Legionella AMAA 2010

Legionella

Analises Clínicas e Saúde Publica 3º Ano

2010/2011Análise Microbiológia de Água

e Alimentos

Alexandra Sofia Roxo Ferreira

n.º 41916

Legionella Características Gerais

• Bacilos de Gram negativo, aeróbios e nutricionalmente exigentes;• Ausência das enzimas oxidase, nitrato redutase e urease;• Necessitam de L-cisteína (essencial nos meios de cultura) e ferro;• Utilizam os aminoácidos como fonte de energia e carbono; • Parasitas intracelulares facultativos de protozoários (amebas de vida livre - Naegleria);• Sobrevivem e multiplicam-se rapidamente entre 20ºC e 45ºC;• pH óptimo 6.6 a 7.2;• Alta concentração de CO2 e baixa de O2;• Nutrientes inorgânicos (ex: enxofre);• Resistentes a desinfectantes como o Hipoclorito de sódio;

LegionellaCaracterísticas Gerais

Mecanismos de patogénese- habilidade de sobreviver nas células, monócitos e macrófagos alveolares (através da produção de enzimas, proteínas e hemolisinas);

Foram descritas cerca de 48 espécies e 70 serogrupos sendo a Legionella pneumophila, serogrupo 1, a responsável por 80% das infecções no Homem;

Descoberta em 1976 no seguimento da morte de 40 legionários que assistiam a um congresso nos EUA, a Legionella pneumophila foi identificada em 1977 pelo CDC (Centro para Controlo de Doenças) – Inicialmente baptizada como Doença dos Legionários, hoje conhecida como Legionelose;

LegionellaAspectos Ecológicos

• Habitat permanente e generalizado na natureza;• Colonizam os mais variados tipos de ambientes aquáticos naturais não salinos (rios, lagos, nascentes e solo húmido):


Assim como ambientes artificiais: • Sistemas de distribuição de agua potável, em edifícios com grande volume de agua em circulação e canalizações envelhecidas;• Sistemas de distribuição e circulação de água quente ( cilindros e caldeiras, torneiras e chuveiros);• Principalmente sistemas de condicionamento de ar que envolvem recirculação de agua (torres de arrefecimento, dispositivos de evaporação ou humidificação);

• A presença de BIOFILME associada a uma temperatura propícia, explica a concentração de Legionella até níveis infectantes para o Homem;


LegionellaTransmissão• Produção de aerossóis levam a bactéria a dispersar-se no ar e penetrar por inalação no aparelho respiratório - gotículas menores que 4 µm mais perigosas pois penetram profundamente;• Hotéis, Hospitais , grandes empresas, centros comerciais, piscinas, Termas (técnicas de ORL) e spas;

• Até as fontes Ornamentais, no Verão, reúnem

condições óptimas para a multiplicação;• Carácter ubiquitário da bactéria em meios aquáticos (naturais ou artificias) aliado as dificuldades de erradicação – favorecem o aparecimento de surtos epidémicos de Legionelose;• Não se transmite pessoa a pessoa, nem pela ingestão de água contaminada;

LegionellaClínica A maior parte de casos da Doença dos Legionários ocorre em indivíduos que viajam e se hospedam em hotéis, apartamentos turísticos aldeamentos, etc. – Doença associada a viagens

Doença do Legionário manifestação clínica mais expressiva da infecção por Legionella pneumophila:• Infecção sistémica oportunista sobretudo em indivíduos adultos com mais de 50 anos ( sexo masculino 2 a três vezes mais), fumadores, portadores de doenças crónicas debilitantes e imunodeprimidos;• Sintomas não específicos que incluem febres altas, calafrios associados a transpiração, dores musculares entre dois a dez dias, evolução para tosse seca, pulmões congestionados, manifestações neurológicas e intestinais, possível afecção de rins e fígado;• Formas mais graves resultam em pneumonia aguda ou infecção grave extra pulmonar que pode ser fatal;• Tratamento por antibioterapia, não existindo vacinação disponível;

LegionellaClínica

Febre de Pontiac• Doença não pneumónica, auto controlada, tipo gripe;• Estado febril que ocorre 24 a 48 horas após o contacto que se caracteriza por um acesso súbito de febre, dores de cabeça, diarreias e mal estar; • Ocasionalmente podem ocorrer sinais neurológicos ou uma tosse seca; • Muitos doentes restabelecem-se sem tratamento numa semana ;• Mais rara que a Doença dos Legionários e de difícil diagnóstico por sinais e sintomas inespecíficos;

Doença dos Legionários está incluída na lista das Doenças de Declaração obrigatória;

LegionellaRegulamentaçãoEWGLI- European Working Group for Legionella Infections é um centro de informação e controlo epidemiológico, tendo como objectivo a vigilância e o desenvolvimento de Metodologias de Diagnóstico, Manutenção e Tratamento da Doença dos Legionários;

EWGLINET é uma Rede Europeia de Vigilância da Doença dos Legionários Associada a Viagens;

A 2 de Julho de 2003 o Parlamento e o Conselho da Europa aprovaram a Decisão nº2119/98/EC para o Controlo e Prevenção da Doença dos Legionários, com várias Guidelines;

Segundo o Decreto-Lei nº 243/01 de 5 de Setembro não é exigida a pesquisa de Legionella para monitorização de águas para consumo humano;

LegionellaRegulamentação

• Águas minerais naturais e águas termais - Portaria nº 1220/2000 de 29 de Dezembro define que a água para ser bacteriologicamente própria deverá estar isenta de Legionella pneumophila em 1 Litro de amostra analisada e o valor de referência para o total de Legionella não L. pneumophila é de 100 UFC/L;• Unidades Hoteleiras – Circulares Normativas 5/ DEP e 6/DEP de 22/04/04 da DGS destinam-se a orientação do procedimento de investigação e tratamento de casos ou surtos de Legionella;• Qualidade do Ar – Dec. Lei n.º 79/2006, nomeadamente o artigo 29º, edifícios com sistemas de climatização onde haja produção de aerossóis (torres de arrefecimento ou humidificadores por agua liquida, sistemas de água quente para chuveiros onde a temperatura de armazenamento seja inferior a 60ºC) – Pesquisa de Legionella spp não deve exceder 100 UFC/L amostra;

LegionellaPrevenção

Actuação a nível das potenciais fontes de contagio:

• Evitar estagnação das águas;• Evitar acumulação de resíduos, sujidade e corrosão;• Prevenção de entrada de substancias estranhas nos sistemas;• Minimizar a produção de aerossóis;• Manter a água a uma temperatura que iniba a multiplicação da bactéria (60- 70ºC e < 20ºC);• Estabelecer procedimentos de descontaminação em planos diários de rotina e sempre que haja suspeita de colonização da água por Legionella pneumophila;•Fazer controlo regular da qualidade da agua:

- Microbiológica

- Físico-química

LegionellaPesquisa e quantificação de Legionella

As análises devem ser realizadas em Laboratórios Certificados:• O método de cultura tomado por referencia para a detecção de Legionella é o descrito na Norma ISO 11731:1998. O método é aplicável a todos os tipos de amostras ambientais;• Contagem de UFC de Legionella;• Em relação á Identificação e serotipagem de Legionella é utilizado um kit comercial em látex que permite distinguir a Legionella spp. não pneumophila e L. pneumophila serogrupo I e serogrupos 2-14;• PCR em tempo real mais rápido (cerca de 4 horas), mas não permite quantificação em UFC;• Periodicidade das analises de acordo com a recomendações da Direcção Geral de Saúde e da EWGLI;

LegionellaProcedimento

Preparação das amostras

• Água límpida e não viscosa – amostra filtrada (1000ml) e membrana colocada em 5ml de diluente ( Solução de Ringer) e agitar para eluir;• Amostras turvas ou viscosas – centrifugar, retirar o sobrenadante e resuspender em 5ml de diluente;• Sedimentos e biofilmes – efectuar diluições de 1/10 e 1/100 com o diluente e agitar;

•Aerossóis – Colher com um aparelho apropriado directamente para placas com meio selectivo sólido (GVPC) ou para meio de enriquecimento liquido e posteriormente incubadas;


Tratamento

Amostras sujeitas ao calor (50ºC, 15 min.) e a ácido para diminuir os interferentes e também uma amostra sem tratamento são semeadas (0.1 ml) em meio GVPC, por espalhamento e incubadas a 37ºC, entre 2 a 14 dias, mantidas em atmosfera húmida;

Quando as amostras são difíceis de filtrar e/ou estão muito sujas, semear 0.1 ml da amostra, directamente do litro, em GVPC;

GVPC- meio selectivo que favorece o crescimento de Legionella e inibe o crescimento de Gram positivos e negativos, leveduras e bolores, através de utilização de 3 antibióticos (Glicina, Vancomicina, Polimixina B e Cicloheximida);


Quantificação

As colónias com uma morfologia característica (cor verde, rosada a azul ou branca, com aspecto de vidro moído) devem ser olhadas como possível Legionella e contadas com uma lupa binocular e luz incidente a 45º;

Quando as placas são incontáveis fazer uma diluição 1/10 e/ou 1/100 a partir do tubo original ou de qualquer um que tenha sofrido tratamento e semear directamente em GVPC;


Confirmação

A confirmação das colónias típicas é feita pela demonstração da sua necessidade em L- Cisteína e ferro para crescimento, utilizando se meio de cultura BCYE. Como controlo as colónias são também semeadas em GS;

O crescimento em BCYE com L-cisteína e ausência de crescimento em gelose de sangue indica a presunção de Legionella e proceder-se-á á identificação do serogrupo através de testes de látex:• Legionella pneumophila srg 1;• Legionella pneumophila srg 2 a 14;• Legionella spp• Látex negativo Identificação da espécie se necessário

Legionella

Caso o numero de UFC/L for superior 100 ou a identificação indique a presença de L. pneumophila terão de ser efectuadas acções correctivas e as respectivas Autoridades contactadas

Obrigado!!

Legionella AMAA 2010

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