ODREĐIVANJE KONCENTRACIJE HEMOGLOBINA METODOM PO SAHLI …kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs/wp-content/uploads/2018/10/Hblj20181.pdf · • Hb spada u grupu složenih belančevina- hromoproteida

UNIVERZITET U BEOGRADU FAKULTET VETERINARSKE MEDICINE

KATEDRA ZA FIZIOLOGIJU I BIOHEMIJU

ODREĐIVANJE KONCENTRACIJE HEMOGLOBINA METODOM PO SAHLI-U

IZRAČUNAVANJE HEMATOLOŠKIH INDEKSA

DOKAZIVANJE HEMIN KRISTALA

VEŽBA BR. 3

III vežba- ključna pitanja i zadaci Uloge hemoglobina?

Biohemijske osobine hemoglobina, koncentracija hemoglobina

Metode za određivanje kon. hemoglobina ?

Metoda po Sahliju, metoda po Drapkinu?

Hematokrit?

Hemin kristali

Hematološki indeksi?

III vežba- ključna pitanja i zadaci

Metode za određivanje kon. hemoglobina ?

Metoda po Sahliju, metoda po Drapkinu?

Hematokrit?

Hematološki indeksi?

Zadaci: 1. Odrediti broj eritrocita u uzorku krvi 2. Odrediti koncentraciju hemoglobina metodama po Sahliju i Drapkinu 3. Odrediti hematokritsku vrednost 4. Iz dobijenih rezultata izračunati: MCV, MHC i MCHC Obavezan rezultat u svesci! 5. Uraditi Taichmannovu reakciju

HEMOGLOBIN

• Hb spada u grupu složenih belančevina- hromoproteida • Sastoji se iz proste belančevine globina i prostetične grupe –hema • Globin Hb eritrocita ima 4 polipeptidna lanca (2α i 2β) • Hem – 4 pirolova prstena sa dvovalentnim Fe u centru

1 molekul hema vezuje 1 molekul kiseonika

4 molekula hema = 4 molekula O₂

conc. Hb= 120 - 150 g/L

Hem je crvene boje

METODE ZA ODREĐIVANJE KONCENTRACIJE Hb

Kolorimetrijske

Merenje intenziteta boje Hb ili nekog njegovog derivata na kolorimetru ili poređenje sa standardom Intenzitet boje je proporcionalan conc. Hb

Gasometrijske

Meri se količina vezanog kiseonika u određenoj zapremini krvi 1g Hb vezuje 1,34cm³ O₂

Hemijske metode

Određivanje koncentracije gvožđa Zastupljenost Fe u 1 molekulu Hb je 0,334%

METODA PO SAHLI- u

Graduisana kiveta sa oznakama od 10-140 Kontrolne cevčice sa standardnim rastvorom

• Pipeta za vodu • Kapilarna pipeta za uzimanje krvi • Stakleni štapić za mešanje

METODA PO SAHLI- u

HCL izaziva hemolizu eritrocita, oslobađa se Hb Gvožđe hema prelazi iz fero u feri oblik Hematin -hlor –hidrat (jedinjenje smeđe boje) Intenzitet ove boje proporcionalan je količini Hb

METODA PO SAHLI- u

0,1 mol/l HCL

0,02 ml krvi

Dest.voda do izjednačavanja boja

Promešati staklenim štapićem, ostaviti da stoji 5 min

1.

2.

3.

4.

Graduisana kiveta hemoglobinometra

conc. Hb izražena u g% * 10 = Hb u g/l

Upoređivanje boje i očitavanje rezultata 5.

METODA PO DRAPKINU

Računamo po formuli Hb (g/L) = e × 368

Nakon 5 min fotometriramo na 540–546 nm

Kapilarnom pipetom uzeti 0,02 ml krvi i istisnuti u 5 ml drapkinovog reagensa

Hb + K-fericianid - met-Hb + KCN - cianmet-Hb

Hematokritska vrednost (Ht, Hct)

Odnos zapremine eritrocita i pune krvi Zavisi od broja i veličine eritrocita i zapremine krvne plazme Izražava se u ? %

Plazma

Krvne ćelije Leukociti i trombociti

Eritriciti

Hematokritska vrednost (Ht, Hct)

Dobija se centrifugiranjem krvi uzete sa antikoagulansom Fiziološki 45%

HEMATOLOŠKI INDEKSI

• Pouzdani pokazatelji tipa anemije u klinici • Broj eritrocita, conc.Hb, hematokritska vrednost krvi

MCV- prosečna vrednost zapremine eritrocita

MCH- prosečna vrednost količine Hb u eritrocitu

MCHC- prosečna vrednost % Hb u eritrocitu

MCV – procečna zapremina eritrocita Ht (hematokrit) MCV (fL) = E (broj eritrocita)

Primer: Ht = 40 % broj Er = 6x10¹² /l 0,4 L/L MCV = 6x10¹² /L

MCV = 69 fL (63-75); psi

= 0,067x10-¹² L = 67 fL

MCH – procečna količina hemoglobina u eritrocitu Hb (hemoglobin) MCH (pg) = Er (broj eritrocita)

Primer: Hb = 150 g/L broj Er = 6x10¹² /l 150 g/L MCV = 6x10¹² /L

MCH= 23 pg (20-25); psi

= 25/10 -¹² g = 25 pg

MCHC – procečna vrednost koncentracije Hb u zapremini er.

Hb (hemoglobin) MCHC (g/L) = Ht (hematokrit)

Primer: Hb = 150 g/L Ht = 45 % 150 g/L MCHC = 0.45 L /L

MCHC= 329 g/L (316-344); psi

= 333 g/L