Manual para el manejo del software Empower Temas:1. Crear
Proyecto
2. Desarrollo de Mtodos
3. Creacin de un Conjunto de Mtodos 4. Configuracin del Equipo y
el Software Empower5. Creacin de Mtodos de Proceso
5.1 Comprobacin Manual del Mtodo de Proceso6. Elaboracin del
informe1) Crear Proyecto Abrir el Software Empower, ingresar
usuario (System) y la contrasea (manager), luego se debe presionar
OK.
A continuacin aparecer la siguiente ventana:Nota: desde aqu en
el icono Configure System se crea el proyecto y se realizan las
configuraciones pertinentes. Ingresar a: Configure System File New
Project hacer clic en Next se debe seleccionar el tamao del
proyecto (250 MB) y el enunciado Full Audit Trail Support no debe
estar seleccionado hacer clic en Next Photo Diode Array
(seleccionar) Owner Only (debe estar seleccionada) hacer clic en
Next hacer clic en Next Project Name (escribir el nombre del
proyecto) Finish (finalizar). Nota: de esta forma el proyecto ya
esta creado. Una vez creado el proyecto, se debe crear el mtodo.2)
Desarrollo de Mtodos
Iniciar nuevamente sesin en el software Empower (escribiendo el
usuario y la clave correspondiente)
Luego se debe hacer clic donde dice Advanced y selecciono la
interface Quick Start y presiono OK.
Se abrir un cuadro de dialogo (Select Project System), a partir
del cual se debe seleccionar el nombre del proyecto que fue creado
anteriormente y el sistema cromatogrfico que es Defaul y
seleccionar OK.
A continuacin se abrir la ventana de anlisis de la interfaz
Quick Start.
Se debe presionar la pestaa View Method y la opcin que dice
Instrument y se abrir la ventana View Method Instrument.
Nota: en esta ventana programo todas las condiciones del
proyecto, tanto del mtodo instrumental (dibujo uno encerrado en el
crculo) como del detector (dibujo dos encerrado en el crculo). Las
condiciones se modifican por separado (se debe hacer clic en cada
uno).Condiciones modificadas en:
Mtodo Instrumental:
General: en esta pestaa se debe establecer el rango de la
longitud de onda con la cual deseo trabajar de comienzo a fin
(start wavelength end wavelength) Degas
Eventos
Flujo: establezco el flujo con el cual va ir pasando la fas mvil
a travs de la columna (ml/min) Temperatura: modifico la temperatura
a la cual quiero que se mantenga la columna. Solvente: hay cuatro
recuadros (solvente A, solvente B, solvente C, solvente D) en los
cuales debo escribir la composicin de la fase mvil y la proporcin
en la que se encuentra, dependiendo de por cual canal este pasando
mi fase mvil. CanalDetector:
General
Eventos
Canal 1
Canal 2
Nota: las condiciones indicadas, aparecen en la parte superior
del software (pestaas) al momento de hacer clic sobre cada uno de
estos (mtodo instrumental o detector).
Finalmente se debe presionar donde dice File Save as se abrir un
cuadro para guardar el mtodo instrumental (colocar el nombre), el
cual estar dentro del proyecto que se creo anteriormente. Una vez
realizado esto, en la barra de estado (parte inferior de la
pantalla) debern aparecer los nombres asignados con el cual se
guardo el mtodo (Method Set) y el proyecto (Instrumental
Method).
Nota: en el caso que el mtodo instrumental ya haya sido creado
(se hayan establecido todas las condiciones), se debe presionar el
icono (carpeta de color amarillo), para abrir el mtodo instrumental
que ya fue creado.
3) Creacin de un conjunto de mtodos Para crear un conjunto de
mtodos se debe hacer clic en la pestaa View Method Method Set (para
poder abrir el conjunto de mtodos).
En donde dice Instrument Method (encerrado en el circulo rojo)
debo seleccionar el nombre del mtodo (el cual fue creado
anteriormente). Luego se debe guardar el mtodo con el nombre
seleccionado (presionando el disquete que aparece en la parte
superior izquierda).
En la pestaa donde dice Run Sample Sample Queue (se deben
escribir, todos los parmetros de las muestras que sern
inyectadas).
Parmetros que se deben tener en consideracin:
Lista de modos: Run Only Vial: se completa de acuerdo a la
posicin que ocupa la muestra.
Sample Name: se completa con el nombre de las muestras que se
van a ainyectar.
Inj Vol: se completa con el volumen de inyeccin correspondiente
a la muestra.
Function: Se debe seleccionar dependiendo si es un estndar
(Standards), se asume que la concentracin es conocida, o si es
muestra (se debe seleccionar la opcin desconocido ya que no se en
que concentracin se encuentra). Method Set: selecciono el nombre
con el cual se creo el mtodo.
Run Time: tiempo de corrida total que dura la muestra.
Para realizar la adquisicin de datos se debe comprobar de que la
pestaa View Acquisition este seleccionada (de color naranjo)4)
Configuracin del Equipo y el Software Empower Se debe encender, el
detector y la pantalla del mtodo instrumental y presionar en la
pantalla, donde dice Menu/Status (todos los parmetros aparecen en
cero). Esta es la ventana de anlisis de muestra. Una vez encendido
el equipo, y el software ubicado en la pestaa Run Sample se debe
presionar el icono de Equilibrado del sistema/monitorizacin de la
lnea base, para abrir el cuadro de dialogo de configuracin del
equilibrado del sistema/monitorizacin de la lnea de base (Setup
Equilibrate/System Monitor).
Donde dice Instrument Method debo seleccionar de la lista el
mtodo que se ha creado al comienzo y a continuacin hacer clic en
Setup Equilibrate/Monitor. Cuando comienza el equilibrado, aparecer
la lnea base en el panel de visualizacin en tiempo real. Al
equilibrar el monitor, los datos que fueron guardados en el Mtodo
Instrumental (flujo, temperatura de la columna, solvente) debern
aparecer en la pantalla del equipo.
Nota: La temperatura de la columna ira aumentando poco a poco,
hasta alcanzar la programada y cuando esta aun no es alcanzada, en
la pantalla del equipo aparecer un mensaje de alerta, se debe
presionar clear cada vez que aparezca para eliminar el mensaje.
Nota: Para poder observar la lnea base, se debe hacer clic en la
pestaa Run Sample Control Panel (se podr observar la corrida de la
lnea base). Mientras se esta estabilizando la linea base, ubico el
mouse sobre el cromatograma y presiono con el botn derecho, en
donde aparecern varias opciones entre ellas: Fullview (volver al
tamao original una vez que hago zoom al cromatograma), Customize
Channels (en la cual debo escribir las tres longitudes de onda
especificas a la cual quiero medir y estas deben estar ticadas),
tambin se puede configurar si deseo ver los cromatogramas juntos
(overlay in single plot) o por separado (separate plots). Cuando la
lnea base ya se haya estabilizado, se debe hacer clic en la
herramienta (detener monitorizacin).
Nota: Debido a que el software ajusta automticamente la escala
del grafico en tiempo real, la lnea de base puede aparecer con
ruido. Una vez que se detiene el proceso de monitorizacin, se debe
hacer clic en el icono que dice Corrida de la muestra, es decir, se
le dar partida a las inyecciones. Una vez que doy la partida
aparece un cuadro en el cual debo especificar el nombre de la
muestra (la que comenzara a correr) y luego se presiona Run.
Al hacer clic en el icono Inyeccin de muestra se abrir el cuadro
de dialogo de configuracin de los parmetros de inyeccin nica
(Specify Single Inject Parameters).
NOTA: UNA VEZ QUE LAS INYECCIONES HAN SIDO GRABADAS Y COMIENZA
LA CORRIDA EL TIEMPO DE CORRIDA DE LA MUESTRA NO SE PUEDE
CAMBIAR.
Nota: se debe completar con el nombre de la muestra, la funcin
(en el caso que sea estndar o muestra lo que se este inyectando),
nombre del mtodo, ubicacin de la muestra en el vial, volumen de
inyeccin, tiempo de corrida de la muestra y finalmente presionar
Inject.EL ICONO LO PRESIONO SOLO CUANDO QUIERO IR INYECTANDO LAS
MUESTRAS UNA A UNA Y ASI EVITO COMPLETAR LA TABLA QUE APARECE AL
PRESIONAR LA PESTAA RUN SAMPLE (VENTANA DE ANALISIS DE MUESTRA) YA
QUE LA COMPLETO SOLO CUANDO QUIERO INYECTAR VARIAS MUESTRAS Y LAS
ESCRIBO TODAS DE UNA SOLA VEZ.
Nota: Es aqu donde se realiza la adquisicin de los datos, para
luego poder procesarlos.
5) Creacin de Mtodos de Proceso ( Integrar los datos Calibrar
los patrones Cuantificar las muestras)
Hacer clic en la pestaa Browse Project (en donde estarn todas
las inyecciones realizadas). En la parte superior de esta pestaa,
existen subpestaas (Sample Sets - Injections Channels Methods
Result Sets Results Sign Offs Curves).
En la subpestaa simple set aparece el nombre con que guarde las
muestras inyectadas y en la pestaa Injections aparecern cada una de
las inyecciones que fueron guardadas con el nombre de la
muestra.
Una vez ubicada en la pestaa Sample Set ubico el mouse sobre el
nombre de las muestras inyectadas (quedara de color negro), luego
se debe presionar el icono que dice Review Data Process Extraer
cromatograma (aqu se debe cambiar la longitud de onda (presionar
enter) a la cual quiero medir el compuesto de inters (cromatograma
en la parte superior), para ver con mayor claridad el compuesto en
la muestra inyectada (cromatograma en la parte inferior) Hacer clic
en el icono que dice Processing Parameters Wizard OK (cuadro de
procesamiento de mtodo wizard) OK (cuadro de dialogo: nuevo mtodo
de proceso).
Luego se deba hacer clic en Next (cuadro de dialogo: Integration
peak deteccin 1) Next Seleccionar donde dice mnima rea y hacer clic
en el pic de inters (una vez que el rea mnima haya sido
seleccionada, se le debe borrar el ultimo decimal y hacer clic en
Test Next Next (aparecer un cuadro con el nombre del pic que ha
sido seleccionado junto con el tiempo de retencin de este).Nota:
Hacer clic con el botn derecho del ratn en el grfico para tener
acceso a las opciones de zoom (Full View/Unzoom) del men
contextual. Luego presiono donde dice: (cuadro de dialogo:
Integration Peak detection 2) Next Aparecer un cuadro de dialogo:
regin de integracin: se debe definir el rea del pic del compuesto
de inters desde donde comienza (start) hasta donde termina (end)
Next
Nota: en este cuadro de dialogo, las reas de los pic ya estn
seleccionadas (lneas de color rojo, observadas en la lnea
base).
En esta pantalla de rechazo de picos (Integration - Peak
Rejection) contiene los resultados de la integracin de la pantalla
precedente. Si se han integrado adecuadamente los picos de inters,
continuar con el paso siguiente. De lo contrario, utilizar las
opciones Minimum Area (rea mnima) y Minimum Height (altura mnima)
para continuar definiendo la integracin.
Nota: Hacer clic sobre un pico para el que se desee definir el
rea mnima o la altura mnima. El pico aparecer marcado de color
rojo. Hacer clic en Minimum Area o Minimum Height. El campo o
campos se rellenan automticamente con un nmero que representa el
95% de la altura o rea real del pico. Las opciones Minimum Area y
Minimum Height inhiben la integracin de los picos con reas y
alturas iguales o inferiores a los valores introducidos. Como
alternativa, introducir los valores en estos campos de forma
manual.
Nota: Cuando se introducen los valores en estos campos de forma
manual, se activa el botn Test y se puede hacer clic en l para
visualizar los resultados obtenidos con los valores introducidos.
Si el software determina los valores, el botn Test se desactiva y
la prueba se realiza automticamente.Cuando se obtenga una
integracin satisfactoria, hacer clic en Next.
Se abrir la pantalla general de calibrado (Calibration
General)
Nota: se debe aceptar lo que ya esta predeterminado y hacer clic
en Next. Aparecer un cuadro de dialogo de Quick Start y se debe
presionar Yes. Se abrir la pantalla de nombres y tiempos de
retencin (Calibration Names and Retention Times).
Nota: donde dice Name se puede escribir el nombre especfico
correspondiente a cada pic (compuesto de inters). Hacer clic en
Next. Se abrir la pantalla de cantidades predeterminadas
(Calibration Default Amounts) con los nombres de los nuevos
componentes introducidos en la tabla. Habr una fila para cada uno
de los picos integrados visualizados en el cromatograma
Nota: las cantidades (Amount) y las unidades (Units) se deben
escribir de forma manual.
Hacer clic en Next y se abrir la pantalla de patrones internos
de calibrado (Calibration Internal Standards).
Nota: Aceptar la seleccin predeterminada de External Standard
Calibration (calibrado con patrones externos). A continuacin, hacer
clic en Next. Se abrir la pantalla del nombre del mtodo de proceso
(Processing Method Name).
Nota: Se debe escribir el nombre del mtodo correspondiente y
luego hacer clic en Finish. El software Empower integrar el
cromatograma aplicando los parmetros configurados, calibrar el
patrn y archivar el nuevo mtodo de proceso. Volver a aparecer la
ventana de visualizacin de datos (View Data) con la pantalla
principal de revisin activa (Review Main) y con el nombre del mtodo
de proceso en la barra de estado.
Nota: Hacer clic en la pestaa Peaks para visualizar los
resultados de la integracin, como nombres de los picos, tiempos de
retencin, cantidades, etc.6.1 Comprobacin Manual del Mtodo de
Proceso Una vez que se realizaron todas las inyecciones, se deben
de integran y cuantificar los cromatogramas, en donde se
especifican las reas, tiempo de retencin y concentracin de cada
pick.
Se debe pinchar el icono que dice View Data, en esta ventana
aparecern todas las inyecciones realizadas. Hacer clic en
(integrar) para integrar el cromatograma.
Hacer clic en (calibrar) para calibrar el cromatograma.
Hacer clic en (cuantificar) para cuantificar el
cromatograma.
Nota: Para visualizar los resultados del proceso de datos
manual, hacer clic en el icono (icono de proceso) de la barra de
herramientas. Se abrir la ventana de revisin de datos (Review). En
la ventana View Data, al hacer clic, me aparecern todas las
inyecciones realizadas al lado izquierdo y al lado derecho me
aparecern los cromatogramas.
En la parte inferior en la ventana 2D Channels, y selecciono la
lnea, voy a File Save Calibration (voy guardando cada uno de mis
puntos para luego poder hacer la curva de calibracin). Una vez que
tengo los puntos guardados, presiono donde dice Caliration Curve,
que es donde voy viendo mi curva de calibracin (concentracin
conocida) con los puntos que fueron guardados anteriormente. Aqu se
va creando la curva de cada uno de los componentes de inters. Nota:
A cada una de las concentraciones que voy guardando le voy
colocando un nombre.
Luego presiono el icono donde dice Review Main Window, para
regresar al cuadro inicial en donde tengo el cromatograma (cada uno
de los compuestos identificados con sus nombres). En el caso que se
este inyectando muestra (no se conoce la concentracin), en la parte
inferior en la ventana 2D Channels, y selecciono la lnea, voy a
File Save Result (voy guardando cada uno de los compuestos que ya
estn integrados).6) Elaboracin del Informe Para generar un informe
una vez que se han adquirido y procesado los datos
(integracin):
Hacer clic en Browse Project, en la barra de navegacin. Aparecer
la ventana del examinador de proyectos (Browse Project). En la pare
superior aparecen varias pestaas (Inyections, Results, Samples
Sets, Channels, etc.) En la pestaa Injections, aparece el listado
de todas las inyecciones realizadas.
Hacer clic en la pestaa Results y, a continuacin, en el botn
Update para actualizar la visualizacin en pantalla. Seleccionar el
resultado que se quiere visualizar (quedara seleccionado de color
negro) y hacer clic en el icono para visualizar el cromatograma (se
abrir una pestaa, se debe presionar OK), luego se debe ir guardando
cada uno de los cromatogramas, presionando el icono