TÉCNICAS DE SEQUENCIAMENT O E APLICAÇÕES Lucélia Silva Barroso Bacharel em Fisioterapia – FAP Laboratório de Microbiologia – HC – UFMG Membro do LINC – INCT MM – FM - UFMG [email protected]Ana Paula Mendes Silva Bacharel em Ciências Biológicas – UFV Mestre em Genética – USP Doutoranda em Medicina Molecular – UFMG [email protected]
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Minicurso Técnicas de Sequenciamento e suas Aplicações
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TÉCNICAS DE SEQUENCIAM
ENTO E APLICAÇÕES
Lucélia Silva BarrosoBacharel em Fisioterapia – FAP
Laboratório de Microbiologia – HC – UFMGMembro do LINC – INCT MM – FM - UFMG
Genomas sequenciados (outubro/2014)Eucariotos: 21 completes, 1701 em progresso
Procariotos: 3227completo, 25252 em progresso
Virus: 4127 completes, 94 em progresso
Organellar: 5039 completos
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NATURE Vol 464 1 April 2010
2001: Human Genome Project2.7G$, 11 years
2001: Celera100M$, 3 years
2007: 4541M$, 3 months
2008: ABI SOLiD60K$, 2 weeks
2009: Illumina, Helicos40-50K$
2010: 5K$, a few days?
2012: 1000$, <24 hrs?
Next Gen X Sanger
2ª Geração de Sequenciamento • 454 - Pirosequenciamento (Roche)
• •Genome Analyser - Seqüenciamento por término reversível (Illumina-Solexa)
• SOLiD - Seqüenciamento por ligação de sondas (Applied Biosystems - Life)
• Comercializada em 2004
Pirosequenciamento – 454/Roche
• Etapas:- Ligação de adaptadores
- PCR em emulsão
- Seqüenciamento
Pirosequenciamento – 454/Roche
*dNTP – só um deles
Pirosequenciamento – 454/Roche
Resultado
Pirosequenciamento – 454/Roche
HiSeq 2000Illumina (Solexa)
Produz acima de 600Gb por corrida em 13 dias. Custo de resequenciar um genoma humano: UNC-CH Genome Analysis Facilit - (30x cobertura) aproximadamente $6,000