TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL “LISANDRO ALVARADO” DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SOCIAL SECCION DE MICROBIOLOGÍA Microbiología Médica I Yudy Aranguren, 2014
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Mmi pruebas bioquímicas básicas utilizadas en el laboratorio de microbiología- yudy aranguren- i -2011
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TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS
UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA
UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL “LISANDRO ALVARADO”
DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SOCIAL
SECCION DE MICROBIOLOGÍA
Microbiología Médica I
Yudy Aranguren, 2014
PASOS PARA EL DIAGNOSTICO MICROBIOLÓGICO:
1.- MUESTRA:
2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram
3.- CULTIVO
4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS
PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO
MICROBIOLÓGICO DE
COCOS GRAM POSITIVO
PRUEBA DE LA CATALASA
La determinación de la presencia de la enzima catalasa
• Se pone en contacto una pequeña cantidad de cultivo bacteriano de
24-48 horas de incubación, con en peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3%.
• La liberación de O2 indica la presencia de la enzima catalasa.
H2O2 + catalasa = H2O + ½ O2
Son catalasa positivo:
Son catalasa negativo:
PRUEBA PRIMARIA: Para cocos Gram positivos
PRUEBA DE LA REDUCCIÓN DE NITRATOS A NITRITOS
• Permite determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos
por algunas especies bacterianas que poseen la enzima nitrato-reductasa
- +
• Se agrega a un cultivo en caldo unas gotas de:
- Reactivo A: solución de dimetilnaftilamina 0,6%.
- Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 0,8%.
• Se observa un cambio de color:
• Positivo: Rojo ladrillo
• Negativo: Sin cambio de color
PRUEBA PRIMARIA: Para cocos Gram positivos
AGAR SALADO MANITOL
• La fermentación de un carbohidrato (azucares) por
un microorganismo en particular ayuda a su
identificación.
- +
FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS
• La acidez que se produce en el medio se
pone en evidencia a través del cambio de
color de un indicador de pH
• Se puede evidenciar la producción de gas
Presencia de la enzima COAGULASA
PRUEBA PRIMARIA: Para diferenciar especies del género Sthaphylococcus
SENSIBILIDAD O RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA (antibiótico)
PRUEBA SECUNDARIA: Para diferenciar especies del grupo Sthaphylococcus Coagulasa negativa
PRUEBA DE LA COAGULASA
COAGULASA
POSITIVA NEGATIVA
Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticus
+ -
+
-La determinación de la presencia de la enzima
coagulasa:
• Se pone en contacto una pequeña cantidad de
cultivo bacteriano con plasma con anticoagulante e
Extracto soluble de la pared celular por acción enzimática + Partículas de látex cubiertos
de anticuerpos específicos
CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA BETA HEMOLITICOS
Hardy Diagnostics StrepPro-1.mp4
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA
Con crecimiento alrededor del disco de Bacitracina
Sin crecimiento alrededor del disco de Bacitracina
PRUEBA : Para diferenciar especies del género Streptococcus Beta hemolíticos
DISCO DE OPTOQUINADISCO DE
OPTOQUINA
Sin crecimiento alrededor del disco de Optiquina
Con crecimiento alrededor del disco de Optiquina
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA
Streptococcus pneumoniae
StreptococcusGrupo Viridans
PRUEBA : Para diferenciar especies del género Streptococcus Alfa hemolíticos
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A BILIS
Streptococcus pneumoniae lisado en presencia de Bilis
Streptococcus mitis NO lisado en
presencia de Bilis
PRUEBA : Para diferenciar especies del género Streptococcus Alfa hemolíticos
PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO
MICROBIOLÓGICO DE
BACILOS GRAM NEGATIVOS
4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS
PASOS PARA EL DIAGNOSTICO:
1.- MUESTRA:
2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram
3.- CULTIVO
FERMENTACIÓN DE LACTOSA EN
MEDIO MAC CONKEY
• Permite conocer la presencia o ausencia del
“citocromo C” en bacterias y es una característica
fisiológica muy utilizada en taxonomía
PRUEBA DE LA OXIDASA
• Este reactivo es rápidamente transformado a
un producto oxidado de color púrpura dentro
de 30 segundos en presencia de citocromo
oxidasa.
• Se toma una pequeña cantidad de cultivo
bacteriano de 24-48 horas de edad y se
transfiere a un trozo de papel filtro
previamente embebido en n,n-dimetil p-
fenilendiamina
Prueba de oxidasa
PRUEBA DE MOVILIDAD• Permite conocer si las bacterias en estudio son móviles o no, eso ayuda
en el proceso de clasificación
• Se realiza una siembra pinchando el medio con la aguja bacteriológica, y tras incubar 24 h, se observa si se ha producido crecimiento entorno a la zona inoculada.
• Se cultiva la especie en estudio en un caldo rico en triptofano para que se produzca el Indol
• Se agrega al cultivo tres gotas del reactivo de Kovack (P-dimetil-aminobenzaldehido )
• Se determina la presencia de Indol a través de la formación de un anillo rojo en la superficie del caldo
PRUEBA DEL INDOL
+ -
Determina si el organismo bacteriano en cuestión se desarrolla o no en un medio que contiene citrato como única fuente de carbono.