Les 4èmes Journées Maghrébines d’Hématologie Les 9èmes Journées Nationales d’Hématologie 26,27 et 28 Avril 2007
Les 4èmes Journées Maghrébines d’HématologieLes 9èmes Journées Nationales d’Hématologie
26,27 et 28 Avril 2007
INTRODUCTION (1)
TG :
Anomalie Felle Déficit quantitatif ou qualitatif des GP
IIbIIIa (intégrines αIIbβ3) Autosomale récessive Cause de saignement clinique
INTRODUCTION (2)
Exploration biologique :
TS/TO Num. Plaq. MO Fonctions plaquettaires SDS PAGE (classification) BM Phénotype membranaire (CMF)
INTRODUCTION (3)
Etude par CMF:
Méthode simple et précise Les données recueillies:
Le % des cellules qui expriment l’Ag L’intensité moyenne de fluorescence
(IMF)
IMF est proportionnelle à la quantité de sites antigéniques à la surface des plaquettes
Représentation schématique d’une plaquette
7-glycogène8-système canaliculaire9-granule α10-GP IbIXV: vWF11-granule dense12-GP IcIIa
1-GP IV: thrombospondine et collagène2-GP IIbIIIa: fibrinogène et vWF3-microtubules4-lysosome5-GP IaIIa: collagène6-recepteur de thrombine
Complexe GPIIbIIIa: intégrine αIIbβ3
MATERIELS
*Groupe témoin : 10 donneurs de sang
5 F / 5 H Sans ATCD de troubles de l’hémostase Age moyen : 36,4 ans (25-51 ans) Taux moyen de plaquettes : 294,2 103/µl * 13 patients:
5 F / 8 H Classés type I ou II par l’étude de la
rétraction du caillot et/ou le SDS PAGE
N/PSexe
Age actu
el
Age et symptômes au Dg
Type de Sd Hgique
Bilan hémostase
Fonctions plaquettaire
s
Classifi-
cation
T.N
H8
1 an, gingivorragies
gingivorragies,circoncision préparée
Plq: 270.103/µlTS: 2’30’’/ V= 45µlTP:86%, TCA:31/30
Ag. nulle à l’ADPRC: nul
IRC
J.N
F29
3ans, épistaxis, gingivorragies
hématurie, ménométrorragies, gingivorragies
Plq:246.103/µl TS: 4’30’’/ V: NPTP:80%, TCA: 32/32
Ag. Nle au RistoAg. nulle à l’ADP et AdrénalineRC: bonne
IIRC
L.N
F27
2 ans, épistaxis, gingivorragies, hgie. digest.
épistaxis, gingivorragies, ménorragies
Plq:250.103/µl TS: 9’ / V: NPTP:100%,TCA: 30/30
Ag. Nle au RistoAg. nulle à l’ADP et AdrénalineRC: bonne
ISDS
PAGE
K.I
F16
9 ans, épistaxis, gingivorragies
gingivorragies, ménorragies, Hématome de l’épaule
Plq:347.103/µl TS: 2’30’’/ V=38µlTP:96%,TCA: 27/30
Ag. Nle au RistoAg. nulle à l’ADP
IIRC
Z.T
H21
14 ans, épistaxis, gingivorragies
épistaxis, gingivorragies, circoncision sans préparation
Plq:254.103/µl TS: 4’/ V: NPTP:74%,TCA: 30/30
CMFII
Z.K
H29
4 ans, circoncision hémorragique
épistaxis + , gingivorragies +
Plq:240.103/µl TS: NFTP:98%, TCA: 29/30
Ag. Nle au RistoAg. nulle à l’ADPRC: NF
II
Caractéristiques des patients
B.R
H23
2 ans, épistaxis, gingivorragies, circoncision hémorragique
épistaxis, hgie. digest.otorragie
Plq: 450.103/µlTS: 5’30’’/ V: NPTP:100%, TCA:30/35
Ag. Nle au Risto Ag. nulle à l’ADPRC: bonne
IIRC
N.H
F7
3ans, épistaxis
épistaxis, gingivorragies,
Plq:214.103/µl TS: 3’/ V: NPTP:100%,TCA: 23/26
Ag. Nle au RistoAg. nulle à l’ADP
ICMF
I.RI
H18
3 ans, épistaxis, circoncision hémorragique
épistaxis, gingivorragies, hgie. digest.
Plq:220.103/µl TS: 5’30’’(Duke)TP:100%,TCA: 30/30
Ag. Nle au RistoAg. nulle à l’ADP et AdrénalineRC: nulle
IRC
I.RA
F12
5 ans, épistaxis,
épistaxis, gingivorragies
Plq:297.103/µl TS: 2’/ V=13µlTP:65%,TCA: 30/32
Ag. Nle au RistoAg. nulle à l’ADP RC: nulle
IRC
G.S
H16
13 ans, épistaxis, gingivorragies
épistaxis, gingivorragies
Plq:230.103/µl TS: 2’30’’/ V: 16µlTP:50%,TCA: 29/30
Ag. Nle au RistoAg. nulle à l’ADP
IICMF
M.W
H24
8 mois épistaxis
épistaxis, gingivorragies, hgie. digest.
Plq:176.103/µl TS: 7’ (Duke) TP:80%,TCA: 30/30
Ag. Nle au RistoAg. nulle à l’ADP RC: bonne
IISDS
PAGE
M.A
H23
3 mois, épistaxis, gingivorragies, circoncision hémorragique
épistaxisPlq:150.103/µl TS: 10’/ V: NPTP:80%,TCA: 30/30
Ag. Nle au RistoAg. nulle à l’ADPRC: bonne
IIRC
METHODES (1)
Pour ces 2 groupes :
Prélèvements : 2 tubes sur citrate de sodium 1 tube sur EDTA
Agrégation plaquettaire : Chrono-Log 500VSMéthode optiqueSur PRP
ADP : 20µMCollagène : 5µg Acide arachidonique (AA) : 2mMRistocétine : 1,25 µg
METHODES (2)
CMF : Coulter EPICS XL
CD41a-PE clone HIP8: GPIIb (αIIb integrin) BD. Bioscience
CD61-PE clone SZ21: GPIIIa (β3 integrin) Immunotech
CD42b-FITC clone HIP1: GPIb BD. Bioscience
Mouse IgG1-FITC et IgG1PE BD. Bioscience
Pour chaque échantillon :IgG1-FITC/IgG1-PECD42b-FITC/CD41a-PECD42b-FITC/CD61-PE
METHODES (3)
Sang avec EDTA PRP + GR
Culot plaquettaire + PPP
2 lavages PBS + EDTA à 0,33%
Resuspension dans le PBS à une cc de 105/µl
50µl de plaquettes + 10 µl Ac
Incubation 30 mn à l’obscurité
200 µl de solution de lyse (10 mn)
lavage PBS Resuspension PBS Lecture
RESULTATS (1)
Agents inducteurs ADP
20µM Collagène
5µg AA
2mM
Ristocétine
1,25µg
Hauteurmaximale
:ΔTL
Moyenne 91,38 92,38 94,13Agglutinati
on +
Écart-type 11,35 10,04 7,63 -
Agrégation plaquettaire
Groupe Témoin :
Agents inducteurs ADP
20µM Collagène
5µg AA
2mM
Ristocétine
1,25µg
Hauteurmaximale
:ΔTL
Moyenne Abce 24,95 49,32Agglutinati
on +
Écart-type - 8,27 9,91 -
Patients :p<0,01
% des cellules Ag+ : patients classés Type I
Étude en CMF
N/PCD41a (%
d’expression)CD61 (%
d’expression)
T.NH
0 % (Absence) 98 %
L.NF
33 % 63 %
N.HF
98 % 0 % (Absence)
I.RIH
55 % 10 %
I.RAF
58 % 14 %
RESULTATS (2)
Ac anti-GP CD42b CD41a CD61
Intensité moyenne de fluorescence
IMF
Moyenne 31,20 9,78 242,86
Écart-type 3,24 1,09 77,18
Étude en CMF
Ac anti-GP CD42b CD41a CD61
Intensité moyenne de fluorescence
IMF
Moyenne 29,23 3,66 10,75
Écart-type 11,39 2,05 11,45
Groupe Témoin :
Patients :
RESULTATS (3)
p<0,01P=0,56 p<0,01
Patients :
Étude en CMF
Ac anti-GP CD42b CD41a CD61
Intensité moyenne de
fluorescence IMF
Type I 35,22 1,82 1,79
Type II 25,49 4,80 16,35
IMF (% par rapport à la
normale)
Type I 112.88 18,63 0,74
Type II 81.69 49,13 6,71
RESULTATS (4)
p<0,01P=0,14
Contrôle
IMF: 2,41 IMF: 38,3
TG type I
IMF: 1,28 IMF: 43
TG type I
TG type I
IMF: 4,49 IMF: 28,4
TG type II
IMF: 37,2 IMF: 31,7
TG type II
TG type II
Pour le type I
CD41a: 18,63% de la normale CD61: 0,74 % de la normale Surexpression de la GPIb:112,88%
Pour le type II
CD41a:49,13% de la normale CD61: 6,71 % de la normale expression de la GPIb:81,69%
COMMENTAIRES (1)
Peu d’études sont réalisées dans ce sens:
Etude indienne: Am.J.Hematol. 2003 :
10 Patients: CD41 et CD61
6 Type I: absence de GP IIb IIIa3 Type II: GP IIb IIIa de 7,72 à 20,40 % de la
normale1 Variant: GP IIb IIIa de 46 %, RC: 60 %
COMMENTAIRES (2)
La détermination de l’IMF quantifier le nombre de molécules à la surface des cellules
Il y’a des trousses permettant de quantifier les GP: nombre de sites antigéniques
utilisation d’une gamme de calibration (4 suspensions de billes de calibration correspondant chacune à un taux connu de sites antigéniques)
Conversion de l’IMF en nombre d’Ac fixés par
cellule
COMMENTAIRES (3)
Proposition d’une classification pour la TG:
Type I
IMF (CD41a): 0 à 20 % de la normaleet/ou
IMF (CD61): 0 à 2 % de la normale
Type II ou variants:
IMF (CD41a) > 20 % de la normaleet
IMF (CD61) > 2 % de la normale
CONCLUSION (1)
Notre étude doit être complétée
Confirmation de nos résultats sur un effectif beaucoup plus important
Etude par CMF de la capacité des plaquettes activées à lier le fibrinogène (Variants)
CONCLUSION (2)