AJCristóvão, Departamento Zoologia Universidade Coimbra 2003 MEDIÇÃO DO CRESCIMENTO DE E. COLI EM SISTEMA FECHADO MÉTODOS PARA DETERMINAR A DENSIDADE CELULAR
AJCristóvão, Departamento Zoologia Universidade Coimbra 2003
MEDIÇÃO DOCRESCIMENTO DE E.COLI EM SISTEMA
FECHADO
MÉTODOS PARADETERMINAR A
DENSIDADE CELULAR
AJCristóvão, Departamento Zoologia Universidade Coimbra 2003
Câmaras decontagem
• Fácil rápido ebarato
• Útil para contareucariotas eprocariotas
• Não distinguecélulas vivas dasmortas
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Contadoreselectrónicos
•Suspensão microbiana forçadaatravés dum pequeno orifício•O movimento das partículas(micróbio) através do orifício éconvertida num sinal eléctrico•Fragmentos são contados•Não se distingue as células vivasdas mortas•Rápido e de fácil uso•Útil para células grandes
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Contagem de célulasviáveis
• Mede o nº decélulas viáveis
• A população éexpressa emcolony formingunits (CFU)
Colocar diluições dapopulação num meio
sólido apropriadoØ
Contar nº de colóniasØ
Calcula o nº de células napopulação
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Métodos de filtraçãoatravés de membranas
Muito útil para amostras de água
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Medições de massamolecular
• Peso seco– Moroso e não muito sensível
• Quantificar um constituinte emparticular– e.g., proteína, DNA, ATP, útil se as quantidades são
constantes em cada célula• Medições turbidimétricas (dispersão
de luz)– Rápido, fácil e sensível
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MEDIÇÃO PORTURBIDIMETRIA
Usar a D.O. como Concentração?
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Parâmetrosmatemáticos do
crescimento
•Tempo de geração (tempo deduplicação)
– tempo necessário para umapopulação duplicar de tamanho
• taxa específica de crescimento(constante de crescimento)
– número de gerações por hora
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Tempo de geração etaxa de crescimento
lnN - lnN0 =µ (t-t0)
N0 = # células ao tempo t0N = # células ao tempo t
µ = taxa específica de crescimentog = tempo de geração
logN - logN0 =µ/2,303 (t-t0)
µ=2,303 (logN - logN0)/(t-t0)
lnN - lnN0 =µ (t-t0)
Se ln(N/N0) =2
Então ln 2 =µ g
Assim g=0,693/µ ou µ=0,693/g
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CURVA DE CRESCIMENTO DEUMA BACTÉRIA
Papel milimétricosemilogarítmico.Porquê?Pode usar papelmilimétrico normal?
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Cálculos:
µ= (log 0.06-log0.03) x 2,303/(2,5-1,5)µ= (-1,22- (-1,522))x 2,303/1µ= 0,696 h-1
Taxa específica de crescimento:
g= 0,693/0,696g= 1 h
Tempo de geração:
N=N0 10µ(t-t0)/2,303
N= 104 x 100,696X5/2,303
N= 323594
Qual o nº de células ao fim de 5 horasSabendo que inicial era 104 células?:
Valores:t=1,5-->D.O.=0,03t=2,5-->D.O.=0,06
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EXERCÍCIOS
1,158
17
0,957,5
0,8556
0,6805,5
0,8865,50,4725
0,40540,3624,5
0,2923,50,2734
0,21730,2083,5
0,13720,1523
0,09310,0852
0,0870,50,081
0,08100,070
D.O.Tempo (h)D.O.Tempo (h)