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Criopreservacin de estadios iniciales de gametofitos de Macrocystis pyrifera (Laminariales, Ochrophyta) en condiciones controladas de laboratorioMara Ins Piel 1 , Marcela Avila 1 y Anglica Alcapn 1
1 Instituto de Ciencia y Tecnologa, Universidad Arturo Prat, Ejercito 443, Puerto Montt, Chile. [email protected] de Biologa Marina y OceanografaVol. 50, S1: 157-162, abril 2015DOI 10.4067/S0718-19572015000200002ARTCULOChristian G Garca Valdz / Ecologa Marina / UJAT
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Macrosistys pyrifera-Clasificacin Taxonmica-
Divisin PhaeophytaClase PhaeophyceaeOrden LaminarialesFamilia LessoniaceaeGnero MacrocystisEspecie Macrocystis pyrifera -Nombres comunes-
Per: SargazoChile: HuiroUSA: Giant Kelp -Caracteres Distintivos-
-Coloracin amarillo -plido a caf.30 m.-Tienen un ciclo de vida con alternancia de generaciones heteromrficas, siendo el esporofitola planta macroscpica y los gametofitos masculino y femenino microscpicos (ACLETO YZUIGA, 1998).
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IMPORTANCIALugar de asentamiento y alimento para especies de invertebrados de importancia econmica (Vasquez et al 2012).
Susceptible ante fenmenos naturales: El nio (ENSO) (Borrast-Chvez et al. 2012)
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INTRODUCCINMantenimiento (mantencin) de stock de gametofitos en laboratorios, para conservar material gentico.
Medio slido y/o LquidoBaja concentracin de nutrientesBaja iluminacinPueden ser activados posteriormente para iniciar cultivos (Lning & Dring 1972, Lning 1981, Westermeier et al. 2006).Christian G Garca Valdz / Ecologa Marina / UJAT
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OBJETIVOSMantenimiento y preservacin de organismos por un largo periodo de tiempo.
Christian G Garca Valdz / Ecologa Marina / UJATMantenimientoNitrgeno liquidoPreservacinEspacios reducidos
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METODOLOGALocalidad de Chauman, Chilo, Chile (41 47' 29,96 S; 73 57'30,75 W)Christian G Garca Valdz / Ecologa Marina / UJAT
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SeleccinSoros esporangiales madurosDeshidratacin por 4h.Se cortaron trozosFrtiles de 1 a 2 cm.Las zooporas recinLiberadas se observaron Al microscopioLos trozos de esporofilas se trasladarona una cmara de cultivo En condiciones controladas.Christian G Garca Valdz / Ecologa Marina / UJAT
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CriopreservacinDespus de 7 das se tom una muestra de gametofitos iniciales en germinacin para la criopreservacin.
Christian G Garca Valdz / Ecologa Marina / UJATA) A la izquierda se observa un gametofito femenino con filamentos de mayor grosor y a la derecha un gametofito masculino (formaesfrica) muy ramificado y de filamentos ms angostos
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1.-En cada tubo criognico de 1,7 ml de capacidad, se agrego 0,75 ml de solucin crioprotectante compuesta en relacin 1:1 por Dimetil Sulfoxido (DMSO) + HEPES.
2.-Los tubos se colocaron en una bandeja con 81 celdas y se realiz una pre-congelacin en un freezer convencional (-18 C) por 30 minutos
3.-Posteriormente fueron introducidos al tanque criognico Taylor Warton LS 3000 a -196 C.Christian G Garca Valdz / Ecologa Marina / UJAT
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DescongelacinDespus de 13 das se seleccionaron 5 tubos criognicos del tanque, los cuales fueron descongelados:Bao mara por 1 minuto (38 C)Bao de agua dulce con hielo picado (4C) por 1 minuto.Dentro de la cmara de flujo laminar, se diluyeron las esporas de 1,5 ml a 4,5 ml en tubos Eppendorf con medio de cultivo Provasoli y se centrifugaron por 5 minutos a 1000 rpmChristian G Garca Valdz / Ecologa Marina / UJAT
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Se distribuy el contenido de los 5 criotubos en tres bolsas plsticas transparentes y se agregaron 100ml de medio de cultivo Provasoli.Se incub la cmara de cultivo en las mismas condiciones iniciales.En forma paralela se mantuvieron cultivos control sin congelar y en las mismas condiciones de cultivoChristian G Garca Valdz / Ecolga Marina / UJAT
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RESULTADOS
Crecimiento de esporofitos de Macrocystis pyrifera provenientes de cultivos criopreservados. Barra representa elcrecimiento promedio de longitud (mm), I representa el error estndar (EE). T representa al tiempo en semanas
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Tasa de crecimiento diario de esporofitos de Macrocystispyrifera criopreservados. T representa al tiempo en semanas.
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Desarrollo y crecimiento de los esporofitos generados post criopreservacin de gametofitos iniciales de M. pyrifera durante 6 semanas. Se incluye: longitud promedio (mm), error estndar (EE) y tasa de crecimiento (%) diario.Christian G Garca Valdz / Ecologa Marina / UJAT
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DISCUSINMacrocystis pyriferaPiel et al. (2015)L. berteroanaSalazar (2011)
45 das alcanzaron tamao promedio de 2mm67 das alcanzaron tamao promedio de 5,1 mm67 das alcanzaron tamao promedio de 11,5 mm
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CONCLUSIONESLa tcnica fue exitosa y recomendable para mantenimiento prolongado de stock de gametofitos de M. pyrifera en condiciones de laboratorio.Christian G Garca Valdz / Ecologa Marina / UJAT
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