Universidad Austral de Chile Facultad de Ciencias Instituto de Ciencias Marinas y Limnológicas Escuela de Biología Marina PROFESOR PATROCINANTE: Dr. Jorge Navarro Azócar Instituto de Ciencias Marinas y Limnológicas Facultad de Ciencias Histología de gónada y glándula digestiva durante la gametogénesis de Ostrea chilensis, Philippi, 1845 (Bivalvia, Ostreidae), expuesta a la Toxina Paralizante del Molusco (TPM) Tesis de grado presentada como parte de los requisitos para optar al título de Biólogo Marino Camila Tatiana Oyarzún Ruiz VALDIVIA-CHILE 2015
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PROFESOR PATROCINANTE: Histología de gónada y glándula ...
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Universidad Austral de Chile
Facultad de Ciencias
Instituto de Ciencias Marinas y Limnológicas
Escuela de Biología Marina
PROFESOR PATROCINANTE:
Dr. Jorge Navarro Azócar
Instituto de Ciencias Marinas y Limnológicas
Facultad de Ciencias
Histología de gónada y glándula digestiva durante la gametogénesis de
Ostrea chilensis, Philippi, 1845 (Bivalvia, Ostreidae), expuesta a la Toxina
Paralizante del Molusco (TPM)
Tesis de grado presentada como parte de
los requisitos para optar
al título de Biólogo Marino
Camila Tatiana Oyarzún Ruiz VALDIVIA-CHILE
2015
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COMISIÓN EVALUADORA
Profesor Patrocinante:
Dr. Jorge Navarro Azócar
Instituto de Ciencias Marinas y Limnológicas
Facultad de Ciencias
Universidad Austral de Chile
Profesor Co-patrocinante:
Dr. Juan Roberto Jaramillo
Instituto de Ciencias Marinas & Limnológicas
Facultad de Ciencias
Universidad Austral de Chile
Profesor Informante:
Dr. Orlando Garrido
Instituto de Ciencias Marinas & Limnológicas
Facultad de Ciencias
Universidad Austral de Chile
3
A mis abuelos, mis ángeles en el cielo
A mis magnánimos ejemplos de esfuerzo y superación;
mis padres…por y para Mónica y Camilo.
4
Agradecimientos
5
ÍNDICE GENERAL
1. RESUMEN 08-09
1.1. Summary 10-11
2. INTRODUCCIÓN 12-23
2.1. Antecedentes de la Ostra Chilena 12-14
2.2. Floraciones Algales Nocivas 14-17
2.2.1. Antecedentes Alexandrium catenella 16-17
2.3. Sistema Inmune en moluscos filtradores 17-22
2.3.1. La Respuesta Inmune 19
2.3.2. Hemocitos, las células inmuno-competentes 19-20
2.3.2.1. Función Inmune de Hemocitos 20-22
2.4. HIPOTESIS 22
2.5. OBJETIVOS 23
3. MATERIALES Y MÉTODOS 24-35
3.1. Obtención de ejemplares adultos de Ostrea chilensis 24-25
3.2. Diseño experimental 25-30
3.2.1. Protocolos de histología en Ostrea chilensis 27-30
I. Protocolo 1. Disección y medición 27
II. Protocolo 2. Deshidratación / inclusión de las muestras 28-29
III. Protocolo 3. Proceso histológico 29-30
3.3. Determinación de las longitudes en los ejes corporales 31
3.4. Proporción sexual en Ostrea chilensis 31
3.5. Análisis microscópico y fotográfico 31
3.6. Análisis en Sigma Scan Pro 5.0 32-35
3.6.1. Análisis de datos 33-35
3.6.1.1. Área de cobertura folicular 33-34
3.6.1.2. Porcentaje de cobertura de folículos 34-35
4. RESULTADOS 36-67
4.1. Análisis de datos 36-41
4.1.1. Longitud de los ejes corporales 36
6
4.1.2. Análisis estadístico aplicado a Ejes corporales 37-39
4.1.3. Proporción sexual en reproductores de Ostrea chilensis 40-41
4.2. Histología 42-49
4.2.1. Análisis microscópico y fotográfico 43-49
4.2.1.1. Intestino 43
4.2.1.2. Estómago 44
4.2.1.3. Glándula digestiva 45
4.2.1.4. Tejido gonadal 46-49
4.2.1.5. Células de la hemolinfa 49
4.3. Respuestas comparativas para tratamientos CTRL-TXC 50-62
4.3.1. Glándula digestiva 50-60
4.3.1.1 Respuesta inmune innata en glándula digestiva 51-59
i. Perdida del epitelio interno estrellado en túbulos digestivos 51
ii. Infiltración de hemocitos (diapédesis) 52-54
iii. Respuesta inflamatoria en intestino 54
iv. Agregación de hemocitos 55
v. Desestabilización de los epitelios de la glándula digestiva 56
vi. Túbulos digestivos e intestino con presencia de células caliciformes 57-58
vii. Constricción del epitelio en túbulos digestivos 58-59
viii. Evidencia de células de Alexandrium catenella en el intestino 59-60
4.3.2. En el tejido gonadal 60-62
4.3.2.1 Respuesta inmune innata en tejido gonadal 61
i. Proceso de reabsorción en restos de folículos 61-62
4.4. Área de cobertura folicular 63
4.5. Análisis de imágenes en Sigma ScanPro 5.0 64-67
4.5.1. Análisis de los datos calculados en la Σ de área de folículos 64-65
4.5.2. Análisis del % de cobertura folicular 65-67
5. DISCUSIÓN y CONCLUSIONES 68-74
6. BIBLIOGRAFÍA 75-86
7
LISTA DE ABREVIATURA
TPM; Toxina Paralizante del Molusco
CTRL; Control
TXC; Contaminado/Tóxico
FAN; Floraciones Algales Nocivas
8
1. RESUMEN
El cierre de valvas se describe como la primera línea de defensa física en los
bivalvos marinos frente al contacto con las microalgas nocivas. En adición a esto, se
han desarrollado otros mecanismos de alimentación para reducir el consumo de las
microalgas toxica (e.j. producción de pseudoheces). La siguiente línea de defensa es el
sistema inmune (Cheng, 1996), el cual es atribuido a las células denominadas
hemocitos. Estas son responsables del reconocimiento, fagocitosis, y eliminación de
partículas externas no deseadas (Janeway, 1994; Franchini et al., 1995; Chu, 2000).
El objetivo de este estudio fue determinar los efectos de la exposición de la ostra
chilena (Ostrea chilensis) a una dieta conteniendo al dinoflagelado toxico Alexandrium
catenella, productor de la Toxina Paralizante del Molusco (TPM), durante un periodo de
90 días, el cual incluye el periodo gametogénico. Se utilizaron técnicas de histología y
de análisis fotográfico para poder identificar y exponer los posibles mecanismos y/o
respuestas frente a la presencia de la Toxina Paralizante del Molusco sobre los tejidos
de la glándula digestiva y en el tejido gonadal de los individuos reproductores de O.
chilensis.
Los análisis histológicos realizados al grupo de ostras expuestas a la dieta toxica
mostraron daños en los túbulos de la glándula digestiva, en el epitelio interno del
estómago e intestino. La respuesta inflamatoria en el intestino se observó con una
pérdida de los cilios en el epitelio interno del surco intestinal. También se presentó una
agregación de hemocitos en el tejido conectivo que rodea el epitelio externo de los
túbulos digestivos, a lo que se adiciona una pérdida de la conformación estrellada del
epitelio interno digestivo. Por otro lado, en muestras del grupo control se observa una
9
baja agregación de hemocitos en el tejido conectivo y una clara conformación estrellada
del epitelio interno de los túbulos digestivos, la cual indica un activo proceso de
alimentación.
En el tejido gonadal, las ostras alimentadas con A. catenella presentaron procesos
de reabsorción de restos de gametos distribuidos en el lumen de los folículos, siendo
los ovocitos y los espermatozoides fagocitados por los hemocitos. Por otro lado se
observa una mayor proporción de folículos del tipo masculino durante todo el periodo
experimental.
El análisis entre tratamientos y la presencia de células de Alexandrium catenella en
el tracto digestivo, permite confirmar que Ostrea chilensis tiene la capacidad de ingerir
las células toxicas. El presente trabajo contribuye a entender a nivel histofisiológico los
mecanismos defensivos empleados por el bivalvo Ostrea chilensis para contrarrestar o
reducir la exposición a la Toxina Paralizante del Molusco.
10
1.1. SUMMARY
The valves closure is described as the first line of physical defence of marine
bivalve against the contact to the harmful algae. In addition, other feeding behaviors
have been developed by bivalves to minimize the consumption of the harmful algae (i.e.
pseudofaeces production). Next line of defense is the immune system (Cheng, 1996),
which is mainly attributed to cells called hemocytes. These are responsible for
recognition, phagocytosis and oxidative removal of foreign particles (Janeway, 1994;
Franchini et al, 1995; Chu, 2000).
This study aims to look the implications in Ostrea chilensis to the exposure to a
diet containing the toxic dinoflagellate Alexandrium catenella, a paralytic shellfish
poisoning (PSP) producer, for 90 days, which includes the period of gametogenesis. For
this purpose, histological techniques and analysis at the microscopic and photographic
level was used, with this was possible identify the effects on gonadal tissue and
digestive gland of breeding stock.
Histologycal analyses for the group of oysters exposed to toxic diet showed
damage in to the digestive gland. The inflammatory response in the intestine was
observed with a loss of cilia on the internal groove epithelium. Also, hemocytes
aggregation in the connective tissue surrounding the outer epithelium of digestive
tubules presented, with an addition of loss a starry internal conformation of the digestive
epithelium. On the other hand, in samples from the control group a low hemocyte
aggregation in connective tissue and a clear starry conformation of the internal digestive
tubule epithelium is observed, which indicates an active feeding process.
11
In the gonadal tissue, oysters feeded with A. catenella presented reabsorption
processes of gametes remains distributed in the lumen follicles, being oocytes and
sperm phagocytosed by hemocytes. Furthermore, a greater proportion of male follicles
were observed a long of the experimental period.
Analysis between treatments and the presence of Alexandrium catenella cells in the
digestive tract of O. chilensis confirms that has the ability to ingest the toxic cells. This
work contributes to understand to histo-physiological level the defensive mechanisms
employed by Ostrea chilensis to offset or reduce the exposure to the paralytic shellfish
poisoning (PSP).
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2. INTRODUCCION
2.1. Antecedentes de la Ostra Chilena (Ostrea chilensis)
El Phylum Mollusca es uno de los más grandes y variado del reino animal.
Dentro de este se encuentra el grupo de los bivalvos, con alrededor de 7.500 especies,
siendo la segunda clase más diversa de los moluscos después de los gastrópodos.
Muchos de ellos son fuente importante de alimento dentro de las tramas tróficas y
también para la población humana, siendo cultivados y por tanto con una gran
importancia comercial. Las ostras del género Ostrea son de gran interés debido a su
alto valor comercial a lo largo de todo el mundo (Polanco y Corral, 2002).
La ostra chilena (Ostrea chilensis) carece de una fase larval pelágica extendida,
por lo cual su distribución se limita a dos poblaciones; una en Nueva Zelanda y otra en
Chile (Fig. 1), las que se encuentran separadas por una gran extensión de océano
(>7000 kilómetros). Se distribuye en aguas cercanas a la costa de Nueva Zelanda
(incluyendo las Islas Chatham), hasta profundidades de 550 metros y también se
encuentra en la zona submareal poco profunda del sur de Chile (Foighil et al., 1999). En
Chile esta especie tiene un rango de distribución que está limitado a la isla de Chiloé y
al sur de las islas Guaitecas (Winter et al., 1983).
La especie Ostrea chilensis presenta hermafroditismo protándrico, siendo
primeramente macho para luego alternar a hembra. Generalmente durante los primeros
dos años se comporta como macho. Solis (1967) indica que la coloración del tejido
gonadal macho se presenta blanquizco, con textura lisa o con finas granulaciones. La
madurez reproductiva se alcanzaría a una talla aproximada de 25 mm (Gleisner, 1981),
luego de esto, aparentemente la influencia de la temperatura de la columna de agua y
13
otros factores ambientales determinan la alternancia de sexo y el posterior inicio de la
ovogénesis para alternar a estadio hembra, este proceso se iniciaría de forma paralela,
el cual culminaría cuando los individuos alcanzan la talla de 37 mm de longitud de
valva, siendo la totalidad de los folículos hembra.
En la mayoría de los bivalvos, la madurez sexual depende del tamaño del
individuo más que de su edad, y el tamaño al que alcanzan la madurez sexual varía de
una especie a otra y según la distribución geográfica. En lo indicado por Chaparro y
Toro (1989) el tamaño en longitud de Ostrea chilensis se presentaría como un factor de
importancia, aún más importante que la edad, en relación a que los individuos
presenten alternancia de sexos y finalmente maduración sexual como hembra.
Fig. 1. Vista Polar del Pacífico Sur que muestra la distribución de Ostrea chilensis.
(Foighil et al., 1999, Carriker y Gaffney, 1996). Las flechas muestran los patrones
predominantes de la circulación superficial.
14
Gleisner (1981) señala que para el primer año la energía absorbida es utilizada
para el crecimiento y el desarrollo de los diversos procesos metabólicos, mientras que
hacia el segundo año de vida gran parte de la energía absorbida se destina para el
proceso de maduración gonadal. Por lo cual, bajo condiciones adversas, la disposición
de alimento tanto en cantidad como en calidad de lo ingerido juega un papel importante
para poder realizar normalmente los diferentes procesos fisiológicos y de desarrollo.
Debido a que la madurez sexual en O. chilensis es un evento complejo, ya que en ella
influyen muchos factores tales como: temperatura, salinidad y especialmente la
disponibilidad de alimento, es importante conocer los efectos de una dieta conteniendo
la toxina paralizante de molusco; toxina producida por el dinoflagelado Alexandrium
catenella, sobre el desarrollo gonadal de la especie.
2.2. Floraciones Algales Nocivas (FAN´ s)
En respuesta a cambios favorables en el medio ambiente, ciertas especies de
microalgas pueden presentar un rápido aumento poblacional, en donde su número
puede alcanzar millones de células por litro, llegando a formar parches visibles en la
superficie del mar (Cosper et al., 1987). Entre las especies que componen el gran
número de microorganismos fitoplanctónicos existe un grupo que puede ser tóxico. La
terminología Floraciones Algales Nocivas (FAN), fue asignada por la Comisión
oceanográfica intergubernamental de la UNESCO (COI-UNESCO) para agrupar a este
diverso grupo de microorganismos planctónicos, también denominados comúnmente
“marea roja” (Black, 2001; Masó, 2003; Backer et al., 2004).
15
Alrededor de 300 (7%) de las aproximadamente 3.400 - 4.100 especies de
fitoplancton se han descrito como causantes de mareas rojas, incluyendo diatomeas,
dinoflagelados, silicoflagelados, primnesiofíceas y raphidophytes (Sournia, 1995). Entre
60-80 especies (2%) de los 300 taxones son perjudiciales o tóxicas como resultado de
la producción de biotoxinas, generando daño físico, anoxia, reducción de la irradiación,
inadecuación nutricional, etc. (Anderson, 1989). Estas microalgas están clasificadas
bajo criterios que reflejan sus efectos y sintomatologías sobre los humanos; de esta
forma se ha descrito la toxina paralizante de molusco (TPM), veneno neurotóxico
(VNM), el veneno amnésico (VAM) y veneno diarreico (VDM) (Odebrecht et al., 2002;
Mafra et al., 2006).
Dentro de la macrofauna bentónica encontramos a los moluscos bivalvos, los
cuales juegan un papel importante en relación con los eventos de mareas rojas.
Pueden pasar a ser organismos vectores, pues por medio de su actividad de filtración
ingieren el fitoplancton toxico, que puede tener graves implicancias para el consumo por
parte de la población humana, debido a que potencian el efecto de las toxinas por su
condición de acumuladores.
Por otro lado, estas floraciones de microalgas tóxicas también pueden llegar a
provocar enfermedades y la muerte en peces, aves marinas, mamíferos marinos y otras
formas de vida oceánica (Anderson, 1994). Las floraciones de algas nocivas (FAN)
tienen profundos efectos sobre la ecología de las aguas costeras (Burkholder, 1998) y
sobre los aspectos económicos de la pesca y la acuicultura (Shumway, 1990; Anderson
et al., 2000).
16
También se han descrito floraciones de algas nocivas (FAN`s) no tóxicas que
pueden causar daños a los ecosistemas, los recursos pesqueros y las instalaciones
recreativas, a menudo debido a la gran biomasa acumulada.
2.2.1. Antecedentes del dinoflagelado tóxico Alexandrium catenella,
productor de la Toxina Paralizante de Molusco (TPM)
La TPM es también conocida como “Saxitoxínas”, con 57 análogos hasta ahora
identificados (GTX1, GTX4, neoSTX, entre otros), de los cuales 38 son producidas por
dinoflagelados (Rossini y Hess, 2010).
Dentro de las microalgas toxicas, el género Alexandrium se ha descrito como
productor de la Toxina Paralizante de Molusco (TPM), junto a otros géneros de
dinoflagelados como; Gymnodinium y Pyrodinium (Cembella et al., 1988).
La exposición de organismos filtradores a Alexandrium catenella
(Whedon yKofoid, 1936) Balech, 1985, es conocida por tener un impacto negativo,
afectando la actividad de filtración e ingestión de bivalvos (Bardouil et al., 1993; Wildish
et al., 1998; Lassus et al., 1999; Li et al., 2001; Navarro et al., 2008, 2014). El modo de
acción de TPM involucra un reversible y altamente especifico bloqueo del transporte de
iones por el canal sodio y por lo tanto del potencial de acción en las membranas
excitable (nunca en las fibras musculares) (Narahashi, 1988; Bricelj y Shumway, 1998).
En Chile se presentan tres grupos capaces de sintetizar estas biotoxinas que
pueden ser nocivas para la salud de la población humana, estas se agrupan como;
toxina paralizante de molusco (TPM), veneno diarreico de marisco (VDM); dos grupos
que han sido descritos como los más perjudiciales para la economía y salud en distintas
17
regiones del país. Como tercer grupo se encuentra el veneno amnésico de los mariscos
(VAM).
El primer registro de la existencia de la toxina paralizante de molusco (TPM) en
Chile ocurrió en 1972, en Magallanes (XII Región). Posteriormente se presentaron
nuevos episodios tóxicos en 1981, 1989 y 1991 (Guzmán et al., 2002). En 1994 se
detectó por primera vez en la XI Región y en 1998 fue reportado en dos localidades de
la X Región. En el año 2002, se registraron floraciones de Alexandrium catenella en la
zona norte de la XI región (Molinet et al., 2003), alcanzando la zona de Dalcahue, en la
Isla de Chiloé (X Región), en donde se ubica el área de mayor desarrollo de los cultivos
de los mitílidos.
Tabla. I. Distribución geográfica de las toxinas marinas presentes en Chile (Seguel, 2008).
2.3. Sistema Inmune en moluscos filtradores y su acción en presencia de la TPM
El término “inmunidad” tiene su raíz del latín inmunitas que tiene como
significado eximir, esta exención era otorgada como un privilegio y protección legal para
personajes de connotación política en la antigua Roma. Posteriormente la aplicabilidad
de este término fue acuñado para el área de la biología, para denotar protección contra
18
enfermedades infecciosas, en respuesta o reacción frente a sustancias, partículas
externas como microorganismos, macromoléculas vivas o inertes que podrían
presentarse como perjudiciales para la viabilidad del organismo.
Dentro de los ecosistemas marinos las microalgas toxicas al obtener las
condiciones adecuadas para crecer, pueden dividirse muy rápidamente y
potencialmente, crear un bloom o florecimiento algal nocivo (FAN´s). Estas
interacciones ocasionales dentro de las tramas tróficas entre las microalgas nocivas y
moluscos filtradores (ej. Ostras, Almejas, Pectínidos, Mitílidos) sugieren no solo la
posibilidad de una intensa exposición a las toxinas, sino también que los moluscos
puedan desarrollar mecanismos de tolerancia para hacer frente a las FAN´s
recurrentes, de lo contrario podrían enfrentarse a la extinción local (Bricelj et al., 2005).
Los organismo filtradores han tenido que aclimatarse a las apariciones
ocasionales de microalgas toxicas que pueden causar daños en los tejidos blandos o
impacto en sus funciones metabólicas. Estudios como los de Bardouil et al. (1993) y
Bricelj et al. (2005), han descrito procesos de adaptación, en donde se observa una
modificación en las conductas alimentarias y respiratorias para así minimizar el contacto
entre las células toxicas y los tejidos, mediante la reducción de las tasas de ingestión,
producción de pseudoheces o por la no digestión de las células ingeridas (Bricelj et al.,
1990; Bardouil et al., 1996). Un estudio realizado por Hégaret et al. (2007 a) demuestra
que los moluscos bivalvos expuestos a microalgas toxicas generalmente producen
depósitos fecales que incluyen células intactas de microalgas toxicas, como; A.
fundyense, H. akashiwo, y P. mínimum.
19
2.3.1. La Respuesta Inmune
Inmunidad innata en Ostrea
Las ostras, al igual que otros invertebrados marinos, se limitan a una respuesta
inmune innata (Janeway, 1994). Esta puede ser identificada de manera temprana, la
cual se acciona a las horas del contacto con la toxina, parasito, patógeno, etc., o
eventualmente puede ocurrir con una respuesta tardía, la cual podría ser medida en
días de exposición. La respuesta temprana constituye la inmunidad innata o natural, la
cual se constituye como la primera línea de defensa del hospedador contra un agente
patógeno (Medzhitov, 1997). El sistema inmune innato es descrito como el mecanismo
que actúa solo al instante de la exposición, no teniendo la facultad de mantener esta
inmunidad en el tiempo, por lo tanto este no podría proteger mejor al individuo de las
exposiciones posteriores (Wikfors y Smolowitz, 1993, 1995). Por lo tanto, la carencia de
especificidad en el reconocimiento, hace que la respuesta sea exactamente igual cada
vez que ocurre el contacto con un agente nocivo o con una partícula no propia. Las
barreras físico-químicas, las proteínas presentes en el suero y las células con actividad
fagocítica forman el conjunto de componentes de la inmunidad innata (Medzhitov y
Janeway, 1997).
2.3.2 Hemocitos, las células inmunocompetentes
Cheng (1996), describió que además del cierre de valvas y la alteración en la
conducta de alimentación, los bivalvos pueden minimizar el contacto con las algas
toxicas a través de mecanismos de defensa interna. Este proceso se atribuye
20
principalmente a las células llamadas “hemocitos”, que son similares a los leucocitos de
la sangre que circula en los vertebrados.
La función de los hemocitos es descrita con una amplia funcionalidad dentro de
los procesos fisiológicos (e.j. digestión, excreción, transporte, defensa, procesos de
reparación) (Cheng, 1981, 1984; Mount et al., 2004). Cheng (1981, 1984) clasificó los
hemocitos en dos grupos de células; aquellas que contienen gránulos citoplasmáticos o
“granulocitos o hemocitos granulares” y aquellos hemocitos con poco o casi nada de
granulaciones, denominados “hialinocitos”.
La respuesta inmune (Janeway, 1994), es realizada principalmente por
granulocitos para el caso de las Ostras (Foley y Cheng, 1975). Estos hemocitos pueden
fagocitar tanto microalgas toxicas, bacterias, levaduras y otras células (Canesi et al.,
2002), siendo la primera etapa de la fagocitosis el acoplamiento del fagocito a la
partícula objetivo (Janeway, 1994; Franchini et al., 1995; Chu, 2000).
2.3.2.1. Función Inmune de Hemocitos
a. Respuesta inflamatoria: Se observa la aglomeración o el reclutamiento de
hemocitos hacia el lugar afectado, aquí también se hacen presente proteínas
plasmáticas sintetizadas por el estímulo patógeno, las cuales se liberan a la hemolinfa
para ejercer su función (Abbas y Lichtman, 2000). Este proceso puede terminar con la
destrucción del tejido dañado, el aislamiento del organismo invasor o la completa
reparación del tejido (Feng, 1988).
b. Fagocitosis: El término fagocitosis corresponde al mecanismo por el cual los
hemocitos granulocitos poseen la capacidad de adhesión, ingestión, destrucción y
21
eliminación partículas exógenas y restos celulares, para luego dar lugar a la
reconstrucción del tejido epitelial (Ratcliffe et al., 1985; Fisher, 1986; Sparks y Morado,
1988). En este proceso las proteínas plasmáticas son intermediarias para la adhesión
de los granulocitos, la proteína aglutina y activa la unión de estos a la partícula
exógena, los hemocitos emiten pseudópodos englobando y atrapando a los
microorganismos (Ratcliffe et al., 1985). Durante la acción de destrucción y previo a la
eliminación de los restos del patógeno se forman gránulos de glucógeno los cuales
pueden pasar a ser destinados para los procesos metabólicos del hemocito o pasan a
formar parte de la hemolinfa (Fisher, 1986).
c. Agregación: Esta función se encuentra asociada al proceso de fagocitosis, en
donde ocurre una aglomeración de hemocitos ya sea en el tejido conectivo como en el
tejido epitelial en donde el elevado número de agentes extraños no son eliminados pues
supera la actividad de fagocitosis (Ratcliffe et al., 1985).
d. Encapsulación: Este mecanismo se activa cuando un agente exógeno es
capaz de superar las barreras de fagocitosis y agregación, este es descrito por Batista
et al. (2009) para invertebrados, en donde esta reacción inmuno-defensiva actúa sobre
cuerpos externos de mayor tamaño, los cuales son muy grandes para ser fagocitados.
Por lo general, en estos casos, una masiva aglomeración de hemocitos encapsula la