3/3/2010 1 Universidade Federal de Goiás Instituto de Ciências Biológicas Departamento de Morfologia Disciplina: Biologia Celular MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS Profa. Mara Rubia Marques 2010 MICROSCOPIA Microscópio é um instrumento que produz imagens ampliadas de objetos de tal ordem pequenos que não podem ser vistos a olho nu. Tipos de microscopia: Microscopia de Luz - o espécime é atravessado por feixes de luz. Microscopia Eletrônica - o espécime é atravessado por elétrons.
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Universidade Federal de GoiásInstituto de Ciências BiológicasDepartamento de Morfologia
Disciplina: Biologia Celular
MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS
Profa. Mara Rubia Marques
2010
MICROSCOPIA
Microscópio é um instrumento que produz imagensampliadas de objetos de tal ordem pequenos que nãopodem ser vistos a olho nu.
Tipos de microscopia:
Microscopia de Luz - o espécime é atravessado por feixes de luz.
Microscopia Eletrônica - o espécime é atravessado por elétrons.
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PODER DE RESOLUÇÃO
0,2 µm
Menor distância entre duas partículas para que sejam vistas como unidades separadas.
3 nm
ML MET
PODER DE RESOLUÇÃO
Célula animal típica: 10 a 20 µm(1/5 da menor partícula visível a olho nu).
1 cm = 10-2 m1 mm = 10-3 m1µm = 10-6 m1 nm = 10-9 m1 Å = 10-10 m
É uma técnica que permite avisualização das superfícies deespécimes não seccionados. A amostraé fixada, dessecada e revestida com acamada fina de um metal pesado. Amicrografia obtida tem um aspectotridimensional.
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MICROSCÓPIO ELETRÔNICO
DE TRANSMISSÃO
MICROSCOPIA DELUZ
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1 – Condensadora
2 – Objetiva
3 – Ocular
4 – Fonte luminosa
5 – Platina
6 – Charriot
7 – Macro e micromanipuladores4
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MICROSCÓPIO DE LUZ MODERNO
Várias lentes na objetiva e na ocular
MODALIDADES DE OBSERVAÇÃO NA MICROSCOPIA DE LUZ
1. Campo claro 2. Campo escuro 3. Contraste de fase 4. Contraste interferencial 5. Polarização 6. Fluorescência 7. Microscópio invertido 8. Microscópio estereoscópico (lupa) 9. Confocal a laser
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Campo claro Campo Escuro
A luz atravessa o material analisado. Um sistema especial de condensadorfaz com que a luz fique de tal formainclinada que não atravessa omaterial. Apenas os feixes desviadospelo objeto são observados.
Contraste de fase Contraste Interdiferencial(Normarski)
Anéis na lente condensadora eobjetivas promovem retardo ópticono caminho do feixe luminoso.
Prismas ópticos no caminho da luzmodificam a fase de onda luminosa.
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Polarização
Côndilo mandibular e disco articular. Corante: Picrossírus
Dois filtros (polarizador e analisador) que selecionam apenas um plano de direção de vibração da luz: plano de luz polarizada (PPL).
Fluorescência
Células cancerosas coradas com Orange deacridina.
RNA – vermelhoDNA - amarelo
As substâncias absorvem a luz emum comprimento de onda eemitem luz com comprimentosmaiores.•Fonte luminosa: luz de mercúrio•Filtros: De excitação / barragem.
O microscópio invertido tem o sistema de iluminação acima do estágio e o sistema de lentesembaixo. Permitem a visualização através de espécimes espessos, como placas de cultivo decélulas, pela proximidade da lente ao fundo da placa.
Sans e Quevedo, 2007
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Microscópio estereoscópico
Observação de objetos opacos por onde a luz não passa, tais como: cristais, fósseis e moedas.
TIPOS DE PREPARO HISTOLÓGICOTIPOS DE PREPARO HISTOLÓGICO
Preparos a fresco (temporário) – vantagens / desvantagens
Preparos permanentes – vantagens / desvantagens.
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1. COLETA DO MATERIAL 2. FIXAÇÃO3. DESIDRATAÇÃO4. DIAFANIZAÇÃO5. INCLUSÃO/EMBEBIÇÃO6. MICROTOMIA7. COLORAÇÃO
Método físico-químico de separação de proteínas.Baseia-se na migração diferencial dos componentes de uma mistura entre umafase fixa (papel filtro, resinas carregadas, líquido depositado num sólido inerte)e outra móvel (solvente).
Maior quantidade de proteínasMenor pureza
Tipos:Cromatografia de filtração por gelCromatografia de intercâmbio iônicoCromatografia de afinidade.