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ALBUMINA (ALB) Verde de Bromocresol
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
La determinacin cuantitativa in vitro de albmina en suero y
plasma. Este producto es adecuado para su utilizacin de
forma
manual y en el analizador Rx Monza.
Cat. No.
AB 362 R1. BCG Concentrado 6 x 13.5 ml
6 x 100 ml CAL Patrn 1 x 5.5 ml
SIGNIFICADO CLINICO (1)
La albmina es la protena srica ms abundante representando
el 55-65% de las proteinas totales. Se sintetiza en el hgado
y
tiene una vida media de 2 a 3 semanas. Las principales funciones
biolgicas de la albmina son mantener
el equilibrio de agua en suero y plasma, transportar y
almacenar
una amplia variedad de ligandos ej: acidos
grasos,calcio,bilirrubina y hormonas como tiroxina. La
albmina
tambin es una fuente endgena de aminocidos.
La hipoalbuminemia est asociada con las siguientes
condiciones
:analbuminemia; sintesis deteriorada de albmina en el
higado;
enfermedades hepaticas; malnutricin o malabsorcin; shock
generalizado; quemaduras o dermatitis; enfermedades renales
e
intestinales .La hiperalbuminemia tiene poca relevancia
diagnstica excepto tal vez en deshidratacin.
PRINCIPIO(2)
La medicin de albmina en suero se basa en su unin
cuantitativa con el indicador 3,3',5,5'-tetrabromo-m cresol
sulfontaleina (verde de bromocresol BCG). El complejo
albmina-verde de bromocresol presenta una absorcin mxima
a 578 nm, siendo la absorbancia directamente proporcional a
la
concentracin de albmina en la muestra.
PREPARACION Y EXTRACCION DE LA MUESTRA
Suero, plasma heparinizado o plasma con EDTA. Se pueden
utilizar los procedimientos normales de recogida y
almacenamiento del suero para las muestras que se vayan a
analizar con este mtodo. El suero es estable durante 3 das a
una temperatura de entre 2 y 8 C, o durante 6 meses a -20C.
COMPOSICIN DEL REACTIVO
Componentes Concentracin inicial de las soluciones
R1. Verde de Bromocresol (BCG) concentrado
Tampn succinato 75 mmol/l, pH 4.2
Verde de bromocresol (BCG) 0.15 mmol/l
Brij 35
Conservante
CAL Patrn Especifico para cada lote
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Slo para diagnstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar
las precauciones normales necesarias, que se requieren al
manejar reactivos de laboratorio.
Atencin: Patrn
El material de origen humano del que se deriva este producto
ha
sido analizado a nivel de donante para el anticuerpo del Virus
de
Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), el Antgeno de
Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y el anticuerpo del Virus
de
Hepatitis C (HCV) y se ha encontrado que es NO-REACTIVO.
Los mtodos utilizadon estn aprobados por FDA.
Sin embargo, dado que ningn mtodo puede ofrecer una
seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este
material y todas las muestras de pacientes se debern manejar
como posibles transmisores de enfermedades infecciosas y
eliminar apropiadamente.
Hojas Sanitarias y de Seguridad estn disponibles si se
desean.
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propsito por personal de laboratorio cualificado, y bajo
condiciones de laboratorio apropiadas.
ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO Y
DEL PATRON
R1. Concentrado BCG
Diluya el contenido de una botella con 87 ml de agua
destilada. Estable durante 3 meses si se conserva entre
+15 y +25C.
CAL. Estandard
Contenido listo para su uso. Etable hasta la fecha de
caducidad si se conserva entre +15 y +25C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Concentrado BCG
Patron Albumina
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Pipetas para dispensar volumenes 10 l y 3,0 ml. Cronmetro y bao
de agua o bloque de calentamiento para
mantener la temperatura entre 20 - 25C.
Espectrfotmetro con una capacidad de longitud de onda de
600 a 650 nm
Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel
3 (No. Cat. HE 1532)
Srum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).
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MANUAL AB 362
PROCEDIMIENTO(2)
Utilice H2O de doble destilacin para realizar una nueva
calibracin de la ganancia en el modo cubeta. Seleccione ALB
en
la pantalla Run Test (Realizar anlisis) y lleve a cabo un blanco
de
agua de la forma indicada.
Pipetee en una cubeta:
Blanco de reactivo S0 Patrn S1 Muestra
H2O de doble destilacin 3 l - - Patrn - 3 l -
Muestra - - 3 l
Reactivo 1000 l 1000 l 1000 l
Mzclelo e incbelo durante 20 minutos a 20-25 oC o durante
10 minutos a 37 oC.
Introdzcalo en el soporte de la celda de flujo de RX Monza y
pulse Read (Leer) en un plazo de 60 minutos.
CALIBRACIN PARA RX MONZA
Se recomienda llevar a cabo una calibracin diaria mediante
el
patrn CAL que se proporciona en el kit o mediante el suero
de
calibracin de nivel 3 de Randox.
PARA USO MANUAL
Longitud de onda: 578 nm o 623 nm
Espectrofotmetro: 630 nm (600 - 650 nm)
Cubeta: 1 cm de espesor
Temperatura de incubacin: 20 - 25C
Medicin: Frente al blanco de reactivo
Pipetear en tubos de ensayo:
Reactivo Patrn Muestra
H2O destilada 0,01 ml --- ---
Patrn (CAL) --- 0,01 ml ---
Suero o Plasma --- --- 0,01 ml
Reactivo de BCG (R1) 3,00 ml 3,00 ml 3,00 ml
Mezclar e incubar durante 5 min entre +20 y +25C. Medir la
absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrn
(Apatrn) frente al blanco de reactivo
CLCULO MANUAL
La concentracin de albmina en la muestra puede
calcularse utilizando la frmula siguiente:
Conc. de albmina (g/l o g/dl)
Amuestra
= x Concentracin
Apatrn del patrn
NORMALIZACIN
El suero de calibracin de nivel 3 de Randox sigue lo indicado
en
el material de referencia DA470 de la albmina (IFCC).
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros
Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deber de analizar
dos
niveles de controles al menos una vez al da. Los valores
obtenidos debern encontrarse dentro del rango especificado.
Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repeticin
excluye
error, se debern seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programacin del instrumento y el origen de luz.
2. Comprobar que todo material est limpio.
3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento de
bacterias puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
INTERFERENCIA
Se analizaron los siguientes analitos hasta los siguientes
niveles y se encontr que no interfieren:
Bilirrubina 500 mol/l Intralpido 1,2%
Triglicridos 22,75 mmol/l
Hemoglobina 6 g/l
VALORES DE NORMALIDAD EN EL SUERO(2)
Adultos 38 - 44 g/l (3,8 4,4 g/dl)
Recin nacidos 38 - 42 g/l (3.8 - 4.2 g/dl)
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango
de referencia para considerar las diferencias en edad, sexo,
dieta
y localizacin geogrfica.
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron
mediante
el analizador Rx Monza a una temperatura de 37 oC.
LINEALIDAD
Este mtodo es lineal hasta 7,55 g/dl. Si la concentracin
sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 1 con
una
solucin del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo.
Multiplique el resultado por 2.
SENSIBILIDAD
La concentracin mnima detectable de albmina con un nivel
aceptable de precisin se ha determinado en
0,287 g/dl.
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MANUAL AB 362
PRECISION (Suero)
Anlisis (Intra)
Nivel 1 Nivel 2
Media (g/dl) 2,86 4,36
DE 0,036 0,031
CV (%) 1,28 0,71
n 20 20
Anlisis (Inter)
Nivel 1 Nivel 2
Media (g/dl) 2,86 4,36
DE 0,129 0,174
CV (%) 4,52 3,99
n 20 20
CORRELACION
Se compar el mtodo Randox (Y) con un mtodo comercial
disponible (X). Se analizaron 51 muestras con valores
abarcando un rango de 22 a 46 g/l en un analizador Hitachi 747.
El anlisis de regresin lineal de los datos result en la
siguiente
ecuacin:
Y = 1,073 X + 0,204
con un coeficiente de correlacin r = 0.9910
Se analizaron 40 muestras con valores de entre 1,66 y 4,51
g/dl.
REFERENCIAS
1. Grant G.H., et al Amino Acids and Proteins; Fundamentals
of
Clinical Chemistry, Tietz N.W. Editor, Third Edition, WB
Saunders Company Philadelphia USA, 328-329, 1987
2. Doumas, B.T., Watson, W.A., Biggs, H.G., Clin. Chim.
Acta.
1971; 31: 87.
Revised 10 Sep 10 bm
Rev. 001
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FOSFATASA ACIDA
(ACP) Mtodo Colorimtrico
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el anlisis cuantitativo in vitro de Fosfatasa Acida en el
suero.
Este producto es adecuado para un uso manual o en el
analizador
Rx Monza.
No. Cat.
AC 1011 R1. Tampn 1 x 70 ml
20 x 3 ml R2. Sustrato 20 x 3 ml
R3. Tartrato 10 frascos
SAM STAB Estabilizador 1 frasco
METODO COLORIMETRICO
PRINCIPIO(1)
fosfatasa cida
1-naftil-fosfato + H2O fosfato + 1-naftol
1-naftol+sal de 4-cloro-2-metilfenildiazonio*
colorante azo
* = Sal TR Fast Rojo
PREPARACION DE LA MUESTRA
Suero. La muestra puede ser estabilizado mediante la adicin
de
1 gota de cido actico estabilizador (STAB SAM) a 1 ml de
suero. Estable durante 3 das a +2 y +8C 24 horas a +15 y
+25C.
Suero. La muestra se estabiliza aadiendo una gota de cido
actico (estabilizador 4) a 1 ml de suero. Es estable durante
3
das entre +2 y +8C 24 horas entre +15 y +25C.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes Concentraciones en la prueba
R1 Tampn
Tampn citrato 75 mmol/l, pH 5,2
R2. Sustrato
1-naftilfosfato 10 mmol/l
Sal TR Fast Rojo 2,5 mmol/l
R3. Tartrato
Tartrato sdico 135 mmol/l
SAM STAB Estabilizador
Acido actico 3 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Slo para diagnstico in vitro. No pipetear con la boca.
Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
Hojas Sanitarias y de Seguridad estn disponibles si se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados slo para los
propsitos indicados por personal adecuado cualificado de
laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACIN DE REACTIVOS
R1. Bufer
Contenios listos para su uso. Estable hasta la fecha de
caducidad si se conserva entre +2 to +8C.
Para la Fosfatasa cida total:
R2. Substrato (R2A) Disuelva el contenido de 1 botella de
sustrato R2 en 3 ml
de tampn R1. Estable durante 5 das si se conserva entre
+2 y +8C o 24 horas entre +15 to +25C, Conservese
protegido de la luz.
Para la Fosfatasa cida no prosttica:
R2. Substrato (R2B)
Disuelva el contenido de 1 botella de sustrato R2 en 3 ml de
tampn R1. A continuacin, transfiera el contenido a un
vial de tartrato R3. Estable durante 5 das si se conserva
entre +2 to +8C o 24 horas entre +15 y +25C,
Conservese protegido de la luz.
MATERIALES SUMINISTRADOS Tampn
Sustrato
Tartrato Estabilizador
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Srum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).
PRPROCEDIMIENTO
FOSFATASA CIDA TOTAL
Seleccione ACP en la pantalla Run Test (Realizar anlisis) y
lleve a
cabo un blanco de agua de la forma indicada.
Pipetee en un tubo de ensayo:
Muestra 0,05 ml
Reactivo 0,5 ml
Mzclelo, incbelo durante exactamente 5 minutos a 37 C o
durante 10 minutos a 20-25 C y asprelo en Rx Monza.
FOSFATASA CIDA NO PROSTTICA
Seleccione NACP en la pantalla Run Test (Realizar anlisis) y
lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.
Pipetee en un tubo de ensayo:
Muestra 0,05 ml
Reactivo 0,5 ml
Mzclelo, incbelo durante exactamente 5 minutos a 37 C o
durante 10 minutos a 20-25 C y asprelo en Rx Monza.
CALIBRACIN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de suero fisiolgico y suero de
calibracin
de nivel 3 de Randox para la calibracin. Es aconsejable
cambiar
el lote del reactivo para la calibracin o seguir lo indicado por
los
procedimientos de control de calidad.
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MANUAL/ RX MONZA AC 1011
FOR MANUAL USE
Longitud de onda: Hg 405 nm
Cubeta: 1 cm de espesor
Temperatura: 30/37C
Medicin: frente al aire
Pipetear en tubos de ensayo:
Macro Semi Micro
Muestra 0,20 ml 0,10 ml
Solucin de reactivo R2 2,00 ml 1,00 ml
Mezclar, verter en la cubeta e incubar durante 5 min a
30/37C.
Leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar el
tiempo
simultneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min.
CLCULO MANUAL
Para calcular la actividad de la fosfatasa cida en la
muestra
utilizar las frmulas siguientes:
Fosfatasa cida total:
U/l = 743 x Asol.2a/min Fosfatasa prosttica:
U/l = 743 x (Asol.2a/min - Asol.2b/min)
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de
controles al menos una vez al da. Los valores obtenidos
debern
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repeticin excluye error, se
debern seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programacin del instrumento y la lmpara
2. Comprobar que todo material est limpio.
3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6.
Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
INTERFERENCIA
Sueros hemolticos e ictricos (bilirrubina > 3 mg/dl)
interfieren
en la prueba.
VALORES NORMALES EN SUERO (2)
30C 37C
Fosfatasa cida total
Hombre Hasta 4,2 U/l Hasta 4,7 U/l
Mujer Hasta 3,0 U/l Hasta 3,7 U/l
Fosfatasa cida
prosttica Hasta 1,5 U/l Hasta 1,6 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geogrfica de la poblacin.
CARACTERSITCAS ESPECFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TCNICA Se
obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un
analizador RX monza. FOSFATASA CIDA TOTAL LINEALIDAD El mtodo es
lineal hasta una concentracin de 159 U/I. Si la concentracin
sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 4 con una
solucin del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo.
Multiplique el resultado por 5. SENSIBILIDAD La concentracin
detectable mnima de fosfatasa cida con un nivel aceptable de
precisin se determin en 2,53 U/l. PRECISION Intraensayo Nivel 2
Nivel 3 Media (U/l) 15.9 43.6 DE 0.717 1.90 CV(%) 4.51 4.35 n 20 20
Interensayo Nivel 2 Nivel 3 Media (U/l) 15.9 43.6 DE 1.05 3.04
CV(%) 6.59 6.98 N 20 20 CORRELACIN Se compar este mtodo (Y) con
otro mtodo comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente
ecuacin de regresin lineal: Y = 0.9723 X + 0.5527 y un coeficiente
de correlacin de r = 0,9925 se analizaron 42 muestras de pacientes
abarcando un rango de 2,5 a 93,9 U/l. FOSFATASA CIDA NO PROSTTICA
LINEALIDAD El mtodo es lineal hasta una concentracin de 80,8 U/I.
Si la concentracin sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir
1 + 4 con una solucin del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de
nuevo. Multiplique el resultado por 5. SENSIBILIDAD La concentracin
detectable mnima de fosfatasa cida con un nivel aceptable de
precisin se determin en 1,76 U/l. PRECISION Intraensayo Nivel 1
Nivel 2 Media (U/l) 6.65 17.8 DE 0.289 0.765 CV(%) 4.34 4.30 n 20
20 Interensayo Nivel 1 Nivel 2 Media (U/l) 6.65 17.8 DE 0.295 0.892
CV(%) 4.43 5.01 n 20 20
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MANUAL/ RX MONZA AC 1011
CORRELATION
Se compar este mtodo (Y) con otro mtodo comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuacin de regresin
lineal:
Y = 0.9653 X + 0.1849
y un coeficiente de correlacin de r = 0,9971.
se analizaron 40 muestras de pacientes abarcando un rango de
2,1 a 80,2 U/l.
REFERENCIAS
1. Hillmann, G.J., Clin. Chem. Clin. Biochem. 1971; 9: 273.
2. Silver, D., et al., J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983; 21:
519.
Revisado 05 Sep 11 bm
Rev. 002
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ALDOLASA (ALS) Fructosa-1,6-difosfato aldolasa
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el anlisis cuantitativo in vitro de Aldolasa en suero y
plasma.
Este producto es adecuado para su utilizacin de forma Manual
y
en el analizador RX monza.
No. Cat.
AD 189 R1. Tampn/Sustrato 5 x 20 ml
5 x 20 ml R2. NADH 2 x 1 ml
R3. GDH/TIM/LDH 1 vial
PRINCIPIO
La aldolasa convierte la fructosa-1,6-difosfato (F-1,6-DP) en
gliceraldehdo-3-fosfato (GAP) y dihidroxiacetona fosfato (DAP).
La adicin de triosafosfato isomerasa (TIM), glicerolfosfato
deshidrogenada (GDH) y NADH convierte la dihidroxiacetona
fosfato en glicerol-1-fosfato. El grado de la reaccin de la
aldolasa
se mide por la disminucin de la absorbancia a 340 nm como
consecuencia de la conversin de NADH en NAD+.
aldolasa
F-1,6-DP GAP + DAP
TIM
GAP DAP
GDH
2DAP + 2NADH + 2H+ 2Glicerol-1-P + 2 NAD+
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes Concentracin en la prueba
R1. Tampn/Sustrato
Tampn colidina 51 mmol/l, pH 7,4
Monoyodoacetato 0,27 mmol/l
F-1,6-DP 2,7 mmol/l
R2. NADH 0,23 mmol/l
R3. GDH/TIM/LDH
GDH 326 mU/ml
TIM 4,35 U/ml
LDH 616 mU/ml
Ammonium Sulphate > 35%
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnstico in vitro. No pipetear con la
boca.
Respetar las precauciones normales necesarias que se
requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad estn disponibles si
se
desean.
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propsito por personal de laboratorio cualificado, y bajo
condiciones de laboratorio apropiadas.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD
R1. Tampn/Sustrato
Reconstituir un vial de Tampn/Sustrato 1 con 20 ml
e agua bidestilada. Es estable durante 2 semanas si se
conserva entre +2 y +8C.
R2. NADH Reconstituir un vial de NADH 2 con 1 ml de agua
bidestilada. Es estable durante 4 semanas entre +2 y +8C.
R3. GDH/TIM/LDH
Componentes listos para su uso. Es estable hasta la
fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C.
ESTABILIDAD Y PREPARACIN DEL REACTIVO EN
FUNCIONAMIENTO PARA RX MONZA
Prepare el reactivo en funcionamiento como se indica en la
tabla
siguiente:-
Tampn/Sustrato NADH GDH/TIM/LDH
R1 R2 R3 2.5ml 0.05ml 0.01ml
5.0ml 0.1ml 0.02ml
10.0ml 0.2ml 0.04ml
Estable durante 8 horas entre +2 y +8C.
MATERIALES SUMINISTRADOS Tampn/Sustrato
NADH
GDH/TIM/LDH
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Calibrador de aldolasa de Randox (No. Cat. AD 5000)
Control de Aldolasa Randox Nivel 2 (Cat. No. AD 5001) y
Nivel
3 (Cat. No. AD 5002)
0.9% Solucin NaCl.
PROCEDIMIENTO
Seleccione ALS en la pantalla Run Test (Realizar anlisis) y
lleve a
cabo un blanco de agua de la forma indicada.
Pipetee en un tubo de ensayo:
SO* Patrn Muestra
S1
H2O de doble destilacin 35l --- ---
ALS CAL --- 35 l ---
Muestra --- --- 35 l
Reactivo en funcionamiento 450 l 450 l 450 l
Mzclelo, incbelo durante 5 minutos a 37C o 10 minutos a 20-
25C y asprelo en RX monza.
*blanco de reactivo
CALIBRACIN PARA RX MONZA
El uso de solucin salina y Randox Aldolasa srica de
calibracin
se recomienda para la calibracin. LA calibracin se
recomienda
a los cambios en el lote del reactivo como se indica en los
procedimientos de control de calidad.
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MANUAL/ RX MONZA AD 189
PARA USO MANUAL
Longitud de onda: 340 nm (Hg 365 nm o Hg 334 nm)
Cubeta: 1 cm de espesor
Temperatura: 37C
Medicin: frente a muestra blanco
Pipetear en tubos de ensayo:
Muestra Blanco Calibrador Muestra
Muestra 0,2 ml 0,2 ml 0,2 ml
Tampn/Sustrato (R1 - 2,50 ml 2,50 ml
Solucin NaCl 0,9% 2,50 ml - -
NADH (R2) - 0,05 ml 0,05 ml
GDH/TIM/LDH (R3) - 0.01 ml 0,01 ml
Mezclar la muestra, R1, R2 y R3 y se incuba durante 5 minutos
a
37C y leer la absorbancia A1 contra el blanco de muestra.
Dejar reposar a 37C durante exactamente 20 minutos. despus
de la primera lectura y entonces medir la absorbancia A2
frente
al blanco.
* Si A1 es < 0,95 diluir 1+1 con NaCl al 0,9% y repetir el
test.
Multiplicar el resultado por 2.
MANUAL DE CLCULO
Para calcular la actividad aldolase utilizar la siguiente
frmula:
(A1 - A2) Muestra
x Conc. de calibrador
(A1 - A2) Calibrador
CONTROL DE CALIDAD
Los controles de Aldolasa Randox Niveles 2 y 3 se
recomiendand
para el control de calidad diario. Se deberan procesar 2 niveles
de
control al menos una vez por da. Los valores que se obtengan
deberan entrar dentro de un rango especfico. Si los valores no
estan dentro de este rango, y la repeticin excluye el error, se
deberan lleva a cabo los siguientes pasos:
1. Comprobar la programacin del instrumento y la lmpara.
2. Comprobar que todo material est limpio.
3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento
bacteriano
puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de
los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
INTERFERENCIA
La hemlisis interfiere en la prueba.
VALORES DE REFERENCIA(1)
Suero: Hasta 7,6 U/l (37C)
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geogrfica de la poblacin.
CARACTERSTICAS DE RENDIMIENTO ESPECFICAS
Se obtuvieron las siguientes caractersticas de rendimiento
mediante un analizador RX monza y un modo de clula de flujo
a 37C.
LINEALIDAD
El mtodo es lineal hasta una concentracin de 106 U/l. Si la
concentracin sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir
1+4 con una solucin de NaCl del 0,9% y debe someterse a
ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 5.
SENSIBILIDAD La concentracin detectable mnima de Aldolasa con un
nivel aceptable de precisin se determin en 1,73 U/l.
PRECISION Precisin intraensayo Nivel 2 Nivel 3 Media (U/l) 6.36
19.1 DE 0.295 0.854 CV(%) 4.64 4.47 n 20 20 Precisin interensayo
Nivel 2 Nivel 3 Media (U/l) 6.36 19.1 DE 0.402 1.35 CV(%) 6.32
7.09
n 20 20
CORRELACIN
El mtodo de Randox (Y) se compar con otro mtodo
comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuacin de
regresin lineal:
Y = 0,9815 X + 0,183
y un coeficiente de correlacin r = 0,9917.
Se analizaron 42 muestras con valores de entre 2,46 y 89,86
U/l.
REFERENCIA
1. Feissli, S., et al., (1966). Klin. Wschr. 44: 390.
Revisado el 15 de Sep 2010 bm
Rev. 001
-
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ALT Alanina Aminotransferasa
IFCC
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el anlisis cuantitativo in vitro de Alanina
Aminotransferasa en el suero y plasma. Este producto es
adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.
No. Cat.
AL 1200 R1a. Tampn/Substrato 1 x 70 ml
20 x 2 ml R1b. Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato 20 x 2 ml
AL 1205 R1a. Tampn/Substrato 1 x105 ml
10 x 10 ml R1b. Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato 10 x 10 ml
AL 1268 R1a. Tampn/Substrato 1 x 105 ml
5 x 20 ml R1b. Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato 5 x 20 ml
AL 2360 R1a. Tampn/Substrato 5 x 100 ml
5 x 100 ml R1b. Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato 5 x 100 ml
METODO UV
Este es un mtodo estandard optimizado de acuerdo con las
concentraciones recomendadas por la IFCC.
PRINCIPIO
ALT
-oxoglutarato + L-alanina L-glutamato + piruvato LD
piruvato + NADH + H+ L-lactato + NAD+
MUESTRA
Suero, plasma heparinizada o plasma EDTA.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes Concentracin en la Prueba
R1a. Tampn/Substrato
Tampn Tris 100 mmol/l, pH 7,5
L-alanina 0,6 mol/l
R1b. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato -oxoglutarato 15 mmol/l LD
1,2 U/ml
NADH 0,18 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Slo para diagnstico in vitro. No pipetear con la boca.
Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo
de reactivos de laboratorio.
La solucin R1a contiene Azida Sdica. Evitar su ingestin o el
contacto con la piel o las membranes mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante
agua. En caso de contacto con los ojos o ingestin, buscar
atencin mdica inmediatamente.
La Azida Sdica reacciona con el plomo y cobre de las
caeras, formando cidos potencialmente explosivos. Cuando
se desechen dichos reactivos, limpiar con grandes volmenes
de agua para evitar la formacin de cidos. Las superficies
metlicas expuestas, debern limpiarse con hidrxido de sodio
al 10%.
Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propsito por personal de laboratorio cualificado, y
bajo condiciones de laboratorio apropiadas.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y
ESTABILIDAD
R1a. Tampn/Substrato
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y+8C
R1b. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato Reconstituir un vial de
Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato R1b con el volumen apropiado de Tampn/Substrato
R1a:
2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AL 1200)
10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AL 1205) 20 ml para el kit de 5
x 20 ml (AL 1268)
Estable durante 14 das entre +2 y+8C e 24 horas
entre+15 y +25C.
Cat. No. AL 2360 5 x 100 ml
Reconstituir un vial of Enzima/Coenzima/-oxoglutarato R1b con
una parte de Tampn/Substrato R1a y despus
transferir todo el contenido a la botella R1a, enjuagando la
botella R1b varias veces. Estable durante 14 das entre +2
y+8C e 24 horas entre+15 y +25C.
R1 = Bufer/Substrato/Enzima/Coenzima/-oxoglutarato R2 =
Ninguno
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampn/Substrato
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sueros de Calibracin Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
Salino RX series (Cat. No. SA 3854)
-
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MANUAL AL 1200
PROCEDIMIENTO Aspire H2O de doble destilacin y realice una nueva
calibracin de la ganancia en el modo de clula de flujo. Seleccione
ALT en la pantalla Run Test (Realizar anlisis) y lleve a cabo un
blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en un tubo de ensayo:
Muestra 0,05 ml Reactivo 0,5 ml Mzclelo y asprelo en Rx Monza.
CALIBRACIN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de suero
fisiolgico y suero de calibracin de nivel 3 de Randox para la
calibracin. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la
calibracin o seguir lo indicado por los procedimientos de control
de calidad. PARA USO MANUAL Longitud de onda: 340 nm (Hg 334 nm o
Hg 365 nm) Cubeta: 1 cm de espesor
Temperatura: 30/37C Medicin: frente al aire Pipetear en la
Cubeta: Macro Micro Muestra 0,2 ml 0,1 ml R1.
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato 2,0 ml 1,0 ml Mezclar. Leer la
absorbancia inicial despus de 1 minuto. Leer de nuevo tras 1, 2 y 3
minutos. Observar si el cambio de absorbancia por minuto est entre
0,11 y 0,16 a 340 nm/Hg 334 nm 0,06 y 0,08 a Hg 365 nm usar slo los
valores para los 2 primeros minutos del clculo. CLCULO MANUAL Para
calcular la actividad de la ALT utilizar la siguiente frmula: U/l =
1746 x A 340 nm/min U/l = 1780 x A Hg 334 nm/min U/l = 3235 x A Hg
365 nm/min NORMALIZACIN El suero de calibracin de nivel 3 de Randox
sigue lo indicado en el material de referencia JSCC TS01 de ALT.
CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox,
Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos
niveles distintos de controles al menos una vez al da. Los valores
obtenidos debern encontrarse dentro del rango especificado. Si los
valores se encuentran fuera del rango y su repeticin excluye error,
se debern seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programacin
del instrumento y la lmpara. 2. Comprobar que todo material est
limpio. 3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin 5. Comprobar la fecha de
caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el
Soporte Tcnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
INTERFERENCIA
Evitar la hemlisis ya que interfiere con el anlisis.
VALORES DE NORMALIDAD EN SUERO(1)
25C 30C 37C
Hombres hasta 22 U/l hasta 29 U/l hasta 40 U/l
Mujeres hasta 17 U/l hasta 22 U/l hasta 31 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y
localidad
geogrfica de la poblacin.
CARACTERSITCAS ESPECFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TCNICA Se
obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante
un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37 C.
SENSIBILIDAD La concentracin detectable mnima de ALT con un
nivel
aceptable de precisin se determin en 7,99 U/l.
LINEALIDAD
Este mtodo es lineal hasta 500 U/l. Si la concentracin
sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + x con una
solucin del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de
nuevo. Multiplique el resultado por x + 1.
PRECISION
Anlisis (Intra) Nivel 2 Nivel 3
Media (U/l) 38.9 134
DE 1.79 1.59
CV(%) 4.61 1.19
n 20 20
Anlisis (Inter)
Nivel 2 Nivel 3
Media (U/l) 38.9 134
DE 1.78 5.22
CV(%) 4.58 3.90
n 20 20
CORRELACIN
Este mtodo (Y) se compar con otro mtodo comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuacin de regresin
lineal:
Y = 0,99 X + 17,2
y un coeficiente de correlacin r = 0,9935
Se analizaron 47 muestras de pacientes con valores de entre
18 y 522 U/l.
REFERENCIAS
1. International Federation of Clinical Chemistry,
Scientific
Committee. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1980; 18:
521-534.
Revisado el 04 Apr 11, bm
Rev. 004
-
AMONIACO (NH3) Mtodo Enzimtico - UV
MANUAL
PARA SU USO
Para la determinacin cuantitativa in vitro de Amonaco en
plasma.
Este producto es adecuado para su utilizacin en Manual.
No. Cat.
AM 1054 R1a. Reactivo 20 x 3 ml
20 x 3 ml R1b. Tampn 70 ml
R2. GLDH 1,0 ml
CAL. Patrn 5,5 ml
RELEVANCIA CLNICA
La mayor fuente de amoniaco en circulacin es el tracto
gastrointestinal. En condiciones normales, el amoniaco se
metaboliza a la urea por las enzimas hepticas. Muchas
enfermedades, tanto heredadas como adquiridas, causan un
incremento en los niveles de amoniaco (hiperamonemia). Las
deficiencias heredadas de las enzimas del ciclo de la urea son
la mayor causa de hiperamonemia en nios. La hiperamonemia
adquirida est provocadas por una enfermedad heptica,
insuficiencia renal o el sndrome de Reye. Un nivel de
amoniaco
elevado resulta txico para el sistema nervioso central.
PRINCIPIO(1)
GLDH
-oxoglutarato + NH3 + NADH glutamato + NAD+
El amonaco se combina con -oxoglutarato y NADH en presencia de
glutamato deshidrogenasa (GLDH) para formar glutamato y NAD
+. La correspondiente disminucin
de la absorbancia a 340 nm es proporcional a la concentracin de
amonaco en plasma.
(1)
MUESTRA(2)
Plasma heparinizado o EDTA plasma.
Se obtiene sangre venosa sin estancar y se conserva en un
bao
de hielo. El plasma se separa dentro de 30 min. El ensayo de
amonaco debera llevarse a cabo inmediatamente. El plasma
puede conservarse durante 2 horas a +4C.
COMPOSICIN DEL REACTIVO
Componentes Concentracin inicial de las soluciones
R1a. Reactivo
NADH 0,16 mmol/l
-oxoglutarato 2 mmol/l R1b. Tampn
Trietanolamina 0,15 mol/l, pH 8,6
R2. GLDH 1200 U/ml
CAL. Patrn See lot specific insert
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnstico in vitro. No pipetear con la
boca.
Respetar las precauciones normales necesarias que se
requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Las soluciones R1b, R2 y CAL contienen azida sdica. Evitar
su
ingestin o contacto con la piel y mucosas. En caso de
contacto
con la piel, lavar inmediatamente el rea afectada con agua
abundante. En caso de ingestin o contacto con los ojos
llamar
inmediatamente a un mdico.
La azida sdica reacciona con el cobre y el plomo de las
tuberas,
lo que podra producir azidas explosivas. Cuando se desheche
este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar
la
formacin de estas azidas. Las superficies metlicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sdica deben ser
lavadas
con hidrxido sdico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad estn disponibles si
se
desean.
Por favor, desechar todos los materials Biolgicos y Qumicos de
acuerdo a las pautas locales.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propsitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio
ESTABILIDAD Y PREPARACIN DE LOS REACTIVOS
R1a. Reactivo
Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo R1a con
3 ml de Tampn R1b. Es estable 24 horas entre +15 y
+25C 2 das entre +2 y +8C.
R1b. Tampn
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
especificada cuando se conserva entre +2 y +8C.
R2. GLDH
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
especificada cuando se conserva entre +2 y +8C.
CAL. Patrn
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
especificada cuando se conserva entre +2 y +8C.
R1 = Reactivo/Tampn
R2 = GLDH
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo
Tampn
GLDH
Patrn
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO
PROPORCIONADOS
Controles Randox de Amonio Etanol:
NIvel 1 (Cat. No. EA 1366)
Nivel 2 (Cat. No. EA 1367)
Nivel 3 (Cat. No. EA 1368)
-
MANUAL - AMONIACO - AM 1054 PAGINA 2 DE 2
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda: 340 nm
Cubeta: 1 cm de espesor
Temperatura: 25/30/37C
Medicin: Frente al aire
Procedimiento Macro
Pipetear en la cubeta:
Blanco de Patrn Muestra
Reactivo
Muestra --- --- 0,2 ml
Agua destilada 0,2 ml --- ---
Patrn --- 0,2 ml ---
Reactivo (R1) 3,0 ml 3,0 ml 3,0 ml
Mezclar, dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia
inicial
de la muestra y del blanco (A1).
GLDH (R2) 0,02 ml 0,02 ml 0,02 ml
Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de
la
muestra y del blanco (A2).
Procedimiento Semi Micro
Pipetear en la cubeta: Blanco de Patrn Muestra
Reactivo Muestra --- --- 0,1 ml Agua destilada 0,1 ml ---
---
Patrn --- 0,1 ml --- Reactivo (R1) 1,5 ml 1,5 ml 1,5 ml Mezclar,
y dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial
de la muestra y del blanco (A1). GLDH (R2) 0,01 ml 0,01 ml 0,01
ml
Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la
muestra y del blanco (A2). CONTROL DE CALIDAD
Los controles Randox de Amonio Etanol Nivel 1, Nivel 2 y
Nivel 3 se recomiendan para el control diario de calidad
Deberan
utilizarse como mnimo dos niveles de controles una vez al da.
Los
valores obtenidos deberan entrar dentro de un rango
determinado.
Si estos valores se salen de ese rango aun habindolo repetido,
se
deben seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar los ajustes del instrumento y el foco de luz.
2. Comprobar la limpieza de todo el equipo.
3. Comprobar el agua y la presencia del algn posible agente
contaminante que pueda interferir en los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin.
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y los componentes
del
mismo.
6. Contactar con el Servicio Tcnico de Laboratorios Randox.
Irlanda del Norte (028) 94422413.
CLCULOS
Ablanco = Blanco A1 - Blanco A2
Amuestra = Muestra A1 - Muestra A2
Utilizando un patrn:
Amuestra - Ablanco
Conc. de x Patrn de conc.
Amonaco = Apatrn - Ablanco
INTERFERENCIA
La hemlisis interfiere con el anlisis.
En muestras normales se observa un pequeo cambio de
absorbancia. Esto puede ser aumentado aadiendo 0,3 ml de
muestra en vez de 0,2 ml. para el procedimiento macro y 0,15
ml
de muestra en vez de 0,1 ml para el procedimiento semi
micro.
Para utilizar un mtodo completamente automatizado de
amonaco recomendamos No. Cat. AM 1015.
VALORES NORMALES (2)
Amonaco en plasma: 10 - 47 mol/l 0,17 -0,80 g/ml
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geogrfica de la
poblacin.
LINEALIDAD
El mtodo es lineal hasta 1180 mol/l (20 g/ml).
REFERENCIAS
1. Dewan J.G., Biochem J., 1938; 32: 1378.
2. Mondzac A., Ehrlich G.E., Seegmiller J.E., J Lab Clin.
Med.,
1965; 66: 526.
Revisado el 26 Abril 2010 bm
Rev. 001
-
PGINA 1 DE 3
ANTITROMBINA III (AT III) SEMIAUTOMTICO
INDICACIONES Determinacin cuantitativa in vitro de la
antitrombina III (AT III) en plasma humano mediante el mtodo
cromognico. El producto es adecuado para uso con mtodos manuales o
semiautomticos.
Nm. cat. ANT 2754 R1a. Reactivo de trombina 4 x 2 ml 26 ml R1b.
Tampn 1 x 10 ml R2. Sustrato 4 x 2 ml
RELEVANCIA CLNICA La antitrombina III es un inhibidor de las
proteasas plasmticas del tipo serina. Una funcin importante de la
antitrombina III es inhibir la actividad de la trombina. Por lo
general, la velocidad de inhibicin de la trombina causada por la
antitrombina III es lenta (actividad antitrombina progresiva). Sin
embargo, dicha velocidad puede aumentar miles de veces en presencia
de heparina (actividad cofactor de la heparina). Tolefsen y
Blank(1) han descubierto otro inhibidor rpido de la trombina que
depende de la heparina, el cofactor II de la heparina, en el plasma
humano. Esta protena puede interferir en las mediciones de
antitrombina III, especialmente a concentraciones de heparina
elevadas (2 unidades/ml USP).
PRINCIPIO En este mtodo de dos fases(2) se aade trombina a la
solucin diluida de plasma que contiene antitrombina III en
presencia de exceso de heparina. Tras un perodo de incubacin
inicial (fase 1) la actividad residual de la trombina se determina
con un sustrato cromognico especfico de la trombina (fase 2). La
actividad residual de la trombina es inversamente proporcional a la
concentracin de antitrombina III. Con el fin de conferir
especificidad para la antitrombina III, este sistema de ensayo
utiliza un concentracin final de heparina ms baja, en la cual la
inactivacin de la trombina aumentada por heparina, debida al
cofactor II de la heparina, es desdeable. Adems, el cofactor II de
la heparina humana reacciona ms fcilmente con la trombina humana
que con la bovina(3). As, este sistema de ensayo presenta mayor
especificidad para la antitrombina III al utilizar trombina
bovina.
MUESTRA Plasma citrado. Plasma diluido 1+40 en NaCl al 0,9%.
RECOGIDA DE MUESTRAS Y PREPARACIN (4) Mezcle nueve partes de
sangre recin extrada con una parte de citrato trisdico al 3,2%
(0,109 mol/l). Evite la hemlisis y la contaminacin de la muestra
sangunea con fluidos corporales. Se deben rechazar las muestras que
contengan menos del 90% del volumen previsto de llenado.
Centrifugue la sangre durante 15 minutos a 1500 g. Realice el
anlisis en un lapso de 4 horas, si las muestras se conservan entre
20 y 25C. Si la prueba no se realiza antes de las 4 horas, el
plasma puede mantenerse congelado a -20C hasta 2 semanas, o a -70C
durante un mximo de 6 meses. Para obtener ms detalles sobre la
recogida de muestras consulte el documento NCCLS H21-A3.
No postergue el mezclado de la sangre con el anticoagulante.
Evite la formacin de espuma en la muestra. Utilice
exclusivamente recipientes de plstico o de vidrio
siliconado. Las muestras turbias, ictricas, lipmicas y
hemolizadas
pueden generar resultados errneos. La congelacin y consiguiente
descongelacin de
muestras de plasma que contengan clulas residuales podra generar
membranas celulares daadas que pueden afectar a los resultados.
El las muestras de plasma con un hematocrito fuera del intervalo
del 20 al 55% puede que la concentracin de anticoagulante errnea,
por lo que debe ajustarse el anticoagulante segn proceda.
COMPOSICIN DEL REACTIVO
Contenido Concentracin inicial
de las soluciones
R1a. Reactivo de trombina
Trombina bovina liofilizada 8 UI/ml
R1b. Tampn
Tampn tris 90 mmol/l, pH 8,2
R2. Sustrato
Tosyl-Gly-Pro-Arg-4-nitranilida
acetato 2,5 mmol/l
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DE
SEGURIDAD
Solo para uso diagnstico in vitro. No pipetee con la boca.
Aplique las precauciones habituales necesarias para la
manipulacin de reactivos de laboratorio.
El reactivo tampn de la antitrombina III (R1b) contiene
acida
sdica. Evite la ingestin o el contacto con la piel o las
mucosas. En caso de contacto con la piel, lave el rea
afectada con abundante agua. En caso de contacto con los
ojos o ingestin, busque atencin mdica de inmediato.
La acida sdica reacciona con las tuberas de plomo y cobre,
con el consiguiente riesgo de generacin de acidas
explosivas.
Al eliminar estos reactivos, hgalo con gran cantidad de agua
para evitar la acumulacin de acidas. Las superficies
expuestas de metal deben limpiase con hidrxido sdico al
10%.
Estn disponibles, previa peticin, las fichas tcnicas de
salud
y seguridad.
Los reactivos deben utilizarse solo para la finalidad
prevista y por personal de laboratorio
adecuadamente cualificado, en unas condiciones de
laboratorio apropiadas.
-
PGINA 2 DE 3
MANUAL ANT 2754
ESTABILIDAD Y PREPARACIN DE LOS
REACTIVOS
R1a. Reactivo de trombina
Reconstituya un vial de reactivo de trombina (R1a) con
2 ml de tampn (R1b).
Estable durante 2 das entre +15 y +25C; 14 das
entre +2 y +8C; 30 das a -20C.
R1b. Tampn
Contenido listo para su uso. Estable hasta la fecha de
caducidad cuando se almacena a una temperatura entre
+2 y +8C.
R2. Sustrato
Reconstituya un vial de sustrato (R2) con 2 ml
de agua desionizada.
Estable durante 8 das entre +15 y +25C; 14 das
entre +2 y +8C; 90 das a -20C.
Precaliente las partes alcuotas de reactivo de
trombina (R1a) y sustrato (R2) a +37C antes de
utilizarlas.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo de trombina
Tampn
Sustrato
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Calibrador de coagulacin Randox (N. cat. CG5037)
Controles de coagulacin Randox de nivel 1, 2 y 3 (N. cat.
CG5021, CG5022 y CG 5023)
Micropipetas
Micropuntas
Analizador de coagulacin foto-ptico
Temporizador
PROCEDIMIENTO
Pipetear en una cubeta
Muestra diluida/control/calibrador 100 l
Reactivo de trombina (R1) 100 l
Mezclar bien e incubar a +37C durante 3 minutos, aadir
sustrato (R2) 100 l
Mezclar bien y tras 5 segundos leer la absorbancia inicial a
405 nm. Volver a leer la absorbancia transcurridos 30
segundos.
Determinar la velocidad de cambio de absorbancia
(Abs/min)
Siga las instrucciones del fabricante del instrumento
para realizar la prueba.
CALIBRACIN
Para la calibracin se recomienda el calibrador de coagulacin
Randox (valor especfico de lote). Use salino como calibrador
del 0%, con el calibrador de coagulacin Randox como 50% y
100%. Se recomienda calibrar cambiando el lote de reactivo o
tal como indican los procedimientos de control de calidad.
CLCULO DE LOS RESULTADOS
Trace el grfico de la Abs/min obtenida con cada calibrador
de antitrombina III frente al % de antitrombina III
correspondiente en papel de escala lineal.
La antitrombina III en las muestras de plasma del paciente
se
puede determinar mediante la interpolacin de la curva de
calibracin.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los controles de coagulacin Randox de nivel
1, 2 y 3 para el control de calidad diario. Deben analizarse
tres niveles de controles al menos una vez al da. Los
valores
obtenidos deben situarse dentro de un intervalo
determinado. Si estos valores estn fuera del intervalo y la
repeticin excluye un posible error, debe procederse como
sigue:
1. Comprobar los parmetros del instrumento.
2. Comprobar que todo el equipo utilizado est limpio.
3. Comprobar los contaminantes, como un crecimiento
bacteriano, que pueden contribuir a la obtencin de
resultados imprecisos.
4. Comprobar la temperatura de la reaccin.
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y su contenido.
6. Pngase en contacto con el servicio tcnico de atencin
al cliente de Randox Laboratories, llamando al telfono
+44 (0) 28 9442 2413 (Irlanda del Norte).
VALORES PREVISTOS
Los valores normales con el reactivo Randox AT III estn
comprendidos dentro del 75 y 125%.
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango de referencia, ya que pueden existir diferencias entre
instrumentos, laboratorios y poblaciones locales.
INTERFERENCIA
Evite utilizar muestras fuertemente hemolizadas y lipmicas,
ya que pueden interferir con el ensayo.
Se comprobaron los siguientes analitos, hasta los niveles
que
se indican, sin encontrar interferencias:
Bilirrubina conjugada 12 mg/dl
Bilirrubina libre 12 mg/dl
Intralpidos 300 mg/dl
Triglicridos 320 mg/dl
Hemoglobina 140 mg/dl
CARACTERSTICAS DE RENDIMIENTO
Se han obtenido los siguientes datos de rendimiento
mediante un coagulmetro semiautomtico a +37C.
SENSIBILIDAD
La actividad mnima detectable de la antitrombina III se
determina como 30,0%.
LINEALIDAD
Este mtodo es lineal hasta un 130% de actividad de la
antitrombina III. Si la muestra excede este valor, diluya
las
muestras previamente diluidas (1+40) de plasma an ms 1+1
con salino al 0,9% y repita el anlisis. Multiplique el
resultado
por 2.
-
PGINA 3 DE 3
MANUAL ANT 2754
PRECISIN
Intraensayo
Normal Patolgica
Media (%) 102 65,5
DE 1.89 2,35
CV (%) 1.86 3,59
n 20 20
Interensayo
Normal Patolgica
Media (%) 85.0 59.4
DE 1.86 2.24
CV (%) 2.19 3.77
n 20 20
CORRELACIN
Este mtodo (Y) se ha comparado con otro mtodo
disponible en el mercado (X) y se ha obtenido la siguiente
ecuacin de regresin lineal:
Y = 1,00X + 0,22
y un coeficiente de correlacin de 1,00
Se analizaron 40 muestras de pacientes que abarcaron un
rango del 38,3 al 113,7%
REFERENCIAS
1. Tolefsen DM and Blank MK, J. Clin. Invest. 68: 589-596,
1981.
2. Odegard OR, Lie M and Abildgaard U: Thromb Res. 6:
287-294, 1975.
3. Friberger P, Egberg N, Holmer E, Hellgren M and
Blomback M, Thromb. Res. 25: 433-436, 1982.
4. Rosemary Biggs, Human blood Coagulation,
Haemostasis and Thrombosis, Blackwell Scientific
Publications, Oxford, England, 1972.
Revisado 25 may 12 rw
Rev. 002
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ALP Fosfatasa Alcalina
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el anlisis cuantitativo in vitro de la Fosfatasa
Alcalina
(ALP) en suero yl plasma. Este producto es adecuado para un
uso manual o en el analizador Rx Monza.
No. Cat.
AP 542 R1a. Tampn 1 x 70 ml
20 x 3 ml R1b. Substrato 20 x 3 ml
AP 307 R1a. Tampn 1 x 105 ml
10 x 10 ml R1b. Substrato 10 x 10 ml
METODO COLORIMETRICO (1)
Este es una mtodo estndar optimizado de acuerdo a las
recomendaciones del Deutsche Gesellschaft fr Klinische
Chemie.
PRINCIPIO
ALP
p-nitrofenilfosfato + H2O fosfato + p-nitrofenol
MUESTRA(2)
Suero o plasma heparinizado.
Las muestras son estables durante 5 das cuando se conservan
entre +2 y +8C.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes Concentraciones en la Prueba
R1a. Tampn
Tampn Dietanolamina 1 mol/l, pH 9,8
MgCl2 0,5 mmol/l
R1b. Substrato
p-nitrofenilfosfato 10 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Slo para diagnstico in vitro. No pipetear con la boca.
Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo
de reactivos de laboratorio.
La solucin R1a contiene Azida Sdica. Evitar su ingestin o el
contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante
agua. En caso de contacto con los ojos o ingestin, buscar
atencin mdica inmediatamente.
La Azida Sdica reacciona con el plomo y cobre de las
caeras, formando cidos potencialmente explosivos. Cuando
se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volmenes
de agua para evitar la formacin de cidos. Las superficies
metlicas expuestas, debern limpiarse con hidrxido de sodio
al 10%.
La Solucin R1a contiene dietanolamina que puede daar
seriamente los ojos y que es daino si se traga. Evitar la
ingestin y llevar proteccin adecuada para los ojos.
Hojas Sanitarias y de Seguridad estn disponibles si se
desean.
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propsito por personal de laboratorio cualificado, y
bajo condiciones de laboratorio apropiadas.
ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS
REACTIVOS
R1a. Tampn
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8C.
R1b. Substrato
Reconstituir un frasco de Substrato R1b con el
volumen apropiado de Tampn R1a:-
3 ml para el kit de 20 x 3 ml (AP 542) 10 ml para el kit de 10 x
10 ml (AP 307)
Estable durante 30 das entre +2 y +8C 3 das entre
+15 y +25C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampn
Substrato
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Srum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).
Salino (Cat. No. SA 3854)
PROCEDIMIENTO
Aspire H2O de doble destilacin y realice una nueva
calibracin de la ganancia en el modo de clula de flujo.
Seleccione ALP en la pantalla Run Test (Realizar anlisis) y
lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.
Pipetee en un tubo de ensayo:
Muestra 0,01 ml
Reactivo 0,5 ml
Mzclelo y asprelo en Rx Monza.
CALIBRACIN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de suero
fisiolgico y suero de calibracin de nivel 3 de Randox para la
calibracin. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la
calibracin o seguir lo indicado por los procedimientos de control
de calidad.
PARA USO MANUAL
Longitud de onda: Hg 405 nm
Cubeta: 1 cm de espesor
Temperatura: 25C, 30C, 37C
Medicin: frente al aire
Pipetear en la cubeta: Macro Semi- Micro
Micro
Muestra 0,05 ml 0,02 ml 0,01 ml
Reactivo (25C, 30C, 37C) 3,00 ml 1,00 ml 0,50 ml
Mezclar, leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar
simultneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 minutos.
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MANUAL / RX MONZA - ALP - FOSFATASA ALCALINA - AP542 / AP 307
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MANUAL CALCULO
Utilizar la siguiente formula para calcular la actividad
de ALP:
U/l = 3300 x A 405 nm/min MACRO U/l = 2760 x A 405 nm/min
SEMI-MICRO U/l = 2760 x A 405 nm/min MICRO
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de controles al menos una vez al da. Los valores
obtenidos debern encontrarse dentro del rango especificado.
Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repeticin
excluye
error, se debern seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programacin del instrumento y la lmpara
2. Comprobar que todo material est limpio.
3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte (028) 94422413.
INTERFERENCIA
Evitar la hemlisis ya que interfiere con el anlisis. Los
siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles
y
se encontr que no interfieren:
Bilirrubina 300 mol/l (17 mg/dl) Intralpidos 2%
Triglicridos 22,75 mmol/l (2010 mg/dl)
Hemoglobina 1 g/l (100 mg/dl)
VALORES DE NORMALIDAD EN EL SUERO
25C 30C 37C
Hombres/Mujeres 60-170 U/l 73-207 U/l 98-279 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y
localidad
geogrfica de la poblacin.
CARACTERSITCAS ESPECFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TCNICA Los
siguientes datos de rendimiento se obtuvieron mediante el
analizador Rx Monza a una temperatura de 37 oC.
SENSIBILIDAD
La concentracin mnima detectable de ALP con un nivel
aceptable de precisin se ha determinado en 49,9 U/l
LINEALIDAD
El mtodo es lineal hasta 1609 U/l. Si la concentracin
sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 9 con
una
solucin del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de
nuevo. Multiplicar el resultado por 10.
PRECISION
Anlisis Intra
Nivel 2 Nivel 3
Media (U/l) 262 486
DE 8.11 9.49
CV(%) 3.10 1.95
n 20 20
Anlisis Inter
Nivel 2 Nivel 3
Media (U/l) 262 486 DE 11.59 17.01
CV(%) 4.43 3.50
n 20 20
CORRELATION
Este mtodo (Y) se compar con otro mtodo disponible en
el mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuacin de regresin
lineal:
Y = 1.076X - 14.5
y un coeficiente de correlacin de r = 0.9975
se hicieron anlisis a 43 pacientes abarcando un rango de 52 a
965 U/l.
REFERENCIAS
1. Rec. GSCC (DGKC); J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1972;
10: 182.
2. Englehardt A., et al, Aerztl Labor 1970 16 42.
Revisado el 10 Sep 2010 bm
Rev. 001
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AST Aspartato Aminotransferasa IFCC MANUAL PARA SU USO Para el
anlisis cuantitativo in vitro de aspartato aminotransferasa (AST)
en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilizacin de
forma manual y en el analizador Rx Monza. Cat. No. AS 1202 R1a.
Tampn/Sustrato 1 x 70 ml 20 x 2 ml R1b. Enzima/Coenzima/ 20 x 2 ml
-oxoglutarato AS 1204 R1a Tampn/Sustrato 1 x 105 ml 10 x 10 ml R1b
Enzima/Coenzima/ 10 x 10 ml -oxoglutarato AS 1267 R1a
Tampn/Sustrato 1 x 105 ml 5 x 20 ml R1b Enzima/Coenzima/ 5 x 20 ml
-oxoglutarato AS 2359 R1a Tampn/Sustrato 5 x 100 ml 5 x 100 ml R1b
Enzima/Coenzima/ 5 x 100 ml -oxoglutarato METODO UV Este es un
mtodo estndar optimizado segn las concentraciones recomendadas por
la IFCC. SIGNIFICADO CLINICO(1,2,3,4)
Las aminotransferasas son un grupo de enzimas que catalizan
las
inter conversiones de aminocidos y -oxocidos por medio de la
transferencia de grupos amino. La GOT (aspartato aminotransferasa o
transaminasa de oxaloacetato glutamato) se ha encontrado en el
citoplasma y mitocondrias de las clulas estudiadas. En caso de un
ligero dao del tejido como por ej. el hgado, la forma predominante
de la GOT en suero es la del citoplasma, con una cantidad ms pequea
proviniente de las mitocondrias. Un dao ms severo del tejido dar
como resultado una mayor liberacin de enzima mitocondrial. Los
niveles elevados de AST pueden ser una seal de infarto de
miocardio, enfermedad heptica, distrofia muscular y dao de rganos.
Los msculos del corazn son los que muestran ms actividad de sta
enzima, sin embargo tambin se ha encontrado en el cerebro, hgado,
mucosa gstrica, tejido adiposo y riones humanos. La IFCC recomienda
actualmente (1980) procedimientos estandarizados para los anlisis
de GOT incluyendo:- 1. optimizacin de las concentraciones de
substrato. 2. Empleo de tampones Tris (en lugar de fosfato, el cual
se ha
demostrado que inhibe la recombinacin de la apoenzima con el
fosfato piridoxal).
3. Preincubacin de suero y tampn combinado para permitir que
tengan lugar posibles reacciones con NADH.
4. Substrato de inicio (-oxoglutarato) 5. Activacin de fosfato
piridoxal opcional. Este es un mtodo estndar optimizado de acuerdo
a las
recomendaciones de la IFCC. PRINCIPIO
El -oxoglutarato reacciona con la L-aspartato en presencia de
GOT para formar L-glutamato mas oxaloacetato. La reaccin indicadora
utiliza el oxaloacetato para la determinacin cintica del consumo de
NADH.
AST -oxoglutarato + L-aspartato L-glutamato + oxaloacetato
MDH oxaloacetato + NADH + H+ L-malato + NAD+
EXTRACCION Y PREPARACION DE MUESTRAS (5)
Suero:- Use serum free from hemolysis.
Plasma:- Se puede utilizar EDTA o heparina como
anticoagulante.
El plasma se deger separar de las clulas durante la
hora siguiente a su extraccin. Las muestras se debern
refrigerar si no se utilizan inmediatamente:-
Las muestras que se almacenen durante ms de 3 das se
debern congelar a -20C.
COMPOSICIN DEL REACTIVO
Componentes Concentraciones en la prueba
R1a. Tampn/Sustrato
Tampn Tris 80 mmol/l, pH 7,5
L-aspartato 240 mmol/l
R1b. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato -oxoglutarato 12 mmol/l MDH
420 U/l
LD 600 U/l
NADH 0,18 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnstico in vitro. No pipetear con la
boca.
Respetar las precauciones normales necesarias que se
requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
La solucin R1a contiene Azida Sdica. Evitar su ingestin o
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la
piel,
lavar inmediatamente el rea afectada con agua abundante. En
caso de ingestin o contacto con los ojos llamar
inmediatamente
a un mdico.
La Azida Sdica reacciona con el cobre y el plomo de las
tuberas, lo que podra producir azidas explosivas. Cuando se
deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para
evitar la formacin de estas azidas explosivas. Las
superficies
metlicas que hayan sido puestas en contacto con la azida
sdica
deben ser lavadas con hidrxido sdico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad estn disponibles
si
se desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propsitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
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MANUAL/RX MONZA - AST - AS 1202/ AS 1204/ AS 1267/ AS 2359 PAGE
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ESTABILIDAD Y PREPARACIN DE LOS REACTIVOS
R1a. Tampn/Sustrato
Listo para su uso. Estables hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +2 y +8C.
R1b. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato Reconstituir un vial de
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato 2
con el volumen adecuado de Tampn/Sustrato 1:
2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AS1202)
10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AS1204)
20 ml para el kit de 5 x 20 ml (AS1267)
Es estable durante 14 das conservado entre +2 y +8C
24 horas entre +15 y +25C
Cat. No. AS 2359 5 x 100 ml
Disolver el contenido de una botella de Enzima/
Coenzima/-oxoglutarato 2 con un pequeo volumen de Tampn/Sustrato
1 y luego transferir el contenido a la botella 1, enjuagando varias
veces la botella 2. Es estable
durante 14 das cuando se conserva entre +2 y +8oC 24
horas entre +15 y +25oC.
MATERIALES SUMINISTRADOS Tampn/Sustrato
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibracin Randox Nivel 3
(Cat. No. CAL 2351)
Salino (Cat. No. SA 3854)
PROCEDIMIENTO
Aspire H2O de doble destilacin y realice una nueva
calibracin
de la ganancia en el modo de clula de flujo. Seleccione AST en
la
pantalla Run Test (Realizar anlisis) y lleve a cabo un blanco
de
agua de la forma indicada.
Pipetee en un tubo de ensayo:
Muestra 0.05 ml
Reactivo 0.5 ml
Mix and aspirate into the Rx Monza.
CALIBRACIN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de suero fisiolgico y suero de
calibracin
de nivel 3 de Randox para la calibracin. Es aconsejable
cambiar
el lote del reactivo para la calibracin o seguir lo indicado por
los
procedimientos de control de calidad.
PARA USO MANUAL
Longitud de onda: 340 nm (Hg 334 nm Hg 365 nm)
Cubeta: 1 cm de espesor
Temperatura: 25/30/37C
Medicin: Frente al aire
Pipetear en cubeta: Macro Micro
Muestra 0,2 ml 0,1 ml
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato 2 2,0 ml 1,0 ml
Mezclar, leer la absorbancia inicial al cabo de 1 min. Leer
de
nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min. Observar si la variacin de la
absorbancia por minuto se sita entre
0,11 y 0,16 a 340/Hg 334 nm
0,06 y 0,08 a Hg 365 nm
para el clculo usar slo los valores obtenidos durante los 2
primeros minutos.
MANUAL CALCULOS
Para calcular la actividad de la GOT utilizar las frmulas
siguientes:
U/l = 1746 x A 340 nm/min U/l = 1780 x A Hg 334 nm/min U/l =
3235 x A Hg 365 nm/min
NORMALIZACIN
El suero de calibracin de nivel 3 de Randox sigue lo indicado
en
el material de referencia JSCC TS01 de AST.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de
controles al menos una vez al da. Los valores obtenidos
debern
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repeticin excluye error, se
debern seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programacin del instrumento y la lmpara.
2. Comprobar que todo material est limpio.
3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento
bacteriano
puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de
los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
ESPECIFICIDAD/INTERFERENCIA(6,7)
La hemlisis bruta producir falsos resultados elevados.
Se deber tomar en consideracin los efectos de varios frmacos
en la actividad de La GOT en los casos de pacientes que estn
recibiendo grandes dosis de frmacos.
Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes
niveles y
se encontr que no interfieren:
Hemoglobina 250 mg/dl
Bilirrubina libre 25 mg/dl)
Bilirrubina conjugada 25 mg/dl)
Triglicridos 1000 mg/dl)
Intralipid 200 mg/dl
Young et cols y Friedman et cols dan una lista de sustancias
y
condiciones que se conoce que afectan a la actividad in vivo de
La
GOT . La integridad de esta lista y la exactitud de la
informacin
que en ella se suministra no representa necesariamente la
opinin de Randox Laboratories, Ltd.
VALORES NORMALES EN SUERO(8,9)
25C 30C 37C
Hombre: Hasta 18 U/l Hasta 25 U/l Hasta 37 U/l
Mujer : Hasta 15 U/l Hasta 21 U/l Hasta 31 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geogrfica de la
poblacin.
CARACTERSITCAS ESPECFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TCNICA
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron
mediante
el analizador Rx Monza a una temperatura de 37oC.
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MANUAL/RX MONZA - AST - AS 1202/ AS 1204/ AS 1267/ AS 2359 PAGE
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LINEALIDAD
Este mtodo es lineal hasta una concentracin de 562 U/l. Si
la
concentracin sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1
+
9 con una solucin de NaCl del 0,9% y debe someterse a ensayo
de nuevo. Multiplicar el resultado por 10.
SENSIBILIDAD
La concentracin detectable mnima de AST con un nivel
aceptable de precisin se determin en 9,3 U/l.
PRECISION
Anlisis (Intra)
Nivel 2 Nivel 3
Media (U/l) 35.6 153
DE 1.66 1.47
CV(%) 4.65 4.63
n 20 20
Anlisis (Inter)
Nivel 2 Nivel 3
Media (U/l) 35.6 153
DE 1.77 7.10 CV(%) 4.86 4.63
n 20 20
CORRELATION
Este mtodo (Y) se compar con otro mtodo disponible en el
mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuacin de regresin
lineal:
Y = 1.07X + 4.9
y un coeficiente de correlacin de r = 0.9975
se hicieron anlisis a 43 pacientes abarcando un rango de 28
a
559 U/l.
REFERENCIAS
1. Wroblewski F, La Due J.S: Ann Intern Med. 1956; 45: 801.
2. Wroblewski F, La Due J.S: Proc Soc Exp Biol Med 1956;
91: 569.
3. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al: Clin Chem 1977; 23:
887.
4. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al: J.Clin Chem Clin
Biochem 1980; 18: 521-534.
5. Tietz N W: Fundamentals of Clinical Chemistry ed 3.
Philadelphia, WB Saunders Co. 1987, pg 372.
6. Young D S, et al: Clin Chem 1975, 21; No5.
7. Friedman RB, et al: Clin Chem 1980, 26; No4.
8. Wallnofer H, Schmidt.E, Schmidt FW, eds: Synopsis der
Leberkrankheiten Stuttgart, Georg Thieme Verlag, 1974.
9. Thefeld W, et al: Dtsch Med Wschr 1974; 99: 343.
Revisado 10 Sep 10 bm
Rev. 001
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AMILASA (AMY) Etilideno Bloqueado-pNPG7
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para la determinacin cuantitativa in vitro de la Amilasa en
el
suero y orina. Este producto es adecuado para su utilizacin
de forma manual y en el analizador Rx Monza.
No. Cat.
AY 2751 R1a. Tampn 1 x 50 ml
20 x 2 ml R1b. Substrato 20 x 2 ml
AY 1580 R1a. Tampn 1 x 105 ml
20 x 5 ml R1b. Substrato 20 x 5 ml
AY 1582 R1a. Tampn 2 x 105 ml 9 x 20 ml R1b. Substrato 9 x 20
ml
METODO COLORIMETRICO(1,2)
El mtodo utiliza etilideno bloqueado
p-nitrofenil-maltoeptaosida como substrato. Tambin se
utiliza
en este mtodo el indicador enzima glucosidasa, utilizado
para
liberar el p-nitrofenol. La glucosa terminal del sustrato se
bloquea qumicamente, previniendo la divisin por el enzima
indicador.
-amilasa
etilideno-G7 pNP etilideno -Gx + Gx-pNP
-glucosidase
Gx-pNP glucosa + pNP-glucosido
- glucosidasa
pNP-glucosido glucosa + pNP
G = glucosa
pNP = paranitrofenol
x = 2 to 5
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado u orina.
Diluir la orina 1+2 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el
resultado
por 3.
COMPOSICIN DEL REACTIVO
Componentes Concentracin Inicial de los Reactivos
R1a. Tampn
Tampn Pipes 50 mmol/l, pH 7.0 Cloruro de Calcio 5.0 mmol/l
Cloruro Sdico 50 mmol/l R1b. Substrato
Tampn Pipes 12.5 mmol/l, pH 7.0
etilideno-G7 pNP 1.0 mmol/l
-glucosidasa 12 U/ml
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Slo para diagnstico in vitro. No pipetear con la boca.
Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo
de reactivos de laboratorio.
La Solucin R1a contiene Azida Sdica. Evitar su ingestin o el
contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante
agua. En caso de contacto con los ojos o ingestin, buscar
atencin mdica inmediatamente.
La Azida Sdica reacciona con el plomo y cobre de las
caeras, formando cidos potencialmente explosivos. Cuando
se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volmenes
de agua para evitar la formacin de cidos. Las superficies
metlicas expuestas, debern limpiarse con hidrxido de sodio
al 10%.
Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles. Los reactivos
deben utilizarse solamente para su propsito por personal de
laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio
apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO Reconstituir el
contenido de un frasco de Substrato R1b con el volumen apropiado de
Tampn R1a:- 2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AY 2751)
5 ml para el kit de 20 x 5 ml (AY 1580)
20 ml para el kit de 9 x 20 ml (AY 1582) Estable durante 21 das
entre +2 y + 8oC.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampn
Substrato
MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Suero de Calibracin Randox Nivel 3
(No. Cat. CAL 2351).
NOTA
Evitar la hemlisis ya que puede disminuir los resultados.
Evitar la contaminacin del reactivo, muestras y material de
cristal por medio de la saliva o sudor, dado que poseen
altos
contenidos de amilasa. No pipetear con la boca.
PROCEDIMIENTO
Seleccione AMY en la pantalla de prueba de funcionamiento y
lleve a cabo un blanco de agua segn las instrucciones.
Pipetee en un tubo de ensayo:
Muestra 0.01 ml
Reactivo 0.5 ml
Mezclar y aspirar en el Monza RX
CALIBRACIN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de Calibracin Randox nivel 3 para la
calibracin. Se recomienda calibrar cada cambio de lote del
reactivo o como se indica en los procedimientos de control
de calidad.
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MANUAL/ RX MONZA AY 2751
PARA USO MANUAL
Longitud de onda: 405 nm (400-420 nm)
Cubeta: 1 cm de espesor
Temperatura: 37C
Medicin: frente al aire
Pipetee en una cubeta:
Muestra 0.02 ml
Reactivo 1.0 ml
Mezclar, leer la absorbancia inicial despus de 60 segundos y
al
mismo tiempo iniciar el temporizador. Leer de nuevo pasados
1, 2 y 3 minutos.
CLCULO MANUAL
Para calcular la actividad de la amilasa utilizar la
siguiente
frmula:
U/l = 4712 x A 405 nm/min
NORMALIZACIN
El suero de Calibracin Randox nivel 3 es trazable a los
materiales de referencia amilasa IFCC456 y BCR476.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros
Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deber de analizar
dos niveles de controles al menos una vez al da. Los valores
obtenidos debern encontrarse dentro del rango especificado.
Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repeticin
excluye
error, se debern seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programacin del instrumento y el origen de luz.
2. Comprobar que todo material est limpio.
3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento de
bacterias puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
VALORES NORMALES
Suero: hasta 95 U / l (37C)
Orina: Aleatorias hasta 490 U / l (37C)
24 horas de orina hasta 450 U/24 horas (37C)
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango de referencia para considerar las diferencias en edad,
sexo, dieta y localizacin geogrfica.
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador de
Rx
Monza en el modo de flujo de clulas a 37C.
LINEARIDAD
El mtodo es lineal hasta una concentracin de 880 U / l.
Diluir las muestras con mayor concentracin en 1 + 9 con
0,9% de Solucin NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado
por 10.
SENSIBILIDAD
La concentracin mnima detectable de la amilasa con un nivel
aceptable de precisin ha sido determinada en 17.9 U/l.
PRECISION
Intraensayo
Nivel 2 Nivel 3
Media (U/l) 72.1 251
DE 3.17 7.35
CV (%) 4.39 2.93
n 20 20
Interensayo
Nivel 2 Nivel 3
Media (U/l) 72.1 251
DE 3.97 8.81
CV (%) 5.50 3.51
n 20 20
CORRELACION
Se compar este mtodo (Y) con otro mtodo comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuacin de regresin
lineal:
Y = 1.077 X - 8.548
con un coeficiente de correlacin r = 0.9963
se analizaron 49 muestras de pacientes abarcando un rango de
28 - 838 U/l.
REFERENCIAS
1. Ranscher, E. et al (1986) Fresenius Z. Analyt. Chem. 324:
304.
2. Kruse - Jarres, J.D. et al (1989). J. Clin. Chem. Clin.
Biochem. 27: 103.
Revised 14 Sep 10 bm
Rev. 001
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PGINA 1 DE 3
CALCIO (Ca) Mtodo Colorimtrico
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el anlisis cuantitativo in vitro de Calcio en el suero,
plasma y
orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el
analizador RX monza.
No. Cat.
CA 590 CAL. Patrn 5.5 ml
200 ml R1. Tampn 1 x 100 ml
R2. Cromgeno 1 x 100 ml
R3. EDTA 10 ml
METODO COLORIMETRICO(1)
O-cresolftalena complexona sin desproteinizacin.
PRINCIPIO Los iones calcio forman un complejo violeta con la
o-cresolftalena complexona en medio alcalino.
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado u orina. Diluir la orina
1 + 1 en NaCl 0,9%. Multiplicar el resultado por 2.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes Concentraciones iniciales
de las soluciones
CAL. Patrn
Calcio Vedi inserto lotto-specifico
R1. Tampn
2-amino-2-metil-
propan-1-ol 3.5 mol/l, pH 10,7
R2. Cromgeno
o-Cresolftalena 0,16 mmol/l
complexona
8-hidroxiquinolina 6,89 mmol/l
Acido clorhdrico 60 mmol/l
R3. EDTA 150 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnstico in vitro. No pipetear con la
boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se
requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad estn disponibles si
se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propsitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD
Todas las soluciones estn listas para su uso. Mantener las
botellas cerradas despus de utilizarlas. Estables hasta la fecha
de
caducidad cuando se conservan entre +15 y +25C.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS DE TRABAJO Y
ESTABILIDAD
Mezclar volmenes iguales de las soluciones R1 y R2 en
cantidad
suficiente para el nmero de muestras que se vayan a ensayar.
Estable durante 7 das cuando se conserve entre +2 y +8C 3
das entre +15 y +25C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Patrn
Tampn
Cromgeno
EDTA
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Srum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
PROCEDIMIENTO DE NOTA
Si la muestra tiene un color fuerte intrnseca (hemoglobina:
>
200 mg/dl, bilirrubina> 20 mg/dl, o lipemia marcada), un
blanco de muestra se debe ejecutar. (Ver abajo)
Esta prueba es muy sensible, por lo tanto el uso de material
desechable es aconsejable. Recipientes de vidrio debern
lavarse
con cido clorhdrico diluido y luego enjuagar con agua
destilada
antes de su uso.
PROCEDIMIENTO
Seleccione Calcio CPC en la pantalla de Ejecucin de prueba y
llevar a cabo un blanco de agua segn las instrucciones.
Pipetear en la cubeta:
Blanco de reactivo S0 Patrn S1 Muestra
ddH20 12.5 l - -
Muestra - - 12.5 l
Patrn - 12.5 l -
Reactivo 500 l 500 l 500 l
Mezclar, incubar por 5 min a +25, +30 o +37C Inserte la
cubeta
en el porta-RX monza celda de flujo y pulse Leer.
Para ejecutar un blanco de muestra:
Despus de medir la absorbancia de la muestra de acuerdo con
el procedimiento de ensayo, aadir una gota de solucin R3
(EDTA) a la muestra y la solucin del reactivo. Cuando las
muestras han convertido incoloro (despus de aproximadamente
10 segundos) insertar la cubeta en el porta-RX monza celda de
flujo y pulse leer. Este resultado debe ser manualmente resta
de
la muestra para obtener el valor corregido de calcio.
CALIBRACIN PARA RX MONZA
Recomend el uso de CAL Patrn proporcionado en el kit. La
calibracin se recomienda con un cambio en la cantidad de
reactivo o como se indica por procudures de control de
calidad.
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PGINA 2 DE 3
MANUAL/ RX MONZA CA 590
PARA USO MANUAL Longitud de onda: Hg 578 nm (550-590 nm)
Espectrofotmetro: 570 nm Cubeta: 1 cm de espesor Medicin: frente a
blanco de reactivo slo se requiere un blanco por serie Temperatura:
+20 y +25C/+37C 1. Para ensayos individuales Pipetear en tubos de
ensayo: Blanco de Reactivo Patrn Muestra Muestra --- --- 25 l Agua
destilada 25 l --- --- CAL --- 25 l --- Solucin R1 0,5 ml 0,5 ml
0,5 ml Solucin R2 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml Mezclar, leer la absorbancia
de la muestra (Amuestra) y del patrn (Apatrn) frente al reactivo
blanco al cabo de 5 a 50 min. 2. Para ensayos en serie Pipetear en
tubos de ensayo: Blanco de Reactivo Patrn Muestra Muestra --- ---
25 l Agua destilada 25 l --- --- Patrn --- 25 l --- Reactivo de
trabajo 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml Mezclar, leer la absorbancia de la
muestra (Amuestra) y del patrn (Apatrn) frente al reactivo blanco
al cabo de 5 a 50 min. Aunque la absorbancia se puede leer durante
los 5 a 50 minutos siguientes, el tiempo de intervalo desde la
adicin de la muestra a la lectura deber ser exactamente el mismo
para el Patrn/Control y Muestra. Para ejecutar un blanco de
muestra: Despus de medir la absorbancia de la muestra de acuerdo
con el procedimiento de ensayo, aadir una gota de solucin R3 (EDTA)
a la muestra y la solucin del reactivo. Cuando las muestras han
convertido incoloro (despus de aproximadamente 10 segundos)
insertar la cubeta en el porta-RX monza celda de flujo y pulse
leer. Este resultado debe ser manualmente resta de la muestra para
obtener el valor corregido de calcio. CALCULOS Amuestra
Concentracin = x Concentracin del patrn (mmol/l) Apatrn (mmol/l)
Amuestra Concentracin = x Concentracin del patrn (mg/dl) Apatrn
(mg/dl)
STANDARDISATION
Randox Calibration Serum Level 3 is traceable to Calcium
reference material NIST 909b and NIST 956b.
CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados
Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario.
Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al da.
Los valores obtenidos debern encontrarse dentro del rango
especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su
repeticin excluye error, se debern seguir los siguientes pasos: 1.
Comprobar programacin del instrumento y la lmpara 2. Comprobar que
todo material est limpio. 3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el
crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reaccin 5. Comprobar la fecha de
caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el
Soporte Tcnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
INTERFERENCIA/LIMITACIONES Los siguientes analitos se analizaron
hasta los siguientes niveles y se encontr que no interfieren:
Bilirrubina 500 mol/l (29 mg/dl) Intralipid 2% Triglicrido 22,75
mmol/l (2010 mg/dl) Hemoglobina 6 g/l (600 mg/dl) Gadodiamida
(OMNISCAN: se utiliza en la RM) interfiere con el calcio srico
causando que los niveles bajos (3). VALORES NORMALES(2) Suero: 2,02
-2,60 mmol/l (8,10-10,4 mg/dl) Orina: 2,5 -6,2 mmol/24hrs (100 -
249 mg/24 hrs) Se recomienda que cada laboratorio establezca su
propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y
localidad geogrfica de la poblacin. CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron
mediante el analizador RX monza en el modo de cubeta a +37C. SUERO
LINEALIDAD El mtodo es lineal hasta 5,67 mmol / l (22,7 mg/dl). Las
muestras con concentraciones superiores deben diluirse 1 +1 con el
0,9% de NaCl y volver a ensayar, multiplicar el resultado por 2.
SENSIBILIDAD La concentracin mnima detectable de calcio con un
nivel aceptable de precisin se determin como 1,16 mg/dl (0,290
mmol/l). PRECISION Intra Assay Nivel 1 Nivel 2 Mean (mg/dl) 9.02
12.4 SD 0.220 0.249 CV(%) 2.44 2.01 n 20 20 Inter Assay Nivel 1
Nivel 2 Mean (mg/dl) 9.02 12.4 SD 0.352 0.317 CV(%) 3.91 2.56 n 20
20
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MANUAL/ RX MONZA CA 590
PGINA 3 DE 3
CORRELACION
Este mtodo (Y) se compar con otro mtodo disponible en el
mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuacin de regresin
lineal:
Y=0.9914 X -0.089
con un coeficiente de correlacin r = 0.9931
Se analizaron 42 muestras con valores de entre 4,1 y 16,5
mg/dl.
ORINA
LINEALIDAD El mtodo es lineal hasta 7,13 mmol / l (28,6 mg /
dl). Las muestras con concentraciones superiores deben diluirse 1
+1 con el 0,9% de NaCl y volver a ensayar, multiplicar el resultado
por 2.
SENSIBILIDAD
La concentracin mnima detectable de calcio con un nivel
aceptable de precisin se de