valores de calcio, magnesio, cobre, fósforo inorgánico, glu cosa, proteínas totales, albúminas, transaminasa glutámico-oxalacético y colesterof, se realiza sobre suero fresco no hemolizado.

Se necesitan unos 15 a 20 mi de sueJ'o, recogido en frascos de boca ancha o en tubos de centrífuga; los mejores sueros son los obtenidos de la siguiente forma:

1. Después de extraída la sangre por punción yugular, los tubos deben colocarse en la sombra, especialmente en días de calor.

2. Para la separación natural del suero, los tubos deben permanecer a temperatu­ra ambiente ( 18 a 25°C), durante dos horas.

3. Centrifugar cada vez que sea posible.

El traspaso del suero obtenido a los recipientes que serán enviados al laboratorio, de be ser real izado con sumo cu idado, tratando de no trasvasar restos del coágulo o go=­tos de sangre, lo que alteraría las reacciones. Puede realizarse con una pipeta de vi drio IIPasteurll , con bulbo de gotero de 1 mi. . -

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Conviene guardar los sueros congelados hasta el momento de su envío, el que debe real izarse en envases de telgopor con conservadores del tipo de los que acompañan a las vacunas antiaftosa, hielo seco, etc.

Si se calcula que el tiempo de llegada de la muestra al laboratorio no será superior a lo aconsejado (24 horas), se puede enviar sangre entera a 15-20°C en cantidad aproximada a 50-100 mi a fin de que la extracción del suero sea llevada a cabo en e\ \aboratorio.

MUESTRAS PARA BACTERIOLOGIA y VIROLOGIA

Consideraciones generales

Las muestras remitidas para cualquier diagnóstico microbiológico deben ser tomadas en la forma más aséptica posible y enviadas, perfectamente conservadas, en el menor· tiempo posible.

El envase en el cual se remite la muestra debe estar estéril, correctamente tapado y rotulado. En la identificación se debe consignar el órgano, fecha de extracción y nom bre del remitente. -

Las muestras de suero que se remitan para distintos diagnósticos, no deben estar hemo lizadas, ya que esto último impide la realización de pruebas serológicas.

Formas de conservaci ón recomendadas:

l. Refrigeración: es la más indicada ya que a esta temperatura { 5°C) no hay pro­I iferación bacteriana secundaria.

2. Congelación: en el caso de que la muestra demore en llegar al laboratorio, se recomienda congelarla con hielo seco, usando conservadoras de telgopor y evi tando el contacto directo del hi elo, con el órgano remitido. . -

3. Medios de cultivo para transporte: se conocen con este nombre, medios de cul­tivo bacterianos que inhiben el desarrollo de las bacterias sin alterar su viabili dad. Uno de los más utilizados es el Medio de Transporte de Stuart, y éste se­recomienda cuando la muestra demora varios días en llegar al laboratorio. Este medio se reconstituye según las instrucciones del fabricante, se distribuye en tubos y se esteril iza en autoclave. Luego se introduce el trozo de órgano d r~ miti r en el interior del medio de cultivo.

4. Conservadores químicos: las muestras de lavados prepuciales para el diagnóstico de vibriosis genital bovina, por inmunofluorescencia, pueden ser conservadas

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INTRODUCCION

El objetivo de esta publicación es dar a conocer a los veterinarios, la forma en que

deben remitir muestras de materi.al biológico para su análisis en laboratorios. De es-

ta manera, se espera facilitar su labor y asegurar que el material remitido para la re~

lización o confirmación de un diagnóstico, llegue en cantidad suficiente y en condi-

ciones adecuadas para garantizarel resultado de los análisis solicitados, con un buen

grado de confianza.

Aunque los anál isis sean efectuados en forma correcta, los resultados obtenidos están

condicionados por la calidad y cantidad de la muestra recolectada, por lo cual se re

quiere:

l. Buen procedimi ento de muestreo.

2. Cantidad suficiente de la muestra.

3. Adecuada identificación.

4. Preservación, protección y envío de las muestras, de tal forma que aseguren su llegada al laboratorio en óptimas condiciones.

Las muestras deben ser embaladas en cajas aislantes, protegidas y enfriadas, con las

correspondientes etiquetas de identificación. Además, se deben acompañar con la

historiQ clínica del caso, incluyendo datos de necropsias, porcentajes de morbilidad

y mortal idad, tratamientos real izados, etc.

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MUESTRAS PARA DETERMINACIONES BIOQUIMICAS

Preparación del material para extracción de muestras

T oclo el material de vidrio que sea util izado deberá ser lava:lo con detergente, en;ua­do tres veces con agua co:nún, luego tres veces con agua destilada y secado en horno o estufa.

Si el envase va a ser utilizado en el envío de muestras para la determinación de mi­croelementos, una vez limpio se lo debe sumergir durante toda la noche en una solu­ción de ácido clorhídrico o nítrico al 10%, preparado con agua destilada.

Luego el material se enjuaga cinco veces con agua destilada, una o dos veces con agua bidestilada y se seca.

Muestras relacionadas con desequ i I ibrios metaból i cos

En la zona centro-oeste y noroeste de la provincia de Santa Fe y zona este de la pro­vincia de Córdoba ( zona de influencia de la E.E.R.A. Rafaela ), los problemas más frecuentes de origen metabólico-carencial son: hipocalcemia, hipomagnesemia, hipo cupremia y circunstancialmente cetosis. -

Al sospecharse la presencia de disturbios metabólicos o deficiencias minerales, es con veniente extraer una muestra de sangre del animal afectado para determinar la causa­real del trastorno. El análisis bioquímico proveerá información suficiente para orien tar un diagnóstico, descartando otras alternativas posibles. La extracción de sangre -debe ser, en lo posible, representativa del tamaño del rodeo ( generalmente es sufi­ciente un 10 % de los animales, aunque en rodeos grandes este número puede ser me nor ). -

Para cualquier tipo de determinación a realizar, es importanj'e que la sangre haya si­do extraída sinel uso de jeringas; lo conveniente es efectuar la extracción por pun­ción de la vena yugular (en algunos casos se puede utilizar la vena mamaria) con agujas de tamaño 40 x 2 mm o sangradores especiales y dejar que la sangre corra di­rectamente sobre las paredes del tubo o recipiente, a fin de evitar la hemólisis de la sangre. Se debe recordar que la muestra hemol izada altera los valores de hemoglobi­na, volumen globular, glucosa, calcio, magnesio, fósforo y proteínas.

En ciertos casos resulta importante el tiempo transcurrido desde la toma de muestras, así por ejemplo, para la correcta determinación de glucosa en sangre no deben trans­.:urrir más de dos horas en llegar la muestra al laboratorio luego de su extracción, ex­cepto que ésta se realice con fluoruro de sodio y EDTA como anticoagulante. Para el

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con el agregado de 2 o 3 gotas de solución fisiológica 'formol oda ( 0,25 % ) Y posterior refrigerado a 5°C. Esto se debe efectuar toda vez que las muestras no se vayan a utilizar para cultivo o no se procesen en forma inmediata. La solu ción fenicada (Acido fénico al 5%) se puede utilizar para conservar suero, pe ro no debe ser empleado en caso de diagnósticoserológico de brucelosis. -

Observaciones

. o Enfermedades de etiología viral: se recomienda que los muestreos se realicen bajo las condiciones de esterilidad necesarias con el material adecuado y se conserven, en caso de ser posible, a -70°C.

Para la realización de análisis serológicos de animales sospechosos de enfermeda­des virales, deben ser tomadas dos muestras de cada animal con un intervalo de 15 a 20 días, para poder detectar aumentos en los títulos de anticuerpos.

o Mastitis: previo a la t.oma de ICímuestra, se debe desinfectar la piel del pezón con amonios cuaternarios, secar con toallas descartablesde papel y realizar una últi­ma desinfección con alcohol de 96 grados. La muestra se tomará colocando el pe­zón en forma horizontal, descartando el primer chorro de leche y evitando el con tacto entre la boca del tubo y la piel del pezón.

o Análisis bacteriológico de agua: es necesario el envío de 250 cc de agua, recogi­da en envases estériles. La toma de la muestra se deberá realizar de la siguiente manera:

1. Flamear la boca del grifo o caño con mechero de alcoholo gas, o hisopo emb~ bido en alcohol.

2. Dejar correr el.agua.unos c-uantos segundos.

3. Flamear nuevamente la boca de la canilla o caño por donde sale el agua.

4. Tomar la muestra al abrigo de la llama.

El material a extraer en las principales afecciones y la forma de conservación más conveni ente se resumen en el Cuadro 1 .

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CUADRO 1 -Tipo de material y forma de conservación de muestras para diagnóstico microbiológico.

Enfermedad Organos a remitir Otras mueStr-as

ABORTO INFECCIOSO ( Vibrio, -Cuajo o líquido de cuajo, rif'lón, pulmón -. Suero ( Brucel a y Leptaspi ra, mues-Brucel osi s~ Leptospirosis ) y bozo fetal. tras pareados) •

- Lavaje prepucial ( vibrio ). - Frotis de cotiledones.

CARBUNCLO - Bovinos: hueso largo, trozo de oreja. - Froti, de sangre. - Pare i nos: gangl i os retrofaringeos. Te - Hispo embebido en exudados san-

jido de edema o periganglionar. - guinolent,os. - Equinos: ganglios linfáticos.

CLOSTRIDIOSIS - 'Organos afectados, ga.riglios regionales :.:. Frotis de áreas con lesiones. y osas intestinales atados. - Contenid.o intestinal ( refrigerado).

- LíqU,ido pericárdico (colector en j eri nga. estéri I es 1..

DIARREA BLANCA - Duodeno, gongl iD mesentérico, - Frotis de duodeno. hígado, bozo y pulmón. - Cerebro.

DIARREA p/SALMONELLAS - Idem anterior, además de bilis. - Suero.

MASTITIS - Leche de los cuatro cúartos.

NEUMONIAS - Pulmón, ganglio bronquial y/o - ·Suero. mediostínicos. - Líquido pleural ( colectado en

. jeringa estéril).

LlSTERIOSIS - Cerebro y órganos afectados. - Suero, sangre con anticoagulante, estéri l.

O UERA TOCONJUNTIVITIS - Ojo. - -Hisopado ocular en solución fisiológico

PARA TUBERCULOSIS - Vólvu.la ileocecal, recto _y gongl ¡os - Biopsia de mucosci rectal. mese-ntéri-cos.

SE PT ICE MIliS ":'-Gonglio, bozo, hígado, ri;'ón, - Sangre conant-icoogul~mteestéril. pulmón, hueso largo.

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Ti po ,de conseivoci ón

- Refrigerado o medio de transporte Stuart( M.T ,S. ).

- Refrigerado, envuelto en papel y en bolsa de nylón.

- Congelado, refrigerado o M.T .S.

- Congelado, refrigerado o M.T .S.

- Congelado, refrigerado o M. T .S.

- Refrigerada.

- Refrig.,oda o:I,.1.s.

- Congelado.

- Congel ado o refrigerado.

- Refrigerado o M.T .5.

- Refrigerado.

- Refrigerado.

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MUESTRAS PARA PARASITOLOGIA

Hemoparásitos

Los frotis delgados de sangre periférica ( punta de cola u oreja), constituyen el ele­mento diagnóstico de mayor importancia para detectar infecciones, en fase aguda, de Anaplasma marginale, Babesia bigémina y Babesia argentina.

Si bien este método es sencillo y perfectamente realizable bajo condiciones de cam­po, se deben respetar una serie de premisas como ser:

l. Recortar los pelos dela punta de la cola de los bovinos y eliminar los detritus y serosidades que allí se acumulan.

2. En caso de babesiosis, es de especial interés que el frotis se realice con la pri mera gotade sangre, producida al rasgar la punta de la cola con la tijera. -

3. Util izar portaobjetos limpios y desengradados.

4. Preferentemente la cola del frotis debe ser redonda y no llegar hasta el extre­mo del portaobjetos.

5. El borde con que se hace la extensión debe ser liso( sin melladuras).

6. La película del frotis debe ser delgada.

7. Tener en cuenta que el tamaño de la gota de sangre y el ángulo existente entre los portaobjetos que sostienen la gota y el portaobjetos con que se extiende, de termina el espesor del frotis. Por lo tanto, cuando mayor es el ángulo, másgrue so es oque'l.. Generalmente con un ángulo aproximado de 30 0 se obti ene una -pel i cu I a de espesor adecuado.

8. Fijar lo antes posible el frotis en alcohol metílico puro durante 1-2 minutos. lO

9. Una vez fijado, el envio al laboratorio para su coloración y observación debe hacerse dentro de las 48 horas.

Parasi tosi s gastroi ntest i nal es y pu I monares

1. A una pablación: es importante subdividir la población, considerando la edad y el sistema de manejo que han recibido los animales. Por ejemplo: menores de 6 meses, menores de un año, adultos, de reposición, estabulados, manejados en de terminados· potreros, ¡etc. De cada grupo es suficiente que se muestreen 10 añI mal es. En el eventual caso que el grupo estuvi era compuesto por 100 menos,con viene muestrearlos a todos. -

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2. A un individuo ( rumiante, equino o porcino): se recomienda extraer la muestra directamente del recto, mediante una bolsa de polietileno. Con la mano en elin terior de la bolsita, se introducirán los dedos vía rectal ejerciendo un masaje en­el techo del recto a los efectos de estimular la defecación. La materia fecal obte nido se mantendrá en el interior de la bolsa, a la que se le extraerá el aire yanu dará. Se deberá recoger aproximadamente entre 15 y 30g. -

3. Identificación de la muestra: sobre la bolsa de plástico no se debe escribir. Lo más indicado es, una vez anudada la bolsa, colocar un papel en el cual se consignan en lápiz la identificación del animal o lote, la edad del animal o edad promedio del lote, el nombre del establecimiento y la fecha de extracción de la muestra. El papel con los datos pre,cedentes se dobla convenientemente y se coloca en el fondo del nudo de la bolsa, procediendo a efectuar otro nudo por sobre el mismo.

4. Conservación y envío: la muestra, sin el agregado de conservador algun~, se re­r:nitirá refrigerada por medio de sachets co~ hielo, en heladera de telgopor.

Trichomoniasis

En el caso de sospecha de trichomoniasis genital bovina, el diagnóstico se puede reo I izar con muestras recogidas de hembras, de machos o de fetos abortados. En las hem bras el mated al de el ección es el líquido de piometras, mi entras que en los fetos abOr­tados se recomi enda el envío de los mismos en cajas de telgopor con refrigerantes. -

El diagnóstico en los toros se hace por la detección de los organismos vivos en el pre pucio y en el glande del pene. La toma de muestras se puede realizar por varios mé-= todos, siendo los más conocidos el lavajeprepucial, el raspador resorte y la pipeta de Bartlett .

El método que mayor difusión tiene en el país, es el lavado de prepucio con solución sal i na tamponada a pH 7,4. iI

Unos 40-50 mi de esta solución, son introducidos por gravedad en la cavidad prepu­cial del toro. Para ello se utiliza un frasco tipo Mariotte, conectado mediante un tubo de goma a una pipeta roma que se introduce en el anillo prepucial, cerrando éste con la mano para evitar el reflujo de la solución. Con la otra mano se masajea vigorosamente durante 60-80 segundos u 80-100 masajes, la zona prepucial desde craneal a caudal. Luego se desconecta el tubo del frasco Mariotte, se lo baja y se recoge el lavado en un frasco estéril, de capacidad suficiente. Obtenida la muestra, sela debe procesar cuanto antes. Se ha mencionado un limite de 8 horas, pero un máximo de 4 parece más seguro. Este mismo material se puede utilizar para el diag­nóstico de vibriosis genital bovina.

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MUESTRAS PARA HISTOPATOLOGIA

Extraer una pieza de tejido, que en lo posible, tome partes sanas y enfermas, de

aproximadamente 1 cm de lado y de forma cúbica o cuadrada. Si se trata de una

víscera hue'ca debe tomar todas las capas ( corte transversal) •

Las muestras se deben colocar en un frasco de boca ancha con solución bufferada

de formol comercial al 10 % , calculando 10 partes en volumen de esta solución

por cada parte de tejido.

Rotular los frascos aclarando el órgano que contiene y señalar el tiempo transcurri

do desde la muerte del animal hasta el momento en que se extrajo la muestra. El

animal que se halle en avanzado estado de putrefacción debe desecharse .

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ISSN 0325-9137

. BIBU.OGRAFIA

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I N·T.I. Secretaría .de Estado de Agri cu.lfura y Gan. ade. r.ía " Estación Experimental Regional Agrop. Rafaela

Impreso en el Servicio de Comunicaciones y Relaciones Públicas 500 ej emplares Agosto de 1980.

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