Le diagnostic préimplantatoire (DPI) Le diagnostic préimplantatoire (DPI) Couplé au typage HLA Couplé au typage HLA Service de génétique médicale Service de génétique médicale Hôpital Necker-Enfants Malades Hôpital Necker-Enfants Malades Paris Paris Philippe BURLET Philippe BURLET
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Le diagnostic préimplantatoire (DPI) Couplé au typage HLA
Le diagnostic préimplantatoire (DPI) Couplé au typage HLA. Philippe BURLET. Service de génétique médicale Hôpital Necker-Enfants Malades Paris. Partie I. Qu’est ce que le DPI avec typage hla ?. Historique. - Première naissance après FIV à Londres en 1978. Historique. - PowerPoint PPT Presentation
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Le diagnostic préimplantatoire (DPI)Le diagnostic préimplantatoire (DPI)Couplé au typage HLA Couplé au typage HLA
Service de génétique médicaleService de génétique médicaleHôpital Necker-Enfants MaladesHôpital Necker-Enfants Malades
ParisParis
Philippe BURLETPhilippe BURLET
Partie I
QU’EST CE QUE LE DPI AVEC TYPAGE HLA ?
Historique
- Première naissance après FIV à Londres en 1978
Historique
- Première naissance après FIV à Londres en 1978
- Première naissance après FIV à Paris en 1982
AMANDINEAMANDINE
Historique
- Première naissance après FIV à Londres en 1978
- Première naissance après FIV à Paris en 1981
- Première naissance après DPI à Londres en 1992
Pr ALAN HANDYSIDEPr ALAN HANDYSIDE
Historique
- Première naissance après FIV à Londres en 1978
- Première naissance après FIV à Paris en 1981
- Première naissance après DPI à Londres en 1992
- Première naissance après DPI à Paris en 2000
Valentin
Historique
- Première naissance après FIV à Londres en 1978
- Première naissance après FIV à Paris en 1981
- Première naissance après DPI à Londres en 1992
- Première naissance après DPI à Paris en 2000
- Première naissance après DPI-HLA à Chicago en 2000
ADAM
Historique
- Première naissance après FIV à Londres en 1978
- Première naissance après FIV à Paris en 1981
- Première naissance après DPI à Londres en 1992
- Première naissance après DPI à Paris en 2000
- Première naissance après DPI-HLA à Chicago en 2000
- Première naissance après DPI-HLA à Paris en 2011
3 centres en France :
PARISSTRASBOURGMONTPELLIER
ObstétricienObstétricienss Sage femmeSage femme
GénéticienGénéticien
CytogénéticienCytogénéticien
Biologiste MoléculaireBiologiste Moléculaire
Biologiste de la Biologiste de la Reproduction Reproduction
PsychologuePsychologue
PédiatrePédiatre
HématologueHématologue
Centre de DPI Centre de DPI PluridisciplinairePluridisciplinaire
et non atteint (et non atteint (11%11% contre contre 18%18% attendu) attendu)
Take home baby rate = Take home baby rate = 9%9%
Résultats Résultats
Partie II
LE DIAGNOSTIC MOLECULAIRE
La PCR
Science, like nothing else among the institutions of mankind, grows like a weed Science, like nothing else among the institutions of mankind, grows like a weed every year. Art is subject to arbitrary fashion, religion is inwardly focused and driven every year. Art is subject to arbitrary fashion, religion is inwardly focused and driven only to sustain itself, law shuttles between freeing us and enslaving us. only to sustain itself, law shuttles between freeing us and enslaving us.
La PCR
La PCR
Méthodes d’analyse
• Le gel d’agarose
• Le séquenceur
Méthodes d’analyse
Les fragments d’ADN sont chargés négativement. Placés dans un Les fragments d’ADN sont chargés négativement. Placés dans un champ électrique, ils vont se déplacer de la cathode vers l’anode. Plus champ électrique, ils vont se déplacer de la cathode vers l’anode. Plus les fragments sont petits, plus ils vont migrer rapidement. les fragments sont petits, plus ils vont migrer rapidement.
• Le peu de matériel biologique disponible
Les difficultés du DPI
Analyse génétique 1-2 cellules/embryon
10 Millions
de cellules
Extraction d ’ADN
Analyse Génétique
DPIDPN
• Le peu de temps pour le diagnostic
Les difficultés du DPI
Rendu des résultats en 24h
pour transfert à J4
Rendu des résultats en
une semaine
DPIDPN
• Les risques de contamination
Les difficultés du DPI
Spermatozoïde Cellules du manipulateur
Cellules de la mère
Fragment d’ADN (amplification précédente)
• La qualité des embryons
Les difficultés du DPI
Absence de noyau
Noyau en dégénérescence
/ mauvaise morphologie
Pas de diagnostic
CMCN
Les difficultés du DPI
• allele drop out
Détermination des embryonsDétermination des embryons compatibles compatibles
Mutation Marqueurs HLAMutation Marqueurs HLA
++ ++++-- --++ ++++-- --
++ ------ --
deux méthodes alternatives utilisées deux méthodes alternatives utilisées ::
• AnalyseAnalyse directedirecte : :
détection de la MUTATIONdétection de la MUTATION • AnalyseAnalyse indirecteindirecte : :
utilisation de MARQUEURS polymorphesutilisation de MARQUEURS polymorphes
DPI - Stratégies DPI - Stratégies
L’analyse préalable
LA REGION HLALA REGION HLA
Chromosome 6Chromosome 6
LA REGION HLALA REGION HLA
6 p 216 p 21
LA REGION HLALA REGION HLA
Class IClass I
Class IIClass II
HLA-AHLA-A
HLA-CHLA-C
HLA-BHLA-B
HLA-DQHLA-DQ
HLA-DPHLA-DP
HLA-DRHLA-DR
LA REGION HLALA REGION HLA
Class IClass I
Class IIClass II
HLA-AHLA-A
HLA-CHLA-C
HLA-BHLA-B
HLA-DQHLA-DQ
HLA-DPHLA-DP
HLA-DRHLA-DR
D6SD6S276 276
D6SD6S16241624
D6SD6S510 510
D6SD6S2972 2972
D6SD6S273 273
D6SD6S1666 1666
D6SD6S2876 2876
D6SD6S2874 2874
D6SD6S2749 2749
D6SD6S1618 1618
D6SD6S1560 1560
D6SD6S439 439
D6SD6S16101610
D6SD6S1615 1615
D6SD6S426426
D6SD6S265 265
Le « génotypage » HLA
A BA B C DC D
B DB D B DB D A DA D A CA C B CB C
1/41/4
La drépanocytose
A SA S A SA S
S SS S S SS S A SA S S AS A A AA A
3/43/4
TYPAGE HLA ET DREPANOCYTOSETYPAGE HLA ET DREPANOCYTOSE