Organizacja i ekspresja genomu eukariotycznego Katarzyna Kozioł Magdalena Machowska Katarzyna Piekarowicz (Pracownia Białek Jądrowych, p.41c, e-mail: [email protected])
Jan 17, 2016
Organizacja i ekspresja genomu eukariotycznego
Katarzyna Kozioł
Magdalena Machowska
Katarzyna Piekarowicz
(Pracownia Białek Jądrowych, p.41c, e-mail: [email protected])
Cel ćwiczeń: Analiza procesu dekondensacji chromatyny Analiza procesu wiązania białek do chromatyny podczas
dekondensacji Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder
komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszki owocowej embrion larwa poczwarka jajniki
Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu komórkowego w komórkach w hodowlach komórkowych
-chromatyna
-ekstrakt
- energia
ODTWARZANIE JĄDER KOM.:- ekstrakt z oocytów Xenopus laevis (żaba szponiasta) - LSS- DSP odbłoniona chromatyna ze spermy Xenopus (demembranated sperm chromatin)- inhibitor coctail- energy mix: ATP, PC (fosforan kreatyniny), PCKinase
METODA IN VITRO NUCLEAR ASSEMBLY
- ANALIZA DEKONDENSACJI CHROMATYNY-ORGANIZACJA CHROMATYNY- REPLIKACJA- BADANIE MITOZY- WPŁYW WYBRANYCH BIAŁEK NA PROCESY DEKONDENSACJI I ODTWARZANIA OTOCZKI
Analiza procesu dekondensacji chromatyny
Odtwarzanie jąder komórkowych (chromatyna i otoczka)
http://www.jove.com/details.php?id=908
Widoczne pęcherzyki błonowe asocjujące z chromatyną
Widoczne prekursory porów i kompletne kompleksy porowe.
Populacje pęcherzyków mitotycznych NEP-B i NEP-A
Budowa otoczki jądrowej
-wraz z innymi białkami otoczki jądrowej tworzą dynamiczny szkielet białkowy zapewniający mechaniczną podporę otoczki jądrowej -kontrolują umiejscowienie kompleksów porowych w obrębie otoczki jądrowej-regulują organizację przestrzenną chromatyny, stanowią miejsce kotwiczenia domen chromatynowych-wpływają na replikację, transkrypcję, splicing-zaangażowane są w procesy starzenia, różnicowania i apoptozy
LAMINY
Molecular Biology of the Cell
Alberts,B i wsp., (1994)
TYPY LAMIN (ludzkie)
-B: (LMNB1) - B1 (LMNB2) –B2, B3 -A/C (LMNA) , A, C,C2, A10
Wpływ emeryny na odtwarzanie struktury otoczki jądrowej in vitro
Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszki owocowej
Dymorfizm płciowy u Drosophila melanogaster
Budowa jajników u Drosophila melanogaster
Jajniki Cewka jajnikowa (owariola)
Owariole i komory jajowe muszki owocowej
Analiza dystrybucji obu typów lamin w embrionach D.melanogaster przy użyciu mikroskopii konfokalnej.
Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu komórkowego
Formowanie wrzeciona podziałowego
The Cell A Molecular Approach Geoffrey M. Cooper Boston University Second Edition Sinauer Associates, Inc., ISBN 0-87893-106-62000
Dziękujemy za uwagę! Do zobaczenia na ćwiczeniach.
Zaliczenie:
- kolokwium ( termin do uzgodnienia)
-praca na ćwiczeniach
-obecność