Nathalie Parthuisot 2006 - 2009 Caractérisation et quantification des populations de Légionelles naturellement présentes dans la rivière « Le Tech » École Doctorale de Biochimie et Biologie Moléculaire B2M Université Paris Diderot-Paris 7 Université Pierre et Marie Curie-Paris 6
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Nathalie Parthuisot 2006 - 2009 Caractérisation et quantification des populations de Légionelles naturellement présentes dans la rivière « Le Tech » École.
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Nathalie Parthuisot2006 - 2009
Caractérisation et quantification des populations de Légionelles
naturellement présentes dans la rivière « Le Tech »
École Doctorale de Biochimie et Biologie Moléculaire B2M
Université Paris Diderot-Paris 7Université Pierre et Marie Curie-Paris 6
Maladie infectieuse bactérienne, connue depuis l’épidémie de 1976 .
La Légionellose
Les Légionelles
Les épidémies en constante progression
Deux manifestations cliniques : fièvre de Pontiac / infection
pulmonaire grave
Ces infections sont graves
C’est un bacille Gram-, aérobie, flagelle monopolaire, mesure 0.5µm
(largeur) et 2µm (longueur )
49 espèces décrites. Legionella pneumophila est la plus virulente
pour l’homme (plus de 80% des cas déclarés)
Introduction
Légionelles : bactéries ubiquitaires de l’environnement, qui se développent dans :
La contamination à l’homme : inhalation d'aérosols contaminés
physiologiques : Multiplication Survie Viables Non Cultivables
Evolution dans réservoirs : Virulence Risque sanitaire
Caractériser les sources et réservoirs environnementaux
de légionelles
Thèse :
Présentation site d’étude : Le Tech Sources principales de contamination / stations
analysées
Dynamique des Légionelles, dans les eaux et sédiments de la rivière « Le Tech »
1. Identification des sources et des réservoirs
environnementaux
Fleuve côtier, extrémité sud des Pyrénées-
Orientales.
Ecoulement sur 85.7 km, bassin versant de
780 km2
Source : massif du Costabonne (2345 m)
Le Tech (1)
Réalisation de la carte : année 2000
Le Tech (2)
Suivis mensuels et saisonniers, des 9 stations :
2. Etude de la dynamique des légionelles, dans les
eaux et sédiments de la rivière « Le Tech »
Caractériser les sources et réservoirs environnementaux de légionelles
Influence des paramètres environnementaux
Analyse de la diversité spécifique des
Légionelles
Quantification des L. pneumophila totales, Quantification des L. pneumophila actives et Quantification des L. pneumophila cultivables
Occurrence in situ des formes VNC
Développements méthodologiques (eaux et sédiments) :
Caractériser les sources et réservoirs environnementaux de légionelles
Méthodes de détection : Culture (norme AFNOR) PCR Immunofluorescence
Optimisation double-marquage L. pneumophila actives : Couplage spécificité (anticorps monoclonal) et activité métabolique Cytométrie phase solide Sédiments : application au préalable d’un gradient de séparation
Méthode alternative de quantification des L. pneumophila actives
Marquages immunofluorescents de L. pneumophila actives
L. pneumophila cells immunostained
Active L. pneumophila cell
L. pneumophila cells immunostained
Active L. pneumophila cell
Validation protocole de double-marquage
Principe : Eau robinet, dopée de 2.103 à 2.107 Lp/litre
Paramètres mesurés : L. pneumophila totales, actives et cultivables
Résultats :
Lp actives vs Lp cultivables
y = 0,893x + 2,1895
R2 = 0,9098
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
6,00
7,00
8,00
1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00
Log (Lp cultivables /litre)
Lo
g (
Lp
act
ives
/lit
re)
Suivis mensuels : premiers résultatsLa Preste Céret
L. pneumophila totales
L. pneumophila actives
Céret Lp totales (NF) /litre
1,00E+00
1,00E+01
1,00E+02
1,00E+03
1,00E+04
1,00E+05
1,00E+06
1,00E+07
17/6/07 6/8/07 25/9/07 14/11/07 3/1/08 22/2/08
Aval Amont
La Preste Lp otales (NF) /litre
1,00E+00
1,00E+01
1,00E+02
1,00E+03
1,00E+04
1,00E+05
1,00E+06
1,00E+07
17/6/07 6/8/07 25/9/07 14/11/07 3/1/08 22/2/08
Aval Amont
Céret : % Lp actives/Lp totales
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
17/6/07 6/8/07 25/9/07 14/11/07 3/1/08 22/2/08
Aval Amont
Résultats préliminaires
La Preste : % Lpactives/ Lptotales
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
17/6/07 6/8/07 25/9/07 14/11/07 3/1/08 22/2/08
Aval Amont
Développements méthodologiques (eaux et sédiments) :
Caractériser les sources et réservoirs environnementaux de légionelles
Analyses des dynamiques des espèces de Légionelles : Méthodes de détection classique : L. pneumophila et quelques