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Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANLISIS CLNICOS LABORATORIO DE HEMATOLOGA
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BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE CIENCIAS
QUMICAS
LICENCIATURA: QUMICO FARMACOBILOGO
REA ESPECFICA DE ANLISIS CLNICOS
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO
ASIGNATURA DE: HEMATOLOGA I CDIGO: LQFB 406L FECHA DE ELABORACI:
MARZO 2006 NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: FORMATIVO TIPO DE
ASIGNATURA: CB
PROFESORES QUE PARTICIPARON EN SU ELABORACIN: M. C.. SILVIA
GARCA GONZLEZ M. C.. MIGUEL ANGEL VILLEGAS GONZLEZ HORAS PRCTICA. 2
TOTAL DE CRDITOS: 0
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NDICE
PRESENTACIN E INTRODUCCIN
3
PRCTICA 1 TOMA DE MUESTRAS SANGUNEAS
4
PRCTICA 2 CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGA 7
PRCTICA 3 DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, VSG, CUENTA
DE ERITROCITOS E NDICES ERITROCITARIOS
10
PRCTIC 4 CUENTA DE LEUCOCITOS Y REALIZACIN DE EXTENDIDO SANGUNEO
(TINCIN DE WRIGHT Y GIEMSA) CON VALORES ABSOLUTOS Y RELATIVOS.
22
PRCTICA 5 CUENTA DE RETICULOCITOS Y FRAGILIDAD ERITROCITARIA A
SOLUCIONES HIPOTNICAS 31
PRCTICA 6 CITOMETRA HEMTICA COMPLETA DE FORMA MANUAL
36
PRCTICA 7 CITOMETRA HEMTICA AUTOMATIZADA 38
PRCTICA 8 SEMINARIO SOBRE INTERPRETACIN DE HISTOGRAMAS 41
PRCTICA 9 CITOMETRA HEMTICA Y SU INTERPRETACIN EN DIVERSAS
PATOLOGAS 42
PRCTICA 10 OBSERVACIN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS MICROCTICAS,
NORMOCTICAS Y MACROCTICAS.
43
PRCTICA 11 OBSERVACIN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS
HEMOLTICAS
45
PRCTICA 12 OBSERVACION DE MEDULA OSEA NORMAL. 48
PRCTICA 13 RESOLUCIN DE CUADROS CLNICOS 51
PRCTICA 13 EVALUACIN FINAL 51
PREPARACIN DE REACTIVOS 52
CUESTIONARIO 54
BIBLIOGRAFA 57
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INTRODUCCIN Siglos atrs la sangre fue considerada como el lquido
esencial para la vida y se le atribua ser la fuente que mantena el
equilibrio en el organismo, sin embargo la composicin celular de la
sangre no se reconoci hasta la invencin del microscopio, siendo
Leeuwenhoek el primero en observar los glbulos rojos, no fue hasta
aos despus cuando se logr realizar exploraciones de los elementos
que constituyen a la sangre, definindose sta como un rgano
polisistemtico constituido por eritrocitos, leucocitos, plaquetas y
plasma.
La complicada composicin de la sangre provoc el inters para
realizar estudios sobre las clulas que la constituan, siendo K.
Vierordt quin realiz los primeros anlisis cuantitativos de stas,
pero fue hasta los aos treinta que se intent relacionar el nmero de
clulas sanguneas con algunas patologas, mtodos cada vez mejores y
conocimientos ms profundos sobre la fisiologa sangunea permiti una
relacin estrecha con el cuadro clnico presentado por diferentes
pacientes.
En la actualidad se han desarrollado tcnicas cualitativas y
cuantitativas de los componentes celulares, que en conjunto
constituyen la CITOMETRA HEMTICA: Determinacin de hemoglobina y
hematocrito, cuenta de eritrocitos, leucocitos, plaquetas,
observacin del frotis sanguneo y clculos de los ndices
eritrocitarios. La Citometra hemtica es sin lugar a dudas el primer
paso para el diagnstico, dado que numerosos trastornos se acompaan
de alteraciones en las clulas por lo cual es importante hacer la
diferenciacin. Las clulas pueden sufrir alteraciones no slo en su
forma sino tambin en su cantidad y su funcin, que pueden ser
secundarias a algunas alteraciones fisiopatolgicas, enfermedades
crnicas, terapias con medicamentos, dficit de algn componente,
neoplasias, etc., lo cual lleva a alterar las funciones que
desempean como es: defensa contra infecciones, aporte de oxgeno.
etc. Actualmente se cuenta con aparatos automatizados para la
determinacin de la citometra hemtica, da a da han sustituido a la
forma manual, ya que los valores son ms precisos; sin embargo el
Qumico Farmacobilogo debe estar preparado para realizar esta prueba
por ambos mtodos. OBJETIVOS.
1. El alumno conocer el funcionamiento de un laboratorio de
hematologa, as como las medidas de precaucin para su proteccin
personal en cuanto al manejo de las muestras de sangre, al ser
considerarlas potencialmente infecto-contagiosas.
2. El alumno conocer y aprender a manejar el material y equipo
ms comn que se utiliza en la realizacin de la citometra
hemtica.
3. El alumno aprender a analizar y correlacionar el resultado de
la citometra hemtica con las manifestaciones clnicas que presente
el paciente.
4. El alumno conocer las alteraciones morfolgicas ms frecuentes
que se presentan en las anemias.
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PRCTICA No. 1 TOMA DE MUESTRA SANGUNEA OBJETIVO: El alumno
conocer y aprender a realizar una puncin venosa para obtener
muestra de sangre. 1. MTODOS DE EXTRACCIN SANGUNEA. Las
determinaciones de la Citometra Hemtica, de preferencia se realizan
con sangre venosa, ya que la extraccin es ms fcil, se obtiene una
cantidad adecuada como para repetir cuantas veces sea necesario, la
manipulacin y el pipeteo es mucho ms fcil, sin embargo tambin se
puede utilizar sangre capilar o arterial. 1.1. OBTENCIN DE SANGRE
CON JERINGA. La extraccin se realiza con jeringa de plstico y aguja
desechable. En las tomas de muestra el operador debe adoptar una
actitud de confianza y seguridad para que el paciente pueda ser
tranquilizado y colabore de forma eficaz. 1.1.1 MATERIAL A UTILIZAR
POR EQUIPO. 1 Torniquete por equipo 1 Frasco con torundas con
alcohol etlico al 70 %, como antisptico. 2 Tubos de ensayo de 13x75
mm con tapn de color lila. 1 Frasco con 10 ml con solucin de
etilen-diamino-tetra-acetato de sodio al 10 % (EDTA). 1.1.2
PROCEDIMIENTO.
1) En un tubo de ensayo de 13x75 mm se coloca una gota del
anticoagulante, en la etiqueta se escribe en el nombre del
paciente, fecha y anlisis deseado.
2) El paciente cmodamente sentado, coloca el brazo en posicin
horizontal, se palpan las venas, (venas ceflica media y baslica) al
mismo tiempo se le solicita que abra y cierre el puo con la
finalidad de hacerlas ms evidentes.
3) Una vez seleccionada la vena en la que se efectuar la puncin,
se sujeta el brazo del paciente tensando la piel, se limpia la zona
en forma circular y de dentro hacia afuera, con el antisptico, se
deja secar, sin soplar.
4) Se aplica el torniquete a 7 cm. aproximadamente por arriba
del pliegue del codo, no apretndolo demasiado y slo el tiempo
necesario, para evitar la hemoconcentracin.
5) Se toma la jeringa de manera que el bisel de la aguja se
encuentre hacia arriba, se coloca paralela al trayecto de la vena,
se introduce a la piel y vena con una puncin directa y nica.
6) Cuando la aguja ha penetrado en la vena, se ve el flujo de la
sangre en la jeringa. 7) Jalar suavemente el mbolo de la jeringa
para obtener la cantidad de sangre deseada,
hacer esta operacin despacio para evitar la hemlisis. 8) Se
suelta el torniquete y se retira la aguja suavemente aplicando la
torunda sobre el
sitio de la puncin, indicndole al paciente que flexione el codo
suavemente con el puo abierto, con la finalidad de evitar
hemorragias o hematomas.
9) Se quita con mucho cuidado la aguja de la jeringa con la
ayuda de su funda, con movimiento de torsin, y la sangre se vaca
lentamente por las paredes del tubo que contiene el anticoagulante,
se tapa y se mezcla suavemente, durante un minuto.
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1.2 OBTENCIN DE SANGRE CON SISTEMA VACUTAINER. El fundamento es
la aspiracin directa de la sangre en tubos al vaco que contienen el
tipo y cantidad apropiada de anticoagulante. 1.2.1 MATERIAL A
UTILIZAR POR EQUIPO. 1 Torniquete 1 Soporte Vacuntainer 2 Agujas
Vacuntainer de calibre 20x25mm (Bisel corto) y/o 20x32mm (bisel
largo) 2 Tubos al vaco con EDTA (Tapn color lila) 1 frasco con
Torundas con alcohol al 70 % por seccin 1 par de guantes de ltex
desechables por persona 1.2.2 PROCEDIMIENTO (Presentacin de video)
1) Preparar el sistema: La aguja se gira para romper el sello de
esterilidad, se atornilla
al soporte, se quita la capucha, quedando lista para la puncin,
el tubo debe estar rotulado con el nombre del paciente, estudio y
fecha de realizacin.
2) El paciente cmodamente sentado coloca el brazo en posicin
horizontal, se palpan las venas, (venas ceflica media y baslica) al
mismo tiempo se le solicita que abra y cierre el puo con la
finalidad de hacerlas ms evidentes.
3) Una vez seleccionada la vena en la que se efectuar la puncin,
se sujeta el brazo del paciente tensando la piel, se limpia la zona
en forma circular y de dentro hacia afuera, con el antisptico, se
deja secar, sin soplar.
4) Se aplica el torniquete a 7 cm. aproximadamente por arriba
del pliegue del codo, no apretndolo demasiado y slo el tiempo
necesario, para evitar la hemoconcentracin.
5) Sujetar firmemente el soporte con la mano derecha e
introducir la aguja con el bisel hacia arriba en la vena elegida,
se sujetar el brazo del paciente con la mano izquierda, y con el
pulgar se sostendr el soporte vacuntainer para evitar que se mueva
la aguja.
6) Empuje el tubo vacutainer hasta el final del soporte,
perforando completamente el tapn.
7) Dejar fluir libremente la sangre hasta que se acabe el vaco.
8) Retire el torniquete suavemente. 9) Jalar el tubo vacuntainer
hacia afuera del soporte y sin quitar el tapn mezcle
suavemente la sangre con el anticoagulante lentamente sin
sacudir. (aprox. 60 veces)
10) A continuacin retire la aguja colocando la torunda en el
sitio de la puncin, indicndole al paciente que flexione el brazo
suavemente.
1.2.3 PRECAUCIONES:
1. Verificar que el material sea estril, para evitar la
transmisin de VIH y HEPATITIS, entre otras, se debe utilizar
guantes durante la extraccin sangunea para proteccin personal.
2. Debe evitarse una mala puncin o exceso de presin ya que puede
provocar hemorragias, hematomas y dolor en la zona de puncin.
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3. Evitar la permanencia prolongada de agujas dentro de las
venas, ya que en ocasiones puede provocar flebitis.
4. En el momento de la puncin asegurarse que la aguja penetre en
la luz del vaso, para evitar la formacin de hematomas.
5. Si por algn motivo la extraccin de sangre se realiza en vena
femoral, se debe tener la precaucin que la aguja no penetre
demasiado para evitar lesin vascular.
1.2.4 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE AMBOS MTODOS. El mtodo de
extraccin por sistema Vacutainer no requiere tanta preparacin. Se
pueden obtener varias muestras en una sola puncin, en cambio con
jeringa slo
se obtiene el volumen indicando en sta. En el sistema Vacutainer
existe una gran variedad de tubos tanto en volumen como
en el tipo de anticoagulante que contienen, adems slo se extrae
la cantidad exacta de sangre con relacin a la cantidad de
anticoagulante.
TIPO DE TUBO ANTICUAGULANTE Tapn morado EDTA Tapn verde Heparina
Tapn gris Oxalato de litio, de potasio y sodio. Tapn azul Citrato
de sodio. Tapn rojo Sin anticoagulante.
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PRCTICA No. 2 CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGA OBJETIVO: El
alumno conocer los sistemas de control de calidad interno y externo
que se utilizan en el laboratorio hematolgico para garantizar al
paciente resultados precisos y exactos.
La citometra hemtica, es sin duda uno de los estudios de
laboratorio ms solicitados y la interpretacin correcta supone el
anlisis exacto, preciso y confiable de cada uno de los parmetros
que se informan. Sin embargo, a pesar de realizar cuidadosamente
las determinaciones analticas, es habitual que se produzcan pequeos
errores durante el desarrollo de las tcnicas, siendo imposible
reproducir exactamente mediciones sucesivas de una misma muestra an
contando con tecnologa de punta. De ah que sea necesario contar con
sistemas de control de calidad interno y externo que garantice a su
vez el control de las variables que pueden ser causa de error
durante el trabajo diario de laboratorio.
Si consideramos el trabajo de laboratorio como un proceso
continuo desde la recepcin del paciente hasta la emisin de
resultados, podemos dividir el trabajo de laboratorio en tres
grandes fases: 1. Pre-analtica, 2.Analtica y 3. Post-analtica, en
las cuales se pueden estar introduciendo errores que deben ser
detectados por nuestro sistema de control de calidad para realizar
las acciones correctivas necesarias.
Los errores que se pueden presentar en el trabajo diario de
laboratorio son:
Burdos.- este tipo de error solo se presenta por descuido del
personal de laboratorio, ya que como su nombre lo dice son errores
muy graves que no se pueden detectar por ningn sistema de control
de calidad. Por ejemplo cambio de una muestra por otra, deun
reactivo por otro, de una cantidad por otra, etc.
Sistemticos.- este tipo de error es el que produce dentro del
sistema o mtodo de prueba, afectando gravemente la precisin de
nuestros resultados y se presentan como consecuencia de
procedimientos de calibracin incorrecta, funcionamiento defectuoso
o falta de precisin de alguna parte del proceso. stos a su vez
pueden ser constantes o proporcionales.
Aleatorios.- este tipo de error se produce como su nombre lo
indica sin prediccin ni regularidad, afectando gravemente la
exactitud de nuestros resultados
As pues, el control estadstico de calidad tiene como finalidad
monitorear en forma continua mediante tcnicas estadsticas, la
estabilidad del proceso, y mediante los grficos de control de este
anlisis detectar en forma visual la variabilidad de nuestras
mediciones, las cuales probablemente se pueden atribuir a alguna
causa especfica que se podr investigar y corregir.
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Los programas de control de calidad interno comprende el anlisis
de muestras de control junto con las muestras de pacientes y la
evaluacin estadstica de los resultados para determinar la
aceptabilidad de la corrida analtica. Con ste trabajo se evala y
controlan la
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precisin y el sesgo debido al anlisis de un mtodo de prueba,
pero no la exactitud. Una muestra control es una muestra especial
insertada en el proceso de comprobacin y tratada como si fuera la
de un paciente. Debe tener concentraciones apropiadas en niveles
significativos, para que el mdico pueda utilizarlos para tomar
decisiones acerca del tratamiento. Debe hacerse una distincin entre
los controles y los calibradores o los estndares, los dos ltimos se
utilizan para ajustar la instrumentacin o definir una curva estndar
para el anlisis. Adems de tener un valor asignado con precisin que
ya se prob segn un mtodo de referencia, el calibrador debe tener
las mismas caractersticas que el mtodo control. Los materiales de
calibracin y control no son intercambiables. El control debe ser
independiente por completo del proceso de calibracin para poder
detectar errores sistemticos causados por el deterioro del
calibrador o un cambio en el proceso analtico.
Las propiedades de un material de control ideal para hematologa,
segn Bachner son las siguientes:
Econmica Estabilidad prolongada Probados directamente Que se
suspenda con facilidad y no se aglutine Caractersticas de flujo
similar a la de la sangre Proporciones pticas y elctricas similares
a las de la sangre Tamao y forma de las partculas similares a los
de la sangre Evaluable por mtodos independientes
Sin embargo, la mayora de los productos de control para
hematologa disponibles en el comercio no son muy buenos, pero
tienen varias ventajas sobre las muestras de pacientes
conservadas.
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO.
Con un programa de control de calidad externo puede evaluarse la
exactitud de un procedimiento, as como el rendimiento de cada
laboratorio o participante sobre una muestra idntica o compararlo
con el rendimiento de laboratorios con mtodos iguales o similares.
Estos programas de control obligatorios pueden ser inspecciones
estatales o nacionales. Se considera que la media del grupo o el
resultado consensuado del grupo es el valor verdadero o exacto. As,
el rendimiento del laboratorio se evala por la proximidad de sus
resultados en comparacin con los de la opinin promedio del
grupo.
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CAPACITACIN CONTINUA.
Un laboratorio de hematologa que pretenda tener un nivel elevado
constante, deber contar con un programa activo de capacitacin
continua para su personal. Es de suma importancia programar
talleres sobre identificacin celular en sangre perifrica, lecturas
y seminarios de citogramas e histogramas de recuento diferencial
automatizado y su correlacin con las anormalidades que puedan
hallarse en los extendidos de sangre perifrica, solo as podr
detectarse variables espurias relacionadas con la muestra que
pueden producir resultados inexactos en los valores obtenidos en
hematologa automatizada.
El contar con profesionales clnicos bien capacitados y
concientes son la mejor forma de prevenir errores en el laboratorio
de hematologa.
Debe disearse un plan que identifique los aspectos necesarios
para garantizar la calidad, junto con los mecanismos y las personas
que los evalen e informen. Las caractersticas generales de
cualquier plan deben incluir las metas, los objetivos, las fuentes
de autoridad, la definicin del alcance de servicios, la seleccin de
temas, un calendario de actividades supervisado, las acciones
correctivas, la evaluacin peridica y los mtodos de comunicacin.
El objetivo de la garanta de calidad del laboratorio es
verificar que la calidad de los servicios contribuya con resultados
confiables, exactos y precisos que coadyuven a la prestacin global
de atencin mdica de excelencia. Esto implica, que el laboratorio
deber supervisar todos los aspectos de la atencin, desde la
solicitud de las pruebas hasta el uso de los resultados de la
prueba
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PRCTICA No. 3 DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, VSG,
CUENTA DE ERITROCITOS E NDICES ERITROCITARIOS OBJETIVO: El alumno
conocer y realizar los mtodos bsicos de la frmula roja para
aprender a calcular los ndices eritrocitarios. 1. DETERMINACIN DE
HEMOGLOBINA 1.1 EL MTODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA. En la Citometra
hemtica una de las determinaciones es la hemoglobina la cual se
expresa en g/dl. El mtodo de la Cianometahemoglobina es el ms
empleado, debido a que es colorimtrico, es barato y permite medir
todas las hemoglobinas presentes en la sangre (Hb-O2, Hb-CO2, Hb-H
a excepcin de la Hb-S). FUNDAMENTO. Para convertir la Hb-O2 en
Hb-CN se utiliza el Reactivo de Drabkin, el cual contiene
ferricianuro de potasio K3Fe(CN)6 que convierte el Fe++ en Fe+++
convirtindose en metahemoglobina. Luego el KCN del mismo reactivo
se combina para formar la Cianometahemoglobina, cuyo pico mximo de
absorcin es de 540nm con un rango de 530 a 550 nm. MATERIAL 2 Tubos
de ensayo de 13x100 mm por equipo 1 Pipeta de Salh por equipo 2
Pipeta de 5 ml por equipo 1 Micropipeteador o boquilla por equipo.
1 Perilla por equipo. 1 Espectrofotmetro por seccin. REACTIVOS:
10ml de reactivo de Drabkin por equipo PROCEDIMIENTO: 1) Se marcan
2 tubos de ensayo, uno como blanco (B) y otro como problema (P) y
se colocan 5 ml. del Reactivo de Drabkin en cada uno. 2) Con la
pipeta de Shali, se toma 0.02 ml (20l) de sangre limpiando
perfectamente la pipeta por fuera con un segmento de papel
desechable humedecido con solucin salina, se pasan al tubo, lavando
la pipeta 2 o 3 veces, por aspiracin y expulsin del reactivo dentro
de la misma. 3) Se mezcla vigorosamente con cuidado. Dejar reposar
la mezcla por 5 minutos. Pasar a las celdas. 4) Ajustar el
espectrofotmetro a cero de absorbancia con el blanco de reactivo
(B) a 540 nm. y se lee la absorbancia del tubo problema. 5)
Calcular la concentracin de la Hemoglobina, a partir de la Ley de
Beer o bien extrapolando en la Curva de calibracin.
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Ley de Beer A= a.b.c. [m] = Abs m [St] [m] = concentracin de la
muestra Abs St Abs m = Absorbancia de la muestra c St =
concentracin del estandard Abs St = Absorbancia del estndar CURVA
DE CALIBRACIN. La curva de calibracin se realiza de la siguiente
manera: a) Marca 5 tubos de ensaye de 13x100 mm: Blanco (B), 5, 10,
15, 20 g/dl b) Pipetear con precisin, de la solucin valorada de
cianometahemoglobina (St) de concentracin de 20 g/dl y del Reactivo
de Drabkin, en cada uno de los tubos correspondientes y mezclar
bien.
CONCENTRACIN
HEMOGLOBINA
B
5
10
15
20 g/dl
Estndar de
Cianometahemoglobina
0.0 ml
1.25 ml
2.5 ml
3.75 ml
5.0 ml
Reactivo de Drabkin
5.0 ml
3.75 ml
2,5 ml
1.25 ml
0.0 ml
c) Medir la absorbancia de cada dilucin en el espectrofotmetro a
540 nm, contra el blanco (B). d) Graficar en papel milimtrico, en
las ordenadas (Y) las absorbancias y en las abscisas (X) las
concentraciones. e) Trazar una lnea perpendicular que parta del
vrtice (O) y toque el mayor nmero de puntos.
f) Extrapola las absorbancias de las muestras problema.
PRECAUCIONES.
1. Se debe de utilizar guantes para la proteccin del estudiante.
2. El reactivo de Drabkin contiene cianuro, es necesario emplear la
perilla auxiliar,
prohibido pipetear con la boca. 3. Es muy importante que las
mediciones de las soluciones sean exactas, eso
favorecer que la lnea perpendicular pase por todos los puntos de
interseccin. 4. Verificar antes de iniciar, que el espectrofotmetro
est prendido, se encuentre
ajustado a CERO de absorbancia en la longitud de onda de 540
nm.
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VENTAJAS. 1. El mtodo de Cianometahemoglobina posee ciertas
ventajas, ya que la
mayora de las formas de hemoglobina que se puedan encontrar en
la sangre (a excepcin de Hb S) se convierten a cianometahemoglobina
con la adicin del reactivo de Drabkin.
2. La mxima absorcin de la cianometahemoglobina a 540 nm,
permite la utilizacin de fotmetros con rangos de lectura
cortos.
DESVENTAJAS.
1. La nica desventaja es que se trabaja con pequeos volmenes de
sangre (20 l) por lo que aumenta la probabilidad de error.
VALORES DE REFERENCIA. HOMBRES 15 a 20 g/dl 9.3 a 12.4 mmol/l
MUJERES 12.5 a 16.5 g/dl 7.5 a 10.33 mmol/l 2. MTODO DE WINTROBE
PARA SEDIMENTACIN GLOBULAR Esta sencilla prueba se emplea
universalmente como un indicador de la presencia de enfermedades
activas, ya que permite conocer las caractersticas fsicas del
ambiente en el que se encuentran los eritrocitos. FUNDAMENTO:
Consiste en dejar que la sangre sedimente por la accin de la
gravedad formando un paquete ms o menos compacto separado del
plasma, ello depende de varios factores como son:
a. Factores plasmticos: En donde los niveles elevados en la
concentracin de fibringeno y/o de globulinas originan la disminucin
del potencial Z de los eritrocitos, favoreciendo la formacin del
fenmeno de Rouleaux.
b. Factores eritrocitarios: Cuando aumenta tamao de los
eritrocitos (macrocitos), se sedimentan ms rpido que los de tamao
normal (normocitos) o los de menor tamao (microcitos).
c. En los pacientes con anemia se disminuye la relacin
eritrocitos/plasma, lo que favorece el apilamiento de los
eritrocitos y el aumento de la VSG.
MATERIAL.
1 Pipeta Pasteur por equipo 1 Tubo de Wintrobe por equipo 1
Soporte para tubos de Wintrobe por seccin PROCEDIMIENTO.
1. Mezclar bien el tubo que contiene la sangre. 2. Llenar la
pipeta Pasteur de sangre, despus introducir la punta hasta el fondo
del
tubo de Wintrobe e ir vistiendo lentamente evitando la formacin
de burbujas, hasta llegar a la marca de 0.
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3. Colocar el tubo verticalmente en la gradilla (fijarse que
este nivelada) durante una hora.
4. Leer la altura de la columna de plasma que aparece en la
parte superior, en la escala que va del 0 al 10 cada raya equivale
a un mm y se reporta en mm/hora.
PRECAUCIONES. a) El tubo de Wintrobe deber llenarse desde el
fondo hasta la marca cero, evitando la formacin de burbujas. b)
Durante el proceso de reposo deber verificarse que se encuentre
exactamente vertical, de lo contrario el valor determinado ser
errneo. c) Verificar que el reposo del tubo de Wintrobe este exento
de vibraciones. d) La sangre debe de estar perfectamente mezclada
para evitar un cambio en la relacin, eritrocitos-plasma. VENTAJAS.
a) Pequea cantidad de muestra. b) Es sencillo. c) Puede calcularse
el valor del hematocrito con la misma preparacin despus de haber
determinado la velocidad de sedimentacin globular. (VSG).
DESVENTAJAS. Se altera fcilmente con movimientos, vibraciones y
sangres hemolizadas. VALORES DE REFERENCIA. HOMBRES 0 a 7 mm/hr.
MUJERES 0 a 15 mm/hr. 3. DETERMINACION DE HEMATOCRITO. El
hematocrito es un parmetro indispensable para poder calcular los
ndices eritrocitarios y se define como el volumen que representa el
paquete globular en el total del volumen sanguneo. El hematocrito
en porcentaje (%) representa aproximadamente tres veces el valor de
la concentracin de hemoglobina y su valor ser siempre fraccionario,
es decir menor a uno (en el sistema internacional de unidades).
Para reportar dicho valor se har como porcentaje o como fraccin
celular, para su determinacin se utiliza el mtodo Wintrobe (macro
mtodo) o bien el micro mtodo (en un tubo capilar) que posee menos
errores inherentes. 3.1 MACROHEMATOCRITO.
MATERIAL. 1 Pipeta Pasteur por equipo 1 Tubo de Wintrobe por
equipo 1 Centrifuga por seccin PROCEDIMIENTO.
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Despus de haber determinado la VSG con el tubo Wintrobe. a)
Calcule el hematocrito, centrifugando el tubo a 3500 r.p.m. durante
30 minutos.
En caso de no contar con esta preparacin efectuar el
procedimiento (2). Procedimiento (2).
a) Con una pipeta Pasteur llnese de sangre el tubo Wintrobe
hasta la marca de 0 cero. b) Centrifguese el tubo A 3500 r.p.m.
durante 30 minutos.
LECTURA: En la graduacin en la que el 0 cero est en el fondo del
tubo, lase a que nivel est el lmite superior de la columna roja (la
sangre se ha separado en cuatro capas: roja formada por los
eritrocitos, blanca griscea por leucocitos, amarillenta cremoso por
plaquetas y la ltima lquida formada por plasma habitualmente de
color amarillento.). 3.1 MICROHEMATOCRITO. MATERIAL. 2 Capilares
por equipo 1 Mechero de Buncen por seccin 1 Lector para hematocrito
por seccin 1 Micro centrfuga por seccin PROCEDIMIENTO. a) Llenar
con sangre capilar o venosa un tubo capilar aproximadamente tres
cuartas partes del total de su longitud. b) Cierre el extremo del
tubo capilar distante de la sangre acercndolo a la flama del
mechero y rotndolo, tambin se puede sellar con plastilina
(cercirese de que el cierre de dicho extremo haya sido completo).
c) Centrifguese en la centrfuga para microhematocrito durante 5
min. d) Leer en el lector del microhematocrito. PRECAUCIONES. a) En
ambos mtodos se debe de evitar la hemoconcentracin de la muestra
durante la obtencin. Si el hematocrito excede de 50 % centrifugar
nuevamente el capilar o tubo utilizado Para la determinacin,
durante 5 minutos. b) En el caso del micro mtodo si el sellado es
con mechero cudese que la sangre no llegue al extremo calentado del
tubo ni quede al nivel de la flama. c) En el caso del macro mtodo
el tubo de Wintrobe se debe aforar exactamente a cero y no deben de
quedar burbujas de aire entre columna de sangre o en el fondo. e)
se debe de mezclar la sangre perfectamente antes de llenar los
tubos de Wintrobe o capilares. VENTAJAS Y DESVENTAJAS. a) El micro
mtodo es el ms empleado debido a que requiere menos tiempo de
centrifugacin, y cantidad de muestra, se puede utilizar sangre
capilar o venosa en comparacin con el macro mtodo.
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b) Se prefiere el micro mtodo debido a que existen diferentes
marcar comerciales de tubos de Wintrobe para el macro mtodo con lo
que se obtienen diferentes resultados del hematocrito. c) La
cantidad de plasma atrapado es mayor en el macro mtodo dando
valores ms elevados. VALOR DE REFERENCIA. HOMBRES 46 a 56 % MUJERES
39 a 50 % 100% 0%
Lector de microhematocrito
4. RECUENTO CELULAR ERITROCITARIO INTRODUCCIN.
El recuento de glbulos en la sangre es una prctica habitual en
el laboratorio clnico, en el cual se determina el nmero de
eritrocitos, leucocitos y plaquetas por mm3 de sangre, con la ayuda
de la cmara de Neubauer o hemocitmetro.
La cmara de Neubauer o hemocitmetro es un grueso portaobjetos de
vidrio, en el centro de su superficie se encuentra un cuadrado de 3
mm de lado dividido en 9 cuadros grandes cada uno de 1 mm, los
cuadros marcados con la letra L son utilizados para el recuento de
leucocitos y se encuentran divididos por 16 cuadros ms pequeos. El
cuadro central esta dividido en 25 cuadros los marcados con la
letra E son utilizados para el recuento de eritrocitos y los
marcados con P para plaquetas. Fig. (1)
Cada uno de estos cuadros se divide en 16 cuadros ms pequeos
dando un total de 400 en el cuadro central. Fig.(2) rea total = 9
mm2. rea de cada cuadro marcado como L = 1 mm2. rea de cada cuadro
marcado como e y P = 0.04 mm2 rea total de los cinco cuadros
centrales E= 0.2 mm2. rea de cada cuadrito marcado como e 0 0.0025
mm2.
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L L 1 mm
E E P P 8 mm E P P P E E
L L
e 0.05mm. 2mm
Fig. (2) Amplificacin de un cuadro de eritrocitos.
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CUIDADOS DE LA CMARA. a. Debern utilizarse cubreobjetos
especiales ya que los convencionales poseen
superficie irregular. a. Se debe lavar la cmara con agua tibia o
un pao suave empapado en alcohol. b. No se deber tocar el rayado de
la cmara con los dedos ya que manchan la cmara
y puede provocar errores de apreciacin c. Evitar usar lienzos
rgidos que puedan araar el rayado sensible de la cmara.
Tomarla nicamente por sus bordes MTODO DE CONTEO. El conteo se
inicia por la parte superior de izquierda a derecha y luego de
derecha a izquierda sucesivamente, teniendo la precaucin de contar
las clulas que tocan una de cualquiera de las tres lneas como si
estuvieran en los cuadros y teniendo la precaucin de no contar una
clula dos veces. Figura (3)
Fig. (3) Mtodo de conteo, amplificacin de un cuadro de
eritrocitos. MATERIAL.
1 Pipeta de Thoma para glbulos rojos por equipo 1 Cmara de
Neubauer o Hemacitmetro por equipo 1 Boquilla o micropipeteador por
equipo Reactivos:
1 frasco con 100ml. de Lquido diluyente de Gower para
eritrocitos por seccin PROCEDIMIENTO.
a) Con la ayuda de la boquilla o el micropipeteador, se aspira
sangre homogeneizada con la pipeta de Thoma para eritrocitos hasta
la marca de 0.5
b) Aspirar luego el lquido diluyente de eritrocitos hasta la
marca 101.
.2 mm
0.05 mm
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c) Se debe de evitar la formacin de burbujas. Agitar la pipeta
suavemente para mezclar o bien mezcle por medio de agitador
electrnico si es que cuenta con l.
d) Eliminar de 4-5 gotas de la pipeta y con la siguiente llenar
por capilaridad la cmara de Neubauer previamente preparada.
e) Dejarla reposar por dos minutos, colocarla bajo el objetivo
seco fuerte (40x) y contar los eritrocitos presentes en los cinco
cuadros marcados con la letra E, utilizando el mtodo sealado.
f) Una vez concluido el conteo, lavar la cmara con el agua de la
llave, agua destilada y finalmente con alcohol. Secar con un pao
limpio, suavemente y utilizar jabn si es necesario.
NOTA: Llenar ambos lados de la cmara de Neubauer, sacar un
promedio de los conteos y calcular el nmero de eritrocitos 7 mm3
multiplicando por el factor de 10000 mm3 Reportar el nmero de
eritrocitos por milmetro cbico de sangre. CLCULOS: El factor 10,000
esta dado por: - 1.5 que corresponde a la fraccin de la cmara en la
que se cuentan los eritrocitos (los 25 cuadros centrales). - 1/10
es la profundidad de la cmara de Neubauer. 1/200 es la dilucin
realizada a la sangre con la pipeta de Thoma. ( 1/5 ) ( 1/10 ) !
1/200 ) = ( 1/19,000 mm3 ) Esto ser valido en el caso de que la
dilucin inicial haya sido 1:200 y se cuenten los cinco cuadros
marcados con la letra E. CONCENTRACIONES. El lquido diluyente de
Gower para eritrocitos es isotnico y acta como fijador para
preservar la forma celular. VALORES DE REFERENCIA EN EL S.I
HOMBRES: 5.5 a 6.3 Millones / mm3 o l 5.5 a 6.3 x 1012 /1 MUJERES:
4.1 a 5.7 Millones / mm3 o l 4.1 a 5.7 x 1012 /1 1 mm3 = 1 l 5.
VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO. Este parmetro nos indica el tamao
promedio de los eritrocitos en un paciente y se calcula de la
siguiente manera. Hematocrito (Hto) VCM =
________________________________ x 10 = u3 # de eritrocitos /
ul
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La obtencin de un VCM inferior a los valores de referencia,
indicar la presencia de eritrocitos pequeos o microcticos. La
obtencin de un VCM que cae entre los valores de referencia, indicar
que se tienen eritrocitos de tamao normal o normocitos. La obtencin
de un VCM mayor a los valores de referencia, indicar la presencia
de eritrocitos grandes o macrocitos. VALORES DE REFERENCIA. En el
S. I. HOMBRES 84 a 95 u3 84 a 95 f1 MUJERES 79 a 103 u3 78 a 103 f1
6. CONCENTRACION MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR. Este ndice
eritrocitario da una idea de la coloracin de los eritrocitos en
base a su contenido de hemoglobina, ya que determina la
concentracin promedio de hemoglobina en todos lo eritrocitos. Su
determinacin se realiza de la siguiente manera: Hemoglobina ( g/100
ml) CMHC = ___________________________________________ x 100 = g/dl
Hematocrito (%) La obtencin de una concentracin media de
hemoglobina corpuscular (CMHC) menor a los valores de referencia
indicar la presencia de eritrocitos con un bajo contenido de
hemoglobina o hipocrmicos. La obtencin de un valor mayor o menor a
los valores de referencia, indicar la presencia de eritrocitos
hipercrmicos. Sin embargo debe de usarse rara vez este trmino, ya
que el nico eritrocito hipercrmico es el esferocito. Un valor de
CMHC que cae entre los valores de referencia indicar la presencia
de eritrocitos con contenido normal de hemoglobina o normocrmicos.
VALORES DE REFERENCIA. En el S. I. HOMBRES. 32 a 34 g/dl 9.85 a
21.10 m mol/1 MUJERES. 30 a 32 g/dl 18.61 a 21.10 m mol/1 7.
HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA ( CMH ). Este ltimo ndice
eritrocitario nos indica el promedio de hemoglobina en cada
eritrocito y se calcula de la manera siguiente. Hemoglobina ( g/dl
) CMH = _______________________________________ x 10 = pg # de
eritrocitos / ul Es importante comprender que las clulas
microcticas no son hipocrmicas en forma obligada, y los macrocitos
no son por lo general hipercrmicos, esto hace que la
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hemoglobina corpuscular media (CMH) sea demasiado intil, ya que
no toma en cuenta el tamao de la clula- VALORES DE REFERENCIA. EN
HOMBRES Y MUJERES 27 a 31 pg (tambin en el S.I) 8. FORMA DE
REPORTAR LOS RESULTADOS. El diagnstico de una anemia est basado en
el historial clnico del paciente, el examen fsico y la investigacin
por parte del laboratorio. El mdico examinar el informe de los
resultados proporcionados por el laboratorio, aqu el Qumico toma
una gran importancia, ya que en l cae la responsabilidad de ayudar
a diagnosticar trastornos hematolgicos en un paciente. Los datos ms
importantes que debe reportar el laboratorio en la biometra hemtica
son los siguientes: FECHA:___________________
PACIENTE:_______________________________________________________________
DOCTOR(A):______________________________________________________________
EXAMEN:________________________________________________________________
VALORES DE REFERENCIA RESULTADO HOMBRES MUJERES. ERITROCITOS
(millones) m/ml 5.5 - 6.3 4.1 - 5.7 HEMOGLOBINA (g/dL) 15 - 20 12.5
- 16.5 HEMATOCRITO (%) 46 - 56 39 - 50 HCM (pg) 27 - 34 27 - 34
CmHb (%) 32- 34 30 - 34 VCM mm 3 VGM (fl) 84- 95 78 - 103 VSG
(mm/hr) 0 - 7 0 - 13 VALORES DE REFERENCIA RESULTADO HOMBRES
MUJERES. RETICULOCITOS (%) 0.5 - 1.5 0.5- 1.5 PLAQUETAS (x mm 3 )
ml 150,000 - 450,000 LEUCOCITOS (x mm 3 ) ml 4,000 - 12000
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FORMULA DIFERENCIAL CIFRAS RELATIVAS CIFRAS ABSOLUTAS (%)
(Clulas/ L) MIELOCITOS 0 0 METAMIELOCITOS 0 2 10-500 EN BAMDA 0 11
100-800 SEGMENTADOS 40 74 2 000-6 000 NEUTROFILLOS 40 85 1 500-7
000 EOSINOFILOS 0 7 100 -200 BASOFILOS 0 3 10-20 LINFOCITOS 12 46 1
000 -4 200 MONOCITOS 1 13 100-800 OBSERVACIONES: Anormalidades de
eritrocitos: Anormalidades de leucocitos: Anormalidades de
plaquetas: A T E N T A M E N T E
_________________________________
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PRCTICA No. 4 CUENTA DE LEUCOCITOS Y REALIZACIN DE EXTENDIDO
SANGUNEO (TINCIN DE WRIGHT Y GIEMSA) CON VALORES ABSOLUTOS Y
RELATIVOS. OBJETIVO: El alumno realizar la cuenta de leucocitos y
un extendido de sangre perifrica para identificar la morfologa de
cada una de las clulas y aprender los fundamentos de las tinciones
y a obtener valores absolutos de cada uno d los leucocitos. 1.
CUENTA DE LEUCOCITOS INTRODUCCIN. El recuento de glbulos en la
sangre es una prctica habitual en el laboratorio clnico, en el cual
se determina el nmero de eritrocitos, leucocitos y plaquetas por
mm3 de sangre, con la ayuda de la cmara de Neubauer o hemacitmetro.
La cmara de Neubauer o hemacitmetro es un grueso portaobjetos de
vidrio, en el centro de su superficie se encuentra un cuadrado de 3
mm de lado dividido en 9 cuadros grandes cada uno de 1 mm, los
cuadros marcados con la letra L son utilizados para el recuento de
leucocitos y se encuentran divididos por 16 cuadros ms pequeos. El
cuadro central esta dividido en 25 cuadros los marcados con la
letra E son utilizados para el recuento de eritrocitos y los
marcados con P para plaquetas. Fig. (1) Cada uno de estos cuadros
se divide en 16 cuadros ms pequeos dando un total de 400 en el
cuadro central. Fig.(2) rea total = 9 mm2. rea de cada cuadro
marcado como L = 1 mm2. rea de cada cuadro marcado como e y P =
0.04 mm2 rea total de los cinco cuadros centrales E= 0.2 mm2. rea
de cada cuadrito marcado como e 0 0.0025 mm2. CUIDADOS DE LA CMARA.
2.1. Debern utilizarse cubreobjetos especiales ya que los
convencionales poseen superficie irregular. 2.2 Se debe lavar la
cmara con agua tibia o un pao suave empapado en alcohol. 2.3 No se
deber tocar el rayado de la cmara con los dedos ya que manchan la
cmara y
puede provocar errores de apreciacin 2.4 Evitar usar lienzos
rgidos que puedan araar el rayado sensible de la cmara. Tomarla
nicamente por sus bordes MTODO DE CONTEO. El conteo se inicia
por la parte superior de izquierda a derecha y luego de derecha a
izquierda sucesivamente, teniendo la precaucin de contar las clulas
que tocan una de cualquiera de las tres lnea como si estuvieran en
los cuadros y teniendo la precaucin de no contar una clula dos
veces. Figura (3)
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L L 1 mm
E E P P 8 mm E P P P E E
L L Fig. (3) Mtodo de conteo, amplificacin de un cuadro de
leucocitos
.2 mm
0.05 mm
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MATERIAL: 1 Pipeta de Thoma para glbulos blancos por equipo 1
Cmara de Neubauer o hemacitmetro por equipo 1 Boquilla o
micropipeteador por equipo 1 Microscopio por equipo Reactivos:
Diluyente para leucocitos (TURK) PROCEDIMIENTO. a) Llenar de sangre
homogenizada la pipeta de leucocitos hasta la marca 0.5 aforando
exactamente. b) Limpiar con papel absorbente el exterior de la
pipeta. c) Aspirar lquido diluyente de leucocitos hasta la marca
11. d) Tapar los extremos de la pipeta y agitar manualmente. La
agitacin podr hacerse con el agitador mecnico de pipetas si se
cuenta con el. e) Limpiar la cmara, el cubreobjetos y colocar ste
sobre aquella. f) Eliminar las cinco gotas de la pipeta y con la
siguiente llenar por capilaridad la cmara. g) Despus de dos minutos
observar a seco dbil, 1/10x) localizar el rea correspondiente para
contar leucocitos (cuadros L ) , y proceder a contarlos. h) El
nmero de leucocitos contados en los cuadros grandes se multiplican
por el factor 50, donde el nmero de leucocitos por milmetro cbico
de sangre. i) Si existe leucopenia es decir un nmero de leucocitos
inferior a 2000, repetir la cuenta de acuerdo con las siguientes
indicaciones. Llenar la pipeta con sangre hasta la marca 1 y aforar
hasta 11 con el diluyente, llenar la cmara y contar nueve cuadros,
el resultado se multiplica por 11.1; si las cifras son de 2000 a
4000 se hace una dilucin 1:20, se cuentan nueve cuadros y se
multiplica por 22.2 Si hay leucocitosis (ms de 50000 leucocitos/
mm3 ) se emplean pipetas de Thoma para eritrocitos, las diluciones
son de 1/100 a 1:200. Con dilucin 1:100, los factores de
multiplicacin seran 1000, 500, 333, 250 y 111, si se cuentan
1,2,3,4,y 9 cuadros de la cmara. Con dilucin 1:200, los factores de
multiplicacin sern 2000, 1000,500, 222 si se cuentan 1,2,4, y 9
cuadros. CLCULOS. Para conocer el nmero de leucocitos por mm3 de
sangre se aplica la siguiente frmula. Nmero de clulas contadas.
Nmero de leucocitos / mm3 =
______________________________________________ Volumen Volumen =
Dilucin x profundidad de la cmara x el rea contada. Las diluciones
para leucocitos son 1:10, 1:20
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La profundidad de la cmara es de 1/10 mm El rea contada en
leucocitos es: 4 mm2 ( 4 cuadrados contados ) Por ejemplo:
Leucocitos contados 500 Cuadros L utilizados 4 Dilucin 1:20
Sustituyendo la formula: V = ( 1/20 ) ( 1:10 ) ( 4 ) = 4/200 = 1/50
mm3
Nmero de clulas contadas. 500 Leucocitos / mm3 =
___________________________________ = _______ Volumen 1 _______ 50
mm3 = 500 x 50 mm3 = 25,000 / mm3
En leucocitosis: Dilucin realizada 1/100 Profundidad de la cmara
1/10 Cuadros utilizados 2 Leucocitos contados 80 Volumen = Dilucin
x profundidad x rea contada. Volumen = ( 1/100 ) ( 1/10) ( 2 ) =
2/1000 Nmero de clulas contadas Nmero de Leucocitos/mm3 =
_________________________________ Volumen 80 80 x 1000 = ______ =
_______________ 2 2 ____ 1000 80000 = ___________ = 40000/ mm3
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CONSIDERACIONES. El lquido diluyente de leucocitos lisa
eritrocitos y es isotnica para los leucocitos. VALORES DE
REFERENCIA. EN HOMBRES Y MUJERES: 4000 - 12000 Leucocitos/ mm3 EN
EL SISTEMA INTERNACIONAL: 4 - 12 X 109 leucocitos/L. 2. TINCIONES
HEMATOLGICAS 2.1. TINCION DE WRIGHT. El recuento diferencial es una
parte importante de la valoracin hematolgica y consiste en
reconocer las distintas variedades de glbulos blancos y las
posibles anormalidades celulares en un frotis de sangre teido con
el colorante de Wright. Debido a que el colorante de Wright se
trata de una solucin de eosina y una mezcla de tiacinas que
incluyen el azul de metileno, el citoplasma de las clulas se tien
con el colorante cido (eosina) ya que en l, se encuentran los
componentes bsicos de la clula, por otro lado, el ncleo de la clula
se tie con los colorantes bsicos (azul de metileno) ya que en el se
encuentran los componentes cidos de la clula. MATERIAL. 1Puente de
tincin por seccin 2 Portaobjetos por equipo 1 Microscopio por
equipo 1 Contador de clulas por seccin Agua destilada. Aceite de
inmersin. REACTIVOS. Colorante de Wright Buffer pH = 7.0 Para el
recuento diferencial el frotis no deber ser tan fino no tan grueso
de tal manera que las clulas estn juntas pero no apiladas. La
extensin que se prepare deber secarse inmediatamente. MTODOS PARA
PREPARAR EXTENDIONES SANGUINEAS. 1.- Mtodo de los dos portaobjetos
o de la cua.
a) Colocar la gota de sangre de un tamao regular (2 a 3 mm de
dimetro) aproximadamente a un centmetro del extremo de un
portaobjetos.
b) Tomar otro portaobjetos con el dedo ndice y pulgar de la mano
derecha. c) Colocar el borde libre sobre la gota de sangre y dejar
que esta se extienda a lo
largo del borde libre. El segundo portaobjetos deber hacer un
ngulo de 30 a 45 con el primer portaobjetos.
Con movimiento suave pero firme y a velocidad constante
desplazar el segundo portaobjetos a lo largo del primer
portaobjetos.
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Es una buena extensin, los leucocitos no estn demasiado juntos y
los eritrocitos no estn apilados. El secado de la extensin debe de
hacerse con movimientos laterales y verticales repetidos al aire o
con un ventilador. Marcar los frotis con lpiz graso o de plomo para
su correcta identificacin. 2.- Mtodo de los dos cubreobjetos. Es un
mtodo que requiere mayor prctica y no es tan usual. 3.- Mtodo de
centrifugacin. Es un mtodo casi automatizado, brinda mejores
resultados pero debido a lo anterior no es tan utilizado comnmente.
4.- Mtodo transversal. Es el ms empleado en la actualidad y su
tcnica es la siguiente: 1 2 3 4
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Se coloca una gota de sangre en el borde del portaobjetos
colocado horizontalmente, y se llena por capilaridad en su borde
inferior el otro portaobjetos colocado a 45 , la sangre se extiende
en forma transversal hacia el otro extremo del portaobjetos, en el
paso siguiente se unen ambos para que la sangre se extienda
homogneamente a lo ancho de la superficie del fondo, despus se
desliza el portaobjetos de arriba para retirar el exceso de sangre,
quedando una pelcula delgada que se secar con movimientos vigorosos
de arriba hacia abajo quedando la preparacin lista para ser teida;
se contarn de 100 a 200 clulas si el nmero de leucocitos es de 2
000 - 10 000 leucocitos/mm3 , y de 200 - 400 clulas si la cifra de
leucocitos/ mm3 es superior a 10 000. La lectura se har con un
microscopio de luz, realizando una observacin primera a 40x para
tener una panormica de la distribucin de las clulas, despus a 100x
para estudiara fondo la morfologa de las clulas. FIJACIN. Es
necesaria una fijacin de la extensin sangunea para evitar la prdida
de muestra en el portaobjetos. Existen dos tipos de fijacin.
Qumica.- sta se hace cubriendo la extensin sangunea por uno a dos
minutos con
metanol puro o alcohol absoluto, o bien, quince minutos en
alcohol absoluto-ter 1:1, tambin se puede usar una solucin de HgCl2
al 1 % o solucin al 1 % de formalina en alcohol.
Calor.- Casi no se usa debido a las alteraciones que causa en la
muestra. Algunos colorantes fijan y tien a la vez como por ejemplo
el colorante de Wright que contiene metanol como fijador, y existen
as mismo otras soluciones fijadoras especiales. PROCEDIMIENTO a)
Realice un frotis sanguneo por el mtodo transversal y se deja secar
al aire sobre el puente de tincin. b) Cubra la extensin con un
exceso de colorante de Wright durante 2 minutos, esto tiene como
finalidad evitar la evaporacin del colorante y la formacin de
precipitados. c) Transcurrido el tiempo, aada una cantidad igual de
solucin amortiguadora. d) Soplar suavemente sobre la superficie de
la mezcla con la finalidad de homogenizar. e) Se deja reposar
exactamente 4 minutos. f) Sin tirar la mezcla, lave con agua
destilada hasta que el agua que escurra no lleve colorante. g)
Secar al aire y aadir una gota de aceite de inmersin para observar
en el microscopio a inmersin. h) Para la frmula diferencial debe de
contarse 100 clulas y deber hacerse la diferenciacin entre
monocitos, linfocitos, basfilos, eosinfilos, neutrfilos, y
simultneamente, ver el nmero de mielocitos, bandas, metamielocitos,
y segmentados que existen entre neutrfilos, si hay otro tipo de
clulas como por ejemplo blastos, debern incluirse en el total.
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CONCLUSIONES: Se deben obtener extensiones de sangre bien
niveladas para un trabajo exacto. Los portaobjetos deben estar
perfectamente limpios y sin grasa para que no se
deformen las clulas. Si el frotis se realiza del pulpejo del
dedo, su elaboracin debe ser rpida antes de
que inicie la coagulacin y sin exprimir el dedo para evitar la
hemodilucin. En casos graves de anemia hay que preparar extensiones
delgadas y secarlas al
momento. El borde del portaobjetos extensor debe de ser liso
para evitar zonas con abundantes
leucocitos. METODO DE CONTEO: El recuento diferencial se realiza
recorriendo el largo de la preparacin de izquierda a derecha hasta
contar 100 clulas, identificando cada una de ellas, si no basta un
solo recorrido, se elige un nuevo campo y se hace completar el
nmero de clulas. (Fig. 12) Fig. ( 12 ) 2.2 TINCION MAY
GRNWALD-GIEMSA: Es una tincin que tambin se usa de rutina en muchos
laboratorios, pero es un poco ms tardada, sin embargo mediante esta
tincin se pueden diferenciar mucho mejor las estructuras
intercelulares. Contiene azur II-eosina y eosinato azul de metileno
aunque actualmente el colorante se vende por separado el mercado
por lo que seguiremos la siguiente tcnica. PROCEDIMIENTO: a) Cubrir
la extensin con 10 gotas a 15 gotas de May Grnwald tres minutos. b)
Aadir la misma cantidad de agua destilada procurando que se mezclen
por un minuto. c) Escurrir el lquido y " sin previo lavado " aadir
la solucin diluida de Giemsa recin preparada dejndola actuar por 30
min. d) Lavar, secar y observar a inmersin.
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2.4 TINCION DE AZUL DE PRUSIA: Se utiliza para la identificacin
de grnulos de hierro (Fe) en el citoplasma de los eritrocitos que
se presentan en casos de ciertas anemias refractarias, despus de
una esplenectoma u otros casos. Los grnulos de hierro no estn
unidos al grupo heme sino a la apoferritina (protena) constituyendo
a la ferritina (en forma de grnulos). En mdula sea se presentan con
mayor frecuencia en el caso de los normoblastos aunque recordemos
que su presencia es normal debido a la sntesis de la hemoglobina.
Estos grnulos no se observan en casos de anemias por deficiencia de
hierro. Los grnulos aparecen de color azul. PROCEDIMIENTO PARA
EXTENSIONES DE SANGRE PERIFRICA: a ) Preparar una extensin sangunea
fina, secarla al aire. b) Fijar por 5 a 10 min. en metanol
absoluto, secar. c) Introducir la extensin en una mezcla de K3 Fe
(CN)6 -HCl 1:1 por 10 minutos. d) Lavar con agua destilada. e)
Contrastar con eosina acuosa al 0.1 % por uno a dos minutos o
solucin de safranina, f) Lavar, secar al aire y observar a
inmersin. PROCEDIMIENTO PARA EXTENSIONES DE MDULA SEA:
1. Aspirar 3.0 ml de una solucin e EDTA (1 mg/ml) en una jeringa
de plstico, tomar de 20 ml junto con 3.0 ml de sangre y mdula sea
aspirados.
2. Depositar el contenido de la jeringa en un vidrio e reloj
grande e identificar las partculas de mdula sea.
3. Extender las partculas de mdula sea. 4. Fijar la extensin en
metanol por 10 min. 5. Lavar en agua destilada. 6. Contrastar con
eosina acuosa al 0.1 % o solucin de safranina por uno o dos
minutos. 7. Lavar con agua destilada, secar y observar a
inmersin.
2. 5 FORMA DE REPORTAR. VALOR OBTENIDO * VALOR DEW REF. (%)
MIELOCITOS ________________ 0 METAMIELOCITOS. ________________ 0 EN
BANDA. ________________ 0 - 11 SEGEMTNADO. ________________ 40 - 74
NEUTROFILOS. ________________ 40 85 EOSINOFILOS ________________ 0
- 7 BASOFILOS. ________________ 0 - 3 LINFOCITOS. ________________
12 - 46 MONOCITOS. ________________ 1 - 13
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PRCTICA No. 5 CUENTA DE RETICULOCITOS Y FRAGILIDAD ERITROCITARIA
A SOLUCIONES HIPOTNICAS OBJETIVO: El alumno aprender a realizar la
cuenta de reticulocitos y su importancia en la valoracin de la
eritropoyesis en la mdula sea. 1. CUENTA DE RETICULOCITOS.
INTRODUCCIN: Los eritrocitos anucleados que contienen organelos
y un sistema ribosmico extenso para sintetizar hemoglobina, se
conocen como reticulocitos, los cuales son retenidos de dos a tres
das en mdula sea y despus permanecen otro da en la circulacin
perifrica, indicando la actividad eficaz de la mdula sea para
producir eritrocitos. MATERIAL. 2 Tubos de ensayo por equipo 1 Bao
mara por equipo 1 Termmetro por equipo Aceite de inmersin. 1
Microscopio por equipo REACTIVOS: Azul cresil brillante
PROCEDIMIENTO:
1. En el tubo de ensaye colocar 2 gotas de azul de cresil
brillante con dos gotas de sangre homogenizada y mezclar
nuevamente.
2. Incubar la mezcla por 10 min. en el bao Mara a 37 C 3.
Transcurrido el tiempo preparar una extensin por el mtodo
transversal de la
siguiente manera: Coloque una gota de la siguiente preparacin de
2 a 3 mm de dimetro en el
borde de un portaobjetos. Coloque el otro portaobjetos sobre la
gota en un ngulo de 45 y deje que se
distribuya por capilaridad. Extienda la sangre en forma
transversal hacia el otro extremo de portaobjetos. Una ambos
portaobjetos para que la sangre se extienda homogneamente a lo
ancho de la superficie. Deslice el portaobjetos de arriba para
retirar el exceso de sangre quedando una
pelcula delgada. Secar y observar a inmersin.
4. Los reticulocitos s observarn de color azul, con material
reticular citoplasmtico de
color azul intenso. 5. Contar 1000 eritrocitos y los
reticulocitos que se encuentran entre ellos, o bien,
contar el nmero de reticulocitos que hay en 10 campos
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CALCULOS.
Nmero de reticulocitos contados % de reticulocitos =
________________________________________________ x 100 Nmero de
clulas contadas. Nmero de reticulocitos contados % de reticulocitos
= _________________________________________________ Nmero de campos
recorridos (10) % de reticulocitos. No. absoluto de restis. =
________________________ ( Nmero de eritrocitos / mm3 ). 100
PRECAUCIONES: Agregar la cantidad de sangre y colorante indicadas
para evitar dificultad al
examinar las preparaciones. Asegurarse que las clulas en el
frotis se encuentran distribuidas homogneamente
para evitar que los campos tengan un nmero confuso de
eritrocitos. No se debe de contar dos veces la misma clula. La
sangre a utilizar debe mezclarse perfectamente para no alterar el
resultado.
VENTAJAS: Es un mtodo econmico. La preparacin del complejo
RNA-colorante no requiere temperatura estrictamente
controlada. El mtodo utilizado para la realizacin del frotis
asegura una distribucin ms
uniforme que cualquier otro mtodo. DESVENTAJAS: Debido a nmero
de eritrocitos que se deben de contar el error es relativamente
grande. Si no se eligen adecuadamente los campos se pueden
contar un mayor o menor
nmero de reticulocitos. VALOR DE REFERENCIA. VALOR RELATIVO. EN
EL S.I. HOMBRES Y MUJERES 0.5 a 1.5 % 0.005 a 0.015
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2. FRAGILIDAD A LAS SOLUCIONES HIPOTNICAS
FUNDAMENTO: Al estar los eritrocitos a concentraciones cada vez
menores de sal, estos se van llenando con agua y se lisan.
Eritrocitos que tengan una estructura defectuosa de su membrana, se
lisaran primero o antes del testigo que tiene una estructura
normal. ste anlisis es parte de un estudio para anemias hemolticas
hereditarias. ESPECMEN. De 4 a 5ml de sangre con EDTA con
anticoagulante al 7.5%. Debe tomarse un testigo para la buena
interpretacin de los resultados. REACTIVOS Y EQUIPO: Solucin salina
(cloruro de sodio) al 0.85% y 0.9%, espectrofotmetro, tubos y
pipetas. TCNICA:
1. En una gradilla poner 15 tubos de 15 x 100mm. En el primero
pipetear 2ml de solucin salina, en el segundo 2.5ml, aumentar 0.5ml
en cada tubo, en el tubo 14 poner 8.5ml de solucin salina
solamente, en el tubo 15 poner 8.5ml de solucin salina al 9.0%.
2. Completar a 8.5ml. el volumen de cada tubo con agua destilada
desionizada. La concentracin final de NaCl y los volmenes se ven en
la siguiente tabla:
TUBO SOL. SALINA (ml) H2O CONC. NaCl (%) 1 2.0 6.5 0.20 2 2.5
6.0 0.25 3 3.0 5.5 0.30 4 3.5 5.0 0.35 5 4.0 4.5 0.40 6 4.5 4.0
0.45 7 5.0 3.5 0.50 8 5.5 3.0 0.55 9 6.0 2.5 0.60 10 6.5 2.0 0.65
11 7.0 1.5 0.70 12 7.5 1.0 0.75 13 8.0 0.5 0.80 14 8.5 0.0 0.85 15
8.5 0,0 0.90
3. Colocar en la misma gradilla y por delante de los tubos
anteriores, dos series de
tubos de 15 x 100mm. Numerar los tubos del 1 al 12 y marcar T
para el testigo y P para el problema.
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4. Pasar de la serie de tubos de la mezcla con agua y solucin
salina, 3ml al tubo correspondiente.
5. Con una pipeta Pasteur, poner una gota de sangre en cada
tubo, la sangre deber estar mezclndose continuamente antes de
agregar la gota (T para testigo, P para problema).
6. Agitar cada tubo con las manos, con golpes laterales. Dejar
los tubos en reposo a temperatura ambiente durante 30-60min.
7. Centrifugar los tubos a 1500rpm, durante 3 minutos, cuidando
de no darle a los tubos movimientos bruscos despus de
centrifugar.
8. Leer tanto en la serie testigo y en la problema, en que tubo
se inicia la hemlisis (hemlisis inicial) y en cual ya no existe el
botn de eritrocitos (hemlisis completa). Ver en el cuadro anterior
a que concentracin de NaCl pertenece, tanto la hemlisis inicial
como la completa.
Ejemplo:
HEMLISIS INICIAL HEMLISIS FINAL TESTIGO 0.50% 0.30% PROBLEMA
0.60% 0.45% VALORES DE REFERENCIA: 0.45% - 0.50% 0.30% - 0.40% Si
se requiere ser ms preciso, puede leerse en el espectrofotmetro a
420nm. La absorbancia y graficar la hemlisis como en las graficas
anexas. Usar solucin salina como blanco. Grfica de preferencia el
porcentaje de hemlisis contra la concentracin en gramos (% de
NaCl). 120 100 80 60 40 20
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0
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PRCTICA No. 6 CITOMETRA HEMTICA COMPLETA DE FORMA MANUAL
OBJETIVO: El alumno realizar una citometra hemtica completa en
forma manual e interpretar los resultados obtenidos, detectando
posibles causas de error en sus resultados. REPORTE DE RESULTADOS:
FECHA: ___________________ PACIENTE:
______________________________________________________________
DOCTOR(A):
_____________________________________________________________
EXAMEN:
_______________________________________________________________
VALORES DE REFERENCIA RESULTADO HOMBRES MUJERES. Eritrocitos
(millones) m/ml 5.5 - 6.3 4.1 - 5.7 Hemoglobina (g/dL) 15 - 20 12.5
- 16.5 Hematcrito (%) 46 - 56 39 - 50 HCM (pg) 27 - 34 27 - 34 CmHb
(%) 32- 34 30 - 34 VCM mm 3 VGM (fl) 84- 95 78 - 103 VSG (mm/hr) 0
- 7 0 - 13 VALORES DE REFERENCIA RESULTADO HOMBRES MUJERES
Reticulocitos (%) 0.5 - 1.5 0.5- 1.5 Plaquetas (x mm 3 ) ml 150,000
- 450,000 Leucocitos (x mm 3 ) ml 4,000 - 12000
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FORMULA DIFERENCIAL RESULTADOS CIFRAS RELATIVAS (%) ( % )
MIELOCITOS 0 METAMIELOCITOS 0 2 EN BAMDA 0 11 SEGMENTADOS 40 74
NEUTROFILLOS 40 85 EOSINOFILOS 0 7 BASOFILOS 0 3 LINFOCITOS 12 46
MONOCITOS 1 13 FORMULA DIFERENCIAL RESULTADOS CIFRAS ABSOLUTAS
(Clulas/ L) (Clulas/ L) MIELOCITOS 0 METAMIELOCITOS 10-500 EN BAMDA
100-800 SEGMENTADOS 2 000-6 000 NEUTROFILLOS 1 500-7 000
EOSINOFILOS 100 -200 BASOFILOS 10-20 LINFOCITOS 1 000 -4 200
MONOCITOS 100-800 OBSERVACIONES: Anormalidades de eritrocitos:
Anormalidades de leucocitos: Anormalidades de plaquetas: A T E N T
A M E N T E _________________________________
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PRCTICA No. 7 CITOMETRA HEMTICA AUTOMATIZADA. OBJETIVO: El
alumno realizar una citometra hemtica por mtodos automatizados y
har la interpretacin de sus resultados W. Coulter describi su mtodo
"El instrumento emplea un sistema de medicin no ptico que provee un
rango de medicin que excede las 6.000 clulas individuales por
segundo con un intervalo de conteo de 15 segundos. Una suspensin de
clulas sanguneas es pasada a travs de un pequeo orificio
simultneamente con una corriente elctrica. Las clulas sanguneas
individuales pasando a travs del orificio producen un cambio de
impedancia (resistencia) en el orificio el cual est determinado por
el tamao de la clula. El sistema cuenta las clulas individuales y
provee distribucin de tamaos. El nmero de clulas contadas por
muestra es aproximadamente 100 veces mayor que los recuentos
microscpicos, reduciendo el error estadstico aproximadamente 10
veces"(1)
El Coulter Counter Model S fue el primer instrumento que de
manera automtica proces datos multiparamtricos en sangre.
El nmero de pulsos elctricos indica la cantidad de partculas que
pasan a travs de la apertura y el tamao de los pulsos es
proporcional al volumen de las partculas(2,3,4,5)
Los contadores modernos an siguen usando este mtodo, el cual es
el mtodo de referencia para recuentos de clulas
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Los contadores COULTER realizan este recuento por triplicado
para eritrocitos, leucocitos y plaquetas
Este sistema es actualmente el mtodo de referencia para el
recuento de clulas y es usado por todos los fabricantes de
contadores celulares
Algunas limitaciones del Mtodo Las limitaciones de este mtodo
estn relacionadas con los tipos de partculas a medir, como condicin
bsica las partculas en estudio deben ser menos conductoras de
electricidad que el medio en que estn disueltas, el tamao de las
partculas a medir debe estar entre el 2 y el 60 % de el dimetro de
la apertura Como se diferencian los Eritrocitos, Leucocitos y
Plaquetas? Los sistemas COULTER poseen 2 baos, uno de eritrocitos y
otro de leucocitos, en el bao de eritrocitos se encuentra una
apertura de 50m y en el de los leucocitos otra de 100m En cada
apertura se realizan 3 recuentos de 4 segundos y se obtiene el
promedio (en el caso de STKS y GEN-S, estos poseen 3 aperturas de
eritrocitos y 3 de leucocitos por lo que la lectura slo dura 4
segundos y se obtiene el promedio de las 3 aperturas) En el bao de
los eritrocitos el sistema identifica los eritrocitos como aquellas
partculas que poseen un volumen igual o mayor que 36 fL
(femtolitro), en este mismo bao se realiza el recuento de plaquetas
las cuales tienen un volumen entre 2 y 20 fL, en los contadores
COULTER si existe un recuento pequeo de plaquetas, el tiempo de
recuento se extiende por 4 segundos ms, a fin de tener un mayor
valor estadstico. En el bao de leucocitos posterior a la dilucin
con diluyente isotnico, se aplica agente lisante, el cual destruye
la membrana citoplasmtica de eritrocitos y leucocitos,
permaneciendo los ncleos intactos. Es as que las partculas que
midan 35 fL o ms son contadas como leucocitos. Hay que hacer notar
que los ncleos de eritroblastos si existiesen tambin son contados,
por lo que si el instrumento seala sospecha de su presencia se
deben buscar en el frotis y de tener un nmero considerable, se debe
corregir el recuento de leucocitos. Posterior al recuento de
leucocitos y utilizando la reaccin qumica del lisante con la
hemoglobina libre en la mezcla, se mide un complejo qumico estable
a 525 nm, el cual dependiendo del instrumento, puede ser realizado
en el mismo bao o en una cubeta de flujo especialmente diseada.
Consecuentemente los parmetros medidos son: Eritrocitos (RBC),
Leucocitos (WBC), Plaquetas (PLT) y Hemoglobina (Hgb) Los parmetros
derivados de las mediciones de volumen: Volumen corpuscular medio
(VCM), Ancho de distribucin eritrocitaria (ADE) y Volumen
plaquetario medio (VPM) Los parmetros calculados son: Hematocrito
(Hct), Hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentracin
corpuscular media (CHCM Como se obtienen los histogramas de
leucocitos, eritrocitos y plaquetas? Como se mencionaba
anteriormente el analizador mantiene una estadstica de los volmenes
celulares, y luego realiza una distribucin de cantidad relativa
versus volumen de estas tres poblaciones, la separacin de volmenes
se hace con una resolucin de 256 canales para cada parmetro
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PRCTICA No, 8 SEMINARIO SOBRE INTERPRETACIN DE HISTOGRAMAS
OBJETIVO: El alumno conocer las diferentes distribuciones de clulas
en los histogramas para aprender a interpretarlos
correctamente.
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PRCTICA No. 9 CITOMETRA HEMTICA Y SU INTERPRETACIN EN DIVERSAS
PATOLOGAS OBJETIVO: El alumno aprender a interpretar y
correlacionar la alteracin de los parmetros de la citometra hemtica
con diversas patologas. INTRODUCCIN
La anemia es una alteracin causada por disminucin del nmero de
glbulos rojos y disminucin de la hemoglobina bajo los parmetros
estndares. Rara vez se registra en forma independiente una
deficiencia de uno solo de estos factores. Los rangos de normalidad
son muy variables en cada poblacin, dependiendo de factores
ambientales (nivel sobre el mar) y geogrficas. A nivel del mar
encontraremos valores mnimos, y a gran altura los valores debern
ser ms altos (la menor presin parcial de O2 obliga al organismo a
optimizar su transporte). Adems, vemos variaciones de sexo,
observando valores menores en mujeres (posiblemente por la prdida
de eritrocitos y contenido sanguneo en cada ciclo menstrual). En
general puede establecerse como normal para un hombre un
hematocrito entre 40 y 50%, hemoglobina entre 13 y 18 g%, y para
una mujer: hematocrito entre 37 y 40%, y hemoglobina entre 12 y 16
g%. Los sntomas y signos de la anemia se correlacionan con su
intensidad, su rapidez de instalacin y el sitio donde se produce.
En cuanto a su rapidez de instalacin puede ser aguda o crnica,
siendo la primera ms dramtica, ya que la crnica permite una
paulatina adaptacin. Otros factores influyentes en el cuadro
sintomtico son la edad, el estado nutritivo, cardiovascular y
respiratorio.
Los sntomas que se observan en la anemia aguda se denominan
sndrome anmico, e incluyen: palidez, astenia, adinamia,
palpitaciones y disnea de esfuerzo. Frecuentemente y sobre todo en
las anemias severas se observa esplenomegalia, hepatomegalia,
petequias, equimosis, ictericia. Tambin puede incluir sntomas
propios de otros sistemas, como cardiovascular (taquicardia, disnea
de esfuerzo marcada, angor, claudicacin intermitente), digestivo
(dispepsia, disfagia, anorexia, diarrea) o neuropsiquitrico
(parestesias, mareos, depresin, cambios de carcter como
irritabilidad, mal humor). Para ser capaz de tratar exitosamente un
sndrome anmico, debe caracterizarse, y establecerse su etiologa, y
para ellos se bede estudiar a fondo las caractersticas de los
glbulos rojos, de los reticulocitos, leucocitos y plaquetas que
circulan en la sangre mediante un hemograma, y las caractersticas
de las series hematopoyticas mediante un mielograma. ste no es
indispensable, generalmente un mdico capacitado logra clasificar
una anemia slo con el cuadro sindromtico y el hemograma. De acuerdo
a todos los factores mencionados, las anemias pueden clasificarse
en diferentes grupos.
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PRCTICA No. 10 OBSERVACIN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS
MICROCTICAS, NORMOCTICAS Y MACROCTICAS. OBJETIVO: El alumno revisar
las alteraciones morfolgicas que se presentan en los eritrocitos en
las anemias microcticas, normocticas y macrocticas. INTRODUCCIN: La
anemia puede definirse como una disminucin de los eritrocitos,
hemoglobina y hematocrito, sin embargo no se considera como una
enfermedad, sino ms bien como la expresin de un trastorno o
enfermedad subyacente. Las primeras manifestaciones muestran
algunos sntomas como debilidad, hipoxia, fatiga, cefalea, vrtigo,
todo esto debido a la falta de oxigeno. Existen varias formas de
clasificar a las anemias, una de ellas es, utilizando los ndices
eritrocitarios, entre stas tenemos a la anemia microctica
hipocrmica, normoctica normocrmica y las macrociticas. 1. ANEMIA
MICROCITICA HIPOCROMICA. Es una de las ms comunes en la actualidad,
se caracteriza porque el volumen corpuscular medio (VCM) y la
concentracin media de hemoglobina (CMHC) son menores a los valores
de referencia, por tanto en un frotis de sangre perifrica el
eritrocito es menor en tamao, presenta un halo central de gran
tamao y el grado de poiquilocitosis (cambios de la forma) depende
de la gravedad del paciente. Las causas que dan origen a este
padecimiento son: Deficiencia en la ingestin de hierro. Una prdida
excesiva de sangre. Mala absorcin del hierro. Defectos de maduracin
citoplasmtica.
2. ANEMIA NORMOCITICA NORMOCROMICA. Esta se caracteriza porque
el nmero de eritrocitos, la hemoglobina y el hematocrito disminuyen
proporcionalmente, por lo tanto, el frotis de sangre perifrica se
observa normal ya que el VCM y CMHC se encuentran dentro de los
valores de referencia. Este tipo de anemia puede aparecer en las
siguientes condiciones: Poco despus de una hemorragia masiva. En el
descenso de la produccin de sangre, por ejemplo en las anemias
aplsticas
(por agentes qumicos, uremia, radiaciones, causas desconocidas,
tejido maligno en mdula sea.
Anemias hemolticas (ya que por lo general son normocticas
normocrmicas). En el aumento del volumen sanguneo (principalmente
en el embarazo).
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3. ANEMIAS MACROCITICAS. Las anemias macrocticas se caracterizan
porque el VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (VCM) es mayor al de
referencia, dando origen a eritrocitos grandes. Esta anemia se
clasifica en dos grupos, las que se asocian con un tipo de
megaloblasto de maduracin de eritrocitos en la mdula sea y las que
no lo hacen. 1).- En la anemia macrocitica megaloblstica existe una
interrupcin en la sntesis nuclear, que trae como consecuencia un
defecto en la maduracin del ncleo en el seguimiento de la
megaloblastocis, la causa principal que origina esta anemia es la
deficiencia de vitamina B 12 y cido flico que funcionan como
coenzimas en la sntesis del cido nucleico. DEFICIENCIA DE ACIDO
FOLICO. 1) Ingestin diettica inadecuada. 2) Requerimiento mayor. 3)
Mala absorcin en el intestino delgado. 4) Inhibicin de
medicamentos. DEFICIENCIA DE VITAMINA B 12 1) Carencia del factor
intrnseco. 2) Mala absorcin. 3) Ingestin diettica inadecuada. Esta
anemia se caracteriza porque el frotis sanguneo presenta la
siguiente triada: macrocitos ovales, neutrfilos hipersegmentados
(con ms de cinco lbulos) y los cuerpos de Howell-Joly, la
anisocitosis es moderada y la poiquilocitosis es ms grave cuando la
anemia es ms intensa. 2) Anemias macrocticas no megaloblsticas an
no se define la causa de su origen, pero es posible que se
relacione con un incremento de los lpidos membranales. Esta anemia
se caracteriza porque se presenta acompaando las siguientes
enfermedades: Alcoholismo. Reticulocitosis. Enfermedad heptica.
Insuficiencia respiratoria. El frotis de sangre perifrica presenta
macrocitos no tan grandes como la anemia megalobstica, los cuales
son redondos con membranas delgadas, no hay neotrfilos
hipersegmentados, la cuenta de lecuocitos y plaquetas son normales
generalmente. La poiquilocitosis es el trmino que se utiliza para
descubrir una variacin en la forma de los eritrocitos mientras que
la anisocitosis denota una variacin del tamao celular, ambos se
reportan como leve, moderada o acentuada.
Los cuerpos de Howell-Jolly, son grnulos constituidos por
fragmentos nucleares (DNA), en forma redonda y de color prpura
obscuro o violeta que se presentan por lo general solo en los
eritrocitos.
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PRCTICA No. 11 OBSERVACIN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS
HEMOLTICAS OBJETIVO: El alumno revisar las alteraciones morfolgicas
que se presentan en los eritrocitos en las anemias hemolticas.
INTRODUCCIN:
Se denomina hemlisis al proceso de destruccin de glbulos rojos
que determina una disminucin de la supervivencia de los mismos,
acompaado de incapacidad de la mdula sea de realizar el aumento
compensatorio. (Una mdula sea estimulada al mximo puede aumentar la
eritropoyesis entre 6 a 8 veces su capacidad normal, y la vida
media del eritrocito puede disminuir hasta 15 a 20 das sin llegar a
anemia).
Esta disminucin de la vida eritrocitaria determina: - un aumento
de la formacin de glbulos rojos a nivel medular: aumento de
eritropoyesis. - un aumento del catabolismo de la hemoglobina. La
hemoglobina liberada de los glbulos rojos sufre metabolizacin y
determina un aumento de la bilirrubina indirecta, que determina
clnicamente la aparicin de ictericia (coloracin amarillenta de piel
y mucosas). El lugar de mxima remocin por fagocitosis es el
bazo.
Nos encontramos frente a un caso de hemlisis crnica cuando este
proceso de destruccin acelerada de glbulos rojos se mantiene en el
tiempo, causando los sntomas y signos caractersticas del sndrome
hemolitico (vase ms adelante).
1.1 Clasificacin de las anemias hemolticas:
De acuerdo al sitio de hemlisis: intra o extravascular.
Patognica: corpusculares (intrnsecas) o extracorpusculares
(extrnsecas). Etiolgica: heredadas o adquiridas.
La mayor parte de las alteraciones intrnsecas son hereditarias,
y la mayor parte de las extrnsecas son adquiridas. Excepciones a
esta regla son la hemoglobinuria paroxstica nocturna*, el dficit de
G6PD y el dao trmico. En investigacin, el diagnstico diferencial de
estas patologas se hace por transfusiones cruzadas.
1.1.1 Clasificacin segn su sitio:
La hemlisis puede ser extravascular o intravascular. Cuando
ocurre un proceso de hemlisis extravascular los eritrocitos
fagocitados sufren ruptura de su membrana. La hemoglobina es
degradada por enzimas lisosomales y se recupera fierro y
aminocidos. El fierro es transportado a la mdula sea para nueva
produccin de hemates. A su vez, cuando ocurre hemlisis
intravascular la hemoglobina libre se disocia en dmeros alfa y
beta, los que se unen haptoglobina u oxidan a metahemoglobina.
Luego estas molculas se
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disocian y liberan el grupo Hemo para unirse a la albmina y
hemopexina, lo que permite la captacin del Hemo por los hepatocitos
para recuperar el fierro y para producir bilirrubina.
La hemlisis intravascular se manifiesta por: Hemoglobinuria,
Metahemalbuminemia, Ictericia, Hemoglobinemia, Hemosiderinuria,
Hemosiderinuria.
El paso final de la hemlisis intra y extravascular ser la
conjugacin de bilirrubina por el hepatocito, excrecin de ella a la
bilis, conversin de la bilis por parte de la flora intestinal en
urobilingeno y urobilina, y por ltimo la excrecin en la orina y
heces.
En la hemlisis extravascular, al excederse la capacidad del
sistema monoctico macrofgico aparecen alteraciones morfolgicas de
los hemates como microesferocitosis, clulas mordidas, eritrocitos
fragmentados y con inclusiones citoplasmticas. Adems la
regurgitacin de hemoglobina libre al plasma provoca disminucin de
la haptoglobina. En tanto, en la hemlisis intravascular con
destruccin de 20 a 40 ml de eritrocitos al da aparece una reduccin
de la haptoglobina a niveles detectables y disminucin de la
hemopexina. La deplecin en ambos sistemas (intra y extravascular)
provoca aparicin de hemoglobina libre en el suero y orina, y
aumento de la metalbmina.
1.1.2 Clasificacin patognica:
CORPUSCULARES: aqu el defecto est en los glbulos rojos, al ser
defectuosos son eliminados de la circulacin. El defecto puede
ser:
1. Enzimtico: alteracin cuantitativa o cualitativa de enzimas
que intervienen en el metabolismo del glbulo rojo; son poco
frecuentes.
Dficit de enzimas de la gliclisis: dficit de piruvato kinasa.
Anomalas del metabolismo de nucletidos: dficit de pirimidin
5nucleotidasa. Dficit de enzimas de shunt pentosas y metabolismo
del glutatin: G6PD, glutatin
sintetasa, glutatin reductasa.
2. Hemoglobina: hay una alteracin en la molcula de la
hemoglobina. Aqu entran las hemoglobinopatas y las talasemias.
Existen varias hemoglobinopatas; la hemoglobinopata ms frecuente
es la anemia de clulas falciformes o hemoglobinopatas, tambin
llamada Drepanocitosis. Aqu hay un aminocido cambiado en la
hemoglobina (hemoglobina S) que altera la estructura del glbulo
rojo adoptando forma de hoz. Estos glbulos rojos llamados
falciformes aumentan la viscosidad sangunea determinando mayor de
oclusin de vasos pequeos que determina microinfartos. Se manifiesta
clnicamente por anemia crnica con episodios de crisis hemolticas,
crisis vasoclusivas (las ms graves son aquellas que ocluyen vasos
cerebrales y seos, pero puede afectarse cualquier rgano).
Existen dos formas clnicas: la homocigota, que presenta anemia
hemoltica y fenmenos vasooclusivos, y la heterocigota (o rasgo
drepanoctico), ms frecuente, asintomtica. En estos ltimos slo se
pone de manifiesto la enfermedad en situaciones en que disminuye la
presin parcial de oxgeno.
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Las talasemias son alteraciones en la hemoglobina por falta
total o parcial de las cadenas de globina. El 90% de la hemoglobina
est formada por el grupo y 4 cadenas de globina (2 alfa y 2 beta).
Cuando falta alguna cadena entonces surgen las talasemias. Existen
varias talasemias, se deben a mutaciones genticas segn las cadenas
afectadas, las llamamos alfatalasemias, betatalasemias.
3. Defectos de membrana: esferocitosis hereditaria,
eliptocitosis, acantocitosis y estomatocitosis. Anomalas en la
permeabilidad inica: Hidrocitosis congnita y Xerocitosis
congnita.
La ms frecuente de este grupo es la esferocitosis hereditaria.
Es una anemia hemoltica crnica de herencia autosmica dominante con
morfologa eritroctica caracterstica (esferocito), en la cual la
hemlisis es extravascular.
B. EXTRACORPUSCULARES: aqu la destruccin del glbulo rojo es por
presencia de factores externos, del medio en que estn. Como causas
de esta anemias se debe mencionar:
1. Hiperesplenismo: la funcin del bazo de retener los glbulos
rojos alterados o viejos se extiende tambin a los glbulos rojos
normales. En general se debe a otras enfermedades (hepatopatas,
linfomas) que al tratarlas disminuye la hemlisis.
2. Anemias hemolticas inmunes: aqu el organismo produce
anticuerpos que actan contra los glbulos rojos determinando la
hemlisis. Esto puede ocurrir, por ejemplo, luego de una transfusin
en que los glbulos rojos transfundidos tienen algn antgeno
(sustancia que es considerada extraa por el receptor y ste
reacciona formando anticuerpos). Otro ejemplo es el de la
enfermedad hemoltica del recin nacido, cuando existe una
incompatibilidad entre los glbulos rojos de la madre y el feto.
Pero a veces surgen anticuerpos formados por el propio organismo
(auto-anticuerpos) por fallas en los mecanismos que regulan el
sistema inmune. La formacin de anticuerpos puede ser secundaria a
otras enfermedades.
C. OTRAS CAUSAS DE LA ANEMIA HEMOLTICA EXTRACORPUSCULAR SON: -
la causa mecnica - por ejemplo, los pacientes con vlvulas protsicas
cardacas; stas pueden lesionar los glbulos rojos circulantes. - por
txicos directos: algunas infecciones, algunos agentes qumicos
(arsnico, cobre, plomo), toxinas de animales (araas, ofidios).
- Las drogas: asociadas a hemlisis por oxidantes (que causan
dficit de G6PD).
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PRCTICA No. 12 OBSERVACION DE MDULA SEA NORMAL. OBJETIVO: El
alumno revisar extensiones de mdula sea de morfologa normal para
familiarizarse con los precursores de cada una de las clulas de la
sangre. INTRODUCCIN: Solo por experiencia se consigue interpretar
bien la citologa de mdula, que debe considerarse como un mtodo. Por
eso el examinador debe informarse con respecto a la naturaleza
clnica de la enfermedad del paciente. En general hay dos mtodos de
examinar una extensin de mdula. El primero consistente en observar
varios portaobjetos a poco aumento, luego a gran aumento en seco y,
finalmente, con el objetivo de inmersin en aceite; y, a base de una
experiencia previa, es posible lograr una impresin respecto al
nmero y la distribucin de las clulas, de modo muy similar a como el
patlogo analiza sus cortes de tejido. El segundo consiste en
efectuar un recuento diferencial de un gran nmero de clulas
(300-1000) y calcular el porcentaje de cada tipo de clula.
Finalmente se puede emplear una combinacin de los dos mtodos. El
segundo mtodo, un laborioso recuento diferencial, constituye una
parte esencial del adiestramiento en este trabajo, sin el cual no
es posible llegar a realizar el primero con exactitud. El recuento
diferencial proporciona, adems, un registro objetivo y til como
referencia para medir ulteriores cambios. El reconocimiento de los
tipos celulares, y en particular de la fase de maduracin dentro de
cualquier serie dada, tiende a variar de un laboratorio en otro, a
pesar de los numerosos esfuerzos realizados para unificar
nomenclatura, con descripciones, fotografas y dibujos. No pueden
aceptarse como universales ningn promedio ni mrgenes normales. La
lnea de base ms vlida es la que determina cada laboratorio
particular y aun entonces, de no emplear un adiestramiento en
grupo, puede haber variaciones notables de un examinador a otro.
Por fortuna estas limitaciones del mtodo slo son graves cuando no
se tienen en cuenta. Con prctica y experiencia, los investigadores
de laboratorio pueden obtener resultados provechosos y conseguir un
alto grado de reproducibilidad en sus recuentos diferenciales de la
mdula. Es recomendable el siguiente procedimiento para examinar
preparaciones de esta clase:
1- Inspeccin a simple vista de los portaobjetos, para escoger la
extensin que contenga partculas.
2- Examen a poco aumento (16mm) de las partculas a fin de
determinar previamente si la mdula es normoplsica, hipoplsica o
hiperplsica.
3- Seleccionar de una zona celular, generalmente en la porcin
caudal de la pelcula, alrededor de las partculas, a la que sigue un
estudio minucioso de los detalles citolgicos a gran aumento y con
objetivo de inmersin en aceite
CELULARIDAD: El grado de c