Lapres Modul 1

7/28/2019 Lapres Modul 1

1/15

1

ISOLASI MIKROORGANISME DALAM

SUATU CAMPURAN


2/15

Laboratorium MikrobiologiJurusan Teknik Kimia FTI-ITS

2

Laporan Resmi Praktikum Mikrobiologi Teknik

LAPORAN RESMI

ISOLASI MIKROORGANISME DARI SUATU CAMPURAN

I.Tujuan

Percobaan isolasi mikroorganisme dari suatu campuran dengan teknik cawan gores

dan cawan tuang.

II. PengamatanII.1 Metode Cawan Gores (24 jam)

Metode cawan

gores (24 jam)

Pengamatan

Sektor 0 Sektor 1 Sektor 2 Sektor 3

Bentuk koloni

jika dilihat dari :

- Atas

keseluruhan

- Atas tepi

- Permukaan

(samping)

Keterangan

- Warna Putih

kehijauan

Putih

kehijauan

Putih

kehijauan

- Diameter 0,3 cm 0,8 cm 1,3 cm

- Kepekatan Jarang jarang Jarang


3/15


3


II.2 Metode Cawan Gores (48 jam)

Metode cawan

gores (48 jam)

Pengamatan

Sektor 0 Sektor 1 Sektor 2 Sektor 3

Bentuk koloni

jika dilihat dari :

- Atas

keseluruhan

- Atas tepi

- Permukaan

(samping)

Keterangan

- Warna Putih Putih Putih Putih

- Diameter 1,1 cm 0,6 cm 1,3 cm 1,7 cm

- Kepekatan Jarang Jarang Jarang Jarang

II.3 Metode Cawan Tuang (24 jam)

Metode Cawan

Tuang (48 Jam)

Pengamatan

Tuang 1 Tuang 2 Tuang 3

Bentuk koloni

jika dilihat dari :

- Atas

keseluruhan


4/15


4


- Atas tepi

- Permukaan

(samping)

Keterangan

- Warna Putih Putih Putih


- Kepekatan Tinggi Sedang Sangat jarang

II.4 Metode Cawan Tuang (48 jam)

Metode cawan

Tuang (48 jam)

Pengamatan

Tuang 1 Tuang 2 Tuang 3

Bentuk kolonijika dilihat dari :

- Atas

keseluruhan

- Atas tepi

- Permukaan

(samping)

Keterangan

- Warna Putih Putih Putih



5/15


5


- Kepekatan Tinggi Sedang Jarang

III.Pembahasan

III.1 Metode Cawan Gores

Salah satu tujuan pada percobaan Isolasi Mikroorganisme Dari Suatu

Campuran adalah untuk mempelajari cara cara mengisolasi mikroorganisme dari

suatu campuran dengan menggunakan teknik cawan gores. Pada teknik cawan

gores, pemanfaatan permukaan media harus seefisien mungkin sehingga didapatkan

pemisahan koloni yang bagus pada kuadran terakhir. Prinsip utama dari metode

cawan gores ini adalah mengencerkan organisme sedemikian hingga individu

spesies dapat dipisahkan dari yang lainnya dengan anggapan bahwa setiap koloni

terpisah yang tampak pada cawan petri setelah inkubasi berasal dari satu sel

tunggal.

Keunggulan dari metode ini adalah kita bisa menghemat bahan dan waktu,.

Apabila dalam pelaksanaannya dilakukan dengan benar, metode ini mungkin adalah

metode yang paling banyak digunakan dalam proses isolasi bakteri dan

mendapatkan biakan murni.

Pada metoda piringan gores (streak-plate method) medium agar steril

dicairkan, didinginkan pada suhu 45oC, dituangkan ke dalam cawan petri steril

(cawan gelas dengan garis tengah 3 inci) dan dibiarkan sampai menjadi padat.

Kemudian, dengan kawat gelang penginokulasi yang penuh dengan biakan

campuran (misalnya spesimen ludah atau bahan lain), goresan dilakukan di atas

permukaan agar. Ada beberapa metode penggoresan yang berbeda, namun kesemua

metode bertujuan untuk meletakkan sebagian besar organisme pada beberapagoresan pertama. Apabila sebaran dilakukan dengan menggerakkan kawat gelang

kian kemari dari satu bagian ke bagian lain cawan petri, bakteri yang tertinggal

pada kawat gelang semakin berkurang. Jika dilakukan secara sempurna, goresan

akhir akan meninggalkan bakteri individual cukup terpisah satu sama lain, sehingga

setelah mengalami pertumbuhan, koloni yang berasal dari bakteri individual akan

benar-benar terpisah satu sama lain. Kemudian, koloni tunggal dapat dipindahkan

ke medium steril, dan akan tumbuhlah biakan murni.


6/15


6


Dua macam kesalahan yang umum sekali dilakukan oleh para mahasiswa

yang baru mulai mempelajari mikrobiologi ialah: (1) tidak memanfaatkan

permukaan medium dengan sebaik-baiknya untuk digores sehingga pengenceran

mikroorganisme menjadi kurang lanjut, dan (2) cenderung untuk menggunakan

inokulum terlalu banyak sehingga menyulitkan pemisahan sel-sel yang digoreskan.

Sukar memang untuk membayangkan betapa kecil sesungguhnya ukuran sel

bakteri; satu sel bakteri berukuran kurang lebih 1/10.000 cm. Jadi bila kita

menggoreskan lup inokulasi yang mengandung bakteri pada permukaan agar

nutrient di dalam cawan petri, pada hakekatnya kita menaruh puluhan ribu sel pada

medium tersebut. Bila kita menggunakan teknik menggores yang baik maka pada

suatu area tertentu pada permukaan medium yang digores, sel-sel bakteri akan

terpisahkan satu dari lainnya. Sel-sel tunggal yang terpisahkan seperti itu disebut

sel induk. Pada waktu inkubasi setiap sel induk berbagi diri dengan pembelahan

biner dalam waktu 20-30 menit menjadi 2 sel anak, lalu pada 20-30 menit

berikutnya setiap sel anak berbagi diri lagi sehingga kini terdapat 4 sel anak. Sel-sel

baru itu terus berbagi diri dalam jumlah eksponensial menjadi bermilyar-milyar sel

anak yang saling bertumpukan di atas dan di sampingnya membentuk suatu koloni.

Bila setelah masa inkubasi koloni-koloni tersebut saling terpisahkan cukup jauh

sehingga tidak bersentuhan, maka diperoleh koloni murni.

III.2 Metode Cawan Tuang

Walaupun metode ini banyak menghabiskan bahan dan membutuhkan

waktu yang sedikit lama, metode ini sering pula digunakan karena tidak

membutuhkan keterampilan tinggi.

Metode cawan tuang terdiri atas penginokulasian biakan campuran ke dalam

tabung uji yang mengandung agar mencari yang telah didinginkan pada suhu 45oC.

Isinya diaduk untuk memencarkan bakteri ke seluruh medium. Campuran itu

kemudian dituangkan ke dalam cawan petri steril dan dibiarkan menjadi padat.

Secara alternatif, inokulum ditempatkan di dalam cawan petri kosong dan medium

yang mencair dituangkan di atasnya. Cawan ini diputar untuk mencampur isinya

sebelum medium menjadi padat. Pertumbuhan koloni terjadi baik dalam medium.


7/15


7


Tujuan pada kedua prosedur ialah untuk memisahkan sel-sel bakteri satu sama lain

sehingga sel-sel itu akan tumbuh menjadi koloni-koloni yang terpisah dalam

medium yang padat. Kemudian dapat diambil sel-sel dari satu koloni untuk

mendapatkan biakan murni. Dalam praktek, sering piringan kedua digores kembali

dengan organisme yang berasal dari koloni yang diisolasi untuk menjamin bahwa

hasil yang diperoleh adalah biakan murni.

Keberhasilan dalam menggunakan metode ini adalah tergantung dari besar

atau luasnya perkembangan koloni dalam cawan yang paling penting, saat

mempelajari suatu aktifitas organisme atau karakteristik koloni dapat membantu

memisahkan variasi type-type koloni tersebut.

IV.Jawaban Pertanyaan

1. Keadaan media pembanding yang seharusnya adalah murni, atau tidak terdapat

koloni bakteri ataupun biakan murni. Sektor 0 atau pembanding digunakan

untuk membandingkan antara media yang berkoloni dengan yang tidak ada,

sehingga kita bisa tahu apakah inokulasi bakteri kita berhasil dengan baik atau

tidak.

2. Setelah melakukan isolasi bakteri dengan metode cawan gores, bakteri terisolasi

pada sektor 3. Jika dibandingkan dengan sektor 0 atau blanko, pada saat

pengamatan setelah 24 jam, hasil pengamatan menunjukkan bahwa blanko

bersih swedangkan terdapat sejumlah bakteri yang terisolasi. Namun, setelah

pengamatan 48 jam, pada sektor 0 terdapat bakteri juga, sama dengan sektor 3,

tetapi di sekor 3 jauh lebih jarang kepekatannya.

3. Pada saat pengamatan pada metode cawan gores, setelah 48 jam, pada sektor nol

yang seharusnya tidak terdapat koloni, namun terdapat koloni. Hal ini bisa

dikarenakan terjadinya kontaminasi dari udara luar, proses inokulasi yang

kurang sempurna, dan kemungkinan terjadinya penggeseran hasil goresan dari

sektor 1 atau 3 ke sektor 0.

4. Keunggulan metode cawan gores adalah metode bisa menghemat waktu dan

biaya sedangkan kekurangannya metode ini, membutuhkan keterampilan yang

lumayan dan atau baik.


8/15


8


Keunggulan metode cawan tuang adalah metode ini tidak memerlukan

keterampialan yang terlalu baik, tetapi dalam pelaksanaannya akan memakan

waktu sekaligus biaya.

V.Kesimpulan

Dari hasil pengamatan yang telah dilakukan dan perbandingan dengan literatur,

dapat ditarik kesimpulan :

1. Pada sektor ketiga cawan gores, terdapat biakan murni

2. Dari hasil pengamatan dan studi literatur didapatkan jenis bakteri pada

sektor ketiga yaituZymomonas.

3. Pada percobaan cawan tuang, biakan murni terdapat pada petridish ketiga

Daftar Pustaka

Finegold, Sydney M., Martin, William J. 1982. Diagnostic Microbiology, sixth

edition, St. Louis, The C.V. Mosby company.

Pelczar, Michael J., dan Chan, E.C.S. 1986. Dasar-dasar Mikrobiologi, Jakarta ,UI

Press.

Prescott, Lansing M., Harley, John P., dan Klein, Donald A. 2002. Microbiology,

fifth edition, New York, Mc-Graw Hill.


9/15


9


UJI BIOKIMIA

UJI BIOKIMIA

I. Tujuan

Tujuan dari percobaan Uji Oksidasi dan Fermentasi (O-F Test) adalah untuk

mempelajari kemampuan mikroorganisme dalam mengkatabolisme, berlangsung secara


10/15


10


oksidatif atau fermentatif. Tujuan dari percobaan hidrolisis lemak adalah menentukan

jenis mikroorganisme yang memiliki lipase, suatu enzime yang mempunyai kemampuan

untuk menghidrolisis lemak menjadi asam lemak gliserol.

II. Pengamatan

II.1 O-F TEST

setelah 24 jam (13 April 2011)

MikroorganismeOksidasi

( Non Parafin )

Fermentasi

( + Parafin )

Zymomonas(+) ; hampir keseluruhan warna

media berwarna hampir biru.

(-) ; tidak ada perubahan

warna media, sama dengan

blanko.

Aspergillus Niger

(+) ; di bagian permukaan

media terdapat lapisan

berwarna biru.


warna media, sama dengan

blanko.

Blanko Media berwarna hijau kebiruan.

setelah 48 jam (14 April 2011)

MikroorganismeOksidasi

( Non Parafin )

Fermentasi

( + Parafin )

Zymomonas

(+) ; Terjadi perubahan warna

pada media, semakin biru dan

lebih keruh secara keseluruhan.


warna media, sama

dengan blanko.

Aspergillus Niger

(+) ; terdapat mikroba di lapisan

permukaan media, seperempat

bagian dari media menjadi

berwarna kuning,


warna media, sama

dengan blanko.

Blanko Media berwarna hijau kebiruan.

II.2 Hidrolisis Lemak

MediaMikroorganisme

Zymomonas Aspergillus Niger

Lemak ( - ); media yang diatasnya

terdapat bakteri, berubah

( + ); media yang

diatasnya terdapat bakteri,


11/15


11


warna dari bening menjadi

biru muda, setelah ditetesi

CuSO4.

berubah warna menjadi

biru.

III. Pembahasan

III. 1 O-F TEST

Reaksi Oksidasi adalah katabolisme yang memerlukan oksigen dan biasanya

dilakukan oleh bakteri aerobik. Bakteri menguraikan karbohidrat polimer menjadi

senyawa-senyawa sederhana. Reaksi yang terjadi pada proses oksidasi adalah :

C6H12 O6 + 6O2 6 CO2 + 6H2O + 688 kkal.

Proses fermentasi atau katabolisme anaeraob merupakan cara utama untuk

penyimpanan energi dalam sel anaerobic. Hasil akhir dari fermentasi anaerob ialah

menyediakan bahan-bahan yang dapat diperlukan bagi proses oksidasi dari

pernafasan. Dalam prosesnya bakteri menguraikan karbohidrat menjadi senyawa

sederhana yaitu alkohol.

Reaksi-reaksi fermentasi :

C6H12 O6 CH3CH2OH (etanol) + CO2 + H2O

C6H12 O6 CH3CH2OH

C6H12 O6 CH3CH2OH CH3COOH (asetat) + H2O

C6H12 O6 CH3CH2 COOH (Laktat)

Aktivitas bakteri dalam mengkatabolisme media yang ditempatinya

menghasilkan asam-asam organik yang mengakibatkan perubahan pH media.

Untuk itu digunakan indikator yang sesuai agar dapat diketahui perubahan pH

media yang terjadi.

Mikroorganisme yang bersifat oksidatif, maka akan terjadi perubaha warna

media, yaitu media yang tidak tertutup parafin sedangkan untuk mikroorganisme

yang bersifat fermentatif, akan terjadi perubahan warna media baik yang tertutup

parafin maupun yang tidak tertutup.

Pada pengamatan 24 jam dan 48 jam terlihat adanya perubahan warna pada

tabung aerob, sedangkan pada tabung anaerob tidak terjadi perubahan warna. Untuk

bakteri Aspergillus niger, untuk tabung reaksi yang tertutup parafin, menunjukkan


12/15


12


positif karena terjadi perubahan warna media dari hijau keruh menjadi biru,

khususnya pada lapisan permukaan. Setelah kurang lebih 48 jam, terjadi perubahan

lagi, dibagian permukaannya terdapat sejumlah bakteriyang tumbuh, dengan warna

coklat, seperti bulu bulu, dan terjadi perubahan warna pada media, menjadi

kuning. Untuk bakteri Zymomonas, pada pengamatan setelah 24 jam terjadi

perubahan warna dari hijau keruh menjadi biru, namu secara keseluruhan media,

tidak seperti pada media dengan bakteri Aspergillus niger. Setelah 48 jam, warna

media menjadi lebih keruh.

Pada tabung yang tertutup oleh parafin, baik bakteri Aspergillus niger

maupun Zymomonas, tidak menunjukan adanya perubahan warna pada medianya.

Warna media tetap seperti blanko. Warna media pada blanko sendiri, pada saat

pengamatan 24 jam adalah hijau kebiruan, sedangkan setelah 48 jam warna media

adalah biru.

III.2 Hidrolisis Lemak

Lipid atau lemak adalah senyawa berat molekul (BM) besar dan

menghasilkan energi tinggi. Peruraian lipid dilakukan oleh enzim lipase/ esterase

dengan memecah ikatan-ikatan ester dengan bantuan air membentuk gliserol dan

asam lemak. Produk yang dihasilkan dari hidrolisa lemak digunakan untuk

pembentukan lemak mikroba dan komponen sel esensial, atau dapat dioksidasi

untuk menghasilkan energi kebutuhan sel di bawah kondisi aerob yang sangat unik.

Setelah media diinkubasikan selama 48 jam, ke dalam petridish tuangkan

larutan CuSO4jenuh dan diamkan selama 10-15 menit. Larutan CuSO4 yang masih

ada dalam petridish dibuang dan hasil uji lemak menunjukkan perubahan warna

menjadi biru gelap atau agak gelap setelah ditetesi larutan CuSO4, ini berarti

organisme tersebut dapat menghidrolisis lemak.

Bakteri yang dipakai adalah Apergillus niger dan Zymomonas. Aspergilus

niger merupakan fungi dari filum ascomycetes yang berfilamen, mempunyai hifa

berseptat, dan dapat ditemukan melimpah di alam. Fungi ini biasanya diisolasi dari

tanah, sisa tumbuhan, dan udara di dalam ruangan. Koloninya berwarna putih pada

Agar Dekstrosa Kentang (PDA) 25 C dan berubah menjadi hitam ketika konidia


13/15


13


dibentuk. Kepala konidia dari A. niger berwarna hitam, bulat, cenderung memisah

menjadi bagian-bagian yang lebih longgar seiring dengan bertambahnya umur.

Aspergillus niger dapat tumbuh optimum pada suhu 35-37 C, dengan suhu

minimum 6-8 C, dan suhu maksimum 45-47 C. Selain itu, dalam proses

pertumbuhannya fungi ini memerlukan oksigen yang cukup (aerobik). A. niger

memiliki warna dasar berwarna putih atau kuning dengan lapisan konidiospora

tebal berwarna coklat gelap sampai hitam.

Zymomonas mobilis adalah bakteri yang termasuk ke dalam genus

Zymomonas. Hal ini penting untuk perusahaan bioetanol menghasilkan

kemampuan-, yang melampaui ragi dalam beberapa aspek. Itu awalnya terisolasi

dari minuman beralkohol seperti tuak Afrika, Meksiko pulque , dan juga sebagai

kontaminan dari sari buah apel dan bir di negara-negara Eropa. Z. mobilis

menurunkan gula untuk piruvat menggunakan jalur-Doudoroff Entner . piruvat ini

kemudian difermentasi untuk menghasilkan etanol dan karbon dioksida sebagai

produk saja (analog dengan ragi).

Kelebihan Z. mobilis atas S. cerevisiae dengan hormat untuk memproduksi

bioetanol :

serapan gula lebih tinggi dan hasil etanol,

rendah produksi biomassa,

etanol lebih tinggi toleransi,

tidak memerlukan penambahan dikendalikan oksigen selama fermentasi,

tanggungan untuk manipulasi genetik.

Namun, ia memiliki keterbatasan parah dibandingkan dengan ragi: kisaransubstrat dapat dipakai adalah terbatas pada glukosa , fruktosa , dan sukrosa .

Menggunakan bioteknologi metode, ilmuwan saat ini berusaha untuk mengatasi hal

ini. Varian dari Z. mobilis yang mampu menggunakan tertentu pentosa sebagai

sumber karbon telah dikembangkan.

Karakteristik menarik Z. mobilis adalah bahwa perusahaan membran plasma

mengandung hopanoid , senyawa pentasiklik mirip dengan eukariotik sterol . Hal


14/15


14


ini memungkinkan untuk memiliki toleransi yang luar biasa untuk etanol di

lingkungannya, sekitar 13%.

IV.Jawaban Pertanyaan

1.

Test Media

Produksi butadienol Media MR-VP

Hidrolisa Kanji Media kanji agar

Hidrolisa Lemak NB Agar

Hidrolisa kasein Media kasein agar

2.

Test Reagent

Voges-Proskauer Test Reagent Barrit

Catalase Test Reagent Hidrogen Peroksida

Hidrolisa Kanji Reagent Grams Iodine

3.

Reaksi Enzim Produk

Hidrolisa Kasein Kaseinase

Hidrolisa Kanji Alpha-amylase Glukosa

Hidrolisa Lemak Lipase Asam lemak dan gliserol

Hidrolisa Gelatin Gelatinase Asam amino

4. MR Test = Menguji terbentuknya asam organik dari proses katabolisme

mikroorganisme Methyl Red

VP Test = Untuk mendeteksi ada tidaknya asetil metil karbinol yang terbentuk,

Reagent Barrit5. a. Enzim kaseinase berfungsi utuk menguraikan kasein menjadi glukosa

b. Enzim amilase berfungsi untuk mengubah amilum menjadi asam lemak dan

glisereol

c. Enzim lipase berfungsi untuk menguraikan lemak menjadi asam lemak dan

gliserol

d. Enzim gelatinase berfungsi untuk menguraikan gelatin menjadi uraian gelatin

(asam amino)


15/15


15


V.Kesimpulan

Berdasarkan hasil percobaan, bakteri yang dipakai adalah Apergillus niger

dan Zymomonas. Apergillus niger lebih banyak memiliki lipase yang mampu

menghidrolisis lemak menjadi asam lemak dan gliserol dari pada Zymomonas

Daftar Pustaka

www.austincc.edu/microbigz/html

Michael J. Pelezar, Jr., dan E.C.S. Chan, Dasar-Dasar Mikrobiologi, edisi kedua

dan ketiga, Jakarta:Universitas Indonesia
http://www.austincc.edu/microbigz/htmlhttp://www.austincc.edu/microbigz/html

Lapres Modul 1

Documents