MEDII DE CULTURA
MEDII DE CULTURA
• suporturi materiale si nutritive care servesc la cultivarea bacteriilor
• amestecuri de substante care asigura cultivarea microorganismelor
Scopuri
• Izolarea in cultura pura
• Identificare
• Diagnostic, tratament
• Producerea industriala a unor substante (prepararea vaccinurilor)
• Controlul sterilitatii sau incarcarcaturii microbiene a unor elemente de mediu (apa, alimente)
Conditii
1. Surse de C, N, apa, substante minerale, energie, substante nutritive, factori de crestere
2. pH optim, temperatura optima
3. Aero/anaerobioza
4. Sterile
Ingrediente
• Peptona
• Extracte sau infuzii de carne
• Agenti de solidificare: agar
• Indicatori de pH: turnesol, rosu fenol
• Agenti selectivi
• Zaharuri
Prepararea mediilor de cultura
• Amestecul ingredientilor: proportie, ordinea indicata
• Determinarea si ajustarea pH-ului
• Repartizarea in recipiente adecvate
• Sterilizarea
• Controlul sterilizarii si al calitatii mediului
Clasificarea mediilor de cultura
Dupa consistenta: lichide solide
semisolide
Dupa provenienta: naturale
sintetice
Dupa compozitie si scop: simple
complexe
speciale
Clasificarea mediilor de cultura
• Medii complexe– de utilitate generala: - uzuale
- cu proteine native
– Medii speciale• selective
• de imbogatire
• anaerobi
• teste biochimice
Medii simple: Apa peptonata
Bulion simplu
Geloza simpla
Medii complexe: bulion sange
geloza sange
geloza chocolatie
Medii lichide- bulion simplu
• Categoria: Mediu de bază
• Componente: macerat de carne + peptonă + NaCl 0,5%
• Utilizare: pentru germeni nepretenţioşi
Geloza simpla
• Categoria: Mediu de bază
• Componente: bulion simplu + agar-agar
Geloza simpla
• Categoria: Mediu de bază
• Componente: bulion simplu + agar-agar
Geloza lactozata
• Categoria: Mediu diferenţial Componente: geloză simplă + lactoză + albastru bromtimol
• Utilizare: studierea fermentării lactozei
Geloza sange
• Categoria: Mediu compus
• Componente: geloză simplă răcită la 45°C + sânge defibrinat 10-20%
Geloza socolatie
• Categoria: Mediu special
• Componente: geloză simplă răcită la 60-80°C + sânge
• Utilizare: cultivarea neisseriilor, hemofililor
Mediul Chapman
Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial
(evidentiaza o proprietate
biochimica a tulpinii) Componente: geloză simplă + NaCl 7,5% + manitol + roşu fenol
Utilizare: selectiv pentru stafilococ
Medii folosite pentru enterobacterii
(agar, lactoza, indicatori de pH) Drigalski Istrate McConkey Levine
Bacteriile care degradeaza lactoza din mediu = lactozo pozitive
Bacteriile care nu degradeaza lactoza din mediu = lactozo negative
Mediul Levine
• Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial
• Componente: geloză simplă + eozină + lactoză + albastru de metilen
• Utilizare: cultivarea enterobacteriilor (E.coli)
ADCL (Leifson)
• Categoria: Mediu selectiv şi diferenţial
• Componente: geloză simplă + săruri biliare + lactoză + roşu neutru
• Utilizare: cultivarea shigelelor şi salmonelelor
• Mediul BSA: vibrionul holeric
• Mediul Chapman : stafilococi
• Mediul Lowenstein-Jensen: bacilul TBC
• Mediul OCST: bacilul difteric
• Mediul Sabouraud: fungi
Mediul Muller - Hinton
• Categoria: Mediu special
• Utilizare: Efectuarea antibiogramelor
Mediul OCST
• Categoria: Mediu de îmbogăţire (favorizeaza X bacteriilor, mai ales cand acestea sunt in concantratie mica)
• Componente: ou + cisteină + ser + telurit de potasiu
• Utilizare: cultivarea bacililor difterici
Mediul Sabouraud
• Categoria: Mediu special
• Componente: geloză simplă + maltoză/glucoză + antibiotice
• Utilizare: cultivarea
fungilor
Mediul Lowenstein-Jensen
Metode de insamantare
• Insamantare = punerea in contact a unei culturi bacteriene sau a unui produs patologic cu mediile de cultura.
• Izolare = repicarea unei singure colonii pe alte medii de cultura cu scopul de a obtine cultura pura
• Cultura bacteriana = totalitatea bacteriilor crescute in/pe suprafata unui mediu de cultura
Tehnici de insamantare
• Tehnica insamantarii prin epuizare:– Scop: obtinerea coloniilor izolate
• Insamantarea prin intepare (pe medii solide aflate in tuburi)
• Insamantarea in panza
Caracterele culturii microbiene pe medii solide
• Colonia= ansamblu localizat, alcatuit din populatie pura de bacterii provenite dintr-un singur parental.
Pe mediu solid se descrie:- forma coloniei - producerea de
pigment- marimea coloniei - consistenta coloniei- suprafata coloniei - emulsificabilitatea- marginile coloniei - mirosul culturii
Pigment
Caracterele culturii microbiene pe medii solide
• Colonia= ansamblu localizat, alcatuit din populatie pura de bacterii provenite dintr-un singur parental.
Colonii S (smooth)
• Colonii R (rough): B.anthracis, C.diphteriae, M.tuberculosis
MYCOBACTERIUM MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS PE TUBERCULOSIS PE MEDIUL MEDIUL LOWENSTEINLOWENSTEIN
HEMOLIZA
ααββ
STAFILOCOCSTAFILOCOC- αα COMPLETA COMPLETA
- - ββ CALD-RECE CALD-RECE (se clarifica la 4°C)(se clarifica la 4°C)
STREPTOCOCSTREPTOCOC
- αα INCOMPLETA INCOMPLETA
VERZUIEVERZUIE
- ββ COMPLETA COMPLETA
Clasificare – hemoliza pe geloza sange
• hemoliza β:= streptococi β -
hemolitici
• hemoliza - incompleta, verzuie
• streptococi γ - nehemolitici,