PROBLEMAS DE DILUCIÓN 1) 1 ml de cultivo de bacterias se diluye con 9 ml de peptona.1/10 de ml de esta dilución se diluye en 9.9 ml de peptona. De esta dilución 1/10 de ml se pone en una placa con 25 ml de medio. Luego de 24 h de incubación se contaron 219 colonias. ¿Cuántas células había en el cultivo original? 1 ml 0,1ml 0,1ml 9 ml 10 -1 10 -3 219 colonias 10 -3 = 219 x 1000 = 219000 Redondeo = 220000 Reporte = 22 x 10 4 UFC /ml o g 2) 5 g de yogurt se mezclan con 45 ml de agua de peptona. Se hacen dos diluciones sucesivas de 1/100.1/10 de ml se pone en placa de la última dilución. Esto se hace en duplicado. Luego de incubar se obtienen l os siguientes resultados: 75 UFC Y 73 UFC. Calcular el número de UFC / ml o g de yogurt. 5g 0,01ml 0,1 ml 10 -1 10 -4 10 -6 75UFC 73 UFC 10 -6 =75000000 10 -6 = 73000000 75000000 + 73000000 = 74000000 2
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diferenciarlas. Reacciones que tengan las siguientes cuatro características son muy
importantes para lograr este propósito:
1. Capacidad para producir Indol. E. Coli lo produce, y Ent. Aerogenes no.
2. Cantidad de ácido producida en un medio especial de caldo glucosado,
adicionado del indicador rojo de metilo. Los dos microorganismos producen
ácido de la glucosa. Sin embargo, E. Coli produce pHmás bajo, lo que hace que
vire al rojo de metilo mientras que Ent. Aerogenes no cambia el color.
3. Capacidad para producir acetilmetilcarbinol en un medio de peptona
glucosado. Este compuesto químico se detecta por medio de la reacción de
Voges – Proskauer. E. Coli no produce acetilmetilcarbinol mientras que Ent.
Aerogenes sí lo hace.
4. Utilización de citrato de sodio. Ent. Aerogenes es capaz de utilizar el citrato de
sodio como su única fuente de carbono, esto es, se desarrollará en un medio
de cultivo químicamente definido en el cual el citrato de sodio es el único
compuesto de carbono. E. Coli no se desarrolla en estas circunstancias.
Por conveniencia, a estas pruebas se las ha designado en forma colectiva
reacciones IMViC (I = Indol, M = rojo de metilo, Vi = reacción Voges – Proskauer y C
= citrato).
Es necesario cuidar los siguientes detalles cuando se sometan muestras de agua a
análisis bacteriológicos:
1. La muestra se tomará en frasco estéril.
2. La muestra ha de ser representativa de la fuente original.
3. Se evitará la contaminación de la muestra durante y después de obtenerla.
4. La muestra se analizará lo mas pronto posible.
5. Si no es posible examinar la muestra enseguida, deberá guardarse en
refrigeración entre 0 y 10 ºC.Los procedimientos bacteriológicos de rutina
son:
a. Cuenta en placas para determinar el número de bacterias.
b. Pruebas que revelen la presencia de bacterias coliformes
Recuento por dilución:
Se basan estos métodos en la presunción de que las bacterias se hallan
normalmente distribuidas en un medio líquido, esto es, en las muestras repetidasdel mismo tamaño de un mismo producto, debe esperarse contengan el mismo
número de gérmenes como promedio; naturalmente, algunas de las muestras
pueden contener algunos gérmenes más o menos. La cifra media es el número más
probable (Most Probable Number o MPN).
Esta técnica se usa principalmente para la estimación de bacilos coliformes,
empleando caldo de MacConkey, pero puede utilizarse casi para toda clase de
gérmenes en muestras líquidas si puede observarse fácilmente el crecimiento, por
ejemplo, si hay turbidez y producción de ácido. Ejemplos de ellos son las levaduras
y hongos en jugos y bebidas de frutas, clostridios en emulsiones de alimentos,