43 ORIGINALNI RAD / ORIGINAL PAPER * Rad primljen za štampu 27. 12. 2012. godine. ** Lužajić Tijana, Univerzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine, Katedra za patološku fiziologiju; Jelena Danilović, Državni Univerzitet u Novom Pazaru, Departman za biologiju; Marko Katić, PKB Korporacija, Beograd; dr sci. vet. med. Tatjana Božić, profesor, dr sci. vet. med. Milica Kovačević Filipović, profesor, Univerzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske med- icine, Katedra za patološku fiziologiju DOI: 10.2298/VETGL1402043L UDK: 636.2+618.56:618.6+612.112 LEUKOGRAM U PERIPARTALNOM PERIODU KOD KRAVA SA I BEZ RETENCIJE PLACENTE* PERIPARTAL LEUKOGRAM IN COWS WITH AND WITHOUT RETAINED PLACENTA Lužajić Tijana, Danilović Jelena, Katić M, Božić Tatjana, Kovačević Filipović Milica** Cilj ovog istraživanja je bio da na osnovu promena u apsolutnom broju pojedinih vrsta leukocita u peripartalnom periodu kod krava sa i bez retencije placente utvrdi da li je zaostajanje posteljice poveza- no sa subkliničkom inflamatornom reakcijom u prepartalnom periodu. Šesnaest visokosteonih krava holštajn rase, starosti od 3 do 9 godi- na, koje nisu pokazivale kliničke znake oboljenja pre teljenja, posle porođaja je podeljeno u dve grupe: prvu grupu (n=9) činile su životi nje koje nisu imale retenciju placente, niti bilo kakvu klinički vidljivu inflamaciju posle porođaja; u drugoj grupi (n=7) bile su krave sa re- tencijom placente. Krv je uzorkovana 3 puta pre teljenja u razmaku od nedelju dana i jednom 24 sata po porođaju. Ukupan broj leukoci- ta i apsolutan broj segmentiranih i nesegmentiranih (mladih) neutro- filnih granulocita (NG), kao i broj limfocita i monocita određen je stan- darnim laboratorijskim tehnikama. Rezultati istraživanja su pokazali da je grupa krava kod koje je posle porođaja nastala retencija pla- cente, u trećoj, drugoj i u poslednjoj nedelji pred porođaj imala blago povišen broj segmentiranih NG, a podjednak broj mladih NG u odno- su na grupu kod koje se nije javila retencija. Kod obe grupe krava, 24 sata nakon porođaja, došlo je do značajnog pada ukupnog broja leu- kocita i broja segmentiranih NG, a porasta broja mladih NG. Na os- novu navedenih rezultata može se smatrati da životinje kod kojih je u prvih 24 sata dijagnostikovana retencija placente, pre porođaja ni- su imale sistemsku subkliničku inflamatornu reakciju. Dvadeset i če- tiri sata posle porođaja sve životinje su imale subkliničku sistemsku inflamatornu reakciju. Takođe, kod životinja sa retencijom placente,
12
Embed
leukogram u peripartalnom periodu kod krava sa i bez retencije ...
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
43
ORIGINALNI RAD / ORIGINAL PAPER
* Rad primljen za štampu 27. 12. 2012. godine.**LužajićTijana,UniverzitetuBeogradu,Fakultetveterinarskemedicine,Katedrazapatološkufiziologiju;JelenaDanilović,DržavniUniverzitetuNovomPazaru,Departmanzabiologiju;MarkoKatić,PKBKorporacija,Beograd;drsci.vet.med.TatjanaBožić,profesor,drsci.vet.med.MilicaKovačevićFilipović,profesor,UniverzitetuBeogradu,Fakultetveterinarskemed-icine,Katedrazapatološkufiziologiju
Cilj ovog istraživanja je bio da na osnovu promena u apsolutnom broju pojedinih vrsta leukocita u peripartalnom periodu kod krava sa i bez retencije placente utvrdi da li je zaostajanje posteljice poveza-no sa subkliničkom inflamatornom reakcijom u prepartalnom periodu. Šesnaest visokosteonih krava holštajn rase, starosti od 3 do 9 godi-na, koje nisu pokazivale kliničke znake oboljenja pre teljenja, posle porođaja je podeljeno u dve grupe: prvu grupu (n=9) činile su životinje koje nisu imale retenciju placente, niti bilo kakvu klinički vidljivu inflamaciju posle porođaja; u drugoj grupi (n=7) bile su krave sa re-tencijom placente. Krv je uzorkovana 3 puta pre teljenja u razmaku od ne de lju dana i jednom 24 sata po porođaju. Ukupan broj leukoci-ta i apsolutan broj segmentiranih i nesegmentiranih (mladih) neutro-filnih gra nu locita (NG), kao i broj limfocita i monocita određen je stan-darnim laboratorijskim tehnikama. Rezultati istraživanja su pokazali da je grupa krava kod koje je posle porođaja nastala retencija pla-cente, u trećoj, drugoj i u poslednjoj nedelji pred porođaj imala blago povišen broj segmentiranih NG, a podjednak broj mladih NG u odno-su na grupu kod koje se nije javila retencija. Kod obe grupe krava, 24 sata nakon porođaja, došlo je do značajnog pada ukupnog broja leu-kocita i broja segmentiranih NG, a porasta broja mladih NG. Na os-novu navedenih rezultata može se smatrati da životinje kod kojih je u prvih 24 sata dijagnostikovana retencija placente, pre porođaja ni-su imale sistemsku subkliničku inflamatornu reakciju. Dvadeset i če-tiri sata posle porođaja sve životinje su imale subkliničku sistemsku inflamatornu reakciju. Takođe, kod životinja sa retencijom placente,
u prvih 24 sata posle porođaja, inflamatorna reakcija, evaluirana kroz ispitivane parametre, nije bila jačeg intenziteta u odnosu na krave kod kojih ovo patološko stanje nije postojalo.
Ključne reči: mladi neutrofili, goveda, leukocitarna formula, partus, retencija placente
Broj leukocita jeodređendvasatapouzorkovanjukrvi, rutinskomručnommetodompomoćuNeubauer-ove komore za brojanje uobličenih elemenata kr-
Materijal i metode rada / Material and methods
46
vi (Fein-optikBADBlankenburg),melanžera za leukocite,Türk-ovog rastvora imikroskopa.Relativnaleukocitarnaformulajedobijenapregledomkrvnograzma-zaibrojanjempojedinihvrstaleukocitadoukupnogbrojaod200.OdređivanjebrojsegmentiranihinesegmentiranihNG,limfocita,monocitaieozinofilnihgranu-locita, dok su ćelije koje nisumogle biti razvrstane ni u jednu vrstu leukocitaoznačenekaoatipičnećelije.
Pojedine vrste leukocita su na krvnom razmazu prepoznavane premasledećimkarakteristikama:a)ćelijesatridopetsegmenataujedruisvetlopla-vomcitoplazmom,dvado triputavećeoderitrocitasudefinisnekaoNG;b)umladeNGsusvrstavanećelijekojesubileneštovećeodsegmentiranihNG,alisanesegmentiranimštapićastimjedrom;c)ćelijepodjednakeveličinekaoiNG,ali sa bilobarnim jedrom i eozinofilnim (ružičasto-narandžastim) granulama, sudefinisanekaoeozinofilnigranulociti;d)ćelijesamalimokruglimjedromkojesusadržaleheterohromatin, iuzankrugsvetloplavecitoplazme,ačijaveličina jemalo prevazilazila veličinu eritrocita su definisane kaomali limfociti; e) srednjilimfocitisudefinisanikaoćelijesaneštovećim,okruglim,ekscentričnopostavlje-nimjedromsaneštosvetlijimhromatinomineštovišecitoplazme;f)ćelije3do4putavećeoderitrocita,savelikimcentralnopostavljenimeuhromatičnimjedromidostasvetloplavecitoplazmesudefinisanekaovelikilimfociti;g)kaomonoci-tisuoznačeneonećelijekojesutakođebile3do4putavećeoderitrocita,alisajedromnepravilnogoblika isivkastoplavomcitoplazmom(saibezvakuola);h)svećelijekojenisumogledaserazvrstajupoopisanimkarakteristikamasvrstanesuuatipičnećelije.Uradujeprikazanukupanbrojlimfocitakojijepredstavljaozbirmalih,srednjihivelikihlimfocita.
Rezultati ispitivanja pokazuju da se ukupan broj leukocita kod obe grupekrava,uperioduodtrinedeljepredporođaj,nemenjaznačajnoidasenemožeuočititrendprepartalnogpadailiporastaovihćelija(grafikon1A).Međutim,kodobegrupekrava,24sataposleporođajauočavaseznačajanpadukupnogbrojaleukocita(grafikon1A),iakonjihovevrednostiostajuuokvirureferentnih(Kramer,
Grafikon1.Ukupan broj leukocita i ukupan broj neutrofilnih granulocita kod krava koje su klinički bile zdrave pre i posle porođaja (beli stubici, n=9) i kod krava koje su pre po-rođaja klinički bile zdrave, ali posle porođaja su imale retenciju posteljice (svetlo sivi stubici, n=7)
Graph 1. Total number of leukocytes and neutrophils in cows that were clinically healthy before and after calving (white columns, n=9) and in cows that were clinically healthy before, and after calving had retained pla-centa (light gray columns, n=7)
KadaseukupanbrojNGpredstavikaobrojsegmentiranihibrojnesegmen-tiranihNG,možeseuočitidapostojitrenduporastubrojasegmentiranihNGunedeljamapredporođaj i njihovznačajanpadodmahposleporođaja (grafikon
Grafikon2.Broj segmentiranih i nesegmentiranih neutrofilnih granulocita kod krava koje su klinički bile zdrave pre i posle porođaja (beli stubici, n=9), kod krava koje su pre po-rođaja klinički bile zdrave ali posle porođaja su imale retenciju posteljice (svetlo sivi stubici, n=7)
Graph 2. Number of segmented and non segmented neutrophils in cows that were clinically healthy before and after calving (white columns, n=9) and in cows that were clinically healthy before, but after calving had re-tained placenta (light grey columns, n=7)
Posle obrade podataka, zaključeno je da između pojedinih vrsta limfoci-ta(mali,srednji iveliki)nijebilorazlike izmeđupojedinihgrupa, takoda jebrojlimfocitaprikazankaozbirnavrednost.Broj limfocita imonocita kod ispitivanih
Grafikon3.Broj limfocita i monocita kod krava koje su klinički bile zdrave pre i posle po-rođaja (beli stubici, n=9), kod krava koje su pre porođaja klinički bile zdrave ali posle porođaja su imale retenciju posteljice (svetlo sivi stubici, n=7)
Graph 3. Number of lymphocytes and monocytes in cows that were clinically healthy before and after calving (white columns, n=9) and in cows that were clinically healthy before, but after calving had retained pla-centa (light grey columns, n=7)
Broj segmentranihNG jeu trećoj, drugoj i uprvoj nedelji predpartusbioneštovećikodkravakojesuimaleretencijuplacenteuodnosunakravebezre-tencije.Našaprethodnaispitivanjapokazujudakodkravasaretencijomplacentenedeljudanapreporođajapostojiznačajanporastbrojatrombocita(Lužajićisar.,2013).NaosnovučinjenicedajebrojsegmentiranihNG,kaoibrojtrombocitauprepartalnomperioduvećikodkravakodkojihseposlepartusarazvijeretencija
NAPOMENA/ACKNOWLEDGEMENT:Deoovogradajefinansiransredstvimaprojektabroj175061Ministarstvazaprosvetu,naukui tehnološkirazvoj,RepublikeSrbije.A part of this work was funded bz the project number 175061 of the Ministry of Education, Science and Technological Development, Republic of Serbia.
Theaimofthisstudywastoinvestigatewhetherprepartalleukogramincowswithretainedplacentacouldindicatethepresenceofsubclinicalsystemicinflamma-toryresponsebeforetheonsetofdisease.Aftercalving,sixteenhighlypregnantHolsteincows,aged3to9years,withoutclinicalsignsofthediseasepriortocalvingweredividedintotwogroups:thefirstgroup(n=9)wereanimalswithoutretainedplacenta,oranyvisi bleinflammationafterbirth;thesecondgroup(n=7)werecowswithretainedplacenta.Bloodwassampledthreetimesbeforeparturition,atintervalsofoneweek,andonce24hoursafterbirth.Thenumberof total leukocytes,segmentedandnonsegmentedneutrophilicgranulocytes(NG),lymphocytesandmonocytesweredeterminedbystandardlaboratorytechniques.Theresultshaveshownthatinthegroupofcowswithretainedplacentathenumberofmatureneutrophilswasslightlyelevatedinthethird,secondandlastweekbe-forecalving,andequalnumberofnonsegmentedneutrophilsinregardtothegroupwithnoretention.Theresultshavealsoshownthat,inbothgroupsofcows,24hoursaftercal-ving,thenumberoftotalleukocytesandthenumberofsegmentedneutrophilsdecreased,butthenumberofthenonsegmentedneutrophilsincreased.Basedonthis,wecancon-clude that cowswith retained placenta had no systemic inflammatory response duringthreeweeksprepartalperiod,but24hoursaftercalving,systemicinflammatoryresponsewasdocumentedinallthecows.Moreover,theintensityofinflammatoryresponseincowswithretainedplacentawasnotmorepronouncedincomparisontocowswithoutretainedplacenta.
Цельюданногоисследованиябылоопределить,являетсялизадержкаплацентыв связи с субклинической воспалительной реакцией в околородовом периоде наосновании изменений абсолютного числа отдельных видов лейкоцитов коров воколородовом периоде со и без удержки плаценты. Шестнадцать високостеоних
Голштайнкороввовозрастеот3до9лет,которыенепоказываликлиническиепризнакизаболеваниядоотела,после родахбылиразделенынадвегруппы:перваягруппа(n=9)состоялаизживотных,имеющихзадержкуплацентыилилюбоеклиническоевидимоепослеродовоевоспаление,вовторойгруппе(n=7)быликоровысзадержкойплаценты. Образцы коров брали три раза до отела через одну неделю и раз втечение24часапослерождения.Общееколичестволейкоцитовиабсолютноечислосегментированныхинесегментированный(молодых)нейтрофильныхгранулоцитов(НГ), а также количество лимфоцитов и моноцитов было определено с помощьюстандартныхлабораторныхметодов.Результатыпоказали,чтогруппакоров,вкото-ройродыпроизошлипослеудержкиплацентывтретьей,второйипоследнейнеделипередродами,количествосегментированныхНГбылонемногобольше,аколичествомолодыхНГодинаковопосравнениюсгруппой,вкоторойнебылоудержки.Вобеихгруппахкоров,через24часапослеродов,наблюдалосьзначительноеуменьшениеобщегочислалейкоцитовичислосегментированныхNG,увеличениечисламолодыхNG.Наоснованииэтихрезультатов,можнопредположить,чтоживотное,укоторого в первые 24 часа был поставлен диагноз удержка плаценты до родов не имелисубклиническогосистемноговоспалительногоответа.Двадцатьчетыречасапослеродов,всеживотныеимелисуб-клиническуюсистемнуювоспалительнуюреакцию. Кроме того, уживотных с задержкой плаценты, в течение первых 24 часов послерождения, воспалительная реакция, которую оценили на основании параметрах исследования,небылаболеевысокойинтенсивностипосравнениюскоровами,укоторыхнесуществуетпатологическоесостояние.
Ключевые слова: молодые нейтрофилы, крупный рогатый скот, лейкоциты,роды,задержкаплаценты