LAPORAN TAHUNAN PENELITIAN HIBAH BERSAING · i laporan tahunan penelitian hibah bersaing kajian tentang efek samping injeksi vitamin c dosis tinggi terhadap kesehatan dengan memakai

i

LAPORAN TAHUNAN PENELITIAN

HIBAH BERSAING

KAJIAN TENTANG EFEK SAMPING INJEKSI VITAMIN C

DOSIS TINGGI TERHADAP KESEHATAN DENGAN MEMAKAI

TIKUS BETINA (Rattus rattus) DEWASA SEBAGAI

HEWAN MODEL

Tahun 1 dari rencana 2 tahun

TIM PENELITI : 1. NI WAYAN SUDATRI, S.Si., M.Si. (Ketua)

NIDN: 0031107102

2. IRIANI SEYAWATI, S.Si.,M.Si. (Anggota)

NIDN : 0017097401

3. NI MADE SUARTINI, S.Si.,M.Si. (Angota)

NIDN : 0028107101

Dibiayai Dari Dana BOPTN Universitas Udayana Tahun Anggaran 2013 dengan

Surat Perjanjian Kontrak No. 103.61/UN14.2/PNL.01.03.00/2014 tanggal

3 Maret 2014

PROGRAM STUDI / JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MIPA

UNIVERSITAS UDAYANA

November TAHUN 2014

ii

iii

RINGKASAN

Vitamin C adalah salah satu vitamin yang dibutuhkan untuk menjaga

kesehatan tubuh. Fungsi vitamin C bagi tubuh antara lain; meningkatkan sistem

imunitas (daya tahan) tubuh, mempercepat proses penyembuhan serta membuat kulit

lebih segar dan cerah. Manfaat vitamin C untuk meningkatkan daya tahan tubuh

memang sudah tidak diragukan lagi. Sedangkan manfaatnya untuk mengencangkan

dan mencerahkan kulit terjadi karena vitamin C merangsang pembentukan kolagen,

suatu protein ekstraseluler yang berperan dalam mengencangkan sel. Saat ini untuk

mendapatkan kulit cerah dan bersih dengan cara injeksi vitamin C sudah banyak

ditawarkan baik oleh dokter kulit maupun oleh praktisi-praktisi kecantikan. Harganya

pun terjangkau mulai Rp 100.000 sampai Rp 200.000 perampul untuk sekali suntik.

Untuk sekali injeksi vitamin C dosis yang diberikan sekitar 1000–4000 mg.

Sedangkan dosis vitamin C yang disarankan untuk menjaga kesehatan sekitar 50-75

mg/hari. Jadi dosis vitamin C yang diberikan melalui injeksi vitamin C sangat tinggi

dibandingkan dengan dosis normal yang diperlukan. Dosis tinggi vitamin C yang

diberikan akan membuat tubuh bekerja lebih berat untuk mengeluarkan kelebihan

vitamin tersebut dari tubuh dan diduga pemberian dosis tinggi vitamin C dalam

jangka panjang menyebabkan pembentukan batu ginjal. Disamping itu, beberapa efek

negatif dari suntik vitamin C yang ditulis oleh media on line antara lain dapat

menyebabkan aborsi, mens tidak teratur, menopause dini serta maag.

Tujuan umum penelitian ini adalah mengetahui efek samping dari injeksi

vitamin C dosis tinggi dalam jangka waktu yang lama terhadap kesehatan . Tujuan

khusus dari penelitian ini adalah 1. Untuk mengetahui kadar kolagen kulit dan tulang

tikus betina yang diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi. 2. Untuk mengetahui

gambaran histologis hati tikus betina yang diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi.3.

Untuk mengetahui kadar SGPT dan SGOT plasma darah sebagai indikator kerja hati

tikus betina yang diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi. 4. Untuk mengetahui

gambaran histologis ginjal tikus betina yang diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi.

5. Untuk mengetahui kadar kreatinin plasma darah sebagai indikator fungsi ginjal

tikus betina yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi. 6. Untuk mengetahui kemampuan

reproduksi tikus betina yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi.

iv

Rancangan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Rancangan Acak

Lengkap (RAL) dengan perlakuan lama penyuntikan vitamin C dosis tinggi yang

berbeda. yaitu: P0 (kontrol), P1 (lama diinjeksi 30 hari), P2 (lama diinjeksi 50 hari),

P3 (lama diinjeksi 70 hari) dan P4 (lama diinjeksi 90 hari). Parameter yang diamati

untuk tahun I adalah gambaran histologis hati dan ginjal, kadar SGOT, SGPT,

kreatinin plasma serta gambaran histologi tulang. Untuk tahun kedua dilihat

kemampuan reproduksi serta frofil hormon estrogen dan progesteron tikus betina yang

diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi dalam jangka waktu yang lama.

Manfaat yang diharapkan dari penelitian ini adalah diperoleh data ilmiah

tentang efek samping injeksi vitamin C dosis tinggi dalam jangka waktu lama

terhadap kesehatan tubuh, dan kalau terbukti injeksi vitamin C dosis tinggi dalam

jangka waktu panjang memberikan dampak yang buruk terhadap kesehatan, maka

hasil penelitian ini bisa dipakai acuan bagi praktisi kecantikan dalam menentukan

dosis vitamin C yang aman bagi konsumen. Selain itu, diharapkan dapat memberikan

edukasi bagi masyarakat bila ingin melakukan injeksi vitamin C dosis tinggi.

Dari hasil penelitian menunjukkan bahwa penyuntikan vitamin C dosis tinggi

pada tikus betina umur 3-4 selama 90 hari terhadap hati menunjukkan adanya

kerusakan hati yang ditunjukkan oleh gambaran histologi hati berupa peningkatan

persentase degenerasi hidrofis, degenerasi lemak, inti piknotik, nekrosis, kongesti

sinusoid dan infiltrasi sel radang. Namun uji SGPT menunjukkan tidak ada

perbedaan yang bermakna, sedangkan hasil uji SGOT menunjukkan adanya

penurunan konsentrasi pada tikus yang disuntik vitamin C dosis tinggi dalam waktu

lama. Dan penyuntikan vitamin C dosis tinggi pada tikus betina umur 3-4 selama 90

hari meningkatkan kadar kreatinin darah tikus sebagai indikator adanya gangguan

pada fungsi ginjal. Hal ini diperkuat dengan gambaran histologi ginjal yang

menunjukkan adanya beberapa peningkatan kelainan ginjal seperti edema glomelurus,

penyempitan kapsula bowman, kongesti glomelurus, endapan protein di tubulus,

degenerasi di tubulus, inti piknotik di tubulus, infiltrasi sel radang, serta kemorragi.

Sedangkan penyuntikan vitamin C dosis tinggi pada tikus betina umur 3-4 selama 90

hari tidak memberikan pengaruh yang bermakna terhadap gambaran histologi tulang

tulang (osifikasi tulang).

v

PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa karena atas

rahmatnyalah laporan tahunan penelitian Hibah Bersaing tahun I yang berjudul ”

Kajian Tentang Efek Samping Injeksi Vitamin C Dosis Tinggi Terhadap

Kesehatan Dengan Memakai Tikus Betina (Rattus Rattus) Dewasa Sebagai

Hewan Model” dapat diselesaikan pada waktunya. Penulis mengucapkan banyak

terima kasih kepada:

1. Laboratorium Fisiologi Hewan Jurusan Biologi Universitas Udayana atas

bantuan sarana dan prasarana yang diberikan sehingga penulis bisa

melakukan penelitian.

2. Laboratorium Kesehatan daerah Propinsi Bali atas bantuan sarana dan

prasarana yang diberikan sehingga penulis dapat melakukan pengujian

sampel darah di tempat tersebut.

3. Balai Besar Veteriner Denpasar (BBVet) atas bantuan sarana dan

prasarana yang diberikan sehingga penulis dapat melakukan pembuatan

preparat histologis di tempat tersebut.

4. DIKTI melalui LPPM Unud atas bantuan dana yang diberikan sehingga

penelitian ini bisa dilaksanakan.

5. Serta semua teman-teman yang telah memberikan sumbangan pemikiran,

saran dan kritik sehingga laporan tahunan/akhir penelitian ini menjadi

lebih baik.

Penulisan laporan penelitian ini masih banyak kekurangannya, untuk itu saran

dan kritik yang membangun sangat diharapkan agar di dalam penelitian dan

penulisan selanjutnya menjadi lebih baik.

Akhir kata, saya berharap agar tulisan ini dapat memberikan manfaat dan

dapat dijadikan sebagai bahan acuan/referensi bagi peneliti lainnya.

Penulis

vi

DAFTAR ISI

HAL HALAMAN PENGESAHAN....................................................................................ii

RINGKASAN.............................................................................................................iii

PRAKATA................................................................................................................. v

DAFTAR ISI...............................................................................................................vi

DAFTAR TABEL......................................................................................................vii

DAFTAR GAMBAR.................................................................................................viii

DAFTAR LAMPIRAN...............................................................................................ix

BAB I. PENDAHULUAN............................................................................................1

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA.................................................................................3

BAB III. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN

BAB IV. METODE PENELITIAN............................................................................9

BAB V. HASIL YANG DICAPAI............................................................................15

BAB VI. RENCANA TAHAPAN BERIKUTNYA.................................................26

BAB VII. KESIMPULAN DAN SARAN.................................................................27

DAFTAR PUSTAKA.................................................................................................28

LAMPIRAN................................................................................................................31

vii

DAFTAR TABEL

Hal

Tabel 1. Pemberian perlakuan lama injeksi vitamin C dosis tinggi.............................17

Tabel 2. Tabel indikator pencapaian……..……………………………………..……22

Tabel 3. Uji ANOVA dan standar error kadar SGOT plasma tikus betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan

dengan uji Duncans..............................................................................23

Tabel 4. Uji Kruskal Wallis dan rerata kadar SGPT plasma tikus betina

(Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis Ting................................23

Tabel 5. Uji Kruskal Wallis dan rerata kadar Kreatinin plasma tikus betina

(Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi.............................24

Tabel 6. Uji Kruskal Wallis dan rerata degenerasi hidrospis sel hati tikus betina

(Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi..............................26

Tabel 7. Uji ANOVA dan standar error rerata degenerasi lemak, Inti piknotik,

sel hati tikus betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C

dosis tinggi dilanjutkan dengan uji Duncans..............................................26

Tabel 8. Uji ANOVA dan standar error rerata Kongesti sinusoid hati tikus

betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan

dengan uji

Duncans......................................................................................................27

Tabel 9. Uji ANOVA dan standar error Edema Glomelurus, Penyempitan kapsula bowman, Kongesti glomelurus Histologi ginjal tikus betina (Mus

musculus L) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan uji Duncans......................................................................................................29

Tabel 10. Uji ANOVA dan standar error degenerasi di tubulus, inti piknotik di

tubulus, infiltrasi sel radang, dan hemorragi ginjal tikus betina (Mus

musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan

dengan uji Duncans............30

Tabel 11. Uji ANOVA dan standar error rerata ketebalan osifikasi tikus betina (Mus

musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan uji

Duncans.....................................................................................................31

viii

DAFTAR GAMBAR

Hal

Gambar 1. Rumus Kimia Vitamin C.......................................................................... 3

Gambar 2. Diagram alir penelitian selama 2 tahun..................................................... 20

Gambar 3. Diagram alir Pelaksanaan Penelitian tahun pertama..................................21

Gambar 4. Grafik kadar SGOT dan SGPT plasma tikus betina (Mus musculus L.)

yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi.........................................................24

Gambar 5. Grafik kadar kreatinin plasma tikus betina (Mus musculus L.) yang

diinjeksi vitamin C dosis tinggi.................................................................25

Gambar 6. Gambaran histologi hati tikus betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi

vitamin C dosis tinggi dengan pewarnaan HE......................................... 26

Gambar 7. Grafik degenerasi hidrofis, degenerasi lemak, inti piknotik sel hati ikus

betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi...............27

Gambar 8. Grafik nekrosis, kongesti sinusoid dan infiltrasi sel radang hati tikus

betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi......,.......28 Gambar 9. Histologi ginjal dengan pewarnaan HE ....................................................28

Gambar 10. Histologi ginjal dengan pewarnaan HE..............................................,....29

Gambar11. Histologi tulang femur yang dipotong memanjang dengan

pewarnaan HE..........................................................................................30

ix

DAFTAR LAMPIRAN

Hal

Instrumen Penelitian....................................................................................32

Personalia Tim Peneliti................................................................................33

1

BAB I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kesehatan adalah aset paling berharga bagi kita karena dengan tubuh yang

sehat kita bisa melakukan aktivitas sehari-hari. Untuk menjaga kesehatan berbagai

upaya dilakukan, mulai dari olahraga, yoga, makan makanan bergizi, minum jamu,

minum vitamin dan juga beberapa jenis suplemen penambah vitalitas tubuh.

Salah satu vitamin yang dibutuhkan untuk menjaga kesehatan tubuh adalah

vitamin C. Fungsi vitamin C bagi tubuh antara lain; meningkatkan sistem imunitas

(daya tahan) tubuh, mempercepat proses penyembuhan serta membuat kulit lebih

segar dan cerah (Aquirreand May, 2008). Bagi beberapa kaum perempuan manfaat

vitamin C untuk membuat kulit cerah dan bersih menjadi daya tarik tersendiri. Secara

alami vitamin C didapatkan dari makanan seperti sayuran dan buah-buahan;

contohnya bayam, daun katuk, selada, jeruk, mangga, jambu biji, nanas dan lain

sebagainya. Namun, banyak dari mereka yang kurang menyukai buah-buahan dan

sayur-sayuran untuk memenuhi kebutuhan akan vitamin C, mereka memilih

suplemen vitamin C yang dijual ditoko-toko obat. (Anonimus, 2013a).

Manfaat vitamin C untuk meningkatkan daya tahan tuhuh memang sudah tidak

diragukan lagi. Dengan antioksidan yang kuat, vitamin C mampu melawan radikal

bebas yang masuk ke dalam tubuh baik yang datang dari luar tubuh maupun hasil

metabolisme dari sel kita sendiri. Sedangkan manfaatnya untuk mengencangkan dan

mencerahkan kulit terjadi karena vitamin C merangsang pembentukan kolagen, suatu

protein ekstraseluler yang berperan dalam mengencangkan sel. Vitamin C

menghambat kerja enzim tirokinase yang berperan dalam menghambat pembentukan

pigmen kulit sehingga kulit menjadi lebih cerah dan kencang (Naidu, 2003).

Saat ini untuk mendapatkan kulit cerah dan bersih dengan cara injeksi vitamin

C sudah banyak ditawarkan baik oleh dokter kulit maupun oleh praktisi-praktisi

kecantikan. Harganya pun terjangkau mulai Rp 100.000 sampai Rp 200.000 perampul

untuk sekali suntik. Untuk sekali injeksi vitamin C dosis yang diberikan sekitar

1000–4000 mg. Sedangkan dosis vitamin C yang disarankan untuk menjaga

kesehatan sekitar 50- 75 mg/ hari (Anonimus, 2013b).

2

Vitamin C adalah vitamin yang larut dalam air, artinya kelebihan vitamin ini

tidak bisa disimpan oleh tubuh seperti vitamin A,D,E dan K yang larut dalam lemak,

sehingga bila kadar vitamin C berlebih maka akan dikeluarkan dari tubuh melalui

ginjal. Oleh karena itu disarankan untuk mengkonsumsi vitamin C setiap hari sesuai

kebutuhan (Dwi Rahayu, 2013). Jadi, dosis vitamin C yang diberikan melalui injeksi

vitamin C sangat tinggi dibandingkan dengan dosis normal yang diperlukan sehingga

akan membuat tubuh dan ginjal bekerja lebih berat untuk mengeluarkan kelebihan

vitamin tersebut dari tubuh. Selain itu, diduga pemberian dosis tinggi vitamin C dalam

jangka panjang menyebabkan pembentukan batu ginjal dan beberapa efek negatif

dari injeksi vitamin C yang ditulis oleh media on line antara lain dapat menyebabkan

aborsi, mens tidak teratur, menopause dini serta maag (Anonimus, 2013c).

Oleh karena itu, untuk membuktikan dugaan tersebut perlu dilakukan

penelitian mendalam mengenai efek samping injeksi vitamin C dosis tinggi terhadap

tubuh dengan memakai tikus betina sebagai hewan model.

3

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Vitamin C

Selain memerlukan karbohidrat, lemak dan protein, tubuh juga memerlukan

vitamin dan mineral. Meski diperlukan dalam jumlah yang sedikit, namun mineral

dan vitamin mempunyai beberapa peran penting dalam metabolisme tubuh. Salah

satu vitamin yang kita perlukan dalam tubuh adalah vitamin C. Vitamin yang larut

dalam air ini, dalam nama kimianya juga dikenal dengan nama asam askorbat.

Vitamin C ini termasuk dalam salah satu golongan antioksidan kuat yang dapat

melawan berbagai radikal bebas ekstraseluler. Karakteristik dari vitamin ini adalah

mudah teroksidasi oleh panas, cahaya maupun logam. Dengan kata lain vitamin ini

mudah sekali rusak (Kim et al. 2002).

Sejarah penemuan vitamin C dimulai ketika Albert Szent Gyorgyi pada tahun

1928–1932 berhasil mengisolasi asam askorbat yang sekarang dikenal dengan nama

vitamin C, dan menyebabkan dia dianugrahi penghargaan nobel dalam bidang

fisiologi dan kedokteran tahun 1937 (Gyorgi AS. 1931.). Beberapa peran penting

vitamin C dalam tubuh adalah menjaga dan meningkatkan sistem imunitas sehingga

mampu melawan infeksi penyakit yang masuk ke dalam tubuh (Naidu KA. 2003.)

.

Gambar 1. Rumus Kimia Vitamin C

Asam dehidroaskorbat (DHA) adalah bentuk asam askorbat (vitamin C) yang

teroksidasi. Asam dehidroaskorbat dapat digunakan sebagai suplemen pangan vitamin

C. Sebagai bahan kosmetik, asam dehidroaskorbat digunakan untuk memperbaiki

penampilan kulit (Kits, 2012).

4

Makanan yang menjadi sumber vitamin C adalah sayuran dan aneka jenis buah

segar diantaranya; tomat, kentang, asparagus, cabe, stroberi, jeruk, jambu biji,

mangga, nanas, kol, susu, mentega, ikan dan hati (Berhnar, 1994).

Kebutuhan setiap orang akan vitamin C bervariasi tergantung dari umur, status

kesehatan dan kebiasaan setiap orang. Orang yang mempunyai kebiasaan merokok,

minum alkohol, mengkonsumsi obat tertentu seperti obat anti kejang, obat tidur, obat

kontrasepsi oral, berpengaruh terhadap kebutuhannya akan dosis vitamin C yang

diperlukan. Selain itu, keadaan sakit, olah raga, demam akan meningkatkan kebutuhan

vitamin C (Kim et.al. 2002).

Vitamin C di dalam tubuh diperlukan untuk menjaga struktur kolagen, suatu

protein ekstraseluler yang menghubungkan semua serabut tubuh yang terdapat pada

sel kulit, tulang, tulang rawan dan jaringan lain di dalam tubuh. Struktur kolagen yang

baik membuat kulit terlihat kencang, tulang kuat, pendarahan kecil dan luka menjadi

ringan. Sebagai antioksidan, vitamin C mampu menangkal dan menetralisir semua

radikal bebas di seluruh tubuh. Vitamin C juga mempercepat penyerapan zat besi dan

mempertajam kesadaran. Melalui efek pencahar, vitamin C mampu mempercepat

pembuangan feses atau kotoran dari tubuh.

Kekurangan vitamin C atau yang dikenal dengan istilah hipoascorbemia akan

menyebabkan beberapa gejala seperti; pilek, bibir pecah-pecah, sariawan, kulit kasar,

gigi mudah goyang dan lepas karena gusi tidak sehat, otot lemah, radang sendi,

pendarahan di bawah kulit sekitar mata dan gusi serta mudah mengalami depresi.

Kekurangan vitamin C pada fase remaja juga mengakibatkan pertumbuhan tulang

berhenti. Sel tulang epipise terus berploriferasi namun tidak ada kolagen baru yang

terbentuk sehingga tulang akan menjadi mudah rapuh. Penyakit lain yang juga

berhubungan dengan kekurangan vitamin C adalah kolesterol tinggi dan jantung

(Daviset.al. 1991 )

Vitamin C mudah diabsorbsi secara aktif dan mungkin pula secara difusi pada

bagian atas usus halus lalu masuk ke peredaran darah melalui vena porta. Rata-rata

arbsorbsi adalah 90% untuk konsumsi diantara 20-120 mg/hari. Konsumsi tinggi

sampai 12 gram hanya diarbsorbsi sebanyak 16%. Vitamin C kemudian dibawa ke

semua jaringan. Konsentrasi tertinggi adalah di dalam jaringan adrenal, pituitary, dan

5

retina. Vitamin C di ekskresikan terutama melalui urin,sebagian kecil di dalam tinja

dan sebagian kecil di ekskresikan melaului kulit (Jackson et.al, 2002).

Kelebihan vitamin C yang dikonsumsi melalui makanan tidak menimbulkan

gejala yang berarti, namun mengkonsumsi vitamin C dalam bentuk suplemen dosis

tinggi akan menyebabkan gejala hiperoksaluria dan meningkatkan resiko terkena batu

ginjal. Kelebihan konsumsi vitamin C juga mengakibatkan gangguan percernaan,

kram perut, mual, gas lambung berlebih, dan diare (Anonim, 2013d). Parisa dan

Siamak (2010) melaporkan bahwa konsumsi vitamin C (asam askorbat) dalam jangka

waktu yang panjang menyebabkan tikus perlakuan mengalami hiperglikemia

(diabetes) dan juga peningkatan kehilangan bobot badan.

2.2. Hati

Hati adalah salah satu organ kelenjar, yang terletak di dalam rongga perut

sebelah kanan. Hati mempunyai beberapa fungsi diantaranya; sebagai organ

detoksifikasi karena hati membantu ginjal karena hati memecah beberapa senyawa

racun menjadi urea, amonia dan asam urat. Berbagai jenis fungsi hati dijalankan oleh

sel hati yang disebut dengan sel hepatosit. Lobus hati terbentuk dari sel parenkimal

dan sel non-parenkimal.Sel parenkimal pada hati disebut hepatosit, menempati sekitar

80% volume hati dan melakukan berbagai fungsi utama hati. 40% sel hati terdapat

pada lobus sinusoidal (Kmiec, 2001).

Lumen lobus terbentuk dari SEC dan ditempati oleh 3 jenis sel lain, seperti sel

Kupffer, sel Ito, limfosit intrahepatik seperti sel pit. Sel non-parenkimal menempati

sekitar 6,5% volume hati dan memproduksi berbagai substansi yang mengendalikan

banyak fungsi hepatosit. Hati juga berperan dalam sistem kekebalan dengan

banyaknya sel imunologis pada sistem retikuendotelial yang berfungsi sebagai tapis

antigen yang terbawa ke hati melalui sistem portal hati. Perpindahan fase infeksi dari

fase primer menjadi fase akut, ditandai oleh hati dengan menurunkan sekresi albumin

dan menaikkan sekresi fibrinogen. Fasa akut yang berkepanjangan akan berakibat

pada simtoma hipoalbuminemia dan hiperfibrinogenemia (Ballmer and Studer, 1994).

Sebagai kelenjar hati menghasilkan empedu (cairan kehijauan yang terasa

pahit) yang berasal dari sel darah merah yang telah rusak atau mati. Empedu

mengandung garam empedu, bilirubin dan biliverdin. Sekresi empedu ini berguna

6

untuk pencernaan lemak. Selain empedu, hati juga menghasilkan sebagian besar asam

amino, faktor koagulan (pembeku darah), albumin, angiotensinogen, IGF-1 dan

banyak enzim lainnya Delarea et. al. 2010).

Kemampuan hati untuk melakukan regenerasi merupakan suatu proses yang

sangat penting agar hati dapat pulih dari kerusakan yang ditimbulkan dari proses

detoksifikasi dan imunologis. Regenerasi tercapai dengan interaksi yang sangat

kompleks antara sel yang terdapat dalam hati, antara lain hepatosit, sel Kupffer, sel

endotelial sinusoidal, sel Ito dan sel punca; dengan organ ekstra-hepatik, seperti

kelenjar tiroid, kelenjar adrenal, pankreas, duodenum, hipotalamus (Galun and

Axelrod, 2002).

Hati merupakan organ yang menopang kelangsungan hidup hampir seluruh

organ lain di dalam tubuh. Oleh karena lokasi yang sangat strategis dan fungsi multi-

dimensional, hati menjadi sangat rentan terhadap datangnya berbagai penyakit. Hati

akan merespon berbagai penyakit tersebut dengan meradang, yang disebut hepatitis.

Seringkali hepatitis dimulai dengan reaksi radang patobiokimiawi yang disebut

fibrosis hati.(Sebastiana, 2009). Untuk mengetahui adanya kerusakan hati dilakukan

beberapa tes darah sederhana seperti uji kadar spartate aminotransferase (AST atau

SGOT) dan alanine aminotransferase (ALT atau SGPT). Enzim-enzim ini

biasanya terkandung dalam sel-sel hati. Jika hati terluka, sel-sel hati menumpahkan

enzim-enzim kedalam darah, menaikan tingkat-tingkat enzim dalam darah dan

menandai kerusakan hati.(Ashoka Babu et al., 2012).

2.3. Ginjal

Ginjal adalah organ ekskresi dalam vertebrata yang berbentuk mirip kacang.

Sebagai bagian dari sistem urin, ginjal berfungsi menyaring kotoran (terutama urea)

dari darah dan membuangnya bersama dengan air dalam bentuk urin. Ginjal adalah

sepasang organ saluran kemih yang terletak di rongga retroperitoneal bagian atas.

Bentuknya menyerupai kacang dengan sisi cekungnya menghadap ke medial.

Bagian paling luar dari ginjal disebut korteks, bagian lebih dalam lagi disebut

medulla. Bagian paling dalam disebut pelvis. Pada bagian medulla ginjal manusia

dapat pula dilihat adanya piramida yang merupakan bukaan saluran pengumpul.

Ginjal dibungkus oleh jaringan fibros tipis dan mengkilap yang disebut kapsula

7

fibrosa ginjal dan diluar kapsul ini terdapat jaringan lemak perirenal. Di sebelah atas

ginjal terdapat kelenjar adrenal. Ginjal dan kelenjar adrenal dibungkus oleh fasia

gerota. Unit fungsional dasar dari ginjal adalah nefron yang dapat berjumlah lebih

dari satu juta buah dalam satu ginjal normal manusia dewasa. Nefron berfungsi

sebagai regulator air dan zat terlarut (terutama elektrolit) dalam tubuh dengan cara

menyaring darah, kemudian mereabsorpsi cairan dan molekul yang masih diperlukan

tubuh. Molekul dan sisa cairan lainnya akan dibuang. Reabsorpsi dan pembuangan

dilakukan menggunakan mekanisme pertukaran lawan arus dan kotranspor. Hasil

akhir yang kemudian diekskresikan disebut urine. Sebuah nefron terdiri dari sebuah

komponen penyaring yang disebut korpuskula (atau badan Malphigi) yang dilanjutkan

oleh saluran-saluran (tubulus). Setiap korpuskula mengandung gulungan kapiler darah

yang disebut glomerulus yang berada dalam kapsula Bowman. Setiap glomerulus

mendapat aliran darah dari arteri aferen. Dinding kapiler dari glomerulus memiliki

pori-pori untuk filtrasi atau penyaringan. Darah dapat disaring melalui dinding

epitelium tipis yang berpori dari glomerulus dan kapsula Bowman karena adanya

tekanan dari darah yang mendorong plasma darah. Filtrat yang dihasilkan akan masuk

ke dalan tubulus ginjal.

Seperti yang kita ketahui bahwa Ginjal termasuk organ penting yang memiliki

fungsi , yaitu menyaring dan mengeluarkan racun maupun kelebihan mineral dari

dalam tubuh melalui urin. Jika fungsi ginjal terganggu akibat peradangan atau karena

penyakit batu ginjal maka dengan sendirinya tubuh akan mengalami keracunan.

Dalam dunia kedokteran, kasus penyakit batu ginjal merupakan penyakit yang

relatif tinggi jumlah penderitanya khususnya di Indonesia. Batu ginjal sering disebut

nephrolithiasis atau renal calculi merupakan massa keras yang mengkristal seperti

batu batu kecil yang dapat terbentuk pada bagian saluran kencing dimana saja

termasuk pada kandung kemih, dalam ginjal yaitu di renal pelvis dan calix renalis.

Terbentuknya kristalisasi itu karena kadar urine yang terlalu pekat karena kurangnya

mengkonsusmsi air putih setiap hari sehingga zat-zat yang ada di dalam urine

membentuk kristal batu. Hal-hal lain yang dapat menjadi penyebab batu ginjal adalah

adanya infeksi, obstruksi, kelebihan sekresi hormon paratiroid, peningkatan kadar

asam urat, terlalu banyak menkonsumsi vitamin D atau kalsium yang tidak larut

dengan sempurna (Multaram, 2013).

8

Selain itu, indikasi adanya kerusakan atau penurunan fungsi ginjal bisa dilihat

dari kadar kreatinin plasma yang meningkat. Hal ini sebagai akibat ketidakmampuan

ginjal mengeluarkan kreatinin ke dalam urin dan dalam jumlah besar kreatinin masuk

kembali ke dalam darah hingga kadarnya dalam plasma meningkat di atas batas

normal (Soesanti dan Darmawan, 2009).

2.4. Organ Reproduksi Betina

Organ reproduksi betina terdiri atas organ reproduksi primer dan organ

reproduksi sekunder. Organ reproduksi primer adalah ovarium sedangkan organ

reproduksi sekunder adalah saluran reproduksi yang terdiri dari tuba fallopi (oviduct),

uterus, serviks, vagina dan vulva. Fungsi organ sekunder ini adalah menerima dan

menyalurkan sel-sel kelamin jantan dan betina, memberi makan dan melahirkan

individu baru (Toelihere 1985) .

Ovarium adalah alat reproduksi primer karena berfungsi sebagai penghasil sel

telur (ovum) dan hormon. Ukurannya sangat bergantung pada umur dan status

reproduksi betina sedangkan bentuknya bervariasi sesuai dengan spesies. Dua

komponen pada ovarium yang sangat penting adalah follikel dan korpus luteum

(Adelien, 2001).

Hormon yang dihasilkan oleh ovarium adalah estrogen dari sel-sel folikel dan

progesteron dari sel-sel korpus luteum. Hormon ini berperan penting dalam

menyiapkan alat-alat reproduksi untuk kebuntingan dan memelihara kandungan

sampai melahirkan anak. Proses produksi hormon ovarium dikendalikan oleh hormon

gonadotrofin dari hipofise seperti : FSH, LH.LTH atau prolaktin yang merangsang

pertumbuhan follikel, menyebabkan ovulasi dan pembentukan korpus luteum serta

menyebabkan korpus luteum bersekresi (Djanuar 1985).

9

BAB III. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN

3.1 . Tujuan Penelitian

3.1.1. Tujuan umum :

Mengetahui efek samping dari injeksi vitamin C dosis tinggi dalam jangka

waktu yang lama terhadap kesehatan .

3.1.2 Tujuan khusus

1. Untuk mengetahui gambaran histologis hati tikus betina yang diinjeksi dengan

vitamin C dosis tinggi.

2. Untuk mengetahui kadar SGPT dan SGOT plasma darah sebagai indikator kerja

hati tikus betina yang diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi.

3. Untuk mengetahui gambaran histologis ginjal tikus betina yang diinjeksi

dengan vitamin C dosis tinggi.

4. Untuk mengetahui kadar kreatinin plasma darah sebagai indikator fungsi ginjal

tikus betina yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi.

5. Untuk mengetahui kepadatan tulang dengan melihat histologi tulang yang

diinjeksi dengan vitamin C dosis tinggi.

6. Untuk mengetahui kemampuan reproduksi tikus betina yang diinjeksi vitamin C

dosis tinggi.

3.2. Manfaat Penelitian

• Dengan melakukan penelitian ini diharapkan diperoleh data ilmiah tentang

dampak injeksi vitamin C dosis tinggi dalam jangka waktu lama terhadap

kesehatan tubuh.

• Kalau terbukti injeksi vitamin C dosis tinggi dalam jangka waktu panjang

memberikan dampak yang buruk terhadap kesehatan, maka hasil penelitian ini

bisa dipakai acuan bagi praktisi kecantikan dalam menentukan dosis vitamin

C yang aman bagi konsumen.

• Selain itu, diharapkan dapat memberikan edukasi bagi masyarakat bila ingin

melakukan injeksi vitamin C dosis tinggi.

10

BAB IV. METODE PENELITIAN

Tahun I (2014)

3.1 Bahan Penelitian

3.1.1 Rancangan penelitian

Rancangan yang digunakan dalam penelitian ini adalah rancangan acak

lengkap (RAL) dengan perlakuan lama injeksi vitamin C dosis tinggi yang berbeda,

yaitu lama injeksi 30 hari (P1), lama injeksi 50 hari (P2), dan lama injeksi 70 hari (P3),

lama injeksi 90 hari (P4) dan kontrol (P0) serta ulangan 10 kali sehingga hewan

model yang dipakai sebanyak 50 ekor.

Tabel 1. Pemberian perlakuan lama injeksi vitamin C dosis tinggi

Perlakuan Pada tikus I II III IV V

Kontrol 2 ekor 2 ekor 2 ekor 2 ekor 2 ekor

Penyuntikan vitamin C selama 30 hari 2 ekor 2 ekor 2 ekor 2 ekor 2 ekor

Penyuntikan vitamin C selama 50 hari 2 ekor 2 ekor 2 ekor 2 ekor 2 ekor

Penyuntikan vitamin C selama 70 hari 2 ekor 2 ekor 2 ekor 2 ekor 2 ekor

Penyuntikan vitamin C selama 90 hari 2 ekor 2 ekor 2 ekor 2 ekor 2 ekor

3.1.2 Bahan penelitian

Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah vitamin C dosis

tinggi (4000 mg/sekali injeksi) untuk manusia. Hewan model yang digunakan adalah

tikus betina dewasa usia 3-4 bulan dengan berat badan antara 150-200 gram. Dosis

yang digunakan dikonversikan dari dosis yang digunakan pada manusia ke tikus.

Faktor konversi dari tikus ke manusia adalah 0.14 Berat badan wanita dewasa yang

diinjeksi diperkirakan kurang lebih 70 kg, sehingga dosis vitamin C yang diberikan

pada tikus adalah 0.14 x 0.02 x 4000 = 11,2 mg/sekali suntik/ ekor.

3.2 Prosedur Penelitian

3.2.1 Perlakuan pada hewan uji

Prosedur penelitian dapat dilihat pada bagan alur penelitian. Sebanyak 50 ekor

tikus betina berumur 3–4 bulan diukur berat badan awalnya, diberi diet formula

standar dan minum air secara ad libitum serta diaklimatisasi selama 4 minggu,

kemudian hewan uji dibagi secara random menjadi 5 kelompok yaitu: P0 = kontrol,

11

kelompok hewan tidak mendapat injeksi vitamin C; P1 = kelompok hewan yang

mendapat injeksi vitamin C selama 30 hari; P2 = kelompok hewan yang mendapat

injeksi vitamin C selama 50 hari; P3 = kelompok hewan yang mendapat injeksi

vitamin C selama 70 hari; P4 = kelompok hewan yang mendapat injeksi vitamin C

selama 90 hari. Injeksi vitamin C dilakukan secara intramuskular dengan jarum suntik

ukuran 1 ml. Injeksi dilakukan 2 hari sekali sesuai lama waktu perlakuan

3.2.2. Koleksi Sampel

Setelah perlakuan injeksi vitamin C selesai, tikus dibius dengan penyuntikan

xylasin (20 mg/kg) dan ketamin (10 mg/kg) secara intramuskuler. Pada keadaan

terbius, darah diambil dari jantung dengan jarum 1 ml kemudian darah dimasukkan

dalam tabung yang sudah diisi heparin untuk mencegah pembekuan darah. Darah

disentrifuge untuk mendapatkan plasma darah dengan kecepatan 1200 rpm selama 10

menit. Plasma yang didapat dipipet dan ditaruh dalam tabung efendov dan

dimasukkan ke dalam refrigenerator sampai siap untuk diuji. Sampel lain seperti kulit,

tulang, hati dan ginjal yang akan dibuat sayatan histologis difiksasi terlebih dahulu

dalam larutan fiksatif formalin 10%.

3.2.3 Proses pembuatan blok parafin dan preparat histologi

Potogan hati dan ginjal dimasukkan ke dalam tissue casse, kemudian dilakukan

proses dehidrasi di dalam larutan etanol bertingkat 70%, 80%, 95%, dan alkohol

absolut dua kali pemindahan, kemudian dilanjutkan dengan proses penjernihan

(clearing) dengan larutan xilol tiga pemindahan, masing-masing tahap berlangsung

selama 60 menit pada suhu kamar. Proses selanjutnya yaitu infiltrasi parafin dengan

memasakkan jaringan pada parafin cair (suhu 60ºC) tiga kali pemindahan masing-

masing selama 45 menit. selanjutnya jaringan dibenamkan di dalam cetakan berisi

parafin cair, kemudian didinginkan dalam suhu kamar sehingga menjadi blok parafin.

Blok parafin disayat setebal 5µm dengan menggunakan rotary microtome.

kemudian sayatan diletakkan dipermukaan air hangat dengan suhu 45ºc dan

ditempelkan pada gelas obyek yang telah dilapisi gelatin. Preparat dikeringkan

dengan cara diletakkan secara vertikal, kemudian diletakkan pada slide warmer

sampai menempel pada objeck glass.

12

3.2.4. Pewarnaan Hematoksilin Eosin (HE)

Potongan jaringan dalam parafin yang akan diwarnai dengan hematoxilin-eosin

diatur dalam rak untuk pewarnaan, kemudian diinkubasi pada suhu 60ºC selama 45

menit, setelah itu diletakkan pada suhu ruangan sampai dingin. Selanjutnya dilakukan

deparafinisasi melalui tahap-tahap pelarutan parafin dalam xilol sebanyak 3 kali,

kemudian dilanjutkan dengan proses rehidrasi dalam alkohol bertingkat 100%, 95%,

dan 80%, 70%m masing-masing tahap berlangsungselama 5 menit, kemudian

dimasukkan dalam akuades selama 10 celup atau sampai alkohol larut.

Proses selanjutnya adalah pewarnaan dalam hematoksilin dengan merendam

slide dengan larutan hematoxilin selama 5 menit kemudian dicuci pada pada air

mengalir selama 5 menit, dan dilanjutkan dengan pewarnaan menggunakan eosin

selama 3 menit, Setelah diwarnai dalam eosin, slide dimasukkan dalam larutan

alkohol bertingkat dari 70%, 80%, 90%, sampai 100% masing-masing selama 10

celup., kemudian dilanjutkan dengan proses clearing menggunakan xilol sebanyak

dua kali masing-masing selama 2 menit, setelah itu preparat ditutup dengan kaca

penutup dengan media balsam kanada. Dan preparat siap untuk diamati.

3.2.5. Penentuan Kadar SGOT- SGPT Plasma

Penentuan kadar Serum glutamate oxalloacetate transaminase (SGOT) dan

Serum glutamate pyruvate transaminase (SGPT) plasma dilakukan di Lab Kesehatan

Daerah Bali Denpasar sesuai dengan standar prosedur dengan memakai kit standar

(Ashoka Babu V.L et al. 2012).

3.2.7. Penentuan Kadar Kreatin Plasma

Penentuan kadar kreatinin plasma dilakukan di Lab Kesehatan Daerah Bali

Denpasar sesuai dengan standar prosedur dengan memakai kit standar (Ashoka Babu

V.L et al. 2012).

3.2.8. Alur Penelitian

Untuk lebih mempermudah dalam pelaksanaan penelitian maka dibuat alur

penelitian yang ditunjukkan dengan bagan alu Lab Kesehatan Daerah Bali Denpasar

13

sesuai dengan standar prosedur dengan memakai kit standar (Ashoka Babu V.L et al.

2012).r penelitian (gambar 2 dan 3).

Sediaan histologi hati

Sediaan histologi ginjal

Penentuan kadar SGOT,

SGPT dan Kreatin

Kadar Kolagen kulit, tulang

Pemeliharaan hewan, aklimatisasi, berat badan awal

Persiapan kandang, vitamin C, zat-zat Kimia

Injeksi vitamin C dosis tinggi sesuai lama perlakuan

Pengamatan

Analisis Data

Berat badan akhir, pembedahan, plasma darah,

organ hati, ginjal, kulit, tulang

Kemampuan Reproduksi

Siklus estrus

Kadar Estrogen,Progesteron

Perkembangan embrio

Jumlah anak

Tahun I Tahun II

Pengamatan

Analisis Data

Gambar 2. Diagram alir penelitian selama 2 tahun

14

Tulang:

Sediaan Histologi

tulang

Pemeliharaan hewan, aklimatisasi, berat badan awal

Persiapan kandang, vitamin C, zat-zat Kimia

Injeksi vitamin C dosis tinggi sesuai lama perlakuan

Pengamatan

Analisis Data

Berat badan akhir, pembedahan, plasma darah,

organ hati, ginjal, kulit, tulang

Ginjal :

Sediaan histologi ginjal

Penentuan Kreatin

Hati:

Sediaan histologi hati

Penentuan kadar:

- SGOT

- SGPT

Kadar kolagen kulit, tulang ?

Histologis hati?

Kadar SGOT, SGPT plasma?

Histologis ginjal ?

Kadar kreatin plasma ?

Gambar 3. Diagram alir Pelaksanaan Penelitian tahun pertama

3.3 Analisis Data

Data yang didapatkan dianalisis secara statistika dengan menggunakan

software SPSS dan bila terdapat pengaruh nyata atau sangat nyata akan dilanjutkan

dengan uji Duncan pada taraf α 0.05 dan α 0.01.Dan bila data tidak terdistribusi

secara normal maka diuji dengan Test Kruskal Wallis.

Tahun ke-2 (2014)

Pada tahun ke 2 dilakukan uji profil kadar Estrogen, Progesteron, serta

kemampuan reproduksi tikus betina. Hal ini dilakukan untuk mengetahui

kemampuan reproduksi tikus betina yang sudah diinjeksi vitamin C dosis tinggi

dengan melihat panjang siklus estrusnya, melihat perkembangan embrio, ada atau

15

tidaknya embrio yang aborsi serta jumlah anak yang dihasilkan oleh tikus betina yang

mendapatkan injeksi vitamin C dosis tinggi dalam jangka wangku yang lama.

TARGET ATAU INDIKATOR KEBERHASILAN

Dengan melakukan penelitian ini diharapkan bisa mendapatkan gambaran

tentang efek samping injeksi vitamin C dosis tinggi dalam jangka waktu yang lama

terhadap kesehatan tubuh. Target tahun pertama yaitu melihat gambaran histologi dari

hati, ginjal, menentukan kadar SGOT, SGPT, kreatin serta histologi tulang tulang.

Tahun kedua menentukan kemampuan reproduksi dari tikus betina tersebut melalui

siklus estrus, profil estrogen, progesteron perkembangan embrioada atau tidaknya

aborsi embrio, serta jumlah anak yang dihasilkan.

Adapun garis besar penelitian selama 2 tahun tercantum pada Tabel 2.

Tabel 2. Tabel indikator pencapaian

Tahun Pertama Luaran Indikator capaian

Histologi hati Kerusakan sel hati Histologi ginjal

Histologi tulang

Kerusakan sel ginjal,terbentuknya batu ginjal

Penurunan kepadatan tulang Kadar SGOT, SGPT Peningkatan kadar SGOT, SGPT

Kadar Kreatin Peningkatan kadar kreatin

Tahun Kedua Luaran Indikator capaian

Siklus estrus Perpanjangan Siklus estrus Perkembangan Embrio Aborsi, cacat embrio

Jumlah Anak Penurunan jumlah anak Profil estrogen, progesterone Penurunan kadar estrogen, progesteron

16

BAB V. HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1. Kadar SGOT, SGPT dan Kreatinin Plasma

Tabel 3. Uji ANOVA dan standar error kadar SGOT plasma tikus betina (Mus

musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan

uji Duncans

No Perlakuan Rata-rata

Kadar SGOT(U/L)

1 K (Kontrol) 158.4 ± 315 a

2 P1 (30 hari) 108.0 ± 50.79 b

3 P2 (50 hari) 98.0 ± 50.69 b c

4 P3 (70 hari) 81.0 ± 99.11 b c

5 P4 (90 hari) 77.4 ± 49.33 b

Kadar SGOT dengan uji ANOVA terdapat perbedaan nyata (P=0.009) antar

perlakuan dan kontrol

Tabel 4. Uji Kruskal Wallis dan rerata kadar SGPT plasma tikus betina (Mus

musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi

No Perlakuan Ranking Mean Chi Square P(Signifikan) Rata-rata

1 K (Kontrol) 15.10

8.152 0.86 315.6

2 P1 (30 hari) 18.40

116.0

3 P2 (50 hari) 15.30

208.0

4 P3 (70 hari) 8.70

207.0

5 P4 (90 hari) 7.50

145.0

Dari uji Kruskal Wallis kadar SGPT tidak berbeda nyata (P=0. 86)

17

Gambar 4. Grafik kadar SGOT dan SGPT plasma tikus betina (Mus musculus L.)

yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi

Tabel 5. Uji Kruskal Wallis dan rerata kadar Kreatinin plasma tikus betina (Mus

musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi

No Perlakuan Ranking Mean Chi Square P

(Signifikan)

Rata-rata

(Mg/DL)

1 K (Kontrol) 11.50

17.050 0.02 0.60

2 P1 (30 hari) 3.00

0.30

3 P2 (50 hari) 19.50

0.68

4 P3 (70 hari) 15.50

0.64

5 P4 (90 hari) 15.50

0.64

Dari uji Kruskal Wallis kadar kreatinin berbeda nyata (P=0. 002)

315.6

116

208 207

145.6158.4

10898

81 77.4

0

50

100

150

200

250

300

350

K P1 P2 P3 P4

Kadar (U/L)

Perlakuan

SGOT

SGPT

18

Gambar 5. Grafik kadar kreatinin plasma tikus betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi

5.2. Histologi Hati

Gambar 6. Gambaran histologi hati tikus betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi

vitamin C dosis tinggi dengan pewarnaan HE (pembesaran 400x insert 500X)

0.6

0.3

0.68

0.64 0.64

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

K P1 P2 P3 P4

Kreatinin

(Mg/Dl)

Perlakuan

Kreatinin

19

A.Normal B. Degenerasi hidrospis C. Inti piknotik D. Kongesti

sinusoid

E. Degenerasi lemak F. Nekrotik G. Infiltasi sel radang

5.2.1. Kelainan histologis hati yang ditemukan pada penelitian ini adalah:

degenerasi hidrofis, degenerasi lemak, inti piknotik, nekrosis, kongesti

sinusoid dan infiltrasi sel radang

Tabel 6. Uji Kruskal Wallis dan rerata degenerasi hidrospis sel hati tikus betina (Mus

musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi

No Perlakuan Ranking Mean Chi Square P

(Signifikan)

Rata-rata

1 K (Kontrol) 7.30 9.304 0.054 6.0

2 P1 (30 hari) 9.70 7.3

3 P2 (50 hari) 12.90 9.0

4 P3 (70 hari) 15.10 16.5

5 P4 (90 hari) 20.00 18.3

Dari uji Kruskal Wallis degenerasi hidropis tidak berbeda nyata (P=0. 054)

Tabel 7. Uji ANOVA dan standar error rerata degenerasi lemak, Inti piknotik, sel hati

tikus betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi

dilanjutkan dengan uji Duncans

No Perlakuan Degenerasi lemak Inti piknotik Nekrosis

1 K (Kontrol) 7.0 ± 3.0 a 9.0 ± 1.87 a 7.0 ± 2.0 a

2 P1 (30 hari) 61.0 ± 6.78 b 27.67 ± 2.81 b 26.3 ± 5.4 b

3 P2 (50 hari) 59.0 ± 5.56 b 32.00 ± 5.14 b 2 5.0 ± 3.16 b

4 P3 (70 hari) 58.0 ± 4.06 b 35.50 ± 5.33 b 24.0 ± 1.87 b

5 P4 (90 hari) 59.3 ± 11.9 b 32.46 ± 8.75 b 31.3 ± 3.39 b

Degenerasi lemak dengan uji ANOVA terdapat perbedaan nyata (P=0.000)

antar perlakuan dan kontrol.Inti piknotik dengan uji ANOVA terdapat perbedaan

nyata (P=0.016) antar perlakuan dan kontrol. Sedangkan nekrosis dengan uji

ANOVA terdapat perbedaan nyata (P=0.01) antar perlakuan dan kontrol.

20

Gambar 7. Grafik degenerasi hidrofis, degenerasi lemak, inti piknotik sel hati tikus

betina (Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi

Tabel 8. Uji ANOVA dan standar error rerata Kongesti sinusoid hati tikus betina

(Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan uji Duncans

No Perlakuan Kongesti sinusoid Infiltrasi sel radang

1 K (Kontrol) 4.2 ± 1.06 a 4.0 ± 1.00 a

2 P1 (30 hari) 6.4 ± 0.88 a b 4.3 ± 2.64 a

3 P2 (50 hari) 6.4 ± 0.93 a b 5.6 ± 0.90 a

4 P3 (70 hari) 10.46 ± 3.2 b 5.7 ± 0.75 a

5 P4 (90 hari) 4.6 ± 0.84 a 5.9 ± 0.46 a

Kongesti sinusoid hati dengan uji ANOVA terdapat perbedaan nyata

(P=0.019) antar perlakuan dan kontrol. Sedangkan infiltrasi sel radang pada hati

dengan uji ANOVA tidak terdapat perbedaan nyata (P=0.55) antar perlakuan dan

kontrol

6.0 7.39.0

16.518.3

7.0

61.059.0 58.0 59.3

9.0

27.7

32.035.5

32.5

0.0

10.0

20.0

30.0

40.0

50.0

60.0

70.0

K P1 P2 P3 P4

(%)

Perlakuan

D.Hidropis

D.Lemak

Inti Piknotik

21

Gambar 8. Grafik nekrosis, kongesti sinusoid dan infiltrasi sel radang hati tikus betina

(Mus musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi

5.3. Histologi Ginjal

Gambar 9. Histologi ginjal dengan pewarnaan HE (pembesaran 100x insert 500X)

A.Glomerulus normal B.Edema glomerulus C. Penyempitan glomerulus

D. Hemorrage

7.0

26.3

25.024.0

31.3

4.2

6.4 6.4

10.5

4.64.0 4.3

5.6 5.7 5.9

0.0

5.0

10.0

15.0

20.0

25.0

30.0

35.0

K P1 P2 P3 P4

(%)

Perlakuan

Nekrosi

22

Gambar 10. Histologi ginjal dengan pewarnaan HE (pembesaran 400x) insert 300x)

A.Endapan protein di tubulus B. Inti piknotik C. Kongesti glomerulus D.Infiltasi sel radang E. Degenerasi lemak di tubulus

5.3.1 Kelaian Histologi ginjal yang ditemukan dalam penelitian ini adalah :

Edema Glomelurus, Penyempitan kapsula bowman, Kongesti glomelurus, Endapan

protein di tubulus, Degenerasi di tubulus, Inti piknotik di tubulus, Infiltrasi sel radang,

Hemorragi.

Tabel 9. Uji ANOVA dan standar error Edema Glomelurus, Penyempitan kapsula

bowman, Kongesti glomelurus Histologi ginjal tikus betina (Mus musculus

L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan uji Duncans

No Perlakuan Edema glomelurus Penyempitan

kapsula bowman

Kongesti

glomelurus (%)

Endapan

protein tubulus

1 K (Kontrol) 13.0 ± 3.0 a 12.0 ± 2.54 a 18.94 ± 4.06 a 6.0 ± 1.0 a

2 P1 (30 hari) 46.0 ± 6.52 b 59.48 ± 11.61 b 71.02 ± 12.65 b 14.8 ±2.74 b

3 P2 (50 hari) 60.0 ± 18.7 b 60.00 ± 18.70 b 70.00 ± 20.00 b 19.0 ± 2.91 b

4 P3 (70 hari) 60.0 ± 4.08 b 65.00 ± 11.30 b 72.66 ± 3.82 b 18.0 ±1.57 b

5 P4 (90 hari) 64,3 ± 21.06 b 68.33 ± 6.43 b 70.00 ± 20.0 b 70.00 ± 20.0 b

23

Edema glomelurus dengan uji ANOVA terdapat perbedaan nyata (P=0.01)

antar perlakuan dan kontrol. Penyempitan kapsula bowman dengan uji ANOVA

terdapat perbedaan nyata (P=0.018) antar perlakuan dan kontrol. Sedangkan

Kongesti glomerulus dan endapan proten di tubulus dengan uji ANOVA terdapat

perbedaan nyata dengan nilan (P=0.058) dan nilai (P=0.031).

Tabel 10. Uji ANOVA dan standar error degenerasi di tubulus, inti piknotik di

tubulus, infiltrasi sel radang, dan hemorragi ginjal tikus betina (Mus

musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan uji

Duncans

No Perlakuan Degenerasi

tubulus

Inti piknotik

tubulus

Infiltrasi sel

radang(%)

Hemorragi (%)

1 K (Kontrol) 7.0 ± 1.22 a 9.0 ± 1.87 a 6.0 ± 1.0 a 6.0 ± 2.46 a

2 P1 (30 hari) 4470 ± 3.88 b 41.98 ± 4.90 b 8.66 ± 0.97 a 16.0 ±3.67 a b

3 P2 (50 hari) 47.0 ± 3.0 b 49.00 ± 4.0 b c 11.0 ± 4.19 a 14.0 ± 2.91 b

4 P3 (70 hari) 56.0 ± 6.96 b c 57.00 ± 4.89 c 17.0 ±1.22 b 19.0 ±2.91 b

5 P4 (90 hari) 66.0 ± 8.57 c 52.0 ± 6.44 b c 10.6 ± 2.0 a 20.0 ± 4.18 b

Degenerasi tubulus dengan uji ANOVA terdapat perbedaan nyata (P=0.000)

antar perlakuan dan kontrol. Inti piknotik di sel tubulus dengan uji ANOVA terdapat

perbedaan nyata (P=0.000) antar perlakuan dan kontrol. Sedangkan Infiltrasi sel

radang dengan uji ANOVA terdapat perbedaan nyata dengan nilai (P=0.002) dan

hemorragi terdapat perbedaan dengan nilai (P=0.038).

5.4. Histologi Tulang

Gambar11. Histologi tulang femur yang dipotong memanjang dengan pewarnaan HE

(pembesaran 50x) K: ketebalan osifikasi.3333333333333

K

K

24

Tabel 11. Uji ANOVA dan standar error rerata ketebalan osifikasi tikus betina (Mus

musculus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan uji

Duncans

No Perlakuan Ketebalan Osifikasi

1 K (Kontrol) 325.74

2 P1 (30 hari) 273.54

3 P2 (50 hari) 255.30

9999 P3 (70 hari) 309.50

5 P4 (90 hari) 235.80

Ketebalan osifikasi dengan uji ANOVA tidak terdapat perbedaan nyata

(P=0.316) antar perlakuan dan kontrol.

5.5. Pembahasan

SGOT(Serum glutamate oxalloacetate transaminase) atau disebut juga

aspartate aminotransferase (AST) dan SGPT (Serum Glutamic Piruvic

Transaminase) atau disebut juga alanine aminotransferase (ALT), merupakan enzim

yang banyak terdapat di hati. Dalam uji SGOT dan SGPT, hati dapat dikatakan rusak

bila jumlah enzim tersebut dalam plasma lebih besar dari kadar normalnya.

Mekanismenya adalah zat-zat toksik atau zat-zat berlebih yang masuk ke dalam tubuh

akan dimetabolisme oleh enzim sitokrom P450 dalam hati menjadi radikal bebas.

Radikal bebas ini kemudian berikatan pada sel hepatosit pada organ hati sehingga

membran hati berubah permeabilitasnya (meningkat). Berubahnya membran sel hati

ini dapat menimbulkan dua macam konsekuensi. Pertama zat –zat dari dalam sel

keluar dengan bebas sehingga hati mengalami pengkerutan dan terjadi nekrosis.

Sebaliknya zat-zat yang berada diluar sel hati juga dapat masuk dan menyebabkan

hati menjadi besar (degenerasi hidropis) dan terjadi apoptosis.

Dalam penelitian ini kadar SGOT kontrol justru lebih tinggi (158.4 ± 315 ) di

bandingkan dengan semua perlakuan. Hal ini kemungkinan disebabkan injeksi

vitamin C dosis tinggi 11,2 mg/ ekor/ hari justru meningkatkan proses regenerasi

hepatosit sehingga menjadi lebih baik. Hasil penelitian ini sesuai dengan yang

25

dilakukan oleh Afiong and Maisie (2006) ; Jackson et.al, (2002); Vahel et al. (2011)

bahwa asam askorbat yang diberikan pada hewan coba yang mengalami beberapa

penyakit menjadi lebih baik kondisinya. Namun hasil penelitian ini tidak sesuai

dengan hipotesis awal yang diajukan. Data SGOT dapat menyimpang karena ada

kemungkinan tikus sedang mengalami gangguan juga pada organ selain hati seperti

pada otot jantung, ginjal dan otot rangka, karena sebenarnya SGOT terdapat di hampir

seluruh tubuh, berbeda dengan SGPT yang spesifik pada hati. Pada umumnya nilai tes

SGPT lebih tinggi daripada SGOT pada kerusakan parenkim hati akut, sedangkan

pada proses kronis didapat sebaliknya. Pada penelitian ini kadar SGPT plasma yang

diuji dengan Uji Kruskal Wallis karena sebaran data tidak normal menunjukkan

perbedaan yang tidak nyata ((P=0. 86).

Dari hasil pengamatan histologi hati didapatkan bahwa sel hati (hepatosit)

yang diinjeksi dengan vitamin c dosis tinggi mengalami kelainan-kelainan seperti

degenerasi hidrofis, degenerasi lemak, inti piknotik, nekrosis, kongesti sinusoid dan

infiltrasi sel radang yang lebih tinggi dibandingkan dengan sel hati kontrol. Bahkan

dari pengamatan makroskopis sudah terlihat bahwa hati tikus yang diinjeksi vitamin

c dosis tinggi menunjukkan adanya jaringan lemak yang berwarna kuning. Hal ini

diperkuat dengan dilakukannya pembuatan preparat histologi, yang menunjukkan

bahwa banyak sel hati yang mengalami degenerasi lemak pada hewan perlakuan. Di

samping itu juga banyak terdapat kongesti sinusoid hati dan infiltrasi sel radang pada

kelompok perlakuan dibandingkan kelompok kontrol. Hal ini karena sel-sel hati

hewan kelompok perlakuan banyak yang mengalami kerusakan sehingga banyak sel-

sel darah putih yang dikirim ke hati untuk membersihkan atau memakan sel-sel yang

sudah rusak tersebut.

Sedangkan kadar kreatinin plasma dalam penelitian ini yang diuji dengan Uji

Krukal Wallis dan dilanjutkan dengan uji Mann Whitney menunjukkan perbedaan

yang nyata (P=0. 002). Kadar kreatinin plasma kelompok perlakuan lebih tinggi

dibandingkan dengan kelompok kontrol. Peningkatan kadar kreatinin ini

mengindikasikan adanya penurunan fungsi pada ginjal yang diakibatkan oleh

tingginya kadar vitamin C yang harus dibuang melalui ginjal. Hal ini berkaitan

dengan sifat vitamin C yang larut dalam air sehingga lebih memperberat kerja ginjal

dibandingkan dengan fungsi hati. Hal ini diperkuat dengan hasil pengamatan pada

26

preparat histologi ginjal. Histologi ginjal tikus betina yang diinjeksi vitamin C dosis

tinggi dalam jangka waktu yang lama menunjukkan banyak terdapat kelainan-

kelainan seperti: edema glomelurus, penyempitan kapsula bowman, kongesti

glomelurus, endapan protein di tubulus, degenerasi di tubulus, inti piknotik di tubulus,

infiltrasi sel radang, dan hemorragi.

Hasil penelitian Voja et al. (2005) melaporkan bahwa konsumsi vitamin C

(asam askorbat) dalam jangka waktu yang panjang menyebabkan tikus perlakuan

mengalami hiperglikemia (diabetes) yang berkaitan dengan peningkatan tekanan

darah dan edema glomerulus. Hal-hal lain yang berkaitan dengan peningkatan kadar

kreatinin adalah : gagal ginjal akut dan kronis, nekrosis tubular akut,

glomerulonefritis, nefropati diabetik, pielonefritis, eklampsia, pre-eklampsia,

hipertensi esensial, dehidrasi, penurunan aliran darah ke ginjal (syok berkepanjangan,

gagal jantung kongestif), rhabdomiolisis, lupus nefritis, kanker (usus, kandung kemih,

testis, uterus, prostat), leukemia, penyakit Hodgkin, diet tinggi protein (mis. daging

sapi kadar tinggi, unggas, dan ikan (Wulandari dan Suwitra, 2008).

27

BAB VI. RENCANA TAHAPAN BERIKUTNYA

Pada tahun ke 2 dilakukan uji profil kadar Estrogen, Progesteron, serta

kemampuan reproduksi tikus betina. Hal ini dilakukan untuk mengetahui

kemampuan reproduksi tikus betina yang sudah diinjeksi vitamin C dosis tinggi

dengan melihat panjang siklus estrusnya, melihat perkembangan embrio serta jumlah

anak yang dihasilkan oleh tikus betina yang mendapatkan injeksi vitamin C dosis

tinggi dalam jangka wangku yang lama.

28

BAB VII. KESIMPULAN DAN SARAN

7.1. Kesimpulan

1. Kadar SGOT tikus betina (Rattus rattus L.)yang dinjeksi vitamin C dosis tinggi

mengalami penurunan dibandingkan dengan kontrol. Kadar SGPT tikus betina

yang dinjeksi vitamin C dosis tinggi mengalami perbedaan namun secara statistik

perbedaan tersebut tidak nyata. Sedangkan kadar kreatinin plasma darah betina

yang dinjeksi vitamin C dosis tinggi mengalami peningkatan dibandingkan dengan

kontrol.

2. Terjadi peningkatan kelainan histologi hati (degenerasi hidrofis, degenerasi lemak,

inti piknotik, nekrosis, kongesti sinusoid dan infiltrasi sel radang) pada tikus

betina yang yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dalam waktu yang lama.

3. Terjadi peningkatan kelainan histologi ginjal (Edema Glomelurus, Penyempitan

kapsula bowman, Kongesti glomelurus, Endapan protein di tubulus, Degenerasi di

tubulus, Inti piknotik di tubulus, Infiltrasi sel radang, Hemorragi) pada tikus betina

yang yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dalam waktu yang lama.

4. Tidak terdapat perbedaan yang nyata terhadap ketebalan osifikasi (tulang) pada

tikus betina yang yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dalam waktu yang lama.

7.2. Saran

Untuk melihat pengaruh injeksi vitamin c dosis tinggi dalam waktu yang

panjang terhadap kesehatan, maka perlu dilakukan penelitian lanjutan mengenai

efeknya terhadap sistem reproduksi dan sistem imunitas.

Ucapan Terima kasih

Penulis mengucapkan banyak terima kepada Lembaga Penelitian dan

Pengabdian kepada Masyarakat Universitas Udayana dan Dikti atas dana yang

diberikan melalalui dana Desentralisasi Hibah Bersaing tahun anggaran 2014.

29

DAFTAR PUSTAKA

Adelien T E. 2001. Pola Estradiol dan Progesteron Serum pada Tikus yang

Disuperovolasi Dikaitkan dengan Kinerja Reproduksi selama Kebuntingan.

Desrtasi Program Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.

Afiong A. Etim, Maisie H. Etukudo .2006. Ascorbic Acid Levels in Hepatitis and Non-Hepatitis Subjects in University of Calabar Teaching Hospital (UCTH),

Calabar . Pakistan Journal of Nutritionl 5( 5): 490-491

Anonimus. 2013 a. Manfaat Vitamin C Untuk Kesehatan Kulit. Available at :http://sportindo.com/special/vitaminc/ (diunduh tgl 1 Mei 2013).

Anonimus. 2013 b.Vitamin C

Available at : http://wikivitamin.com/category/vitamin-c-asam-askorbat/

Anonimus. 2013c. Tes-tes Darah Hati. .

Available at : http://www.totalkesehatananda.com/darahhati1.html

Anonimus.2 013d. Efek VitaminC Berlebih .

Available at :

http://female.kompas.com/read/2012/02/27/11044371/Efek.Jika.Kelebihan.Vitami

n.C

Anonimus. 2013e. Apa itu Kolagen.

Available at: http://www.classiccollagen.com/collagen_Page.html

Aguirre, Rene and James M. May 2008. Inflammation in the Vascular

Bed.Importance of Vitamin C. Pharmacol Ther. 119(1) : 96-103

Ashoka ,Babu V.L;Ganeshan Arunachalam, Korlakunda Narasimha,Jayaveera,Varadharajan M. Shanaz Banu. 2012. Hepatoprotective

activity of methalonic extract of Ecrobolium viride (FOR SSK ) alston roots against carbon tetrachloride induce hepatocity. IRJP , 3 (8)

Ballber and Studer H. 1994. The effect of prednisolone and a protein-deficient diet on

plasma albumin and fibrinogen in a turpentine-induced acute-phase reaction in

rats. J. Lab .Clin Med. 123(1) :117-25

Bednar C, Kies C. 1994. Nitrate and vitamin C from fruits and vegetables: Impact of

intake variations on nitrate and nitrite excretions of humans. Plant Foods Hum

Nutr Vol. 45:71-80

Davies MB, Austin J, Partridge DA. 1991. Vitamin C: Its Chemistry and

Biochemistry. The Royal Society of Chemistry: Cambridge. Hal : 97-100.

Delaere, F. Magnan, C. Mathieuk, G. 2010. Hypothalamic integration of portal

glucose signals and control of food intake and insulin sensitivity. Diabetes

Metab.36(4): 257-62

30

Djanuar R. 1985. Fisiologi Reproduksi dan Inseminasi Buatan Pada Sapi. Gajah Mada

University Press. Yogyakarta.

Dwi Rahayu I. 2013. Klasifikasi, Fungsi dan Metabolisme Vitamin. Fakultas Pertanian-Peternakan. Universitas Muhamadyah Malang.

Avialable at :

http://imbang.staff.umm.ac.id/files/2010/02/Klasifikasi_dan_Metabilisme_vita

min_imbang.pdf

Galun, E. Axelrod, JH..2002. The role of cytokines in liver failure and regeneration:

potential new molecular therapies. Biochim Biophys Acta. 1592 (3) :354-58

Gyorgi AS. 1931. Vitamin C, Muscles, and WWII. Szeged: 1931-47

James A. Jackson, Hugh D. Riordan,

Nancy L. Bramhall,

Sharon Neathery, MT.

2002. Sixteen-Year History with High Dose Intravenous Vitamin C

Treatment for Various Types of Cancer and Other Diseases. Journal of

Orthomolecular Medicine . 17( 2) :119-117

Katili, Abubakar Sidik. 2009. Struktur Dan Fungsi Protein Kolagen. Jurnal Pelangi Ilmu .2( 5)

Kembuan, M ; Wangko, Sunny; Tanudjaja, George N. 2012. Peran Vitamin C dalam

Mencegah Pigmentasi Kulit. Jurnal Biomedik Vol 4, No 3.

Kim DO, Lee KW, Lee HJ, Lee CY. 2002. Vitamin C equivalent antioxidant capacity

(VCEAC) of phenolic phytochemicals. J Agric Food Chem 50(13):3713–17.

Kitt, D.Q. 2012. Topical Dehydroascorbic Acid (Oxidized Vitamin C) Permeates

Stratum Corneum More Rapidly Than Ascorbic Acid. Thesis. Available at :

http://www.researchgate.net/publication/225274699_Topical_Dehydroascorbi

c_Acid_%28Oxidized_Vitamin_C%29_Permeates_Stratum_Corneum_More_

Rapidly_Than_Ascorbic_Acid

Kmiec Z. 2001. Cooperation of liver cells in health and disease. Anat Embriol Cell

Biol. 161 (3):1- 151

Kiyatno, Kiyatno . 2009. Antioksidan Vitamin dan Kerusakan Otot pada Aktivitas

Fisik Studi Eksperimen pada Mahasiswa JPOK-FKIP UNS Surakarta. Media Medika Indonesia. Vol.43 (6) :page 277-281

Multaram, Al. 2013. Batu Ginjal. Available at : http://www.metris-

community.com/gejalabatuginjal-penyebab-penyakitbatuginjal/

Naidu KA. 2003. Vitamin C in human health and disease is still mistery? An

Overview. J Nur. Vol. 2(7)

31

Parisa Hasanein, Siamak Shahidi .2010.The effect of long term administration of

ascorbic acid on the learning and memory deficits induced by diabetes in rat .

Tehran University Medical Journal 68(1) : 12-18

Puspita Rini, Dea. 2013. Hubungan peningkatan kadar asam urat serum

(hiperurecemia) dengan kejadian batu ginjal di RS Dr. Kanujoso Jatiwibowo Balikpapan periode Januari – Desmber 2008. Avilable at :

http://portalgaruda.org/?q=batu+ginjal&type=advanced&mod=all&ref=search&select=all&button=Search&pub=&from=1000&to=2013

Sebastiani, Geada. 2009.Non-invasive assessment of liver fibrosis in chronic liver

diseases: Implementation in clinical practice and decisional algorithms. J Gastroenterol. 15(18): 2190–2203.

Sudatri, Ni Wayan. 2010. Kadar Kolagen Kulit dan Tulang yang Disuplementasi

Somatotropin. Jurnal Biologi. XIV(1) : 10-14.

Sudatri, Ni Wayan; Iriani Setyawati. 2013. Perkembangan Sel-Sel Folikel dan Korpus

Luteum (Mus Musculus) yang Diberi Ekstrak Daun Lantoro. Laporan

Penelitian Dosen Muda.

Soesanti, N. H., Ruben D.. 2009. Pengaruh VCO terhadap hitung jenis leukosit,kadar

glukosa dan kreatinin darah Mus musculus Balb/c hiperglikemi dan

tersensitisasi ovalbumin. Bioteknologi 6 (1): 1-10

Toelihere M. 1985. Fisiologi Reproduksi Pada Ternak. Angkasa Bandung. Hal 21-50.

Wulandari, Diah Catur, Suwitra, Ketut. 2008. Pengaruh Vitamin C terhadap C-reaktive protein petanda implamasi pada gagal ginjal kronik dengan

hemodialisis regular Journal of internal medicine . 9( 3)

Vahel J. A. A., Ihsan T. Tayeb, Johnny S. 2011.Yokhana Effects of supplemental ascorbic acid on humeral immune response in broilers reared under heat-stress

condition.Roavs. Vol 1(7), 459-462.

Voja P, Zoran P. 2004. The Effect Of Ascorbic Acid On Membran Transfort Of

Glukose. Acta Medica Medianae. Vol. 43(3): 29-31.

Voja .P, Snezana C.c, Goran R., Nenad S . 2005. Antioxidant and Pro-oxidant Effect

of Ascorbic Acid. Acta. Medica Medianae. Vol. 44(1): 65-68.

Voja P., Snezana C., Vladmila B., Nenad S., Goran R. 2005. Ascorbi c Acid

Modulates Spontaneous Thymocyte Apoptosis. Acta Medica Medianae . Vol.

4

32

LAMPIRAN 1. INSTRUMEN PENELITIAN

33

LAMPIRAN 2. Personalia Tim Peneliti

No

Nama dan NIDN

Instansi Asal Bidang Ilmu Alokasi Waktu Uraian Tugas

Jam/mg bulan

1 Ni Wayan Sudatri,

SSi.,MSi./0031107102

Universitas

Udayana

Biologi/Fisiologi,

Patologi hewan

17 8 Ketua Tim

Peneliti

2 Iriani Setyawati, SSi.,

MSi./0017097401

Universitas

Udayana

Biologi/Struktur,

Teratologi Hewan

12 8 Anggota

Tim Peneliti

3 Ni Made Suartini, S.Si.,

Msi./ 0028107101

Universitas

Udayana

Biologi/ Zoologi 12 8 Anggota

Tim Peneliti

4 A.A. Istri Mas Padmiswari/

1008305009

Universitas

Udayana

Biologi 10 8 Pelaksana/

Mahasiswa

34

KADAR SGPT, SGOT DAN KREATININ PLASMA DARAH

TIKUS BETINA YANG DIINJEKSI VITAMIN C DOSIS TINGGI

Ni Wayan Sudatri1), Iriani Setyawati2), Ni MadeSuartini3)

123Jurusan Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Udayana, Bukit Jimbaran-Badung,Bali

E-mail : [email protected]

Abstract

Vitamin C is one of the vitamins that are needed to maintain a healthy body.

The function of vitamin C for the body, among others; enhance the immune system

(resistance) of the body, speed up the healing process and make skin more fresh and

bright. The purpose of this study was to determine the side effects of high-dose

injections of vitamin C in the long term on health. The design used in this study was a completely randomized design (CRD) with longer treatment injection of high doses of

vitamin C are different. namely: P0 (control), P1 (injected 30 days old), P2 (injected 50 days old), P3 (injected 70 days old) and P4 (injected 90 days old). The parameters

measured were the levels of SGOT, SGPT and creatinine in plasma. The result showed that the levels of SGOT with ANOVA showed significant differences (P =

0.009) between the treatment group and the control group, while the Kruskal Wallis test SGPT levels were not significantly different (P = 0. 86) while the Kruskall Wallis

test on serum creatinine levels showed significant differences. (P = 0. 002). SGOT

plasma levels lower than the control group while serum creatinine female rats were

injected high doses of vitamin C in the long term is higher than the control group.

Keywords: SGPT, SGOT, creatinine, vitamin c, female rats

Abstrak

Vitamin C adalah salah satu vitamin yang dibutuhkan untuk menjaga kesehatan tubuh. Fungsi vitamin C bagi tubuh antara lain; meningkatkan sistem

imunitas (daya tahan) tubuh, mempercepat proses penyembuhan serta membuat kulit lebih segar dan cerah. Tujuan penelitian ini adalah mengetahui efek samping dari

injeksi vitamin C dosis tinggi dalam jangka waktu yang lama terhadap kesehatan.

Rancangan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Rancangan Acak Lengkap

(RAL) dengan perlakuan lama penyuntikan vitamin C dosis tinggi yang berbeda.

yaitu: P0 (kontrol), P1 (lama diinjeksi 30 hari), P2 (lama diinjeksi 50 hari), P3 (lama

diinjeksi 70 hari) dan P4 (lama diinjeksi 90 hari). Parameter yang diamati adalah

kadar SGOT, SGPT dan kreatinin dalam plasma. Dari hasil penelitian didapatkan

bahwa Kadar SGOT dengan uji ANOVA menunjukkan perbedaan nyata (P=0.009)

antar kelompok perlakuan dan kelompok kontrol, sedangkan dari uji Kruskal Wallis

kadar SGPT tidak berbeda nyata (P=0. 86) sedangkan uji Kruskall Wallis pada kadar

kadar kreatinin menunjukkan perbedaan yang nyata. (P=0. 002). Kadar plasma

SGOT lebih rendah dibandingkan dengan kelompok kontrol sedangkan kadar

kreatinin tikus betina yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dalam jangka waktu

lama lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok kontrol.

Kata kunci: SGPT, SGOT, kreatinin, vitamin c, tikus betina

35

Pendahuluan

Vitamin C atau disebut juga asam askorbat merupakan salah satu vitamin

yang dibutuhkan untuk menjaga kesehatan tubuh. Fungsi vitamin C bagi tubuh antara

lain; meningkatkan sistem imunitas (daya tahan) tubuh, mempercepat proses

penyembuhan serta membuat kulit lebih segar dan cerah. Bagi beberapa kaum

perempuan manfaat vitamin C untuk membuat kulit cerah dan bersih menjadi daya

tarik tersendiri. Secara alami vitamin C didapatkan dari makanan seperti sayuran dan

buah-buahan; contohnya bayam, daun katuk, selada, jeruk, mangga, jambu biji, nanas

dan lain sebagainya. Namun, banyak dari mereka yang kurang menyukai buah-buahan

dan sayur-sayuran untuk memenuhi kebutuhan akan vitamin C, mereka memilih

suplemen vitamin C yang dijual ditoko-toko obat (Aquirreand May, 2008).

Manfaat vitamin C untuk meningkatkan daya tahan tuhuh memang sudah tidak

diragukan lagi. Dengan antioksidan yang kuat, vitamin C mampu melawan radikal

bebas yang masuk ke dalam tubuh baik yang datang dari luar tubuh maupun hasil

metabolisme dari sel kita sendiri. Sedangkan manfaatnya untuk mengencangkan dan

mencerahkan kulit terjadi karena vitamin C merangsang pembentukan kolagen, suatu

protein ekstraseluler yang berperan dalam mengencangkan sel. Vitamin C

menghambat kerja enzim tirokinase yang berperan dalam menghambat pembentukan

pigmen kulit sehingga kulit menjadi lebih cerah dan kencang (Kembuan et al., 2012;

Naidu, 2003).

Vitamin C mudah diabsorbsi secara aktif dan mungkin pula secara difusi pada

bagian atas usus halus lalu masuk ke peredaran darah melalui vena porta. Rata-rata

absorbsi adalah 90% untuk konsumsi diantara 20-120 mg/hari. Konsumsi tinggi

sampai 12 gram hanya diarbsorbsi sebanyak 16%. Vitamin C kemudian dibawa ke

semua jaringan. Konsentrasi tertinggi adalah di dalam jaringan adrenal, pituitary, dan

retina. Vitamin C di ekskresikan terutama melalui urin,sebagian kecil di dalam tinja

dan sebagian kecil di ekskresikan melaului kulit (Jackson et.al, 2002).

Vitamin C adalah vitamin yang larut dalam air, artinya kelebihan vitamin ini

tidak bisa disimpan oleh tubuh seperti vitamin A,D,E dan K yang larut dalam lemak,

sehingga bila kadar vitamin C berlebih maka akan dikeluarkan dari tubuh melalui

ginjal. Oleh karena itu disarankan untuk mengkonsumsi vitamin C setiap hari sesuai

kebutuhan (Dwi Rahayu, 2013). Kalau kita mengkonsumsi suplemen vitamin C

36

dosis tinggi atau melakukan injeksi vitamin C dosis tinggi (4000 mg/sekali suntik)

untuk membuat kulit cerah seperti yang banyak dilakukan saat ini, maka kelebihan

vitamin ini akan dibuang dari tubuh. Diduga pemberian dosis tinggi vitamin C dalam

jangka panjang menyebabkan pembentukan batu ginjal dan beberapa efek negatif

dari injeksi vitamin C yang ditulis oleh media on line antara lain dapat menyebabkan

aborsi, mens tidak teratur, menopause dini serta maag (Anonimus, 2013). Kelebihan

vitamin C yang dikonsumsi melalui makanan tidak menimbulkan gejala yang berarti,

namun mengkonsumsi vitamin C dalam bentuk suplemen dosis tinggi akan

menyebabkan gejala hiperoksaluria dan meningkatkan resiko terkena batu ginjal.

Kelebihan konsumsi vitamin C juga mengakibatkan gangguan percernaan, kram perut,

mual, gas lambung berlebih, dan diare. Parisa dan Siamak (2010) dan (Voja et al.,

2005) melaporkan bahwa konsumsi vitamin C (asam askorbat) dalam jangka waktu

yang panjang menyebabkan tikus perlakuan mengalami hiperglikemia (diabetes) dan

juga peningkatan kehilangan bobot badan.

Hati merupakan organ yang menopang kelangsungan hidup hampir seluruh

organ lain di dalam tubuh. Oleh karena lokasi yang sangat strategis dan fungsi multi-

dimensional, hati menjadi sangat rentan terhadap datangnya berbagai penyakit. Hati

akan merespon berbagai penyakit tersebut dengan meradang, yang disebut hepatitis.

Seringkali hepatitis dimulai dengan reaksi radang patobiokimiawi yang disebut

fibrosis hati.(Sebastiana, 2009). Untuk mengetahui adanya kerusakan hati dilakukan

beberapa tes darah sederhana seperti uji kadar spartate aminotransferase (AST atau

SGOT) dan alanine aminotransferase (ALT atau SGPT). Enzim-enzim ini biasanya

terkandung dalam sel-sel hati. Jika hati terluka, sel-sel hati menumpahkan enzim-

enzim kedalam darah, menaikan tingkat-tingkat enzim dalam darah dan menandai

kerusakan hati .(Ashoka Babu et al., 2012).

Selain hati, ginjal termasuk organ penting yang memiliki fungsi , yaitu

menyaring dan mengeluarkan racun maupun kelebihan mineral dari dalam tubuh

melalui urin. Jika fungsi ginjal terganggu akibat peradangan atau karena penyakit batu

ginjal maka dengan sendirinya tubuh akan mengalami keracunan. Dalam dunia

kedokteran, kasus penyakit batu ginjal merupakan penyakit yang relatif tinggi jumlah

penderitanya khususnya di Indonesia. Batu ginjal sering disebut nephrolithiasis atau

renal calculi merupakan massa keras yang mengkristal seperti batu batu kecil yang

37

dapat terbentuk pada bagian saluran kencing dimana saja termasuk pada kandung

kemih, dalam ginjal yaitu di renal pelvis dan calix renalis. Terbentuknya kristalisasi

itu karena kadar urin yang terlalu pekat karena kurangnya mengkonsusmsi air putih

setiap hari sehingga zat-zat yang ada di dalam urine membentuk kristal batu. Hal-hal

lain yang dapat menjadi penyebab batu ginjal adalah adanya infeksi, obstruksi,

kelebihan sekresi hormon paratiroid, peningkatan kadar asam urat, terlalu banyak

menkonsumsi vitamin D atau kalsium yang tidak larut dengan sempurna (Multaram,

2013).

Selain itu, indikasi adanya kerusakan atau penurunan fungsi ginjal bisa dilihat

dari kadar kreatinin plasma yang meningkat. Hal ini sebagai akibat ketidakmampuan

ginjal mengeluarkan kreatinin ke dalam urin dan dalam jumlah besar kreatinin masuk

kembali ke dalam darah hingga kadarnya dalam plasma meningkat di atas batas

normal (Soesanti dan Darmawan, 2009).

Bahan dan metode

Rancangan yang digunakan dalam penelitian ini adalah rancangan acak

lengkap (RAL) dengan perlakuan lama injeksi vitamin C dosis tinggi yang berbeda,

yaitu lama injeksi 30 hari (P1), lama injeksi 50 hari (P2), dan lama injeksi 70 hari

(P3), lama injeksi 90 hari (P4) dan kontrol (P0) serta ulangan 10 kali sehingga

hewan model yang dipakai sebanyak 50 ekor.

Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah vitamin C dosis

tinggi (4000 mg/sekali injeksi) untuk manusia. Hewan model yang digunakan adalah

tikus betina dewasa usia 3-4 bulan dengan bobot badan antara 150-200 gram. Dosis

yang digunakan dikonversikan dari dosis yang digunakan pada manusia ke tikus.

Faktor konversi dari tikus ke manusia adalah 0.14 Berat badan wanita dewasa yang

diinjeksi diperkirakan kurang lebih 70 kg, sehingga dosis vitamin C yang diberikan

pada tikus adalah 0.14 x 0.02 x 4000 = 11,2 mg/sekali suntik/ ekor.Injeksi vitamin C

dilakukan secara intramuskular dengan jarum suntik ukuran 1 ml. Injeksi dilakukan 2 hari

sekali sesuai lama waktu perlakuan.Setelah perlakuan injeksi vitamin C selesai, tikus dibius

dengan penyuntikan xylasin (20 mg/kg) dan ketamin (10 mg/kg) secara intramuskuler. Pada

keadaan terbius, darah diambil dari jantung dengan jarum suntik 1 ml kemudian darah

dimasukkan dalam tabung yang sudah diisi heparin untuk mencegah pembekuan darah. Darah

38

disentrifuge untuk mendapatkan plasma darah dengan kecepatan 1200 rpm selama 10 menit.

Plasma yang didapat dipipet dan ditaruh dalam tabung efendov dan dimasukkan ke dalam

refrigenerator sampai siap untuk diuji.

Penentuan kadar Serum glutamate oxalloacetate transaminase (SGOT) dan Serum

glutamate pyruvate transaminase (SGPT)dan kadar kreatinin plasma dilakukan di Lab

Kesehatan Daerah Bali Denpasar sesuai dengan standar prosedur dengan memakai kit standar

(Ashoka Babu et al. 2012).

Data yang didapatkan dianalisis secara statistika dengan menggunakan software

SPSS dan bila terdapat pengaruh nyata atau sangat nyata akan dilanjutkan dengan uji Duncan

pada taraf α 0.05 dan α 0.01.Dan bila data tidak terdistribusi secara normal maka diuji dengan

Test Kruskal Wallis dan dilanjutkan dengan uji Mann Whitney.

Hasil

Dari hasil penelitian ini kadar SGOT plasma tikus betina (Rattus rattus L.) yang

diinjeksi vitamin C dosis tinggi disajikan pada tabel 1.

Tabel 1. Uji ANOVA dan standar error kadar SGOT plasma tikus betina (Rattus rattus L.)

yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi dilanjutkan dengan uji Duncans

No Perlakuan Rata-rata Kadar

SGOT(U/L)

1 K (Kontrol) 158.4 ± 315 a

2 P1 (30 hari) 108.0 ± 50.79 b

3 P2 (50 hari) 98.0 ± 50.69 b c

4 P3 (70 hari) 81.0 ± 99.11 b c

5 P4 (90 hari) 77.4 ± 49.33 b

(Sumber: Sudatri, 2014)

Kadar SGOT plasma dengan uji ANOVA terdapat perbedaan nyata (P=0.009) antar

perlakuan dan kontrol. Kadar SGOT kontrol lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol.

Sedangkan dari uji Kruskal Wallis kadar SGPT plasma tidak berbeda nyata (P=0. 86).

Tabel 2. Uji Kruskal Wallis dan rerata kadar SGPT plasma tikus betina (Rattus rattus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi

No Perlakuan Ranking Mean Chi Square P Rata-rata

(U/L)

1 K (Kontrol) 15.10 8.152 0.86 315.6

2 P1 (30 hari) 18.40 116.0

3 P2 (50 hari) 15.30 208.0

4 P3 (70 hari) 8.70 207.0

5 P4 (90 hari) 7.50 145.0

39

Dari uji Kruskal Wallis kadar kreatinin berbeda nyata (P=0. 002) . Kadar kreatinin

plasma tikus betina yang diinjeksi vitamin C lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol.

Tabel 3. Uji Kruskal Wallis dan rerata kadar Kreatinin plasma tikus betina (Rattus rattus L.) yang diinjeksi vitamin C dosis tinggi yang dilanjutkan dengan uji Mann Whitney

No Perlakuan Ranking Mean Chi Square P

Rata-rata

(Mg/DL)

1 K (Kontrol) 11.50 17.050 0.02 0.60 a

2 P1 (30 hari) 3.00 0.30 b

3 P2 (50 hari) 19.50 0.68 b c

4 P3 (70 hari) 15.50 0.64 a c

5 P4 (90 hari) 15.50 0.64 a b

Pembahasan

SGOT(Serum glutamate oxalloacetate transaminase) atau disebut juga aspartate

aminotransferase (AST) dan SGPT (Serum Glutamic Piruvic Transaminase) atau disebut

juga alanine aminotransferase (ALT), merupakan enzim yang banyak terdapat di hati. Dalam

uji SGOT dan SGPT, hati dapat dikatakan rusak bila jumlah enzim tersebut dalam plasma

lebih besar dari kadar normalnya. Mekanismenya adalah zat-zat toksik atau zat-zat berlebih

yang masuk ke dalam tubuh akan dimetabolisme oleh enzim sitokrom P450 dalam hati

menjadi radikal bebas. Radikal bebas ini kemudian berikatan pada sel hepatosit pada organ

hati sehingga membran hati berubah permeabilitasnya (meningkat). Berubahnya membran sel

hati ini dapat menimbulkan dua macam konsekuensi. Pertama zat –zat dari dalam sel keluar

dengan bebas sehingga hati mengalami pengkerutan dan terjadi nekrosis. Sebaliknya zat-zat

yang berada diluar sel hati juga dapat masuk dan menyebabkan hati menjadi besar

(degenerasi hidropis) dan terjadi apoptosis.

Dalam penelitian ini kadar SGOT kontrol justru lebih tinggi (158.4 ± 315 ) di

bandingkan dengan semua perlakuan. Hal ini kemungkinan disebabkan injeksi vitamin C

dosis tinggi 11,2 mg/ ekor/ hari justru meningkatkan proses regenerasi hepatosit sehingga

menjadi lebih baik. Hasil penelitian ini sesuai dengan yang dilakukan oleh Afiong and Maisie

(2006) ; Jackson et.al, (2002); Vahel et al. (2011) bahwa asam askorbat yang diberikan

pada hewan coba yang mengalami beberapa penyakit menjadi lebih baik kondisinya. Namun

hasil penelitian ini tidak sesuai dengan hipotesis awal yang diajukan. Data SGOT dapat

menyimpang karena ada kemungkinan tikus sedang mengalami gangguan juga pada organ

selain hati seperti pada otot jantung, ginjal dan otot rangka, karena sebenarnya SGOT terdapat

di hampir seluruh tubuh, berbeda dengan SGPT yang spesifik pada hati. Pada umumnya nilai

40

tes SGPT lebih tinggi daripada SGOT pada kerusakan parenkim hati akut, sedangkan pada

proses kronis didapat sebaliknya. Pada penelitian ini kadar SGPT plasma yang diuji dengan

Uji Kruskal Wallis karena sebaran data tidak normal menunjukkan perbedaan yang tidak

nyata ((P=0. 86).

Sedangkan kadar kreatinin plasma dalam penelitian ini yang diuji dengan Uji Krukal

Wallis dan dilanjutkan dengan uji Mann Whitney menunjukkan perbedaan yang nyata (P=0.

002). Kadar kreatinin plasma kelompok perlakuan lebih tinggi dibandingkan dengan

kelompok kontrol. Peningkatan kadar kreatinin ini mengindikasikan adanya penurunan fungsi

pada ginjal yang diakibatkan oleh tingginya kadar vitamin C yang harus dibuang melalui

ginjal. Hal ini berkaitan dengan sifat vitamin C yang larut dalam air sehingga lebih

memperberat kerja ginjal dibandingkan dengan fungsi hati. Hasil penelitian Voja et al. (2005)

melaporkan bahwa konsumsi vitamin C (asam askorbat) dalam jangka waktu yang panjang

menyebabkan tikus perlakuan mengalami hiperglikemia (diabetes) yang berkaitan dengan

peningkatan tekanan darah dan edema glomerulus. Hal-hal lain yang berkaitan dengan

peningkatan kadar kreatinin adalah : gagal ginjal akut dan kronis, nekrosis tubular akut,

glomerulonefritis, nefropati diabetik, pielonefritis, eklampsia, pre-eklampsia, hipertensi

esensial, dehidrasi, penurunan aliran darah ke ginjal (syok berkepanjangan, gagal jantung

kongestif), rhabdomiolisis, lupus nefritis, kanker (usus, kandung kemih, testis, uterus, prostat),

leukemia, penyakit Hodgkin, diet tinggi protein (mis. daging sapi kadar tinggi, unggas, dan

ikan (Wulandari dan Suwitra, 2008).

Kesimpulan

Kadar SGOT tikus betina (Rattus rattus L.)yang dinjeksi vitamin C dosis tinggi

mengalami penurunan dibandingkan dengan kontrol. Kadar SGPT tikus betina yang dinjeksi

vitamin C dosis tinggi mengalami perbedaan namun secara statistik perbedaan tersebut tidak

nyata. Sedangkan kadar kreatinin plasma darah betina yang dinjeksi vitamin C dosis tinggi

mengalami peningkatan dibandingkan dengan kontrol.

Ucapan Terima kasih

Penulis mengucapkan banyak terima kepada Lembaga Penelitian dan Pengabdian

kepada Masyarakat Universitas Udayana dan Dikti atas dana yang diberikan melalalui dana

Desentralisasi Hibah Bersaing tahun anggaran 2014.

41

Rekapitulasi Penggunaan Dana Penelitian .

Judul : KAJIAN TENTANG EFEK SAMPING INJEKSI VITAMIN C DOSIS TINGGI TERHADAP KESEHATAN DENGAN

MEMAKAI TIKUS BETINA (Rattus rattus) DEWASA SEBAGAI HEWAN MODEL

Skema Hibah : Penelitian Hibah Bersaing

Peneliti / Pelaksana

Nama Ketua : NI WAYAN SUDATRI S.Si., M.Si.

Perguruan Tinggi :Universitas Udayana

NIDN : 0031107102

Nama Anggota (1) : IRIANI SETYAWATI S.Si. M.Si.

Nama Anggota (2) : NI MADE SUARTINI S.Si.,M.Si.

Tahun Pelaksanaan : Tahun ke 1 dari rencana 2 tahun

Dana Tahun Berjalan : Rp 58.500.000,00

Dana Mulai Diterima Tanggal : 28 Mei 2014

.

1. HONOR OUTPUT KEGIATAN

Item Honor Volume Satuan Honor/jam

(Rp)

Total (Rp)

1.Ketua 570.00 Jam 11.000 8.160.000

2.Anggota 570.00 Ja