POR: ANGÉLICA AQUINO MARÍA GARRIGA MERARIS SOTO LUIS E. OQUENDO Tinción de esporas, tinción de flagelos y otras pruebas para identificar bacilos Gram-positivos.

POR:ANGÉLICA AQUINO

MARÍA GARRIGAMERARIS SOTO

LUIS E . OQUENDO

Tinción de esporas, tinción de flagelos y otras pruebas para

identificar bacilos Gram-positivos

CATALASA - , NO FORMADORES DE ESPORAS

Bacilos Gram +

Hay tres especies de Erysipelothrix: Erysipelothrix rhusiopathiae Erysipelothrix tonsillarum Erysipelothrix inopinata

Erysipelothrix rhusiopathiae es la única que causa enfermedades en humanos

Gram-positivaCatalasa negativaNo formadora de esporasTiende a formar largos filamentosNo motilesUreasa negativoErisipeloideProduce H2S

http://www.actasdermo.org/es/forma-cutanea-difusa-erisipeloide/articulo/13052968/

Sensible a: Penicilina Cefalosporinas Eritromicina Clindamicina

Resistente a: vancomicina

http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/A/Antibiotics.html

Deben ser cultivadas en caldo nutriente con: 1% de glucosa 5% de CO2 A 35 ˚C

También crece en agar chocolate y agar sangre

En agar sangre las colonias son no hemolíticas

Después de 48h de incubación se ven dos diferentes tipos de colonias

Pequeña, forma lisa transparente, reluciente y bordes enteros

Grande, colonias ásperas, estructura curvea, bordes irregulares

Aracnobacterium, 9 especies Aracnobacterium haemolyticum Aracnobacterium pyogenes Aracnobacterium bernardiae

Catalasa negativa

Agar Sangre

Beta-hemólisis

Tinción de Flagelos

Tinción de flagelos

Los flagelos son órganos de locomoción

Los flagelos están compuestos por cerca de 20 proteínas, con aproximadamente otras 30 proteínas para su regulación y coordinación

La flagelina es la principal del flagelo

Tiene su origen en el protoplasma de la célula bacteriana

Tipos de flagelos

Métodos

Kodak Cubrir la preparación durante 5 a 10 minutos Lavarlo por 2 ó 3 minutos Observar la placa de la periferia hacia el centro

Método Leifson Fuscina básica en alcohol etílico Acido tánico en agua destilada Cloruro de sodio en agua destilada

Tinte RYU Se utiliza en el borde del cubreobjetos Después de 5 a 10 minutos se examina la muestra

NO FORMADORES DE ESPORA, ACTINOMICETOS AERÓBICOS

FILAMENTOSOS

Bacilos Gram +

Actinomicetos

Grupo heterogéneo

Bacterias filamentosas ramificadas

Similar al crecimiento de hongos

Aerobios / Anaerobios facultativos

Crecimiento lento

No motil

“Acid-fast stain”

http://www.biotechinfo.in/study-material-/acid-fast-staining-by-ziehl-neelsen-method/

“Acid-fast Stain”

http://www.highlands.edu/academics/divisions/scipe/biology/labs/rome/acid_fast_stain.htm

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/Lab%20Stuff/Stains/Bacterial%20Stains.htm

Nococardia spp.

Presente en suelo y en material vegetativo

No motil

Parcialmente ácido-resistentes Se utiliza prueba

modificada Utiliza ácido débil (0.5% a 1% H2SO4)

En humanos causa infecciones pulmonares y

subcutáneas sistémica afección al Sistema

Nervioso Central

La infección progresa rápidamente

Actinomadura spp. Gordonia spp.

A. madurae se diferencia por ser Xilosa positivo

Reduce nitratoNo tiene micelioNo motilParcialmente ácido-

resistente

Otros Actinomicetos

Rhodococcus spp.

R. equis

Parcialmente ácido-resistente.

Se diferencia por exhibir colonias rosa-salmón en Agar Sangre Parecido a Klebsiella

http://people.upei.ca/jlewis/html/lab_4_coryne-_mycobacterium.html

Identificación Actinomicetos

FORMADORES DE ESPORAS, NO FILAMENTOSOS, CATALASA +

Bacilos Gram +

Esporas

Resistentes a condiciones ambientales adversas.

Organismos que producen esporas: Hongos Plantas Bacterias

http://promocionxxii.med-unjfsc.edu.pe/2011/10/genero-clostridium.html

Clostridium difficile

Formación de esporas

Tinción de Esporas

1. Fijar la bacteria en la laminilla.

2. Colocar un pedazo de papel toalla en la laminilla.

3. Echar verde malaquita sobre el papel toalla.

Tinción de Esporas

4. Calentar la laminilla por 5 minutos.

5. Lavar el frotis con agua destilada.

6. Cubrir el frotis con safranina por 30 segundos.

Tinción de Esporas

7. Lavar con agua destilada y secar.

B. anthracis

http://textbookofbacteriology.net/Anthrax.html

Bacilos formadores de esporas

Gram positivos

Catalasa positivos

Aeróbicos / Anaeróbicos facultativos

Muchas de las especies crecen en Agar de Sangre

Bacillus spp. & Clostridium spp.

Bacillus spp.

B. anthracis No motil No fermenta lactosa Infecciones humanas

B. cereus Infecciones humanas Motiles Beta hemolítico

B. thuringienses Insectos Beta hemolítico

B. subtillis Beta hemolítico Aspecto liso, mucoide

o rugoso

B. anthracis

Son grandes, grises y planas.

En Agar Sangre no son hemolíticas.

Son halófilas y crecen en medios alcalinos.

Susceptibles a penicilina, fluroquinolinas, entre otros.

“Medusa head”

B. anthracis

http://biogefahr.shopkeeper.de/cgi-bin/nw/biogefahr-de/

B. cereus

Tiene dos enterotoxinas Emética Diarrea

Crece a 37˚C en Agar Sangre.

Resistentes a penicilina.

Susceptible a vancomicina y clindamicina.

Figura 16-19 Bacillus cereus en Agar de Sangre

BACILOS CATALASA +, NO FORMADORES DE ESPORAS Y NO FILAMENTOSOS

Identificación de Bacilos Gram + Aeróbicos

Características Generales

Se encuentran en el ambiente (agua y suelo) con facilidad.

No se consideran altamente patogénicos, mas sin embargo se están aislando en infecciones clínicas con mayor frecuencia.

Unos pocos son menos comunes, mas causan enfermedades severas.

Diagrama de Identificación

Corynebacteria

C. (ulcerans, diphtheriae, pseudotuberculosis) Catalasa + No motil CTBA (medio) forman

“halo” marrón

C. diphtheria No produce ureasa Fermenta glucosa y

maltosa Reduce nitrato a nitrito Prueba de Elek para

detectar toxina

Elek’s Test

Corta papel de filtro de 75% diámetro de plato de agar y 2 cm de ancho.

Saturar con antitoxina C. diphtheria y esperar que seque.

Añadir suero de conejo y “potassium tellurite” al agar caliente.

Elek’s Test

Coloca los papeles en el plato de agar caliente y deja que llegue al fondo.

Luego de sólido, añade el organismo y pon paralelo a este, controles negativos y positivos.

Incubar de 18- 24 horas.

Identificación de C. diphtheria

Rothia and Listeria

Rothia spp.

Cocos Gram + Disimulan ser BacilosFamilia

MicrococcaceaNitrato +No motilHidrolizan esculinaUreasa Negativa2/3 catalasa +

Listeria monocytogenes

Bacilos Gram +Familia ListericeaCatalasa +Hidrolizan esculinaMotilesB-hemolíticosCrece en 6.5% NaCl

IDENTIFICACIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE BACILOS GRAM POSITIVOS

Resultados de Pruebas Bioquímicas

Pruebas de Identificación

http://es.slideshare.net/jmhr23/bacilos-gram-positivos-aerobios-no-esporulados

Pruebas de Identificación

https://www.scribd.com/doc/28806551/Bacteriologia-diagnostica

Pruebas de Identificación

Tabla 1 – Identificación y Diferenciación de géneros relacionados

Pruebas Listeria Lactobacillus Erysipelothrix

Microscopia Cocobacilos Bacilos Bacilos

Catalasa + - -

Vancomicina S R R

Motilidad +(flagelos)

- -

H2S - - +

Bilis Esculina + - -

NaCl 6.5% + - -

B hemólisis V - - S – Susceptible, R – Resistente, V - Variable

http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf

Pruebas de Identificación

http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf

Pruebas de Identificación

Diferenciación de especies del género BacillusPruebas B. firmus B. subtillis B. sphaericusCatalasa + + +Espora + (central) + (central) + (central)Oxidasa - - +Licuefacción de gelatina

+ + +

Hidrólisis de almidón + + -

Citrato - + -Crecimiento NaCl 7% + + d

Reducción Nitrato d + -Crecimiento anaeróbico

- - -

Fermentación Glucosa + + -

L-arabinosa - + -D-xilosa - + -D-manitol + - -Ureasa -  - +Motilidad + + -VP - + -Indol - - -

d – Reacción débilhttp://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis404.pdf