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PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DE VALPARASO
FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA DE INGENIERA BIOQUMICA
ICB 690 Laboratorio de Bioprocesos
PRODUCCIN DE LACTASA A ESCALA PILOTO MEDIANTE FERMENTACIN
BATCH DE Kluyveromyces marxianus
Marzo 2015
Claudia Caroca.
Gabriel Thun.
Mauro Torres
Alejandro Zarria
Irene Martinez
Estela Tapia
Integrantes:
Profesores:
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RESUMEN
Esta investigacin se enfocar principalmente en monitorear el
crecimiento en cultivo sumergido
de la cepa Kluyveromyces marxianus a escala piloto con la
finalidad de producir y extraer la enzima
lctica B-galactosidasa.
Se realizaran dos fermentaciones sucesivas en modalidad por
lotes, bajo las siguientes
condiciones: pH 4,7, manteniendo una temperatura entre 30-35C,
agitacin de 200 rpm y un
caudal de aire de 1 vvm. La primera etapa de la fermentacin,
conocida como etapa de
propagacin, se realizar en un Biorreactor Biolafitte de un
volumen til de 15 [l] llegando a una
concentracin de 10 [g/l]. La segunda etapa de la fermentacin,
conocida como fermentacin
piloto, se llevar a cabo en un fermentador de 120 [l] hasta
alcanzar una concentracin de 10 [g/l].
Una vez alcanzada la concentracin deseada, el caldo de cultivo
ser centrifugado con el fin de
obtener una nueva concentracin de 120 [g/l]. Posteriormente,
mediante el rompimiento de las
clulas por friccin en un molino de bolas en modalidad continua
se extraer la lactasa y se medir
la actividad enzimtica de esta enzima. Durante el proceso se
realizarn distintas mediciones:
Mtodo de turbidimetra para determinacin de biomasa, azucares
reductores con DNS para
medicin de lactosa, proteina total por mtodo de Bradford y
actividad enzimtica utilizando el
mtodo ONPG.
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INDICE GENERAL
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CAPTULO 1
INTRODUCCIN
En la actualidad, el desarrollo de nuevos procesos industriales,
en especial en la industria
alimentaria, ha permitido un enorme desarrollo en la produccin
de enzimas. La formulacin de
enzimas puede ser tanto qumica como biolgica, siendo la ltima
una variante importante en la
produccin masiva ya que el mercado es cada vez ms exigente con
producir agentes amigables
con el medio ambiente.
La produccin de enzimas hace referencia a una serie de procesos
agrupados en varias etapas,
siendo las bsicas la sntesis celular de la enzima, la
recuperacin o aislamiento de la enzima
(incluye la separacin slido-liquido o clarificacin, extraccin y
concentracin) y la purificacin en
s de la enzima (Olivares, 1996). La produccin de enzimas depende
del origen o fuente de la
enzima y del fin de su uso o aplicacin.
La enzima producida debe ser aislada del organismo productor.
Para ello, las operaciones de
recuperacin, que a diferencia de la produccin, no dependen del
origen de la enzima sino de su
localizacin extracelular o intracelular, permiten obtener un
extracto enzimtico crudo capaz de
ser purificado. En el caso de una enzima intracelular, la
extraccin involucra la disrupcin o
permeabilizacin de las membranas celulares y una vez obtenido el
extracto crudo, se procede,
por lo general, a liberarlo de contaminantes principalmente
proteicos, es decir, a purificarlo
(Olivares, 1996).
La industria lctea es uno de los nichos que ms utiliza enzima en
la industria de los alimentos,
desde la produccin de quesos hasta la deslactacin de la leche.
En este ltimo caso, la enzima -
galactosidasa, ms conocida como lactasa, es usada ampliamente
para degradar la lactosa en
glucosa y galactosa.
El presente trabajo, se basa en la produccin de la
b-galactosidasa a nivel de escala piloto usando
la levadura Kluyveromyces marxianus con lactosa como fuente de
carbono y energa. Para ello se
llevar a cabo el proceso desde la fermentacin hasta la extraccin
de la enzima, permitiendo
determinar el rendimiento de cada etapa y el rendimiento global
del proceso.
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Objetivos
Objetivo General
Produccin de la enzima intracelular b-galactosidasa mediante una
fermentacin por lotes
a escala piloto, utilizando la levadura Kluyveromyces
Marxianus.
Objetivo especfico
Planificar una fermentacin por lotes de Kluyveromyces marxianus
a escala piloto.
Calcular de los parmetros de crecimiento de Kluyveromyces
marxianus, incluyendo
velocidad especfica de crecimiento, productividad de biomasa y
producto as como
rendimiento de sustrato en biomasa y producto.
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CAPTULO 2
REVISION BIBLIOGRAFICA
Kluyveromyces marxianus
Kluyveromyces marxianus es una especie de hongo del gnero
Kluyveromyces que tiene la
capacidad de generar energa a travs de la fosforilacin oxidativa
o por fermentacin a etanol.
Una caracterstica distintiva de esta levadura, es la capacidad
de asimilar y utilizar la lactosa como
fuente de carbono, debido a que produce la enzima -
galactosidasa (Lactasa), exclusivamente
intracelular. Otras caractersticas relevantes, es la capacidad
de metabolizar una gran variedad de
sustratos, puede crecer en amplio rango de temperatura (20-39C)
y a un pH ptimo entre los 6 y
7 (Mendoza , 2013).
En estudios anteriores se ha demostrado la obtencin de biomasa y
b-galactosidasa a partir de
K.Marxianus a bajas concentraciones de lactosa, con rendimientos
satisfactorios. (Araujo et al,
2010). Cabe destacar que la produccin de -galactosidasas por
parte de K. Marxianus se ve
fuertemente inhibida por altas concentraciones de calcio en la
leche, pequeas concentraciones
de sodio, la presencia de galactosa y glucosa. Tambin se ha
determinado que el pH ptimo para la
fermentacin de K. marxianus es entre 4,0 -5,0 (Reyes y Acevedo,
1989). Mientras que el rango de
temperaturas en donde la actividad es ptima, vara entre 30C y
39C (Acosta et al, 2012).
-D-Galactosidasa (lactasa)
La b-galactosidasa hidroliza la lactosa hasta glucosa y
galactosa. Su actividad depende de 6 grupos
sulfhdricos que posee en su estructura y a medida que se van
oxidando a enlaces de disulfuro, la
enzima va disminuyendo su actividad (Jimnez, 2003).
Las caractersticas y propiedades de esta enzima varan
dependiendo de la fuente de donde se
obtengan, para el caso de las de origen fngico, estas presentan
mayor estabilidad a altas
temperaturas comparadas con las que se obtienen de bacterias
(son ms termolbiles). La
temperatura ptima de esta enzima es alrededor de los 37C. En el
caso del pH, mientras el valor
-
ptimo para la b-galactosidasa obtenida de levaduras y bacterias
es cercano a 7.0, la actividad
decae a medida que disminuye el pH, perdiendo completamente su
actividad a un pH de 4.5.
Hoy en da, esta enzima es de gran inters nutricional, tecnolgico
y ambiental. Nutricional,
porque un porcentaje alto de la poblacin mundial, en torno al
70% (Chitunda, 2001) o ms del
70% (Ladero y otros, 2002) presenta problemas para metabolizar
la lactosa de la leche y de los
productos lcteos, ello debido a las deficiencias de lactasa
intestinal (Berka et al,2004), lo cual
finalmente provoca una mala absorcin e intolerancia (Montalto et
al, 2005). Es en el campo
tecnolgico en donde est ms extendido el uso de la
b-galactosidasa; su uso en la hidrlisis de la
lactosa en la leche, en el suero de leche y en sus respectivos
filtrados sigue siendo una de sus ms
prometedoras aplicaciones en la industria alimenticia (Barberis
y Segovia, 2002; Rodrguez et al,
2006). La b-galactosidasa tambin es de inters ambiental porque
puede ser utilizada en la
eliminacin de la lactosa del suero de leche y sus filtrados,
residuos de la industria quesera, que,
generalmente, son descargados a ros y desages (Ramrez y Rivas,
2003), causando problemas
ambientales debido a que presentan una alta demanda de oxgeno
(Chitunda, 2001).
Produccin de b-galactosidasa
La -galactosidasa se encuentra bastante distribuida en la
naturaleza (Fisher, 1995), es posible
encontrarla en plantas (ElTanboly, 2001), animales y
microorganismos (Chitunda, 2001).
Segn la Administracin Estadounidense de Alimentos y Medicamentos
(FDA), los siguientes
organismos son considerado GRAS (Generalmente reconocido como
seguro) para la produccin a
nivel biotecnolgico de la -galactosidasa: Kluyveromyces sp
(Golubev y Golubev, 2004), K. lactis
(Becerra, 1998; Becerra et al, 2004; Bridiau et al, 2006;
Chockchaisawasdee y otros, 2005; Ramrez
y Rivas, 2003; Rodrguez et al., 2006), K. fragilis (Ladero et
al., 2002) y K. marxianus (Lukondeh et
al, 2005; O'connell y Walsh, 2007), y destacan como buenos
productores -galactosidasa tanto
extracelular como intracelular.
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CAPTULO 3
METODOLOGA ANALTICA Y EXPERIMENTAL
3.1 METODOLOGIA ANALITICA
Tabla 3.1 Mtodos analticos
Mtodo Objetivo Descripcin
1. Turbidimetra Determinar
concentracin de
Biomasa
Este mtodo mide la reduccin de la transmisin
de la luz debido a las partculas en suspensin. La
absorbancia es directamente proporcional al peso
seco, independiente del tamao celular. Para la
determinar la concentracin de biomasa de K.
marxianus, la longitud de onda se mide a 650 nm.
2. Mtodo de DNS Determinar la
concentracin de
Lactosa
Este mtodo se basa en la medicin de los
azucares reductores libres por reduccin del
cido dinitrosalicilico (DNS), formando un
compuesto nitroaminado de color amarillo. La
densidad ptica, medida a 540 nm usando un
espectrofotmetro, es proporcional a la
concentracin de grupos reductores.
3. Mtodo de
Bradford
Determinar la
concentracin de
protenas
Este mtodo se basa en la unin del colorante
Comassie Blue G-250 a las protenas. El colorante,
en solucin cida, existe en dos formas una azul y
otra naranja. Las protenas se unen a la forma
azul para formar un complejo protena-colorante
con un coeficiente de extincin mayor que el
colorante libre. Esto permite determinar por
espectofotometra a 595 nm la concentracin de
protenas en solucin.
4. Mtodo del reactivo
ONPG
Determinar la
actividad enzimtica
En presencia de clulas galactosidasa positivas, el
reactivo incoloro ONPG ingresa al interior de la
clula sin la ayuda de la -galactsido permeasa,
donde es hidrolizado y libera un compuesto
cromgeno amarillo, -nitrofenol (ONP), la
reaccin de -galactosidasa positiva se basa en la
deteccin de ONP (MacFaddin, 2003).
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3.2 METODOLOGA EXPERIMENTAL
3.2.1 Cepa, Condiciones y Desarrollo del cultivo
Para el cultivo en el reactor de propagacin y reactor piloto se
utilizar una cepa Kluveromyces
marxianus productora de -galactosidasa, obtenida del cepario de
la Escuela de Ingeniera
Bioqumica. En el caso del reactor de propagacin, se utilizar el
reactor Constructeur Gourdon
Biolafitte con 10 L de medio de cultivo, se estima llegar a una
concentracin de 10 [g/l] en este
reactor. Mientras que a escala piloto, se usar el reactor Piloto
con 100 L de medio de cultivo.
Ambos reactores operarn bajo las siguientes condiciones de
operacin: 30C, pH 4.7, 1 vvm y 180
rpm.
Adicionalmente, se estimaron los tiempos de cultivo para ambos
reactores. Para ello se consider
una velocidad especfica de crecimiento de 0.4 h-1 y una
concentracin de biomasa inicial de 0.1
g/L y 1 g/L para el reactor Biolafitte y Piloto,
respectivamente. Cabe destacar que a lo largo de la
fermentacin a escala piloto, se realizar una muestra a tiempo
cero y muestras cada 1 hora para
determinar la concentracin de biomasa y sustrato as como la
actividad enzimtica de lactasa
intracelular.
3.2.2 Proceso Downstream
Una vez obtenida una concentracin celular de 10 g/l en el
fermentador piloto, se proceder a
concentrar el caldo de cultivo por medio de una centrifuga de
discos Westfalia Separator SA 1-01-
175, en modalidad continua. De esta separacin se obtendr un
clarificado y la pasta celular que
posee la enzima lactasa (enzima intracelular). Posteriormente,
se realizar la extraccin de la
enzima lactasa por medio del rompimiento celular por mtodos
mecnicos a travs de un molino
de bolas en modalidad continua. Una vez extrada la enzima, se
separar de los restos celulares
gracias a una segunda centrifugacin. Se calcular la actividad
enzimtica de la enzima y medicin
de protenas. En la Figura X se muestra el diagrama de flujo
desde el proceso de esterilizacin de
materiales hasta la extraccin de la enzima intracelular
-galactosidasa.
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Durante el proceso, se realizarn una serie de mediciones para
determinar concentraciones
celulares, concentraciones de sustratos, actividades enzimticas
y protenas totales, lo cual se
sintetiza en la tabla 3.1.
Tabla 3.2 Toma de muestras y mediciones.
Lugar de medicin
Mediciones
[Biomasa] [g/L]
[Sustrato] [g/L]
Actividad enzimtica [UI/g]
Protenas totales [g]
Antes de Fermentacin en R.B.
Antes de Fermentacin en B.P.
Antes de Centrifugacin
Antes de Molienda
Despus de Centrifugacin final
3.2.3 Medio de cultivo
Tanto para el cultivo de propagacin como para la planta piloto,
el medio de cultivo fue diseado a
partir de los rendimientos de cada sustrato en biomasa de cada
nutriente que compone el medio
de cultivo (Anexo A). En la tabla 3.3 se especifican las
cantidades de nutrientes por volumen til de
reactor.
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Tabla 3.3 Masas de reactivos en gramos para la preparacin del
medio de cultivo
Compuesto Reactor de Propagacin Reactor Piloto
Lactosa, [g] 294.2 2650
(NH4)2SO4, [g] 47.1 425
MgSO47H2O, [g] 3.9 37.5
K2HPO4, [g] 1.2 107.5
Ext. Levadura, [g] 73.6 662.5
EsterilizacinPor autoclave
Propagacin (R.B)
V:10[l]
Fermentacin piloto (R.P)
V:100[l]
Centrifugacin X [l/h]
10 [g/l] Biomasa
Molienda12[l/h]
Concentrado 120 [g/l]
Centrifugacin
Medicin de actividad
Extracto enzimtico
Inculo V:1 [l]
Medio de cultivo V:9 [l]
Determinacin de: Biomasa SustratoSe realizar luego de inocular y
al finalizar la fermentacin.
Esterilizacin de: Reactor de Propagacin Medio de cultivo
Pipeteros con pipetas Mangueras y filtro de aire Embudo para Medio
cultivo
EsterilizacinPor caldera
Medio de cultivo V:90 [l]
Esterilizacin de: Reactor de reactor piloto Medio de cultivo
Determinacin de: Biomasa (c/u hora) Sustrato (c/u hora) Act Enz.
Intracelular (Al
finalizar la fermentacin)
Proceder a: Limpieza antes y despus
de la operacin. Construccin curva de
operacin centrfuga.
Clarificado
Fragmentos celulares
Determinacin de: Act. Enz. De extracto
enzimtico Protenas totales
Figura A. 1 Diagrama de Flujo
3.3.3 Solucin tampn citrato y hidrxido de sodio 8 M
En el ANEXO C se especifican los clculos para determinar la masa
correspondiente de cada
solucin.
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En el caso del tampn citrato en el reactor Biolafitte, se
necesitarn agregar 132 g de NaOH y
428.1 g de cido ctrico a los 10 L de medio de cultivo del
reactor.
En el caso de la solucin de hidrxido de sodio a utilizar en el
reactor piloto, se calcul que se
necesitarn 0,65 L de solucin base para preparar una solucin 8
M.
PLAN DE TRABAJO
Carta Gantt
Lunes
Preparacin de materiales, soluciones y pre-inculo
8 9 10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
Encargado
Recoleccin y limpieza de materiales y reactivos
Mauro-Claudia
Preparacin y secado de capachos para curva de calibrado de
biomasa
Preparacin de curva de calibrado DNS
Preparacin de curva de calibrado Bradford
Preparacin solucin NaOH
Preparacin de la solucin tampn citrato
Preparacin de solucin antiespumante
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Esterilizacin de medios de cultivos (matraz) y materiales
Thun-Claudia
Martes
Esterilizacin y preparacin del inculo
8 9 10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
Encargado
Recoleccin y limpieza de equipos y materiales
Mauro-Claudia Preparacin del material para autoclavar
Preparacin del medio de cultivo (Matraz, Biolafite, P.
Piloto)
Esterilizacin de medios de cultivos, equipos, materiales y
soluciones
Thun-Alej.
Preparacin curva de calibrado Biomasa
Puesta en marcha R. B. para propagacin de incoulo
Medicin de biomasa y sustrato en Reactor
Miercoles
Fermentacin en R. Piloto
8 9 10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
Encargado
Medicin de biomasa y sustrato en Reactor
Claudia-Aleja
Preparacin bomba
Preparacin de R. Piloto
Inoculacin e incubacin del R.Piloto
Medicin de biomasa y sustrato en R. Piloto Thun-
Mauro
Control de pH y temperatura en R. Piloto
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Medicin de actividad enzimtica
Jueves
Extraccin de la enzima
8 9 10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
Encargado
Preparacin Bomba
Mauro-Ale
Construccin curva de operacin de la centrfuga
Centrifugacin Continua
Preparacin del Molino
Toma de muestra de actividad enzimtica intracelular
Claudia-Thun
Medicin de biomasa
Molienda
Centrifugacin
Medicin de actividad enzimtica y protena total
Ficha de Registro de Actividades
Curva de Calibrado Biomasa Hora Fecha Encargado(a) Obs
Preparar de capachos
Secar de capachos a 105C por 24 hrs
Centrifugar del cultivo
Resuspender con NaCl 2,5 mM + centrifugacin x3
Resuspender en 5mL de agua desionizada
Pesar capachos secos antes
Secadar de suspensin en capachos a 105 por 24 hrs
Diluir 1-10 con 2,5 mM NaCl
Preparar del blanco con 2,5 mM NaCl
Medir de absorbancia a 650 nm
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Limpiar materiales
Pesar capachos secos
Elaborar curva de calibrado
Curva de calibrado DNS Hora Fecha Encargado(a)
Lote React
Preparacin de la solucin
DNS
Aadir 50 mL de Agua
Aadir 1,6 g de NaOH
Aadir 30 g de tartrato de sodio y potasio
Agitar en placa calefactora
Aadir 1 g de reactivo DNS
Aforar a 100 mL
Transferir a frasco color mbar
Preparacin de la curva de calibrado para
lactosa
Aadir agua
Aadir lactosa
Diluirs 1-10 con agua desionizada
Preparar del blanco con agua desionizada
Mezclar 1 mL solucin + 1mL DNS
Calentar a ebullicin por 5 min
Aadir 10 mL de Agua
Medir absorbancia (540 nm)
Elaborar curva de calibrado
Curva de calibrado Bradford Hora Fecha Encargado(a)
Lote React
Preparacin de la solucin
Bradford
Aadir 50 mL etanol al 95%
Aadir 0,1 g azul brillante de comassie G-250
Aadir 100 mL de c. fosfrico al 85%
Aforar a 1 L con agua destilada
Filtrar por gravedad
Sellar el recipiente (indicar etiqueta)
Elaboracin curva de calibrado
Aadir 10 mL tampn fosfato 0,1 M a pH 6,6
Aadir 10 mg de albmina
Diluir 1-10 con tampn fosfato
Preparar del blanco con tampn fosfato
Mezclar 500 L solucin + 5mL de Bradford
Medir absorbancias (595 nm)
Preparacin de soluciones Masa Volumen Encargado(a)
Lote React
Medio de cultivo
(Inculo)
Solucin de Lactosa
Solucin MgSO4 7H2O
Solucin (NH4 )2SO4
Solucin KH2PO4
Solucin Extracto de Levadura
Tampn cido Ctrico
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citrato
NaOH
Preparacin antiespumante
solucin antiespumante 10% v/v
Medio de cultivo (Piloto)
Solucin de Lactosa
Solucin MgSO4 7H2O
Solucin (NH4 )2SO4
Solucin KH2PO4
Solucin Extracto de Levadura
Preparacin solucin NaOH
Preparacin de Equipos Hora Fecha Encargado(a) Obs
Material para Autoclavar
Acondicionamiento de Material a esterilizar
Conectar mangueras en el reactor
Conectar manguera de salida del autoclave al reactor
Dejar vlvula abierta
Revisar el nivel del agua del autoclave
Colocar material a esterilizar en el autoclave
Encender botn rojo
Esperar a que salga vapor saturado por mangueras
Cerrar vlvula del autoclave
Esperar que la presin aumente hasta 1 atm
Apagar y esperar a que baje la presin
Retirar material con guantes
Eterilizacin de reactor
piloto
Revisar nivel de agua en la sala de calderas
Abrir vlvulas de flujo de agua hacia la caldera
Encender panel de la caldera
Esperar que salga vapor saturado por el despiche
Cerrar la vlvula
Abrir vlvula de salida del manifold y dirigir flujo de vapor
hacia entrada de aire del R.P.
Manetener cerrada la vlvula hacia el rotmetro
Dejar abiertas las vlvulas de toma de muestra y salida de
aire
Supervisar que la presin no supere los 0,5 psi
Esperar 20 min
Cerrar vlvula de salida de aire
Cerrar vlvula de toma de muestra
Cerrar vlvula de salida del manifold
Esterilizacin Agregar medio de cultivo bajo mechero
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Medio de cultivo (R.
Piloto)
Abrir paso de vapor hacia el serpentn y vlvula de salida de
trampa de vapor
Encender motor del R.P.desde el computador (180 rpm)
Esperar a que la T alcance los 105C y contar 45 min
Supervisar que la presin no supere los 0,5 psi
Cerrar vlvula de ingreso de vapor al sistema de fermentacin
Apagar el motor
Apagar caldera y cerrar las vlvulas de paso de agua hacia la
caldera
Operacin de Equipos Hora Fecha Encargado(a) Obs
Operacin de Reactor
Conectar filtro en la entrada de aire del Bioreactor
Sumergir manguera de salida de aire en solucin de sulfato de
cobre
Adicionar medio de cultivo
Poner en marcha el control de T
Encender motor (180 rpm-3 Hz)
Conectar rotmetro a la entrada de aire y airear a 1 vvm
Esperar que la T alcance los 30C
Inocular
Dejar fermentacin por 14 h
Operacin de Reactor Piloto
Sumergir manguera de salida de aire en solucin de sulfato de
cobre
Abrir la vlvula
Abrir el programa "Adquisicin 2011"
Encender panel de control
Encender motor (180 rpm)
Abrir vlvula de aire para mantener a 1 vvm
Enfriar Biorreactor a 30C mediante el serpentn
Inocular
Operacin de la centrfuga
de discos
Limpiar
Construir curva de operacin a 3 flujos diferentes
Determinar concentracin del caldo de cultivo
Limpiar
Operacin del molino
Limpiar
Calibrar Bomba en 12 [L/h]
Determinar el volumen de bolitas de vidrio
-
Encender del sistema de refrigeracin
Molienda continua (3200 rpm)
Limpiar
Ficha de Registro de Mediciones
Biomasa
Hora Tiempo Fd Abs 1 Abs 2 Concentracin Encargado(a)
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Sustrato
Hora Tiempo Fd Abs 1 Abs 2 Concentracin Encargado(a)
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Temperatura y pH
Hora Tiempo T pH Obs Encargado(a)
0
1
-
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Actividad enzimtica Proteina
1 2 3
Lectura de absorbancia
Obs
-
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Ingeniera Qumica,3(1),14-22.
-
ANEXO A
DISEO DEL MEDIO DE CULTIVO
Frmula
= ( )
( 0)
Dnde:
YX/S = Rendimiento del sustrato X en biomasa (g biomasa/ g
sustrato)
Xf = Concentracin final de clulas
Xi = Concentracin inicial de clulas
S0 = Concentracin inicial de sustrato
Sf = Concentracin final de sustrato
Ejemplo de clculo para la lactosa
0,34 = (10 0,1)
S0
Luego,
S0 = 29,12 (g/L)
Consideraciones,
X0 (R. Propagacin) = 0.1 g/L
X0 (R. Piloto) = 1 g/L
V (R. Propagacin) =10 L
V (R. Piloto) = 100 L
Extracto de levadura 20% de la cantidad de lactosa
Para todos los nutrientes se le aadi un 25% a los mnimos
requerimientos calculados.
Concentracin en medio de cultivo (g/L)
Compuesto Yx/s Biolafitte Fermentador piloto
Lactosa 0.34 29.12 26.47
(NH4)2SO4 2.65 4.48 4.07
MgSO47H2O 32.53 0.36 0.33
K2HPO4 10.48 1.13 1.03
Extracto levadura 6.98 6.35
-
ANEXO B
PREPARACIN DE SOLUCIN TAMPN DE CITRATO
Frmula
+ +
= [+][][] () = ([][]) + ([+])
= + ([][])
Dnde:
= Constante de disociacin del cido
[]= Concentracin molar del cido
[]= Concentracin molar de la base conjugada del cido
pH= - ([+])
pKa= - ()
Clculo
Para un volumen de 10 L se obtiene una masa de:
3 = 0,223 [] 10[] 192[] = 428.1 [ ]
= 0,33 [] 10[] 40[] = 132 [ ]
Consideraciones,
Se deben considerar todas las formas ionizadas del cido ctrico
para hacer los clculos.
Para formar 2, se necesitan 0,22 M de NaOH, y para obtener
0,1066 M de 2 se necesitan 0,11 M de NaOH.
-
ANEXO C
CLCULO DEL TIEMPO DE FERMENTACIN
Frmula
X = X0 exp( t )
Dnde:
X = Concentracin de biomasa al tiempo t (g/L).
X0 = Concentracin de biomasa al inicio (g/L)
= Velocidad especfica de crecimiento (h-1)
t = Tiempo (h).
Ejemplo de clculo para Reactor Biolafitte
10 = 0,1 exp(0,4 t)
t = 11,5 h
Consideraciones,
La velocidad especfica de crecimiento es de 0,4 h-1.
X0 = 0.1 g/L
X = 10 g/L
-
ANEXO D
C.1 FICHAS DE SEGURIDAD DE SUSTANCIAS
1. Sustancia: CIDO 3,5-DINITROSALICLICO (DNS)
2. Identificacin de Peligros
- Descripcin del riesgo: Xn Nocivo
- Sobre los riesgos para el hombre y el medio ambiente: R 22
Nocivo por ingestin. R 36/37/38 Irrita de los ojos, sistema
respiratorio y la piel.
- Sistema de clasificacin (Clasificaciones HMIS escala 0-4):
- Salud (efectos agudos) = 1
- Inflamabilidad = 1
- Reactividad = 1
- Peligros: Txico por ingestin. Provoca irritacin de la piel.
Causa irritacin ocular grave. Puede causar irritacin
respiratoria.
- Prevencin:
- Evite respirar el polvo / el humo / el gas / la niebla / los
vapores / aerosoles.
- Lavar a fondo despus de manipular.
- No comer, beber o fumar mientras se manipula este
producto.
- Usar slo al aire libre o en un rea bien ventilada.
- Usar guantes / ropa de proteccin / proteccin para los ojos /
la cara.
Respuesta:
- En caso de ingestin: Llame inmediatamente a un CENTRO DE
TOXICOLOGA o a un mdico.
- Contacto con la piel: Lavar con abundante agua y jabn.
- En caso de inhalacin: Trasladar al aire libre y mantenerla en
reposo en una posicin confortable para respirar.
- Si en los ojos: Lavar cuidadosamente con agua durante varios
minutos. Qutese los lentes de contacto, si presente y fcil de
hacer. Proseguir con el lavado.
Llame a un CENTRO DE TOXICOLOGA o a un mdico si se encuentra
mal.
-
El tratamiento especfico (vase etiqueta).
Enjuagar la boca.
- Si la irritacin cutnea contina: Consulte a un mdico.
- Si persiste la irritacin ocular: Consulte a un mdico.
- Qutese la ropa contaminada y lavar antes de usar.
3. Primeros auxilios
En caso de inhalacin: Suministro de aire fresco. Si es
necesario, proporcionar respiracin artificial, si los trastornos
persisten. Consultar inmediatamente al mdico.
Contacto con la piel: Lave inmediatamente con agua y jabn y
enjuagar bien. Consultar inmediatamente al mdico.
Contacto con los ojos: Limpiar los ojos abiertos durante varios
minutos con agua corriente. Y consultar un mdico.
Ingestin: Consultar inmediatamente al mdico.
4. Lucha contra Incendios
- Medios de extincin adecuados: El dixido de carbono, polvo
extintor o agua pulverizada. Combatir incendios mayores con chorro
de agua espuma resistente al alcohol.
- Peligro particular provocado por la sustancia, sus productos
de combustin o gases generados:
En caso de incendio, el siguiente gas puede ser liberado:
- Monxido de carbono y dixido de carbono
- Los xidos de nitrgeno (NOX)
Equipos de proteccin:
- Use aparatos respiratorios autnomos.
- Use traje de proteccin completa.
5. Proteccin Individual
- Persona relacionada con las medidas de seguridad: Llevar
equipo de proteccin. Mantenga las personas sin proteccin alejadas.
Asegurar una adecuada ventilacin
- Medidas para la proteccin del medio ambiente: No permita que
el material sea liberado al medio ambiente sin los correspondientes
permisos gubernamentales.
-
- Procedimiento de limpieza / recepcin: Desechar el material
contaminado segn norma del laboratorio. Asegurar una ventilacin
adecuada.
6. Almacenamiento y Manipulacin
Manipulacin:
- Sobre la manipulacin segura: Mantenga el recipiente cerrado
hermticamente.
Almacenar en lugar fresco y seco en recipientes hermticamente
cerrados. Asegurar una buena ventilacin en el lugar de trabajo.
- Informacin sobre proteccin contra incendios y explosiones:
Mantener alejadas fuentes de ignicin.
Almacenamiento:
- Requisitos que deben cumplir los almacenes y recipientes: No
requiere medidas especiales.
- Informacin sobre el almacenamiento: en caso de un
almacenamiento conjunto: No almacenar junto con agentes
oxidantes.
- Mantenga el recipiente cerrado hermticamente.
- Conservar en un lugar fresco y seco, en envases bien
cerrados.
7. Informacin Toxicolgica
Toxicidad aguda:
- En la piel: irrita la piel y las mucosas.
- En el ojo: Produce irritaciones.
Sensibilizacin: No se conocen efectos sensibilizadores.
Toxicidad subaguda hasta crnica: El Registro de Efectos Txicos
de Sustancias Qumicas (RTECS) informa de los siguientes efectos en
animales de laboratorio: Conducta - somnolencia (actividad
deprimida en general).
1. Sustancia: ALCOHOL ISO-AMLICO
2. Apariencia: lquido incoloro con olor caracterstico
3. Identificacin de Peligros
- Inflamable.
-
- Nocivo por inhalacin. Irrita las vas respiratorias.
- La exposicin repetida puede provocar sequedad o formacin de
grietas en la piel.
4. Primeros Auxilios
- Tras inhalacin: aire fresco.
- En caso de parada respiratoria: Respiracin asistida o por
medias instrumentales. Suministracin de oxigeno en caso necesario.
Llamar inmediatamente al mdico.
- Tras contacto con la piel: aclarar con abundante agua.
Eliminar ropa contaminada.
- Tras contacto con los ojos: aclarar con abundante agua,
manteniendo abiertos los parpados. En caso necesario llamar al
oftalmlogo.
- Tras ingestin: cuidado con los vmitos. Peligro de aspiracin.
Mantener libres las vas respiratorias. Llamar inmediatamente al
mdico.
5. Lucha Contra Incendios
- Medias de extincin adecuados: CO2, espuma, polvo
- Riesgos especiales: Combustible. Vapores ms pesados que el
aire.
En caso de calentamiento pueden producirse mezclas explosivas
con el aire.
En caso de incendio posible formacin de gases de combustin o
vapores peligrosos.
- Equipo de proteccin especial para el personal de lucha contra
incendios: Permanencia en la lnea de riesgo solo con sistemas de
respiracin artificial e independiente del ambiente. Proteccin de la
piel mediante observacin de una distancia de seguridad y uso de
ropa protectora adecuada.
- Referencias adicionales: Refrigerar los recipientes con
rociado de agua desde una distancia segura. Evitar la penetracin
del agua de extincin en acuferos superficiales o subterrneos.
6. Proteccin Individual
- Proteccin respiratoria: necesaria en presencia de
vapores/aerosoles. Filtro A
- Gafas de seguridad
- Proteccin de las manos:
- Para contacto pleno:
- Guantes: Caucho nitrile
- Espesor: 0,40 [mm]
-
- Tiempo de penetracin: >480 [min]
- En caso de salpicaduras:
- Guantes: Policloropreno
- Espesor: 0,65 [mm]
- Tiempo de penetracin: > 240 [min]
7. Manipulacin y Almacenamiento
- Manipulacin:
Observaciones sobre la proteccin de incendios y explosiones:
Mantener alejado de fuentes de ignicin. Evitar la carga
electroesttica.
- - Almacenamiento:
Bien cerrado, en lugar bien ventilado, alejado de fuentes de
ignicin y de calor. Temperatura de almacenamiento: sin
limitaciones.
8. Estabilidad y Reactividad
- Condiciones a evitar: Calentamiento.
- Materias a evitar: formacin de gas con: metales alcalinos,
metales alcalinoterreos (liberacin de hidrgeno).
-Peligro de ignicin o de formacin de gases o vapores
combustibles con: flor, oxidantes fuertes, oxgeno.
-Informacin complementaria:
- Materiales inadecuados: plsticos diversos, goma capaz de
explotar por calor en estado de gas/vapor con aire.
9. Informacin Toxicolgica
- Toxicidad aguda
- Informaciones adicionales sobre toxicidad
- Tras inhalacin de vapores: Irritaciones en !as vas
respiratorias, absorcin, edema pulmonar.
- Tras contacto con la piel: leves irritaciones, absorcin,
efecto desengrasante sobre la piel con posible infeccin
secundaria.
- Tras contacto con los ojos: leves irritaciones.
-
- Tras ingestin: absorcin por: estmago, intestinos.
- Tras absorcin de grandes cantidades: cefaleas, sueo, falta de
apetito, nauseas, vmito, descomposicin, vrtigo, debilidad muscular,
confusin, prdida de conocimiento, coma.
- Consecuencias posibles: perjudicial para: hgado, riones.
- Se potencia su efecto por: etanol
- Otras indicaciones:
-Existe riesgo de aspiracin al vomitar.
-Informacin complementaria
-El producto debe manejarse con las precauciones apropiadas para
los productos qumicos.
1. Sustancia: 2-MERCAPTOETANOL
2. Identificacin de Peligros
- Nocivo por ingestin. Txico en contacto con la piel. Provoca
quemaduras. Txico para los organismos acuticos, puede provocar a
largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acutico.
3. Primeros Auxilios
- Tras inhalacin: Tomar aire fresco. Si fuera preciso,
respiracin boca a boca o por medios instrumentales.
- Tras contacto con la piel: aclarar con abundante agua. Cambiar
enseguida la ropa contaminada. Llamar al
mdico.
- Tras ingestin: beber abundante agua, provocar vmitos. Avisar
al mdico.
- Tras contacto con los ojos: aclarar con abundante agua, con
los prpados bien abiertos. Llamar al oftalmlogo.
4. Lucha Contra Incendios
- Medios de extincin adecuados: espuma, CO2, polvo.
-
- Riesgos especiales particulares: Inflamable. Vapores ms densos
que el aire.
- En caso de incendio: posible formacin de vapores txicos.
- En caso de incendio puede formarse: sulfxidos
- Equipo de proteccin especial para el personal de lucha contra
incendios: No permanecer en la zona de peligro sin ropa protectora
adecuada y sin sistemas de respiracin artificiales e independientes
del ambiente.
- Informacin adicional: Procurar que el agua de extincin no
penetre en acuferos superficiales o subterrneos.
5. Proteccin Individual
- Gafas de seguridad
- Delantal
- Guantes
- En caso de ser necesario, equipo de respiracin.
6. Almacenamiento y Manipulacin
- Manipulacin: Sin ms exigencias.
- Almacenamiento: Almacenar bien cerrado, en lugar bien
ventilado. Slo accesible a personas autorizadas, expertas.
Almacenar entre +15C y +25C.
7. Informacin Toxicolgica
- Efectos sistmicos: afecciones sobre el sistema nervioso
central (nuseas, vmito).
- Tras inhalacin: irritacin de las mucosas.
- Tras contacto con la piel: quemaduras
- Tras contacto con los ojos: quemaduras. Peligro de que se
produzca turbidez en la crnea.
- Tras ingestin: (grandes cantidades): espasmos, colapso,
narcosis.
- Tras absorber cantidades importantes: Efectos sistmicos:
afecciones sobre el sistema nervioso central (nuseas, vmito).
-
1. Sustancia: EXTRACTO DE LEVADURA
2. Identificacin de Peligros
Efectos potenciales agudos sobre la salud: Ligeramente peligroso
en caso de contacto cutneo (irritante), del contacto con los ojos
(irritante), de la ingestin y de la inhalacin.
3. Primeros Auxilios
- Contacto con los ojos: Lavar los ojos con agua corriente
durante al menos 15 minutos, manteniendo los prpados abiertos.
Puede utilizarse agua fra.
- Contacto con la piel: En caso de contacto con la piel, lavar
inmediatamente con abundante agua y jabn no abrasivo. Tenga
especial cuidado de limpiar los pliegues, grietas y la ingle. Puede
utilizarse agua fra.
- Cubra la piel irritada con un emoliente. Si la irritacin
persiste, busque atencin mdica. Lavar la ropa contaminada antes de
reutilizacin.
- Inhalacin: Permitir que la vctima descansar en un rea bien
ventilada. Busque atencin mdica inmediata.
- Ingestin: No induzca el vmito. Aflojar las ropas apretadas
tales como collares, corbatas, cinturones o cintos. Si la vctima no
respira, realice boca a boca. Busque atencin mdica inmediata.
4. Lucha Contra Incendios
Inflamabilidad del producto: Puede ser combustible a altas
temperaturas.
Medios de extincin de incendios e instrucciones:
Incendio Pequeo: Usar polvo qumico seco.
Gran Incendio: Utilizar agua pulverizada, niebla o espuma. No
usar chorro de agua.
5. Proteccin individual
- Gafas de seguridad
- Delantal de laboratorio
- Guantes
- En caso de ser necesario, equipo de respiracin.
-
- Si la operacin genera polvo, niebla o algo smil, use un
sistema de ventilacin.
6. Almacenamiento y Manipulacin
Precauciones: Mantener alejado del calor. Mantener alejado de
fuentes de ignicin. Los recipientes vacos representan un riesgo de
incendio, evaporar los residuos bajo una campana extractora de
humos. No respirar el polvo.
Almacenamiento: Mantener el recipiente seco. Mantenga en un
lugar fresco. Mantenga el recipiente bien cerrado. Mantener en un
fresco y bien ventilado. Los materiales combustibles deben
almacenarse lejos del calor extremo y lejos de agentes oxidantes
fuertes.
7. Controles de Exposicin / Proteccin Personal
Controles de ingeniera:
Use recintos de proceso, ventilacin local, o de otros controles
de ingeniera para mantener los niveles en el aire por debajo de los
lmites de exposicin. Si la operacin genera polvo use ventilacin de
humo o niebla, para mantener la exposicin a los contaminantes en el
aire por debajo del lmite de exposicin.
Proteccin personal: gafas de seguridad. Bata de laboratorio.
Mascarilla. Asegrese de utilizar un respirador certificado /
aprobado o equivalente. Guantes.
Proteccin personal en caso de un derrame grande:
Gafas de seguridad. Traje completo. Respirador de polvo. Botas.
Guantes. Un equipo de respiracin autnomo debera ser utilizado para
evitar la inhalacin del producto. Ropa de proteccin sugerida podran
no ser suficiente; consultar a un especialista antes de tocar el
producto.
1. Sustancia: CIDO CLORHDRICO
2. Identificacin de Peligros
Efecto en la salud humana:
- Inhalacin: tos, inflamacin de la nariz, garganta y vas
respiratorias. Puede producir dao al pulmn
- Contacto: quemaduras de piel y ojos
- Ingestin: quemaduras de boca, garganta y tracto
gastrointestinal. Puede producir nauseas, vmito y diarrea.
-
- Altamente corrosivo
Efecto en el medio ambiente:
- Corrosivo
- Txico
3. Primeros Auxilios
- Inhalacin: dirigirse a una zona ventilada. Si no respira
proporcionar respiracin artificial y solicitar ayuda mdica.
- Contacto: En caso de contacto con los ojos lavar con abundante
agua manteniendo los ojos abiertos durante al menos 15 [min]. En
caso de irritacin, consultar un mdico. En caso de contacto con la
piel, remover ropa contaminada y lavar con abundante agua durante
al menos 15 [min].
- Ingestin: beber abundante agua o leche. No inducir el
vmito.
4. Lucha Contra Incendios
- No inflamable
5. Proteccin Individual
6- Delantal, guantes, antiparras
- Equipo respiratorio en caso necesario
- De preferencia manipular en campana de extraccin de gases
6. Almacenamiento
- En un lugar fresco y seco, en un rea ventilada
1. Sustancia: LACTOSA
2. Identificacin de Peligros
Efectos potenciales agudos sobre la salud: Ligeramente peligroso
en caso de contacto cutneo (irritante), contacto con los ojos
(irritante), e inhalacin.
La exposicin repetida o prolongada no debera agravar el estado
de salud.
-
3. Primeros auxilios
Contacto con los ojos:
Revise y quite los lentes de contacto. En caso de contacto,
inmediatamente lave los ojos con abundante agua durante al menos 15
minutos. El agua fra puede ser utilizada. Busque atencin mdica si
se produce irritacin.
Contacto con la piel: Lavar con agua y jabn. Cubra la piel
irritada con un emoliente. Busque atencin mdica si se desarrolla
irritacin.
Inhalacin: Si es inhalado, trasladar al aire libre. Si no
respira, dar respiracin artificial. Si la respiracin es difcil, dar
oxgeno. Si es necesario, conseguir atencin mdica.
Ingestin: No provocar el vmito a menos que lo indique
expresamente el personal mdico. No dar nada por boca a una persona.
Aflojar las ropas apretadas tales como collares, corbatas,
cinturones o cintos. Obtener atencin mdica si aparecen los
sntomas.
4. Lucha Contra Incendios
Inflamabilidad del producto: Puede ser combustible a altas
temperaturas.
Temperatura de autoignicin: 470C (878F)
Productos de combustin: Estos productos son xidos de carbono
(CO, CO2).
Riesgos de incendio en presencia de varias sustancias:
Ligeramente inflamable en presencia de calor.
Medios de extincin de incendios e instrucciones:
- Incendio pequeo: Usar polvo qumico seco.
- Gran incendio: Utilizar agua pulverizada, niebla o espuma. No
usar chorro de agua.
5. Proteccin Individual
Derrames pequeos:
Utilice las herramientas adecuadas para poner el slido derramado
en un contenedor de recuperacin apropiado. Terminar la limpieza
vertiendo agua en la superficie contaminada y eliminar segn las
exigencias locales y regionales.
Grandes derrames:
Use una pala para poner el material en un contenedor de
recuperacin apropiado. Terminar la limpieza vertiendo agua en la
superficie contaminada y permitir la evacuacin a travs del sistema
sanitario.
6. Almacenamiento y Manipulacin
-
Precauciones: Mantener alejado del calor. Mantener alejado de
fuentes de ignicin. Los recipientes vacos representan un riesgo de
incendio, evaporar los residuos bajo una campana extractora de
humos. No ingerir. No respire el polvo. Si se ingiere, buscar
atencin mdica inmediatamente y mustrele el envase o la etiqueta.
Mantener alejado de incompatibles tales como agentes oxidantes.
Almacenamiento: Mantenga el recipiente bien cerrado. Mantenga el
recipiente en lugar fresco y bien ventilado. No conservar a
temperatura superior a 23C (73,4F).
7. Controles de Exposicin / Proteccin Personal
Controles de ingeniera: Use recintos de proceso, ventilacin
local, o de otros controles de ingeniera para mantener los niveles
en el aire por debajo los lmites de exposicin. Si la operacin
genera polvo, utilice un ventilador, para mantener la exposicin a
los contaminantes en el aire por debajo del lmite de exposicin.
Proteccin personal: gafas de seguridad. Bata de laboratorio.
Respirador de polvo. Asegrese de utilizar un respirador certificado
/ aprobado o equivalente. Guantes.
Proteccin personal en caso de un derrame grande:
Gafas de seguridad. Traje completo. Respirador de polvo. Botas.
Guantes. Un equipo de respiracin autnomo debera ser utilizado para
evitar la inhalacin del producto. Ropa de proteccin sugerida podran
no ser suficiente; consultar a un especialista antes de tocar este
del producto.
1. Sustancia: ORTO-NITROFENIL--GALACTOSIDO (ONPG)
2. Apariencia
- Aspecto: Polvo blanco o negro.
- Olor: Inodoro.
3. Identificacin de los Riesgos
- Inhalacin: La inhalacin de polvo puede causar irritacin de las
vas respiratorias.
- Ingestin: Puede ser nocivo si se ingiere.
- Contacto con la piel: Puede causar irritacin.
- Contacto con los ojos: Puede causar irritacin. Exposicin
crnica: No se encontr
-
informacin.
4. Medidas de Primeros Auxilios
- Inhalacin: Salga al aire libre. Obtener atencin mdica para
cualquier dificultad para respirar.
- Ingestin: Inducir el vmito inmediatamente como lo indique el
personal mdico. No dar nada por la boca a una persona inconsciente.
Obtener atencin mdica.
- Contacto con la piel: Quitar la ropa contaminada. Lavar la
piel con jabn o detergente suave y agua durante al menos 15
minutos. Obtener atencin mdica si la irritacin aumenta o
persiste.
- Contacto con los ojos: Lave cuidadosamente con agua corriente.
Consulte a un mdico si se desarrolla irritacin.
5. Medidas para Combatir Incendios
- Fuego: Como con la mayora de los slidos orgnicos, el fuego es
posible a elevadas temperaturas o por contacto con una fuente de
ignicin.
- Explosin: Polvo fino disperso en el aire en concentraciones
suficientes, y en presencia de una fuente de ignicin es un riesgo
potencial de explosin de polvo.
- Medios de extincin de incendios: Agua pulverizada, polvo
qumico seco, espuma de alcohol o dixido de carbono.
- Informacin especial: En el caso de un fuego, vestidos
protectores completos y el NIOSH, aprobado por el aparatos de
respiracin con mascarilla completa operando en la demanda de presin
u otro modo de presin positiva.
6. Medidas de Liberacin Accidental
Eliminar todas las fuentes de ignicin. Ventilar el rea de la
fuga o derrame. Use equipo protector personal adecuado como se
especifica en la Seccin 8.
- Derrames: Limpie los derrames de manera que no disperse polvo
en el aire.
- Utilice herramientas que no produzcan chispas y equipo.
Reduzca el polvo en el aire y prevenga esparcimiento humedeciendo
con agua. Levante el derrame para recuperacin o disposicin y
coloque en un recipiente cerrado.
7. Manipulacin y Almacenamiento
- Mantenga alejado de sustancias incompatibles. Congelar.
8. Controles de Exposicin / Proteccin Personal
-
- Lmites de exposicin: no se han establecido.
- Sistema de ventilacin: un sistema de extraccin local y/o
general es recomendado para mantener las exposiciones del empleado
tan bajas como sea posible. Extraccin local es generalmente
preferida porque esta puede controlar las emisiones de los
contaminantes desde su fuente, impidiendo dispersin del mismo al
lugar general de trabajo. Por favor, consulte el documento de la
ACGIH, Industrial Ventilation, manual de prcticas recomendadas, la
edicin ms reciente, para ms detalles.
- Respiradores Personales (Aprobados por NIOSH): para
emergencias o casos donde los niveles de exposicin no son
conocidos, use un rostro completo de presin positiva, respirador
con suministro de aire. ADVERTENCIA: Los respiradores purificadores
de aire no protegen a los trabajadores en atmsferas deficientes de
oxgeno.
- Proteccin de la piel: use guantes protectores y ropa limpia
que cubra el cuerpo.
- Proteccin de los ojos: utilice gafas de seguridad qumica.
Mantenga los lava ojos y regaderas de emergencia en el rea de
trabajo.
1. Sustancia: REACTIVO DE BRADFORD
2. Apariencia
- Forma: Solucin
- Color: Azul oscuro
- Olor: Parecido al alcohol
3. Identificacin de Peligros
- Descripcin del riesgo: Corrosivos
- Informacin sobre los riesgos para el hombre y el medio
ambiente: El producto tiene que ser etiquetados por el
procedimiento de clculo de las directrices internacionales. Provoca
quemaduras.
- Sistema de clasificacin: La clasificacin se hizo de acuerdo a
las ltimas ediciones de las listas de sustancias internacional, y
ampliado a partir de datos de la empresa y la literatura.
4. Primeros Auxilios
-
- Instrucciones generales: Quitarse de inmediato toda prenda
ensuciada con el producto.
- En caso de inhalacin: En caso de personas desmayadas deben
depositarse en posicin lateral para el transporte.
- En caso de contacto con la piel: Lavar inmediatamente con agua
y jabn y enjuagar bien.
- En caso de contacto con los ojos: Limpiar los ojos abiertos
durante varios minutos con agua corriente, consultar un mdico.
- En caso de ingestin: Beber mucha agua y respirar aire fresco.
Llame inmediatamente a un mdico.
5. Lucha Contra Incendios
- Sustancias extintoras apropiadas: CO2, polvo extintor o agua
pulverizada. Combatir incendios mayores con chorro de agua o espuma
resistente al alcohol.
- Equipo de proteccin: No requiere medidas especiales.
6. Proteccin Individual
- Medidas personales relacionadas con la seguridad: Use equipo
de proteccin. Mantenga las personas sin proteccin lejos.
- Medidas para la proteccin del medio ambiente: Diluir con
abundante agua. No permita que penetre en la canalizacin / aguas
superficiales o subterrneas.
- Procedimiento de limpieza / recepcin: Quitar con material
absorbente (arena, tierra de diatomeas, aglutinante de cidos,
aglutinante universal, serrn). Utilizar un neutralizador. Desechar
el material contaminado segn normas del laboratorio. Asegurar una
ventilacin adecuada.
7. Almacenamiento y Manipulacin
Manipulacin:
Instrucciones sobre la manipulacin segura:
- Asegurar una buena ventilacin / aspiracin en el lugar de
trabajo.
- Evitar la formacin de aerosoles.
Prevencin de incendios y explosiones: No requiere medidas
especiales.
Almacenamiento:
- Exigencias con respecto al almacn y los recipientes: No
requiere medidas especiales.
-
- Informacin sobre el almacenamiento en caso de un
almacenamiento conjunto: No es necesario.
- Instrucciones adicionales sobre las condiciones de
almacenamiento: Mantener el recipiente cerrado hermticamente.
8. Informacin Toxicolgica
Toxicidad aguda:
- Efecto estimulante primario:
- En la piel: Efecto custico en la piel y las mucosas.
- En el ojo: Fuerte efecto custico.
- Sensibilizacin: No se conocen efectos sensibilizadores.
- Indicaciones toxicolgicas adicionales:
El producto tiene los siguientes riesgos de acuerdo a los mtodos
de clculo de la CE para Preparados: Corrosivo.
La ingestin produce un fuerte efecto custico en la boca y la
garganta con peligro de perforacin del esfago y del estmago.
1. Sustancia: SULFATO DE AMONIO
2. Identificacin de Peligros
- Riesgo a la Salud: Peligroso en caso de contacto con la piel
(irritante), contacto con el ojo (irritante), inhalacin e
ingestin.
- Puede ser combustible a altas temperaturas.
3. Primeros Auxilios
- En caso de inhalacin: Si inhal, exhalar al aire libre. Si no
respira, dar respiracin artificial. Si respira dificultosamente,
dar oxgeno. Conseguir atencin mdica.
- En caso de contacto con la piel: Lavar con abundante agua.
Cubrir la piel con un emoliente. Retirar la ropa y calzado
contaminados. Conseguir atencin mdica.
- En caso de contacto con los ojos: Retirar lentes de contacto.
Si hay contacto, lavar
-
con abundante agua durante 15 minutos. Conseguir atencin
mdica.
- En caso de ingestin: No induzca el vomito, a menos que sea
supervisado por personal mdico. No administre nada por va oral a
alguien inconsciente. Afloje la ropa apretada, cinturones, relojes
y pulseras. Si aparecen sntomas, consiga atencin mdica
4. Lucha Contra Incendios
- Sustancias extintoras apropiadas: Polvo qumico seco, en caso
de mayor incendio, rociar con agua como spray, no como chorro.
5. Proteccin Individual
- Gafas de seguridad
- Delantal de laboratorio
- Guantes
- En caso de ser necesario, equipo de respiracin.
6. Almacenamiento y Manipulacin
- Instrucciones sobre la manipulacin segura: Mantener lejos del
calor y fuentes de ignicin, no ingerir, trabajar en un ambiente
ventilado o con un equipo de respiracin.
- Informacin sobre el almacenamiento: Mantener cerrado, en un
rea fra y ventilada.
7. Informacin Toxicolgica
- Puede ser un mutgeno. Se han realizado pruebas, pero de
momento no se ha llegado a nada concluyente.
- Al ser ingerido, puede actuar como laxante. Al ser ingerido de
forma sistemtica, puede causar envenenamiento por amonio, causando
vmito, hipermotilidad y diarrea. Al consumirse en grandes dosis,
puede causar diuresis.
1. Sustancia: SULFATO DE MAGNESIO
2. Identificacin de Peligros
- Descripcin del riesgo: Peligroso en caso de ingestin.
Ligeramente peligroso en caso
-
de contacto con la piel (irritante), contacto con el ojo
(irritante), inhalacin.
3. Primeros Auxilios
- En caso de inhalacin: permita a la vctima descansar en un rea
ventilada, Consiga atencin mdica.
- En caso de contacto con la piel: Lavar con abundante agua.
Gentilmente y a fondo lave la piel contaminada haciendo correr agua
utilizando un jabn no abrasivo. Poner especial nfasis en las
arrugas, pliegues y otras irregularidades en la piel. Cubrir la
piel irritada con un emoliente. Conseguir atencin mdica.
- En caso de contacto con los ojos: Lave los ojos con agua por
lo menos durante 15 minutos, manteniendo los prpados abiertos.
- En caso de ingestin: No induzca vmito. Afloje ropa apretada,
cinturn, reloj y pulseras. Si la vctima no respira, realice
respiracin boca a boca. Consiga atencin mdica.
4. Lucha Contra Incendios
- No inflamable
5. Proteccin Individual
- Gafas de seguridad
- Delantal
- Guantes
- En caso de ser necesario, equipo de respiracin.
6. Almacenamiento y Manipulacin
- Instrucciones sobre la manipulacin segura: no se han
encontrado precauciones especficas.
- Informacin sobre el almacenamiento: no es necesario un
almacenamiento especfico.
7. Informacin Toxicolgica
- Efectos crnicos en humanos: al ser ingerido, en caso de
mujeres embarazadas, pasa a travs de la placenta y es excretado en
la leche humana
-
1. Sustancia: FOSFATO DE POTASIO
2. Identificacin de peligros
- Descripcin del riesgo: Peligroso en caso de ingestin y
contacto con ojos (irritante) .Ligeramente peligroso en caso de
contacto con la piel (irritante) e inhalacin.
3. Primeros Auxilios
- En caso de inhalacin: exhalar al aire fresco. Si no respira,
dar respiracin artificial. Si respira dificultosamente, dar oxgeno.
Conseguir atencin medica.
- En caso de contacto con la piel: Lavar con agua y jabn, cubrir
la piel irritada con un emoliente. Conseguir atencin medica si
aparece irritacin.
- En caso de contacto con los ojos: Revise y remueva lentes de
contacto. Lave los ojos con agua por lo menos durante 15 minutos,
manteniendo los prpados abiertos.
- En caso de ingestin: No induzca vmito. Afloje ropa apretada,
cinturn, reloj y pulseras. Si la vctima no respira, realice
respiracin boca a boca. Consiga atencin mdica.
4. Lucha Contra Incendios
- No inflamable
5. Proteccin Individual
- Gafas de seguridad
- Delantal
- Guantes
- En caso de ser necesario, equipo de respiracin.
6. Almacenamiento y Manipulacin
- Instrucciones sobre la manipulacin segura: no respirar el
polvillo, evitar contacto con los ojos. Si no se siente bien,
conseguir atencin mdica y mostrar la etiqueta en lo posible.
- Informacin sobre el almacenamiento: Higroscpico, mantener
cerrado, en un ambiente fro y ventilado, no por sobre 23C.
7. Informacin Toxicolgica
- El envenenamiento por potasio es raro debido a que se requiere
de gran cantidad, las cuales normalmente causan vmito, y es
rpidamente excretado. De no ser as (al
-
sumarse son algn problema anterior), los sntomas pueden incluir
gastroenteritis, nauseas, vmito, dolor estomacal, diarrea; puede
afectar el sistema nervioso central, el metabolismo, el sistema
cardiovascular y riones.
-
C.2 FICHAS DE SEGURIDAD DE EQUIPOS Y PROCEDIMIENTOS
1. Equipo: CALDERA Procedimiento: Manejo y limpieza de la
caldera
2. Componentes del Procedimiento
- Caldera
- Sistema de caera
- Cmara de almacenamiento de vapor
- Bomba
3. Identificacin de Peligros
- Tropiezo con cables, partes del equipo u otros instrumentos
que se encuentren en el suelo.
- Quemadura por contacto con la caldera, caeras con vapor o fuga
de vapor.
- Explosin de la cmara de almacenamiento por aumento de la
presin.
- Peligro de incendio por sobrecalentamiento de la caldera por
falta de agua.
4. Primeros Auxilios
- Golpe: Reposo, aplicar hielo en caso de inflamacin.
- Dolores de cabeza por ruido: Reposo, en caso de que el alumno
lo requiera administrar un analgsico.
- Cada: No levantar a la persona inmediatamente; asegurar antes
de que no haya fracturas ni aturdimiento. En caso de prdida de
conciencia llamar una ambulancia.
- Quemadura: Enfriar la quemadura con agua e ir inmediatamente a
un centro mdico.
- Luxacin y contractura: Reposo aplicar hielo en caso de
inflamacin. En caso de luxacin inmovilizar en posicin que se
encuentra la articulacin. No intentar hacer masajes o aplicar
pomadas. Llevar a un centro de salud inmediatamente
- Caso de incendio: Avisar a la autoridad pertinente y tratar de
controlar el incendio.
- Informar al ayudante/profesor.
5. Proteccin Individual
-
- Zapatos cerrados con suela de goma.
- Guantes gruesos.
- Delantal de laboratorio.
- Al movilizar equipos de alto peso: Flexionar piernas, no hacer
trabajo que dae la espalda.
- Mantener el suelo seco para evitar cadas y electrocucin.
- Verificar que todas las mangueras estn bien conectadas para
evitar fugas.
1. Equipo: CENTRFUGA GRAVITATORIA SORVALL RC5B Procedimiento:
Manejo y limpieza de la centrfuga
2. Componentes del Procedimiento
- Tapa principal
- Sujetador de capachos
- Palanca de desganche mecnico
- Sistema de refrigeracin
3. Identificacin de Peligros
- Apriete de dedos al manejar el equipo.
- Quemadura por electricidad al momento de utilizar el panel de
control con las manos mojadas.
- Luxacin y contractura al mover equipos o material pesado.
- Tropiezo con cables, partes del equipo u otros instrumentos
que se encuentren en el suelo.
- Golpe en las manos por manejo del equipo en
funcionamiento.
-
4. Primeros Auxilios
- Golpe: Reposo, aplicar hielo en caso de inflamacin.
- Dolores de cabeza por ruido: Reposo, en caso de que el alumno
lo requiera administrar un analgsico.
- Cortaduras: Cubrir el rea afectada con una gasa estril y
aplicar presin para evitar salida de sangre. Si el vidrio est
enterrado, no remover y llevar a un centro de salud lo antes
posible.
- Cada: No levantar a la persona inmediatamente; asegurarse
antes de que no haya fracturas ni aturdimiento. En caso de prdida
de conciencia llamar una ambulancia.
- En caso de corte menor, limpiar la herida, desinfectar y
cubrir con vendaje.
- Quemadura: Enfriar la quemadura con agua e ir inmediatamente a
un centro mdico.
- Luxacin y contractura: Reposo, aplicar hielo en caso de
inflamacin. En caso de luxacin inmovilizar en posicin que se
encuentra la articulacin. No intentar hacer masajes o aplicar
pomadas. Llevar a un centro de salud inmediatamente.
- Informar al ayudante/profesor.
5. Proteccin Individual
- Zapatos cerrados con suela de goma.
- Delantal de laboratorio.
- Al movilizar equipos de alto peso. Flexionar piernas, no hacer
trabajo que dae la espalda.
- Mantener el suelo seco para evitar cadas y electrocucin.
- Manejo de equipos elctricos con manos y suelos seco.
- Esperar que el equipo est completamente detenido para su
apertura.
1. Equipo: CENTRIFUGA SEPARADORA DE DOBLE RODETE WESTFALIA
SEPARATOR, SA 1- 01-175
Procedimiento: Manejo y limpieza de la centrifuga
-
2. Componentes del Procedimiento
- Tambor
- Parte superior del bastidor
- Crter
3. Identificacin de Peligros
- Cada debido a suelo mojado.
- Apriete de dedos al manejar el equipo.
- Quemadura por electricidad al momento de utilizar el panel de
control con las manos mojadas.
- Dolores de cabeza por ruido.
- Luxacin y contractura al mover equipos o material pesado.
- Tropiezo con mangueras u otros instrumentos o equipos que se
encuentren en el suelo.
4. Primeros Auxilios
- Golpe: Reposo, aplicar hielo en caso de inflamacin.
- Dolores de cabeza por ruido: Reposo, en caso de que el alumno
lo requiera administrar un analgsico.
- Cortaduras: Cubrir el rea afectada con una gasa estril y
aplicar presin para evitar salida de sangre. Si el vidrio est
enterrado, no remover y llevar a un centro de salud lo antes
posible.
- Cada: No levantar a la persona inmediatamente; asegurarse
antes de que no haya fracturas ni aturdimiento. En caso de prdida
de conciencia llamar una ambulancia.
- En caso de corte menor, limpiar la herida, desinfectar y
cubrir con vendaje.
- Quemadura: Enfriar la quemadura con agua e ir inmediatamente a
un centro mdico.
- Luxacin y contractura: Reposo aplicar hielo en caso de
inflamacin. En caso de luxacin inmovilizar en posicin que se
encuentra la articulacin. No intentar hacer masajes o aplicar
pomadas. Llevar a un centro de salud inmediatamente.
- Informar al ayudante/profesor.
5. Proteccin Individual
-
- Zapatos cerrados con suela de goma.
- Antiparras.
- Guantes.
- Proteccin auditiva.
- Delantal de laboratorio.
- Al movilizar equipos de alto peso. Flexionar piernas, no hacer
trabajo que dae la espalda.
- Mantener el suelo seco para evitar cadas y electrocucin.
- Manejo de equipos elctricos con manos y suelos seco.
1. Equipo: FERMENTADORES, BIOLAFITTE Y FERMENTADOR PILOTO
Procedimiento: Manejo, limpieza y esterilizacin del equipo
2. Componentes del Procedimiento
- Rotor
- Tapa con entradas para mangueras y medidores
- Estanque de fermentacin
- Mangueras
3. Identificacin de Peligros
- Cada debido al suelo mojado.
- Golpes en la cabeza por mal manejo de la tapa.
- Apriete de dedos al manejar el equipo, especialmente la
tapa.
- Explosin del equipo por alza de la presin.
- Quemadura por electricidad al momento de utilizar el rotor con
las manos mojadas.
- Dolores de cabeza por ruido.
- Luxacin y contractura al mover equipos o material pesado.
-
- Tropiezo con mangueras u otros instrumentos o equipos que se
encuentren en el suelo.
- Fugas de vapor.
- Quemaduras con vapor al momento de esterilizar.
- No abrir el fermentador durante la fermentacin y
esterilizacin.
4. Primeros Auxilios
- Golpe: Reposo, aplicar hielo en caso de inflamacin.
- Dolores de cabeza por ruido: Reposo, en caso de que el alumno
lo requiera administrar un analgsico.
- Cortaduras: Cubrir el rea afectada con una gasa estril y
aplicar presin para evitar salida de sangre. Si el vidrio est
enterrado, no remover y llevar a un centro de salud lo antes
posible.
- Cada: No levantar a la persona inmediatamente; asegurarse
antes de que no haya fracturas ni aturdimiento. En caso de prdida
de conciencia llamar una ambulancia.
- Quemadura: Enfriar la quemadura con agua e ir inmediatamente a
un centro mdico.
- Luxacin y contractura: Reposo aplicar hielo en caso de
inflamacin. En caso de luxacin inmovilizar en posicin que se
encuentra la articulacin. No intentar hacer masajes o aplicar
pomadas. Llevar a un centro de salud inmediatamente.
-Informar al ayudante/profesor.
5. Proteccin Individual
- Zapatos cerrados con suela de goma.
- Antiparras.
- Casco, en el momento de mover la tapa con el rotor.
- Guantes gruesos al momento de esterilizar.
- Proteccin auditiva.
- Delantal de laboratorio.
- Pantalones largos.
- Al movilizar equipos de alto peso. Flexionar piernas, no hacer
trabajo que dae la espalda.
- Mantener el suelo seco para evitar cadas y electrocucin.
-
- Manejo de equipos elctricos con manos y suelos secos.
1. Procedimiento: LIMPIEZA Y MANIPULACIN DE MATERIAL DE
VIDRIO
2. Identificacin de Peligros
- Corte debido a mala manipulacin, como lavado con excesiva
fuerza, golpearlo o cada de ste.
3. Primeros Auxilios
- En caso de corte menor, limpiar la herida, desinfectar y
cubrir con vendaje.
- Informar al ayudante/profesor.
4. Proteccin Individual
- Zapatos cerrados con suela de goma.
- Delantal de laboratorio.
- Pantaln largo.
5. Otros
- Descartar material trisado.
- En caso de rompimiento, descartar y limpiar con cuidado.
1. Equipo: MOLINO DE BOLAS DYNO MILL TYP KDL Procedimiento:
Manejo y limpieza equipo
2. Componentes del Procedimiento
- Contenedor de molienda
-
- Material de molienda
- Discos agitadores
- Espaciadores
- Sistema de refrigeracin
3. Identificacin de Peligros
- Cada debido al suelo mojado o por material de molienda.
- Apriete de dedos al manejar el equipo.
- Quemadura por electricidad al momento de utilizar el panel de
control con las manos mojadas.
- Dolores de cabeza por ruido.
- Luxacin y contractura al mover equipos o material pesado.
- Tropiezo con mangueras u otros instrumentos o equipos que se
encuentren en el suelo.
- Quemadura por calentamiento del equipo por mala
refrigeracin.
4. Primeros Auxilios
- Golpe: Reposo, aplicar hielo en caso de inflamacin.
- Dolores de cabeza por ruido: Reposo, en caso de que el alumno
lo requiera administrar un analgsico.
- Cortaduras: Cubrir el rea afectada con una gasa estril y
aplicar presin para evitar salida de sangre. Si el vidrio est
enterrado, no remover y llevar a un centro de salud lo antes
posible.
- Cada: No levantar a la persona inmediatamente; asegurarse
antes de que no haya fracturas ni aturdimiento. En caso de prdida
de conciencia llamar una ambulancia.
- Quemadura: Enfriar la quemadura con agua e ir inmediatamente a
un centro mdico.
- Luxacin y contractura: Reposo aplicar hielo en caso de
inflamacin. En caso de luxacin inmovilizar en posicin que se
encuentra la articulacin. No intentar hacer masajes o aplicar
pomadas. Llevar a un centro de salud inmediatamente.
-Informar al ayudante/profesor.
5. Proteccin Individual
-
- Zapatos cerrados con suela de goma.
- Antiparras.
- Guantes.
- Proteccin auditiva.
- Delantal de laboratorio.
- Al movilizar equipos de alto peso. Flexionar piernas, no hacer
trabajo que dae la espalda.
- Mantener el suelo seco para evitar cadas y electrocucin.
- Manejo de equipos elctricos con manos y suelos seco.