PLATELIA™ Candida Ag Plus - Bio-Rad12. ВНИМАНИЕ: Следва лист с потенциални химически опасности, съдържащи се в някои

1

PLATELIA™ Candida Ag Plus 96 62784

ОТКРИВАНЕ НА CANDIDA МАНАН АНТИГЕН В ЧОВЕШКИ СЕРУМ ИЛИ ПЛАЗМА ЧРЕЗ ИМУНОЕНЗИМЕН МЕТОД

1- ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ Platelia™ Candida Ag Plus представлява имуноензимен микроплаков метод тип сандвич за откриване на циркулиращ Candida манан антиген в човешки серум или плазма. 2- ПОКАЗАНИЯ ЗА УПОТРЕБА Поставянето на диагноза инвазивна кандидоза трябва да се основава на комбинирано откриване на антитела и циркулиращи антигени 13. Platelia™ Candida Ag Plus (каталожен номер 62784) заедно в комбинация с Platelia™ Candida Ab Plus (каталожен номер 62785) е тест, който може да помогне за поставяне на бърза 11 и прецизна диагноза като част от пълната диагностика, използвайки комбинация от вътрешни и ятрогенни рискови фактори, както и клинични и микологични данни 10, 13, 14. Тази тестова комбинация е също така съществена част от клиничния и лабораторния процес на мониториране на пациента, както и в помощ на терапевтични решения 8. 3- КЛИНИЧНА СТОЙНОСТ Инфекциите с Candida се класифицират като първа причина за нозокомиални гъбични инфекции; кандидозите са четвърта по ред причина относно нозокомиални кръвни инфекции 12, 15, 16 Инвазивните кандидози представляват най – сериозните форми на инфекции с Candida със смъртност, движеща се от 30 до 70% при имуносупресирани пациенти. Поставянето на диагноза при тях е все още трудно поради липсата на специфични клинични симптоми и лошата чувствителност на кръвните култури. Поставянето на диагноза инвазивна кандидоза при започнало подходящо лечение обикновено се базира на комбинация от данни 2. По този повод диагнозата на системните кандидози трябва да обедини серологичните техники с директните микологични методи. Откриването на циркулиращи антигени в серум или плазма води до подобряване поставянето на диагноза при пациенти с риск от инвазивна кандидоза 10, 13, 14. Основните рискови фактори включват неутропения след химиотерапия или при лечение с имуносупресиращи вещества (при пациенти, болни от рак, онкохематологични и след трансплантации) 4, 10, широко спектърна антибиотикотерапия, венозни катетри, парентерално хранене, бъбречна диализа, поставяне на протеази (при хоспитализирани пациенти в звена за медицински и интензивни хирургически грижи) 5, 13, 16. Между антигените на Candida, манан антигенът е полизахарид, нековалентно свързан към клетъчната стена на дрождите, и представлява над 7% от сухото тегло на C. аlbicans. Този антиген се явява като един от основните биомаркери за поставяне на диагнозата Инвазивна Кандидоза. Редовното мониториране на рисковите пациенти в комбинация с откриване на циркулиращ манан антиген и анти-мананови антитела може да подпомогне диагностицирането на инвазивна кандидоза 9, 10, 13. 4- ПРИНЦИП НА ПРОЦЕДУРАТА Platelia™ Candida Ag Plus е едностъпков имуноензимен микроплаков метод тип сандвич, който открива циркулиращ Candida манан антиген в човешки серум или плазма. Методът използва плъши моноклонални антитела (MAb), EBСA-1, които са директно насочени срещу Candida α 1-5 олигоманозиди, и са определени в предишни проучвания 13, 14. EBСA-1 моноклоналните антитела се използват за: натоварване ямките на микроплаката и свързване на манан антигена; откриване на антигена, свързан към чувствителната микроплака (конюгат реактив: моноклонални антитела,

маркирани с пероксидаза). Серумните или плазмени проби се обработват топлинно в присъствие на EDTA, за да се отделят имунните комплекси и да се утаят серумните протеини, които евентуално биха могли да възпрепятстват реакцията. Така обработените серумни или плазмени проби и конюгата се добавят към ямките на микроплаката, натоварени с анти-манан моноклонално антитяло. След инкубация на 370С стриповете се измиват, за да се отстрани всякакъв несвързан материал. Ако в човешките проби се намира циркулиращ манан антиген, се формира комплекс: анти-манан моноклонално тяло – манан антиген – анти-манан моноклонално тяло / пероксидаза. След това се добавя хромогенен разтвор, съдържащ пероксидазен субстрат, и плаката се инкубира на стайна температура, което позволява откриване на свързани комплекси към микроплаковите ямки. Ензимната реакция се стопира с 1N сярна киселина. Коефициентът на поглъщане (оптичната плътност) на човешки проби и калибратор се определя с помощта на спектрофотометър, настроен с дължина на вълната 450/620 nm.

2

5- РЕАКТИВИ Реактивите се доставят в количество, достатъчно за извършване на 96 теста в максимум 9 партиди. Относно условията за съхранение и срокът на годност на реактивите, моля обърнете внимание на етикетите на кутията. Преди употреба оставете всички реактиви на стайна температура (+18-30°C). Веднага след приключване на използването им върнете всички реактиви на температура +2-8°C. Върнете неизползваните стрипове в тяхната оригинална опаковка и ги запечатайте отново. Не отстранявайте пакетчето с изсушаващо вещество.

Компонент Съдържание Количество

R1 Микроплака Микроплака: - 96 ямки (12 стрипа с по 8 ямки на всеки), натоварени с анти - манан моноклонално антитяло EBCA-1

1

R2 Концентриран миещ

разтвор (20х)

Концентриран миещ разтвор (20X): - Tris-NaCl буфер (pH 7.4) - 2 % Tween® 20 - Консервант: <1.5% ProClin™300

1 x 70 ml

R3 Калибратор 0

Конюгат 0 pg/ml (готов за употреба): - Буфер на Трис-NaCl-Трехалоза, несъдържащ пречистен манан на Candida albicans - Консервант: <1.5% ProClin™300

1 x 2.0 ml

R4а Калибратор 62.5

Калибратор 62.5 pg/ml (готов за употреба): - Буфер на Трис-NaCl-Трехалоза - Пречистен манан на Candida albicans - Консервант: <1.5% ProClin™300

1 x 2.0 ml

R4b Калибратор 125

Калибратор 125 pg/ml (готов за употреба): - Буфер на Трис-NaCl-Трехалоза - Пречистен манан на Candida albicans - Консервант: <1.5% ProClin™300

1 x 2.0 ml

R4c Калибратор 250


1 x 2.0 ml

R4d Калибратор 500


1 x 2.0 ml

R0 Отрицателна контрола

Отрицателна контрола: - Човешки серум, отрицателен за манан - Консервант: <1.5% ProClin™300

2 x 1.5 ml

R5

Положителна контрола

Положителна контрола: - Човешки серум, съдържащ манан - Консервант: <1.5% ProClin™300

2 x 1.5 ml

R6 Конюгат

Конюгат (готов за употреба): - Моноклонално анти - манан антитяло, маркирано с пероксидаза - Пурпурен бромкрезол - Консервант: <1.5% ProClin™300

1 x 17 ml

R7 Серумен разтвор за обработка на проби

Серумен разтвор за обработка на проби (готов за употреба): - Разтвор на EDTA (етилендиаминтетраоцетатна) киселина, без консверванти

1 x 10.5 ml

R9 Хромоген TMB Хромогенен TMB разтвор (готов за употреба): - Разтвор на 3,3,, 5,5,-тетраметилбензидин (<0.1%), Н2О2 (<1.0%)

1 x 28 ml

R10 Стопиращ разтвор

Стопиращ разтвор (готов за употреба): - 1N разтвор на сярна киселина

1 x 28 ml

Покривно фолио за микроплаки 4

3

6- СЪВЕТИ КЪМ ПОТРЕБИТЕЛИТЕ 1. Предназначен за ин - витро употреба. 2. Само за професионална употреба. 3. Не се препоръчва използването на този набор за проби, различни от човешки серум или плазма. 4. Отрицателната контрола R0 и положителната контрола R5 са приготвени от човешки серум, тествани са със СЕ

маркирани тестове и са показали отрицателен резултат за анти - HIV-1, анти - HIV-2 и анти - HCV антитела, както и за HBs антиген. Въпреки това всички реактиви трябва да се третират като вероятни преносители на инфекция. Всички тестове трябва да се извършват в съответствие с OSHA стандарт патогени с кръвен произход, биосигурност ниво 2 или други подходящи приложения за сигурност.

5. Носете предпазно облекло, включващо престилка, защитна маска за очите/лицето и ръкавици за еднократна употреба (препоръчват се синтетични, нелатексови ръкавици), и работете с реактивите от набора и пробите от пациента съгласно Добрите Лабораторни Практики. След извършване на теста измийте добре ръцете си.

6. Не пипетирайте с уста. 7. Не пушете, не пийте или не яжте в зоните, където се работи с проби или реактиви от набора. 8. Избягвайте разливането на проби или разтвори, съдържащи проби. 9. Пръските от биологични разтвори, които не съдържат киселина, трябва да се почистват добре с подходящ

дезинфектант. Дезинфекциращите вещества, които могат да се използват, включват (но не се ограничават до) 10% разтвор на белина (0.5% разтвор на натриев хипохлорит), 70% етанол или 0.5% Wescodyne Plus™. Материалите, използвани за избърсване на пръските, трябва да се третират като биологичен отпадък.

ВНИМАНИЕ: Не поставяйте разтвори, съдържащи белина, в автоклав. 10. Пръските, съдържащи киселина, трябва да се адсорбират (избършат) по подходящ начин или неутрализират с

помощта на натриев бикарбонат, след което повърхността да се почисти и подсуши; ако съдържат биологичен материал, избършете повърхността с някой от химическите дезинфектанти.

11. Изхвърляйте всички проби и материали, използвани за извършване на теста, съгласно правилата за третиране на отпадъци, съдържащи инфекциозни агенти. Лабораторните и биологичните отпадъци трябва да бъдат третирани и изхвърляни съгласно всички текущи законови разпоредби.

12. ВНИМАНИЕ: Следва лист с потенциални химически опасности, съдържащи се в някои компоненти от набора (виж раздел 5- РЕАКТИВИ). ВНИМВАНИЕ: Някои реактиви съдържат ProClin™300 <1.5%: Относно препоръките за рискове и опасности се насочете към таблицата в края на листовката за употреба

13. Спецификацията с данните за безопасност на материала (MSDS) се предоставя при поискване. 7- ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ КЪМ ПОТРЕБИТЕЛИТЕ 1. ЗАМРАЗЕНИ СЕРУМНИ ИЛИ ПЛАЗМЕНИ ПРОБИ, СЪХРАНЯВАНИ ПРИ НЕИЗВЕСТНИ УСЛОВИЯ, МОЖЕ ДА

ДАДАТ ФАЛШИВО ПОЛОЖИТЕЛНИ РЕЗУЛТАТИ ПОРАДИ ЗАМЪРСЯВАНЕ С ГЪБИЧКИ И/ИЛИ БАКТЕРИИ. 2. Не използвайте набора или който и да било от реактивите от набора след изтичане на обозначения срок на

годност. 3. Не смесвайте реактиви от различни набори с различни партидни номера, с изключение на Миещия разтвор (R2,

означение на етикета: 20х оцветен зелено), Хромогена (R9, означение на етикета: TMB оцветен тюркоазено) и Стопиращия разтвор (R10, означение на етикета: 1N оцветен червено), при наличие, че тези реактиви са еквивалентни и че са използвани еднакви партидни номера в рамките на процедурата. Забележка: Миещият разтвор (R2, означение на етикета: 20х оцветен зелено), Хромогена (R9, означение на етикета: TMB оцветен тюркоазено) и Стопиращия разтвор (R10, означение на етикета: 1N оцветен червено), при наличие, че тези реактиви са еквивалентни и че са използвани еднакви партидни номера в рамките на процедурата.

Забележка: Миещият разтвор (R2, означение на етикета: 20х оцветен зелено) не може да се смесва с Миещия разтвор (R2, означение на етикета: 10х оцветен синьо), осигурен в наборите на Био-Рад.

4. Преди употреба оставете всички реактиви на стайна температура (+18 до +300С) в продължение на най-малко 30 минути.

5. Използвайте стъклария, основно измита и изплакната с дестилирана вода или за предпочитане материали за еднократна употреба.

6. Проверявайте пипетите и другото оборудване за прецизност и правилна експлоатация. 7. Внимателно възстановете или разтворете R2 реактива, избягвайки всякакво замърсяване. 8. Ензимната реакция е много чувствителна към метал и метални йони. Следователно не допускайте контакт на

метални елементи с различни разтвори, съдържащи конюгат или субстратен разтвор. 9. При ръчно пипетиране на калибратори, контроли и проби, използвайте отделни накрайници на пипетата, за да

избегнете замърсяване на пробите. 10. За да осигурите подходящо измиване на ямките, спазвайте препоръчания брой цикли на измиване и

съблюдавайте ямките да бъдат напълнени догоре и след това изцяло изпразнени. Измиването трябва да се извършва с миещо устройство на микроплаки.

11. Не оставяйте микроплаката да изсъхне между края на цикъла на измиване и добавянето на реактивите. 12. Не използвайте един и същи контейнер за разтворите на конюгата и проявяващия разтвор. 13. Избягвайте излагането на Хромоген TMB разтвора на силна светлина по време на съхранението или

инкубацията. Не допускайте контакт на хромогенния разтвор с окисляващ агент.

4

14. Хромогенният разтвор (R9) трябва да бъде безцветен. Появата на синьо оцветяване е индикация, че реактивът

не трябва да се използва и трябва да се изхвърли. 15. Избягвайте контакт на стопиращия разтвор с всякакви окисляващи агенти, метали или метални йони. 16. Не връщайте неизползван конюгат обратно в оригиналния му контейнер. 8- ПРИГОТВЯНЕ И СЪХРАНЕНИЕ НА РЕАКТИВИТЕ Микроплака (R1) Всеки носач, съдържащ 12 стрипа, е пакетиран в опаковка. Срежете опаковката с ножици точно под запечатването. Отворете я и извадете носача. Върнете носача заедно с неизползваните стрипове обратно в оригиналната опаковка. Внимателно я затворете и я върнете при +2-8°C. След отваряне на вакуумната опаковка, стриповете с ямките са стабилни в продължение на 8 седмици, ако се съхраняват при температура +2-8°C в добре затворената им оригинална опаковка, в която има пакетче с изсушаващо вещество. Миещ разтвор (R2) Пригответе работен миещ разтвор чрез разреждане на Концентрирания миещ разтвор 20 пъти в дестилирана вода: 50 ml от R2 в 950 ml дестилирана вода. Използвайте 400 ml от работния миещ разтвор за една пълна плака от 12 стрипа (като се изключва мъртвия обем в зависимост от използваната апаратура). Работният миещ разтвор може да се съхранява в продължение на 14 дни при температура +2-30°C. След отваряне концентрираният миещ разтвор, съхраняван при температура +2-30°C, е стабилен до изтичане на срока на годност, обозначен на етикета, ако няма наличие на замърсяване. Калибратор 0 (R3), Калибратор 62.5 (R4а), Калибратор 125 (R4b), Калибратор 250 (R4c), Калибратор 500 (R4d): Калибраторите са готови за употреба. След отваряне тези реактиви са стабилни в продължение на 8 седмици, съхранявани при температура +2-8°C, ако няма наличие на замърсяване. Отрицателна контрола (R0), Положителна контрола (R5) Отрицателната контрола (R0) и Положителната контрола (R5) трябва да бъдат топлинно обработени с EDTA киселинен разтвор (R7), като пробите от пациентите, с цел да бъдат монитор на изследването. След отваряне тези реактиви са стабилни в продължение на 8 седмици, съхранявани при температура +2-8°C, в отсъствие на замърсяване. Конюгат (R6), Серумен разтвор за обработка на проби (R7), TMB Хромогенен разтвор (R9): Тези реактиви са готови за употреба. След отваряне реактивите, съхранявани при температура +2-8°C, при отсъствие на замърсяване, са стабилни в продължение на 8 седмици. Стопиращ разтвор (R10) Реактивът е готов за употреба. След отваряне този реактив, съхранявани при температура +2-8°C, при отсъствие на замърсяване, е стабилен до изтичане срока на годност, отбелязан на етикета. 9- ПРОБИ ЗА ИЗСЛЕДВАНЕ 1. Тестът се извършва със серумни или плазмени проби, взети с EDTA, хепарин или цитрат антикоагуланти. 2. Придържайте се към следните указания за топлинна обработка, изпълнение и съхранение на кръвните проби:

Вземете кръвните проби съгласно стандартните лабораторни процедури. За серум оставете пробите да се утаят преди центрофугиране. Дръжте епруветките запушени през цялото време. След центрофугирането отделете серума или плазмата и ги съхранявайте в затворени епруветки. Пробите за изследване могат да се съхраняват при температура +2-8°C до 5 дни преди извършване на теста. Ако тестът не може да бъде извършен в рамките на 5 дни, замразете пробите на -20°C (или -80°C). Серумните или плазмените проби могат да се подлагат максимум на 5 цикъла на замразяване /

размразяване. Преди извършване на теста замразените проби трябва да се миксират добре след размразяване.

3. Резултатите няма да се повлияят от проби, съдържащи 60 g/l човешки албумин или 120 g/l общо протеини или 200 mg/l несвързан билирубин или 200 mg/l конюгиран билирубин, липемични проби, съдържащи еквивалента на 30 g/l триолеин (триглицерид), или 5 g/l холестерол или хемолизирани проби, съдържащи 2 g/l хемоглобин.

4. Не загрявайте серумите или плазмата.

5

10- ПРОЦЕДУРА Осигурени материали Виж раздел РЕАКТИВИ. Необходими материали, които не са включени при доставката 1. Стерилна дестилирана или дейонизирана вода за разреждане на концентрирания миещ разтвор. 2. Попивателна хартия. 3. Ръкавици за еднократна употреба. 4. Предпазни очила. 5. Натриев хипохлорит (белина) и натриев бикарбонат. 6. Пипети или многоканални пипети, или автоматични или полуавтоматични, регулируеми или с фиксиран обем, за

измерване и накапване на 10 l до 1 000 l, и 1 ml, 2 ml и 10 ml. 7. 1.5 ml полипропиленови микроцентрофужни епруветки с въздухонепроницаеми запушалки, способни да издържат

нагряване до 120°C (нагревателен блок) или 100°C (водна баня с вряща вода). епруветки с винтова запушалка: 1.5 ml конични епруветки, Био-Рад каталожен № 224-0010 или

еквивалентни. ИЛИ епруветки с щракваща запушалка: EZ микро тест епруветки, 1.5 ml, Био-Рад каталожен № 223-9480 или

еквивалентни. 8. Блокировки за запушалки на микроепруветки (VWR каталожен № 6054001 или еквивалентни). Тези щракващи

блокировки затварят херметически епруветките и предотвратяват отварянето на запушалките по време на промяната на температурата и налягането. Позволяват лесно изваждане на епруветките от нагревателния блок или врящата вода като се избягва всякакъв риск от изгаряне.

9. Лабораторна настолна центрофуга за 1.5 ml полипропиленови епруветки, способна да достигне 10,000 g оборота. 10. Ако се използва нагревателен блок при обработка на серумите:

Нагревателен блок. Препоръчват се следните модели нагревателни блокове: - единичен блок модел: Grant QBD1 (VWR каталожен № 460-0074)

- два блока модел: Grant QBD2 (VWR каталожен № 460-0076) Блок за нагревателен блок: двата нагревателни блока (QBD1, QBD2) трябва да се използват с Grant block QB-

E1 (VWR каталожен № 460-8517). Ако се използва водна баня с вряща вода при обработка на серумите:

Преносима стойка за микро центрофуга Водна баня с вряща вода при 100°C

11. 25 ml, 50 ml, 100 ml и 1 000 ml градуирани епруветки. 12. Контейнер за биологични отпадъци. 13. Вортекс. 14. Инкубатор за микроплаки при 37 ± 1 °C (*). 15. Автоматично или полуавтоматично миещо устройство на микроплаки (*). 16. Четец на микроплаки, снабден с филтри за 450 nm и 620 nm (*). (*) Консултирайте се с нас за подробна информация относно оборудването, препоръчвано от нашите технически служби. Обработка на пробите за изследване Отрицателната контрола (R0) и Положителната контрола (R5) трябва да се обработят по същото време като пробите от пациенти чрез добавяне на 100 l разтвор за обработка (R7). R3, R4a, R4b, R4c и R4d Калибраторите, които са готови за употреба, не минават през тази обработка. 1. Накапете по 300 l от всяка проба за изследване, от отрицателната контрола (R0) и от положителната контрола

(R5) в отделни 1.5 ml полипропиленови епруветки. 2. Добавете по 100 l от серумния разтвор за обработка на проби (R7) във всяка епруветка. 3. Смесете добре съдържанието на епруветките като ги разклатите силно или с помощта на вортекс. Здраво

запушете епруветките, за да предотвратите отварянето им по време на нагряването. Не пробивайте запушалката. 4. Загряваща блок опция: Загрейте епруветките в продължение на 6 минути в нагревателния блок при температура 120°C. Епруветките

трябва да се поставят в блока, само след като необходимата температура вече е достигната.(*) ИЛИ

Нагряване на водна баня опция: Ако използвате водна баня с вряща вода: нагрейте епруветките в продължение на 3 минути при температура 100°C. (*) Епруветките трябва да се поставят в блока, само след като необходимата температура вече е достигната.

5. Внимателно извадете горещите епруветки от нагревателния блок или водната баня с вряща вода и ги поставете в центрофугата. Центрофугирайте епруветките при 10,000 x g оборота за 10 минути.

6. За откриване на манан антигена се използва супернатантата. Тествайте супернатантата, използвайки следната процедура. Тестът трябва да се извърши в рамките на два часа след топлинната обработка на серумите или плазмата.

6

(*) Стриктното спазване на предписаните температури и време за обработка, както и използването на препоръчителните материали, са от изключителна важност за успеха на теста. Не се ограничавайте с отчитане на температурата от показанията на апаратурата. Моля, проверявайте дали температурата съответства на спецификациите, като я измерите с калибрирания термометър, поставен в тръба с минерално масло: 120°C трябва да бъдат достигнати във вътрешността на епруветката в нагревателния блок и 100°C във водната баня с вряща вода. NB:

Всички проби, обработени по тази процедура, могат да се използват за изследване с наборите Platelia™ Aspergillus EIA/Ag, тъй като процедурите за обработка на пробите са идентични при двата теста.

Не съхранявайте проби (отрицателна контрола, положителна контрола и пациентски проби) след топлинната обработка.

EIA процедура Стриктно спазвайте предложения тест протокол. Спазвайте Добрите Лабораторни практики.

Преди употреба оставете реактивите на стайна температура (18-30°C) за най-малко 30 минути. Използвайте всички Калибратори, Отрицателната и Положителната контроли при всяка процедура за

валидиране на резултатите от теста.

Продължете, както следва: 1. Изгответе таблица за идентификация на Калибраторите, Отрицателната контрола, Положителната контрола и

пробите от пациенти за изследване, използвайки следния план: - А1: Положителна контрола R5 (супернатантата от обработената контрола) - B1: Калибратор 500 pg/ml (R4d) - C1: Калибратор 250 pg/ml (R4c) - D1: Калибратор 125 pg/ml (R4b) - E1: Калибратор 62.5 pg/ml (R4a) - F1: Калибратор 0 pg/ml (R3) - G1: Отрицателна контрола R0 (супернатантата от обработената контрола)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A R5 S2 S10 B R4d S3 S11 C R4c S4 D R4b S5 E R4a S6 F R3 S7 G R0 S8 H S1 S9

2. Извадете носача на плаката и стриповете с микроямките (R1) от опаковката им. Върнете стриповете, които няма

да използвате, обратно в опаковката, заедно с торбичката с изсушаващо вещество, и запечатайте отново опаковката.

3. Накапете по 100 l от супернатантата на обработената пациентска проба и 100 l от супернатантата на обработените R0 и R5 контроли във всяка от съответните ямки.

4. След това накапете по 100 l от R4d, R4c, R4b, R4a и R3 съгласно реда на плаката. NB: Накапването на редицата калибратори може да бъде контролирано при тази стъпка от процедурата: кореспондиращите ямки показват промяна в цвета от оранжев (R4d) до светло жълт (R3). 5. Смесете съдържанието на флакон R6 преди употреба чрез въртене. Ако използвате многоканална пипета, само

използвайте обем, достатъчен за процедурата: осигурете 2.5 ml за два стрипа от по 8 ямки. 6. Добавете по 100 l от конюгата (R6) във всяка ямка. 7. Покрийте микроплаката с покривно фолио, осигурявайки добро покритие на повърхността и

водонепроницаемост. 8. Инкубирайте микроплаката веднага в сух инкубатор за микроплаки в продължение на 90 ± 10 минути при

температура 37°C ± 1 °C. 9. Пригответе Работния миещ разтвор (насочете се към раздел 8). 10. Отстранете покритието на плаката. Аспирирайте съдържанието от всички ямки в контейнер за отпадъци

(съдържащ натриев хипохлорит). Измийте микроплаката 5 пъти с миещо устройство за микроплаки (използвайте 800 l работен миещ разтвор). След последното измиване обърнете микроплаката и внимателно я почукайте върху попивателна хартия, за да отстраните остатъчната течност.

11. Бързо добавете по 200 l от Хромогенния разтвор (R9) във всяка ямка, като избягвате излагането на силна светлина.

12. Инкубирайте микроплаката на тъмно при стайна температура +19-25°C в продължение на 30 ± 5 минути. Не използвайте покривно фолио по време на тази инкубация.

13. Добавете по 100 l Стопиращ разтвор (R10) във всяка ямка, като спазвате същата последователност на реда и ритъма, както при поставянето на хромогенния разтвор. Смесете добре.

7

14. Избършете добре дъното на всяка плака. 15. Отчетете оптичната плътност на всяка ямка при 450 nm (референтен филтър 620 nm). Трябва да отчетете

микроплаките в рамките на 30 минути след добавянето на стопиращия разтвор (стриповете трябва да се пазят от светлина преди отчитането).

16. Проверете съответствието между отпечатаното от четеца и плана за накапване на микроплаката преди интерпретиране на резултатите.

11 – КАЧЕСТВЕН КОНТРОЛ (КРИТЕРИИ ЗА ВАЛИДИРАНЕ) Използвайте калибраторите и контролите на всяка микроплака всеки път, когато се извършва теста. Следните критерии трябва да бъдат изпълнени, за да може да се валидира метода:

Стойност на оптичната плътност OD R4a > 0.280 OD R0<OD R4a Съотношения: OD R4a / OD R3 > 1.25 OD R4b / OD R4a > 1.15 OD R4c / OD R4b > 1.15 OD R4d / OD R4c > 1.20 Концентрация на манан в положителната контрола R5: Концентрацията на R5 трябва да бъде еднаква на концентрацията, отбелязана на флакона ± 30%.

12- ИНТЕРПРЕТИРАНЕ НА РЕЗУЛТАТИТЕ Създаване на калибрационна крива Калибрационната крива се чертае, използвайки 5 точки (калибратори): 0 pg/ml, 62.5 pg/ml, 125 pg/ml, 250 pg/ml и 500 pg/ml. Начертайте калибрационна крива [OD = функция (pg/ml)] при записване на ODs на калибраторите R3, R4a, R4b, R4c и R4d на вертикалната ос Y (Y ос), после запишете техните съответни концентрации в pg/ml на хоризонталната ос X (Х ос). Начертайте крива, свързвайки точките. Определяне на концентрацията на манан (pg/ml) в тест пробите Концентрацията на манан, докладвана като pg/ml, може да бъде определена на калибрационната крива за всяка изследвана проба. Интерпретиране на резултатите

Проби с концентрации по-малки от 62.5 pg/ml (C < 62.5) се считат „отрицателни” за манан антиген. Проби с концентрации между 62.5 и 125 pg/ml (62.5 ≤ C < 125) се считат „междинни” за манан антиген. Проби с концентрации, равни или по-големи от 125 pg/ml (C ≥ 125), се считат „положителни” за манан

антиген. Гамата точки, използвани за построяване на калибрационната крива, не позволяват никаква титрация на

концентрации над 500 pg/ml. За определяне по-точно концентрацията на високо положителни проби, тестът трябва да се изпълни отново след пре-разреждане на супернатантата на обработените проби (нова обработка) до 1/5 с работен миещ разтвор (насочете се към секция 8). Концентрацията на високо положителни проби ще бъде калкулирана чрез умножаване на така получения титър с 5. „Междинните” резултати могат да бъдат потвърдени чрез вземане на нови проби за изследване от пациентите в рамките на няколко седмици от датата на вземане на първата проба, която е показала междинен резултат. 13- ОГРАНИЧЕНИЯ НА ПРОЦЕДУРАТА 1. Отрицателният тест не може да изключи диагнозата за инвазивна кандидоза поради много ниска концентрация и

бързо елиминиране на манан антигена по време на инфекцията. Поставянето на диагноза инвазивна кандидоза може да бъде направено само след комплексна оценка на всички клинични, терапевтични, рентгенологични, цитологични, директни микологични и серологични данни, като всеки отделен критерий трябва да бъде интерпретиран внимателно.

2. Отрицателен тест за манан антиген трябва да се интерпретира също заедно с резултатите, получени от анти-манан антитялов тест: дори в случай на инвазивна кандидоза, манан антигенът по-трудно се открива при изследвани пациенти, положителни за анти-манан антитела (виж раздел 15 – Характеристики).

3. Процедурата за откриване на манан антиген в серум или плазма е свързана с честотата на тестовете, проведени на пациента. Редовното мониториране на високо рискови пациенти и скрийнинг на анти-манан антитела са препоръчителни с цел повишаване на чувствителността и ранно позитивиране на теста.

4. Процедурата с набора Platelia™ Candida Ag Plus и интерпретирането на резултатите трябва да следват изследването на пациентите за наличие на манан антиген. Потребителят на набора трябва да се запознае внимателно с листовката за употреба преди провеждане на теста. По-специално, тест процедурата трябва да се следва внимателно относно накапването на проби и реактиви, миене на плаката и времето при инкубиращите стъпки.

8

5. Неправилното добавяне на проби или реактиви, както е посочено в процедурата, може да доведе до фалшиво

отрицателен резултат. Когато има клинични съмнения за инвазивна кандидоза или за процедурна грешка, трябва да се направи повторно изследване на допълнителни проби.

6. Възможно е замърсяване на ямките, съдържащи отрицателна проба от пациент, от ямки с положителна контрола, калибратори или проба от пациент, ако пръски от съдържанието на една ямка попаднат в друга поради грубо манипулиране с микроплаката или лоша техника на боравене с пипетата при добавяне на реактиви.

7. Характеристиките на набора Platelia™ Candida Ag Plus не са проверявани върху серумни и плазмени проби от новородени и деца.

8. Характеристиките на набора Platelia™ Candida Ag Plus не са установени при ръчно отчитане и/или визуално определяне на резултатите.

9. Съобщава се за кръстосана реакция при пациенти, получаващи инфузия с определени партиди на hydrox yeth-ylstarch плазма (като например Hesteril® 6%), които се употребяват в лечението на циркулаторни нарушения: хиповолемия, хеморагичен шок и септицемичен шок.

10. Наблюдавани са фалшиво положителни резултати при проби, съдържащи човешки гамаглобулини с концентрация ≥ 60 g/l, и също при някои проби, които са изследвани и са установени реактивни за анти-токсоплазмени антитела.

14- ОЧАКВАНИ СТОЙНОСТИ Преобладаващите стойности на манан кандида антиген, измерени при използване на набора Platelia™ Candida Ag Plus, са оценени на панел от 613 проби от 51 холандски пациенти (Местоположение 1 – Холандия), хоспитализирани за лечение на рак (онкохематологична патология при 49 пациента и нехаматологичен рак при 2 пациента) на интензивна химиотерапия. От общо 613 проби, 88 са доказани положителни и 51 са междинни с разпространение 88/613 = 14.4% [доверителен интервал 95%: 11.7 – 17.4%], считайки междинните резултати като отрицателни и 139/613 = 22.7% [доверителен интервал 95%: 19.4 – 26.2%], считайки междинните резултати като положителни. От страна на пациентите, от които 51 са изследвани, при 23 е имало най-малко една положителна проба и 14 са имали най-малко една междинна проба и нито една положителна, с разпространение 23/51 = 45.1% [доверителен интервал 95%: 31.1 – 59.7%], считайки междинните резултати като отрицателни и 37/51 = 72.6% [доверителен интервал 95%: 58.3 – 84.1%], считайки междинните резултати като положителни. От тези 51 пациенти, 30 (388 проби) не са документирани като инвазивна кандидоза. Сред последните, 20 са били колонизирани от дрожди (12 от Candida albicans, 7 от Candida albicans в съчетание с други видове от Candida и 1 е колонизирана от най-малко един не-Candida albicans вид). Четирима от тези пациенти са показвали клинични симптоми и микробиологична проява на повърхностна инфекция с Candida. Тежки наранявания на мукозната бариера са присъствали при 24 от тези пациенти. От съответните 388 проби, 41 са били положителни и 43 междинни, с разпространение 41/388 = 10.6% [доверителен интервал 95%: 7.7 – 14.1%], считайки междинните резултати като отрицателни и 84/388 = 21.7% [доверителен интервал 95%: 17.7 – 26.1%], считайки междинните резултати като положителни. От страна на пациентите, от които 30 са изследвани, при 10 е имало най-малко една положителна проба и 11 са имали най-малко една междинна проба и нито една положителна, с разпространение 10/30 = 33.3% [доверителен интервал 95%: 17.3 – 52.8%], считайки междинните резултати като отрицателни и 21/30 = 70.0% [доверителен интервал 95%: 50.6 – 85.3%], считайки междинните резултати като положителни. 15. СПЕЦИФИЧНИ РАБОТНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ

A. Репродуктивни изследвания Прецизност в рамките на серията (повтаряемост)

За да се оцени вътрешносерийната повтаряемост, петте проби (две отрицателни и три положителни) са изследвани 32 пъти по време на същата серия. Концентрацията в pg/ml е определена за всяка проба. Средната концентрация, Стандартното Отклонение (SD) и Коефициентът на Вариация (%CV) за всяка проба са отбелязани в таблицата по-долу. Прецизност в рамките на серията (повтаряемост) .

N=32 Отрицателна

проба

Силноотрицателна

проба

Нискоположителна

проба

Средно положителна

проба

Силноположителна

проба

Средна концентрация

(pg/ml) 25.1 54.8 63.7 154.1 261.8

SD 4.11 5.20 4.27 8.01 16.93 CV % 16.3% 9.5% 6.7% 5.2% 6.5%

Междусерийна прецизност (възпроизводимост) За да се оцени междусерийната възпроизводимост, петте проби (две отрицателни и три положителни) са изследвани всяка от тях по два пъти, в две серии през деня, за период над 20 дни. Концентрацията в pg/ml е определена за всяка проба. Средната концентрация, Стандартното Отклонение (SD) и Коефициентът на Вариация (%CV) за всяка проба са отбелязани в таблицата по-долу.

9

Междусерийна прецизност (възпроизводимост)

N=80 Отрицателна

проба

Силноотрицателна

проба

Нискоположителна

проба

Средно положителна

проба

Силноположителна

проба

Средна концентрация

(pg/ml) 24.1 55.0 70.0 161.6 264.9

SD 6.99 11.47 14.50 30.07 38.62 CV % 29.0% 20.8% 20.7% 18.6% 14.6% B. Кръстосана реактивност

Патология Брой тествани проби Брой положителни проби Брой междинни проби

Aspergillus 10 0 1

Anti-ds-DNA antibodies 10 0 0

ANAs Positive 10 0 0

Myeloma IgG and IgM 20 0 1

Anti-Toxoplasma IgG 10 3 1

Human anti-mouse antibodies 10 0 0

Rheumatoid Factor 10 0 0

C. Линейност Обхватът на линейност на набора Platelia™ Candida Ag Plus беше установен между 20 и 470 pg/ml от изследванията на разрежданията, извършени на 4 положителни проби. D. Клинични проучвания Характеристиките на набора Platelia™ Candida Ag Plus са оценени на три обекта с общо 852 проби от 505 пациента. ЧУВСТВИТЕЛНОСТ Чувствителността на набора Platelia™ Candida Ag Plus беше определена на панел от 436 проби от 89 пациента, хоспитализирани в два обекта (в Холандия и Франция). Разпределението на пробите е както следва:

Местоположение 1 (Холандия): 225 проби от 21 холандски пациенти, приети в онкохематологична клиника за лечение на злокачествена хемопатия (19 случая) или на нехамотологичен рак (2 случая) с интензивна химиотерапия, следвана, ако е подходящо, с трансплантация на стволови хемопоетични клетки. Всички тези пациенти са с инвазивна кандидоза, доказана микробиологично на базата на най-малко една култура, положителна за Candida (кръвна култура от нормална стерилна тъканна проба). 17

Местоположение 2 (Франция): 211 проби от 68 френски пациенти, приети в различни интензивни отделения или онкохематологични клиники с инвазивна кандидоза, доказана микробиологично на базата на най-малко една култура, положителна за Candida spp.

NB: Панелите проби, използвани при тези две изследвания, са от пациенти, чиито кръвни проби са събирани между 1999 и 2007 година. Относителната стабилност на манан антигена и анти-манан антителата при тези проби по време на периода на замразяване, и също след всеки цикъл на замразяване и размразяване, правят резултатите зависими от условията на съхранение на изследвания панел. Стойностите на чувствителността на теста, определени в провеждани ретроспективни клинични проучвания, може да бъде по-ниска поради това отколкото при тези, получени в проспективни клинични проучвания, използващи проби, взети съвсем наскоро. Резултати от Местоположение 1: 21 холандски пациента са приети в болница за лечение на злокачествени хемопатии (остра миелоидна левкемия, остра лимфатичи левкемия, хронична лимфатична левкемия, миелома, миелодиспластичен синдром, апластична анемия, или не-Hodkin лимфома) или нехематологичен рак с интензивна химиотерапия, последвана, ако е подходящо, от трансплантация на стволови хемопоетични клетки. Тези 21 пациента са развили инвазивна кандидоза, доказана микробиологично на базата на най-малко поне една култура, положителна за Candida spp. (кръвна култура или култура от нормална стерилна тъканна проба). Състоянието на тези пациенти по отношение наличие на манан Candida антиген, открит чрез набора Platelia™ Candida Ag Plus, се разглежда като положително, ако поне една от пациентските проби е положителна. В отсъствие на положителна проба състоянието се приема като междинно, ако поне една от пациентските проби е междинна, и като отрицателно, когато всички пациентски проби са отрицателни.17 Наред с набора Platelia™ Candida Ag Plus, същите проби бяха изследвани с набора Platelia™ Candida Ab Plus за наличие на анти-манан антитела 9. Състоянието на пациента за наличие на манан Candida антиген или анти-манан Candida антитела се счита за положително, ако най-малко поне един от двата теста е положителен. В случай на отсъствие на положителен тест, състоянието се счита като междинно, ако поне един от двата теста е междинен, и като отрицателно, когато и двата теста са отрицателни.

10

Наред с набора Platelia™ Candida Ag Plus, същите проби бяха изследвани с набора Platelia™ Candida Ab Plus за наличие на анти-манан антитела 9. Състоянието на пациента за наличие на манан Candida антиген или анти-манан Candida антитела се счита за положително, ако най-малко поне един от двата теста е положителен. В случай на отсъствие на положителен тест, състоянието се счита като междинно, ако поне един от двата теста е междинен, и като отрицателно, когато и двата теста са отрицателни.

Категория пациенти

Резултати с набора Platelia™ Candida Ag Plus

Брой пациенти (брой проби)

Чувствителност

(междинни считани за

отрицателни)



положителни)

21 пациенти (225

проби), представящи най-малко поне една култура, положителна

за Candida spp.

положителни междинни отрицателни

13 (47) 3 (8) 5 (170) 61.9%

95% IC [38.4-81.9%] 76.2%

95% IC [52.8-91.8%]


Комбинирани резултати с наборите Platelia™ Candida Ag Plus и Platelia™ Candida Ab Plus








21 пациенти (225

проби), представящи най-малко поне една култура, положителна

за Candida spp.


15 (98) 4 (34) 2 (93) 71.4%

95% IC [47.8-88.7%] 90.5%

95% IC [69.6-98.8%]

Резултати от Местоположение 2: 68 френски пациента са приети в различни отделения за интензивна грижа (операции, трансплантации, изгаряния, травма, пневмология и др.) или онхемотологични клиники (злокачествена хемопатия). Всички те са развили инвазивна кандидоза, доказана микробиологично на базата на най-малко поне една кръвна култура, положителна за Candida (albi-cans, parapsilosis, norvegensis, glabrata, krusei или tropicalis) 6, 7, 14 в дните преди или след изследването на пробите. Кръвните проби са взети 6 дни (средно) след първата кръвна култура, положителна за Candida (минимум 61 дни преди, максимум 67 дни след). Състоянието на тези пациенти по отношение наличие на манан Candida антиген се разглежда като положително, ако поне една от пациентските проби е положителна. В отсъствие на положителна проба състоянието се приема като междинно, ако поне една от пациентските проби е междинна, и като отрицателно, когато всички пациентски проби са отрицателни.

11










68 пациенти (211 проби), представящи най-малко поне една кръвна

култура, положителна за Candida spp.


35 (86) 7 (14) 26 (111) 51.5%

95% IC [39.0-63.8%] 61.8%

95% IC [49.2-73.3%]

- включително 34 за C. albicans (113 проби) 22 (55) 6 (12) 6 (46)

64.7% 95% IC [46.5-80.3%]

82.5% 95% IC [65.5-93.2%]

- включително 15 за C. parapsilosis (37 проби) 2 (3) 1 (1) 12 (33)

13.3% 95% IC [1.7-40.5%]

20.0% 95% IC [4.3-48.1%]

- включително 12 за C. glabrata (32 проби) 7 (13) 0 (0) 5 (19)

58.3% 95% IC [27.7-84.8%]

66.7% 95% IC [34.9-90.1%]

- включително 4 за C. tropicalis (19 проби) 4 (15) 0 (1) 0 (3) 100.0% * 100.0% *

- включително 2 за C. krusei (8 проби) 0 (0) 0 (0) 2 (8) 0.0% * 0.0% *

- включително 1 за C. norvegensis (2 проби)

0 (0) 0 (0) 1 (2) 0.0% * 0.0% *

*: доверителният интервал от 95% не беше изчислен поради недостатъчен брой проби. Наред с набора Platelia™ Candida Ag Plus, същите проби бяха изследвани с набора Platelia™ Candida Ab Plus за наличие на анти-манан антитела 9. Състоянието на пациента за наличие на манан Candida антиген или анти-манан Candida антитела се счита за положително, ако най-малко поне един от двата теста е положителен. В случай на отсъствие на положителен тест, състоянието се счита като междинно, ако поне един от двата теста е междинен, и като отрицателно, когато и двата теста са отрицателни.

12


Комбинирани резултати с наборите Platelia™ Candida Ag Plus и Platelia™ Candida Ab Plus


Чувствителност (междинни считани за




68 пациенти (211 проби), представящи най-малко поне една кръвна

култура, положителна за Candida spp.


48 (122) 8 (40) 12 (49) 70.6%

95% IC [58.3-81.0%] 82.4%

95% IC [71.2-90.5%]

- включително 34 за C. albicans (113 проби) 28 (74) 2 (22) 4 (17)

82.4% 95% IC [65.5-93.2%]

88.2% 95% IC [72.6-96.7%]

- включително 15 за C. parapsilosis (37 проби) 5 (7) 6 (15) 4 (15)

33.3% 95% IC [11.8-61.6%]

73.3% 95% IC [44.9-92.2%]

- включително 12 за C. glabrata (32 проби) 11 (24) 0 (3) 1 (5)

91.7% 95% IC [61.5-99.8%]

91.7% 95% IC [61.5-99.8%]

- включително 4 за C. tropicalis (19 проби) 4 (17) 0 (0) 0 (2) 100.0% * 100.0% *

- включително 2 за C. krusei (8 проби) 0 (0) 0 (0) 2 (8) 0.0% * 0.0% *

- включително 1 за C. norvegensis (2 проби)

0 (0) 0 (0) 1 (2) 0.0% * 0.0% *

*: доверителният интервал от 95% не беше изчислен поради недостатъчен брой проби. СПЕЦИФИЧНОСТ Специфичността беше определена на панел от 416 проби от 2 френски обекта, разпределението на пробите е както следва:

Обект 1: 200 проби от 200 френски пациенти от женски произход, мониторирани серологично за токсоплазмоза по време на тяхната бременност и с клинични признаци на инфекция с Candida.

Обект 2: 219 проби от 216 френски пациенти кръводарители.








200 бременни жени (200 проби), мониторирани

серологично за токсоплазмоза


3 2 195 97.5%

95% IC [94.3-99.2%] 98.5%

95% IC [95.7-99.7%]

216 кръводарители (216

проби) 1 1 214 99.1%

95% IC [96.7-99.9%]

99.5% 95% IC [97.5-

100.0%]

13

16- КОНТРОЛ НА КАЧЕСТВОТО ОТ СТРАНА НА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Всички произведени реактиви са приготвени съгласно нашата Система по качеството, като се започне от получаването на суровините до крайното пускане на продукта на пазара. Всяка партида се подлага на тестове за контрол на качеството и се пуска на пазара, само ако съответства на предварително определените критерии за приемане. Записите, свързани с производството и контрола на всяка отделна партида, се пазят в Био - Рад. 17- БИБЛИОГРАФИЯ 1- Alam, F.F., Mustafa, A.S., Khan, Z.U. 2007. Comparative evaluation of (1,3)-beta-D-glucan, mannan and anti-mannan

ntibodies, and Candida species-specific snPCR in patients with candidemia. BMC Infectious Diseases 7(103): p. 1-9. 2- Ascioglu, S., Rex, J.H., de Pauw, B., Bennett, J.E., Bille, J., Crokaert, F., Denning, D.W., Donnelly, J.P., Edwards, J.E.,

Erjavec, Z., Fiere, D., Lortholary, O., Maertens, J., Meis, J.F., Patterson, T.F., Ritter, J., Selleslag, D., Shah, P.M., Stevens, D.A., Walsh,T.J. 2002. Defining opportunistic invasive fungal infections in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic stem cell transplants: An international consensus. Clinical Infectious Diseases 34: p. 7-14.

3- Ellepola, A.N.B., Morrison, C.J. 2005. Laboratory Diagnosis of Invasive Candidiasis. Journal of Microbiology 43(No. S): p. 65-84.

4- Ellis, M., Al-Ramadi, B., Bernsen, R., Kristensen, J., Alizadeh, H., Hedstrom, U. 2009. Prospective evaluation of mannan and anti-mannan antibodies for diagnosis of invasive Candida infections in patients with neutropenic fever. Journal of Medical Microbiology 58(5): p. 606-615.

5- Guery, B.P., Arendrup, M.C., Auzinger, G., Azoulay, E., Borges Sá, M., Johnson, E.M., Müller, E., Putensen, C., Rotstein, C., Sganga, G., Venditti, M., Zaragoza Crespo, R., Kullberg, B.J. 2009. Management of invasive candidiasis and candidemia in adult non-neutropenic intensive care unit patients: Part I. Epidemiology and diagnosis. Intensive Care Med. 35: p. 55-62.

6- Nucci, M., , Colombo, A.L. 2007. Candidemia due to Candida tropicalis: clinical, epidemiologic, and microbiologic characteristics of 188 episodes occurring in tertiary care hospitals. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 58: p. 77-82.

7- Oliveri, S., Trovato, L., Betta, P., Romeo, M.G., Nicoletti, G. 2008. Experience with the Platelia™ Candida ELISA for the diagnosis of invasive candidiosis in neonatal patients. Clinical Microbiology and Infection 14 (4): p. 377-397.

8- Pappas, P.G., Kauffman, C.A., Andes, D., Benjamin D.K.Jr., Calandra, T.F., Edwards, J.E.Jr, Filler, S.G., Fisher, J.F., Kullberg, B.J., Ostrosky-Zeichner, L., Reboli, A.C., Rex, J.H., Walsh, T.J., Sobel, J.D. 2009. Clinical Practice Guidelines for the Management of Candidiasis: 2009 Update by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases 48: p. 503-535.

9- Persat, F., Topenot, R., Piens, M.A., Thiebaut, A., Dannaoui, E., Picot, S. 2002. Evaluation of different commercial ELISA methods for the serodiagnosis of systemic candidiosis. Mycoses 45: p. 455-460.

10- Prella, M., Bille, J., Pugnale, M., Duvoisin, B., Cavassini, M., Calandra, T., Marchetti, O. 2005. Early diagnosis of invasive candidiasis with mannan antigenemia and anti-mannan antibodies. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 51: p. 95-101.

11- Rentz, A.M., Halpern, M.T., Bowden, R. 1998. The Impact of Candidemia on Length of Hospital Stay, Outcome, and Overall Cost of Illness. Clinical Infectious Diseases 27: p. 781-788.

12- Ruan, S.-Y., Hsueh, P.-R. 2009. Invasive Candidiasis: An Overview from Taiwan. J. Formos. Med. Assoc. 108(6): p. 443-451.

13- Sendid, B., Poirot, J.L., Tabouret, M., Bonnin, A., Caillot, D., Camus, D., Poulain, D. 2002. Combined detection of mannanaemia and anti-mannan antibodies as a strategy for the diagnosis of systemic infection caused by pathogenic Candida species. J. Med. Microbiol. 51: p. 433-442.

14- Sendid, B., Caillot, D., Baccouch-Humbert, B., Klingspor, L., Grandjean, M., Bonnin, A., Poulain, D. 2003. Contribution of the Platelia™ Candidaspecific antibody and antigen tests to early diagnosis of systemic Candida tropicalis infection in neutropenic adults. Journal of Clinical Microbiology 41(10): p. 4551-4558.

15- Tortorano, A.M., Peman, J., Bernhardt, H., Klingspor, L., Kibbler, C.C., Faure, O., Biraghi, E., Canton, E., Zimmermann, K., Seaton, S., Grillot, R. 2004. Epidemiology of Candidaemia in Europe: Results of 28-Month European Confederation of Medical Mycology (ECMM) Hospital-Based Surveillance Study.Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 23: p. 317-322.

16- Vardakas, K. Z., Michalopoulos, A., Kiriakidou, K. G., Siampli, E. P., Samonis, G., Falagas, M. E. 2009. Candidaemia: incidence, risk factors, characteristics and outcomes in immunocompetent critically ill patients. Clin. Microbiol. Infect. 15: p. 289-292.

17- Verduyn Lunel, F.M., Donnelly, J.P., van der Lee, H. A. L., Blijlevens, N.M. A., Verweij, P. E. 2009. Circulating Candida-specific anti-mannan antibodies precede invasive candidiasis in patients undergoing myeloablative chemotherapy. Clin. Microbiol. Infect. 15(4): p. 380-386.

14

15

Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 11/2011 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 881082 www.bio-rad.com

PLATELIA™ Candida Ag Plus - Bio-Rad12. ВНИМАНИЕ: Следва лист с потенциални химически опасности, съдържащи се в някои

Documents