MENENTUKAN NILAI MIC (MINIMAL INHIBITORY CONCENTRATION) DAN MENENTUKAN NILAI KOOFISIEN FENOL DARI DESINFEKTAN TERHADAP BAKTERISALMONELLA THYPOSA. BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Mikroorganisme hidup dan berkembangdengan cepat disekitar kita, ada mikroorganisme yang menguntungkan namun tak sedikit pula yang dapat sangat merugikan manusia maupun makhluk hidup lainnya.Oleh karena itu, dibutuhkan adanya bahan antimikroba untuk menghambat atau membunuh mikroorganisme patogen tersebut. Antimikroba yang umumnya digunakan adalah antiseptika dan desinfektansia. Namun, yang menjadi kendala dalam penggunaannya adalah kita tidak mengetahui kadar dimana antimikroba tersebut dapat menghambat dan melawan mikroorganisme. Untuk menganalisa kadar desinfektan dan antiseptik ini maka perlu diadakan uji kuantitatif untuk mengetahui kadar minimal suatu bahan yang masih dapat menghambat pertumbuhan
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
MENENTUKAN NILAI MIC (MINIMAL INHIBITORY CONCENTRATION) DAN MENENTUKAN NILAI KOOFISIEN FENOL DARI DESINFEKTAN TERHADAP
BAKTERISALMONELLA THYPOSA.
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Mikroorganisme hidup dan berkembangdengan cepat disekitar kita, ada mikroorganisme
yang menguntungkan namun tak sedikit pula yang dapat sangat merugikan manusia maupun
makhluk hidup lainnya.Oleh karena itu, dibutuhkan adanya bahan antimikroba untuk
menghambat atau membunuh mikroorganisme patogen tersebut.
Antimikroba yang umumnya digunakan adalah antiseptika dan desinfektansia. Namun,
yang menjadi kendala dalam penggunaannya adalah kita tidak mengetahui kadar dimana
antimikroba tersebut dapat menghambat dan melawan mikroorganisme.
Untuk menganalisa kadar desinfektan dan antiseptik ini maka perlu diadakan uji
kuantitatif untuk mengetahui kadar minimal suatu bahan yang masih dapat menghambat
pertumbuhan mikroorganisme. Uji tersebut dinamakan Berdasarkan hal tersebut maka
dilakukanlah suatu uji konsentrasi hambat minimal atau minimal inhibitory concentration (MIC),
untuk menguji secara kuantitatif konsentrasi terendah yang masih dapat menghambat
pertumbuhan suatu mikroba atau bakteri uji.
Hasil pengujian konsentrasi hambat minimal dilanjutkan dengan suatu uji yang disebut
koefisien fenol, dimana bahan desinfektan yang digunakan akan dibandingkan dengan baku fenol
5%.
B. Maksud Percobaan
Maksud dari percobaan ini yaitu :
1. Mengetahui dan memahami cara- cara penentuan nilai MIC dari suatu desinfektan
2. Mengetahui dan memahami cara – cara pengujian koofisien fenol dari suatu desinfektan
C. Tujuan Percobaan
Adapun tujuan dari percobaan ini yaitu :
1. Untuk menentukan nilai MIC (Minimal Inhibitory Concentration) dari desinfektan terhadap
bakteriSalmonella thyposa.
2. Untuk menentukan nilai koofisien fenol dari desinfektan terhadap bakteri Salmonella thyposa.
D. Rumusan Masalah
Adapun rumusan diadakan percobaan ini yaitu;
1. Berapa nilai Minimal Inhibitor Concentration (MIC) dari desinfektan
2. Berapa nilai koefisien fenol dari desinfektan
E. Manfaat Percobaan
Manfaat dari percobaan ini adalah untuk mengetahui mutu suatu desinfektan dengan
menggunakan metode MIC (Minimal Inhibitory Concentration) dan koofisien fenol, sebagai
sumber informasi kepada masyarakat atau konsumen.
BAB II
KAJIAN PUSTAKA
A. TEORI UMUM
Pada saat telah banyak beredar dan ditawarkan berbagai macam desinfektansia kepada
konsumen.Desinfektansia secara umum diartikan sebagai pembasmi mikroorganisme terutama
ditujukan pada benda mati. Pada penandaannya, yang memenuhi persyaratan telah dicantumkan
cara penggunaan produk yang sesuai sebagai bahan untuk desinfeksi. Namun demikian banyak
pula produk disinfektansia yang memuat cara-cara penggunaannya dan komposisinya (Djide,
2003).
Desinfektansia adalah bahan atau zat yang digunakan untuk menghilangkan atau
menghancurkan bakteri baik bakteri patogen atau non patogen, terutama bakteri yang
membhayakan (patogen). Istilah ini pada umumnya digunakan dalam proses membebaskan
benda-benda mati atau infeksi, dan aman untuk dipakai dalam bidang industri atau pada rumah
sakit, atau industri-industri makanan/ minuman dan industri farmasi lainnya (Rusli , 2008).
Nilai koefisien fenol adalah perbandingan pengeceran tertinggi desinfekstansi dengan
pengenceran tertinggi baku fenol 5%,dimana pengenceran tersebut dapat mematikan bakteri uji
dalam kontak waktu 10 menit,tetapi tidak mematikan bakteri uji dalam kontak waktu 5
menit.mikroorgarnisme yang di pakai, menurut FDA adalah galur salmonella thyposa dan
staphylococcus aureus yang khas. Galur-galur tersebut dapat di peroleh dari American Type
culture collection rockville,maryland .Tetapi untuk desinfekstansi yang baru perlu di uji terhadap
mikoorganisme yang lebih luas (Djide,2003).
Selain dari pada itu menurut AOAC,1984, bahwa mikroorganisme uji untuk pengujian
koefisien fenol dapat di gunakan bakteri-bakteri pseudomonas aeruginosa, salmonella typhosa
dan staphylococcus. Namun bakteri salmonella thyposa yang di gunakan sebagai bakteri uji
koefisien fenol di indonesia (SNI 06-1872-1990) (Djide,2003).
Perlu di ketahui bahwa pada awal dan akhir dari pengujian kofisien fenol selalu di
lakukan uji kemurnian bakteri uji .pengujian kemurnian bakteri tersebut pada akhir pengujian
kofisien fenol di lakukan pada hari ketiga inkubasi pada suhu 370 C (AOAC,1984)
(Djide,2003).
Fenol merupakan salah satu salah satu antiseptikum tertua (Lister,1870) dengan khasiat
bakterisid dan fungisid, juga terdapat basil dan spura, walaupun memerlukan waktu yang lebih
lama. Mekanisme kerjanya berdasarkan denaturasi protein sel bakteri, yakni perubahan rumus
bangunnya hingga sifat khasnya hilang. Khaistnya dikurangi oleh zat organis dan ditiadakan oleh
sabum, karena dengan alkali terbentuk fenolat inaktif, karena sefat mendenaturasi juga berlaku
untuk jaringan utuh manusia fenol berdaya korosit (membakar) terhadap kulit dan sangat
merangsang sehingga jarang digunakan sebagai antiseptikum kulit, berdasarkan sifat anestetik
likjalonya adakalanya senyawa ini digunakan dalam lotion antigatal misalnya lotion alba
(Tjay,2002).
Sebagian besar Salmonella sp bersifat pathogen pada binatang dan merupakan sumber
infeksi bagi manusia. Binatang-binatang itu, antara lain tikus, unggas, ternak, anjing dan kucing.
Di alam bebas Salmonella thypi dapat tahan hidup lama dalam air, tanah atau pada bahan
makanan. Dalam feces di luar tubuh manusia tahan hidup 1-2 bulan. Dalam air susu dapat
berkembang hidup dan hidup lebih lama sehingga sering merupakan batu loncatan untuk
penularan penyakitnya (Entjang, 2003).
Ciri – ciri ideal suatu desinfektansia (Djide,2003):
1. Aktivitas antimikrobialnya
persyaratan ini adalah kemampuan bahan kimia tersebut mematikan mikroorganisme. Pada
konsentrasi rendah,bahan tersebut harus mempunyai aktivitas antimikroba dengan spectrum
luas,artinya harus dapat mematikan berbagai macam mikroorganisme.
2. Kelarutan
Bahan kimia tersebut harus dapat larut didalam air atau pelarut-pelarut lain sampai pada taraf
yang diperlukan untuk dapat digunakan secara efektif.
3. Stabilitas
perubahan yang terjadi pada bahan kimia tersebut,apabila dibiarkan beberapa lama harus
seminimal mungkin atau tidak boleh mengakibatkan kehilangan sifat antimikrobanya dengan
nyata
4. Tidak toksik bagi manusia dan hewan
idealnya senyawa tersebut hanya bersifat letal bagi mikroorganisme sasarannya
5. Homogenitas (keserbasamaan)
terutama dalam penyimpanan juga komposisinya harus seragam,sehingga bahan aktifnya selalu
ada dalam setiap aplikasi
6. Tidak terikat dengan bahan – bahan organic
hal tersebut, katena banyak bahan kimia dapat berikatan dengan protein atau bahan organic
lainnya.
7. Pengaruh suhu
aktivitas antimikrobanya tetap aktiv pada suhu kamar atau pada suhu tubuh.
8. Kemampuan penembusan
tidak menimbulkan karat dan warna sehingga dapat merusak pakaian,kain dan sebagainya]
9. Kemampuan menghilangkan bau yang kurang sedap
10. Berkemampuan sebagai detergen
11. Ketersediaan dan biaya bahan kimia tersebut harus tersedia dalam jumlah yang besar dan dengan
harga yang pantas
Faktor utama yang menentukan bekerja sama suatu disinfektan adalah potensi, kadar,
waktu yang diberikan kepada desinfektan untuk bekerja, suhu disinfektansia, jumlah dan tipe
mikroorganisme yang ada bahan yang disinfeksi. Untuk bekerjanya suatu desinfektansia harus
mempengaruhi beberapa bagian dari sel yang vital dari mikroorganisme. Bagian sel yang peling
rentang terhadap cara kaerja desinfektansia adalah pada membran sitoplasma, enzim tertentu,
dan protein struktual seperti yang terdapat pada dinding sel. Adanya perbedaan dasar
mendesinfektansia dari setiap bahan kimia terhadap tipe mikroorganisme, apabila ditunjukan
pada proses disinfeksi terhadap mikroorganisme pathogen tertentu, maka bahan yang dipilih
adalah desinfektansia harus membunuh mikroorganisme, misalnya untuk
membunuhMycobacterium tubercolosis maka digunakan larutan yodium atau fenol, bukan
benzalkonium cair. Adapun beberapa fakto-faktor yang berpengaruh tersebut adalah:
1. Konsentrasi (kadar)
Konsentrasi disinfektansia yang digunakan akan bergantung kepada bahan yang akan
digunakan untuk desinfektansia dan mikroorganisme yang akan dimusnakan. Pada umumnya
pada konsentrasi yang tinggi akan bersifat bakterisida, sedangkan yang bersifat lemah akan
bersifat bakteriostatika, kecuali terhadap alkohol, karena alkohol efektiff pada konsentrasi 70%
dan propel alkohol pada konsentrasi 50-80%
2. Waktu
Perusakan mikroorganisme untuk desinfektan kelihatannya merupakann uatu proses yang teratur.
Waktu sangat berpengaruh oleh berbagai variable. Pada umumnya dengan batas keselamatan
yang lebar dapat dipastikan akan memberikan waktu yang cukup suatu disinfektansia untuk
bekerja.
3. Suhu
Sudah menjadi suatu kenyataan bahwa dengan peningkatan suhu akan mempercepat laju rekasi
kimia. Dengan demikiann disinfektansia juga berlaku yaitu naiknya suhu akan mempercepat
proses tersebut. Tidak jarang dengan kenaikan suhu 10o C dapat mengandakan laju pemusnahan
suatu desinfektansia.
4. Keadaan sekitar media
pH medium dan adanya benda asing mungkin sangat berpengaruhi proses desinfektansia. pH
dapat menentukan apakah suatu zat kimia tersebut dapat bersifat sebagai disinfektansia atau
tidak. Demikian pula adanya benda asing dapat membantu kemampuann atau mengurangi
aktivitas duatu desinfektansianya (Natsir,2003).
Adanya beberapa kelompok utama bahan-bahan kimia yang dapat digunakan sebagai
bahan disinfektansia antara lain fenol an persenyawaan fenolik, alkohol, halogen, loham berat
dan persenyawaannya, deterjen, aldehida, dan kemosterilitas gas (Djide, 2003).
Banyak zat kimia dapat menghambat atau mematikan mikroorganisme berkisar dari
unsur logam berat seperti perak sampai tembaga kepada molekul organik seperti persenyawaan
ammounium kuartener. Berbagai substansi tersebut menunjukan efek antimiroba dengan cara
terhadap berbagai macam mikroorganisme. Efek terhadap permukaan benda atau bahan juga
berbeda-beda, ada yang serasi dan ada yang bersifat merusak, karena ini juga variabel, maka
perlu sekali diketahui terlebih dahulu perilaku suatu bahan kimia sebelum digunakan untuk
penerapan praktis tertentu. Beberapa faktor yang perlu dipertimbangkan dan memilih bahan
antimikrobiol untuk tujuan praktis yaitu (Zaraswati, 2004):
1. Sifat bahan yang akan diberi perlakuan
Suatu zat kimia yang digunakan untuk mendefinisikan perabotan terkontaminasi mungkin tidak
baik bila digunakan untuk kulit karena dapat amat merusak sel-sel jaringan kulit. Dengan
demikian maka harus dipilih zat yang serasi dengan bahan yang dikenainya.
2. Tipe mikroorganisme
Tidak semua mikroorganisme sama rentannya terhadap sifat menghambat atau mematikan suatu
zat kimia tertentu. Karena itu harus dipilih zat yang telah diketahui efektif terhadap suatu tipe
mikroorganisme yang akan dibasmi. Sebagai contoh, spora bersifat lebih resisten dari pada sel-
sel vegetatif. Bakteri gram positif dan gram negatif memiliki kerentangan yang berbeda, jauh
lebih resisten terhadap disinfektan kationik dari pada gram positif. Galur-galur yang berbeda dari
spesies yang sama juga memiliki kerentangan berbeda terhadap suatu zat antimikrobial tertentu.
3. Keadaan Lingkungan
Yaitu suhu, pH, waktu, konsentrasi, dan adanya bahan organik asing kesemuanya itu mungkin
turut mempengaruhi laju adan efisiensi penghancuran mikroba. Berhasilnya penggunaan suatu
bahan antimikrobiol menyaratkan dipahaminya pengaruh kondisi-kondisi tersebut
terhadap bahan yang dimaksud sehingga bahan itu dapat dipergunakan didalam keadaan yang
paling menguntungkan.
B. URAIAN BAKTERI UJI
Salmonella thyposa
A. Klasifikasi
Kingdom : Protista
Divisi : Schizophyta
Class : Bakteria
Ordo : Eubacteriales
Familia : Enterobacteriaceae
Genus : Salmonella
Spesies : Salmonella thyposa
B. Morfologi :
Termasuk kuman gram negatif, tidak berspora banyak, berbentuk batang yang lurus,
terpisah-pisah, kadang-kadang mebentuk koloni berupa rantai.Bergerak dengan flagel yang
peritrik atau tidak bergerak.Menimbulkan fermentasi anaerobik pada glukosa, kadang-kadang
juga laktosa. Seringkali terdapat pada saluran pernafasan dan saluran kencing Vertebrata,
lainnya hidup bebas, lain lagi bersifat pathogendan bahkan dapat tersusun seperti rantai, pendek.
Susunan gerombol yang tidak teratur biasanya ditemukan pada sediaan yang dibuat dari
pembenihan padat, sedangkan dari pembenihan kaldu biasanya ditemukan tersendiri atau
tersusun sebagai rantai pendek.Kumain ini tidak bergerak, tidak berspora dan positif gram.Hanya
kadang-kadang yang gram (-) dapat ditemukan pada bagian tengah gerombolan kuman, pada
kuman yang telah difagositosis dan pada biakan tua yang hampir mati.
C. Uraian Bahan
a. Fenol (Ditjen POM : 484)
Nama resmi : Phenolum
Nama lain : Fenol
RM/BM : C6H5OH / 94,11
Rumus Bangun : OH
Pemerian : Hablur berbentuk jarum atau massa hablur; tidak
berwarna atau merah jambu, bau khas, kaustik.
Kelarutan : Larut dalam 12 bagian air ; mudah larut dalam
etanol (95 %) P, dalam kloroform P, dalam eter P,
dalam gliserol P dan dalam minyak lemak.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat terlindung dari
cahaya, di tempat sejuk.
Khasiat : Antiseptikum ekstern
Kegunaan : Sebagai desinfektan
b. Alkohol (Ditjen POM, 65)
Nama resmi : Aethanolum.
Nama lain : Etanol/Alkohol.
RM/BM : C2H5OH/46,07
Pemerian : Cairan tak berwarna, jernih, mudah menguap dan
mudah bergerak; bau khas; rasa panas. Mudah
terbakar dengan memberikan nyala biru yang tidak
berasap.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari
cahaya; di tempat sejuk, jauh dari nyala api.
Kegunaan : Sebagai antiseptik.
c. Air Suling (Ditjen POM, 96)
Nama resmi : Aqua destillata
Nama lain : Aquades, air suling
RM/BM : H2O/18,02
Pemerian : Cairan jernih, tidak berbau, tidak berasa dan tidak
mengandung bahan kimia yang dapat
membahayakan tubuh
Kegunaan : Sebagai pelarut
d. Pepton (Ditjen POM,1979)
Nama Resmi : Pepton
Sinonim : Pepeton Kering
Pemerian : Serbuk,kuning kemerahan sampai coklat; bau
khas, tidak busuk.
Kelarutan : Larut dalam air; memberikan larutan berwarna
coklat kekuningan yang bereaksi agak asam;
praktis tidak larut dalam etanol (95 %) P dan dalam
eter P.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.
Kegunaan : Sebagai komposisi.
e. Ekstrak Beef (Ditjen POM,1979)
Nama resmi : Beef ekxtrak
Sinonim : Kaldu nabati dan kaldu hewani.
Pemerian : Berbau dan berasa pada lidah.
Kelarutan : Larut dalam air dingin.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat.
Kegunaan : Sebagai komposisi medium
D. Prosedur Kerja (Djide, 2003 )
a. Uji Minimum Inhibition Concentration (MIC)
1. Sediakan 10 buah tabung steril, dan isi 9,5 ml medium NB steril kedalam tabung pertama dan 5
ml kedalam tabung lainnya.
2. Tambahkan ke dalam tabung pertama 0,5 ml anti mikroba yang akan di uji , sehingga di peroleh
pengenceran 1:20.
3. Diambil dengan pipet steril 5 ml dari tabung pertama dan masukkan ke dalam tabung ke dua,
campurkan sampa homogen.
4. Kemudian di ambil lagi 5 ml dari tabung kedua ini dan di masukkan ke dalam tabung ketiga dan
seterusnya sampai pada tabung kesepuluh , setelah dihomogenkan, dipipet 5 ml dari tabung
terakhir dan dibuang. Sebaiknya untuk pemindahan cairan dari tabung ke tabung digunakan pipet
tersendiri.
5. Ditanam kedalam tiap-tiap tabung 0,02 ml suspensi biakan yang telah berumur 24 jam.
6. Diinkubasikan semua tabung pada suhu 370 C dan diperiksa pertumbuhan bakteri setelah 24-72
jam.
7. Untuk memastikan bahwa bakteri yang tumbuh adalah bakteri yang diinokulokasikan, maka
adanya pertumbuhan di periksa dengan penanam kembali dalam medium pembenihan.
Konsentrasi tertinggi yang masih memperlihatkan penghambatan pertumbuhan mikroba adalah
nilai MIC-nya.
b. Uji Koefisien Fenol
1. Ditentukan milai MIC desinfektan yang akan diuji.
2. Buatlah 5 pengenceran desinfektansia yang akan diuji, dengan perbedaan konsentrasi masing-
masing 1: 20.
3. Tempatkan MIC pada pengenceran kedua, misalnya nilai MIC hasil uji sebelum adalah 1:20,
maka deret pengeceran itu akan menjadi 1:20,1:40, 1:60, 1:80, dan 1:100.
4. Buatlah larutan murni fenol dengan konsentrasi 5 % dan buat dari larutan ini 3 pengenceran
yaitu 1:80, 1:90, dan 1:100.
5. Sediakan 4 deret tabung buylon masing-masing deret sebanyak 5 tabung.
6. Didepan deret tabung buylon itu diletakkan desinfektansia dari ke lima pengenceran tersebut di
atas sebanyak 5 ml tiap tabung. Tabung-tabung itu sebaiknya direbdam dalam air dingin dengan
suhu 5-100C.
7. Selang tiap 30 detik masukkan 0,2 ml biakan 24 jam bakteri uji kedalam masing-masing tabung
desinfektansia dimilai dari pengenceran terendah sampai tertinggi.
8. penanaman ini memerlukan waktu 2 menit, sehinga waktu kontak untuk tiap tiap tabung adalah
2 menit sebelum melakukan proses inokulasi pada tabung deret kedua, lakukan proses istirahat
selama tiga menit.
9. Pada menit ke 5 detik nol (0) pindahkan 1 ose bulat (diameter 4 mm) dari tabung pengenceran
pertama (1) deret pertama(1), ke tabung pertama deret buylon ke dua.
10. Tiga puluh (30) detrik kemudian dipindahkan 1 ose bulat (dameter 4 mm) dari pngenceran kedua
deret buylon pertama kedalam tabung kedua dari deret buylon kedua.
11. Tiga puluh (30) detik kemudian tanam dengan cara yang sama pada tabung ke tiga, demikian
seterusnya sampai deret buylon tertanam dengan masing-masing pengenceran desinfektansia,
sehingga waktu kontak bakteri uji dalam desinfektansia itu untuk tiap-tiap pemgenceran adalah 5
menit.
12. Ulangi perlakuan ini pada tabung buylon deret buylon ke tiga, masing-masing selang 30 detik
tetapi setelah bakteri uji berada 10 menit dalam tiap-tiap pengenceran desinfektansia.
13. Ulangi dengan cara yang sama pada larutan embanding fenol 5%.
14. Lakukan dengan cara yang sama pada larutan pembanding fenol 5%.
15. Inkubasi tabung-tabung buylon tersebut pada suhu 370C selama 48 jam.
16. Amati hasil percobaan, catat dan hitung koefisien fenol desinfektansia tersebut.
BAB III
KAJIAN PRAKTIKUM
A. Alat yang Dipakai
Alat-alat yang dipakai pada saat praktikum adalah: autoklaf, bunsen, botol steril,
erlenmeyer, inkubator,karet, korek api, ose bulat, oven, rak tabung, spoit 1 ml, spoit 5 ml,
stopwatch, dan tabung reaksi.
B. Bahan yang Digunakan
Bahan-bahan yang digunakan pada saat praktikum adalah: air es / air dingin, air steril,
Mikrobiologi dan Bioteknologi Farmasi Universitas Hasanudin : Makassar.
Entjang, Indan. 2003. ”Mikrobiologi dan Parasitologi”. PT.CITRA ADITYA BAKRI : Bandung .Rusli, dan Fitriana.2008. ”Tuntunan Praktikum Mikrobiologi Farmasi Terapan”. Universitas Muslim