LAMPIRAN Lampiran 1. Tahapan Penelitian PembuatanTepung Talas (Nuraida, 2006) SterilisasiAlat (Hadioetomo, 1990) EkstrakTepungTalas (Muchtadi, 1989) Pembuatan media MRSA/MRSB (Bridson, 1998) PeremajaanIsolat Bifidobacterium sp. Pembuatan kultur Isolat Bifidobacterium sp. EkstrakTalas (Colocasia esculenta) dengan konsentrasi berbeda Pembuatan kurva pertumbuhan Bifidobacterium sp. Inokulum Bifidobacterium sp. pada media MRSB di fase eksponensial Inokulasi Bifidobacterium sp. pada media MRSB MRSB + ekstrak Konsentrasi 2 % MRSB + ekstrak Konsentrasi 3 % MRSB + ekstrak Konsentrasi 1 % MRSB + ekstrak Konsentrasi 0 % (kontriol) Inkubasi 96 jam Inkubasi 48 jam Inkubasi 144 jam Pengamatan Total AsamLaktat (Apriyanto et al., 1989) Parameter yang diamati Jumlah Sel dengan Menggunakan Total Plate Count (TPC) (Lay, 1994) Derajat Keasaman (pH) Medium (Hadioetomo, 1990) Kadar gula reduksi dilakukan dengan metode Nelson-Somogyi (Sudarmadji et al., 1989)
13
Embed
Lampiran 1. Tahapan Penelitian - bio.unsoed.ac.idbio.unsoed.ac.id/sites/default/files/B1J010126-9_1.pdf · No Nama Bahan Spesifikasi Kegunaan ... 2 Buffer Tris- HCl 0,05 M Larutan
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
18
LAMPIRAN
Lampiran 1. Tahapan Penelitian
PembuatanTepung Talas (Nuraida, 2006)
SterilisasiAlat (Hadioetomo, 1990)
EkstrakTepungTalas (Muchtadi, 1989)
Pembuatan media MRSA/MRSB
(Bridson, 1998)
PeremajaanIsolat Bifidobacterium sp.
Pembuatan kultur Isolat
Bifidobacterium sp.
EkstrakTalas (Colocasia esculenta) dengan konsentrasi berbeda
Pembuatan kurva pertumbuhan
Bifidobacterium sp.
Inokulum Bifidobacterium sp. pada media MRSB di fase eksponensial
Inokulasi Bifidobacterium sp. pada media MRSB
MRSB + ekstrak
Konsentrasi 2 %
MRSB + ekstrak Konsentrasi
3 %
MRSB + ekstrak Konsentrasi
1 %
MRSB + ekstrak Konsentrasi 0 %
(kontriol)
Inkubasi 96 jam
Inkubasi 48 jam
Inkubasi 144 jam
Pengamatan
Total AsamLaktat (Apriyanto et al., 1989)
Parameter yang diamati
Jumlah Sel dengan Menggunakan Total Plate Count (TPC)
(Lay, 1994) Derajat Keasaman (pH) Medium
(Hadioetomo, 1990)
Kadar gula reduksi dilakukan dengan metode Nelson-Somogyi
(Sudarmadji et al., 1989)
19
Lampiran 2. Komposisi dan Cara Pembuatan Media MRSA (Bridson, 1998)
Peptone 10 gram/liter
Lab-Lemco’powder 8 gram/liter
Yeast extract 4 gram/liter
Glucose 20 gram/liter
Sorbitan mono-oleate 1 ml
Dipotassium hydrogen phospate 2 gram/liter
Sodium acetate 3H2O 5 gram/liter
Triammonium citrate 2 gram/liter
Magnesium sulphate 7H2O 0,2 gram/liter
Magnesium sulphate 4H2O 0,05 gram/liter
Agar 10 gram/liter
Cara kerja :
Semua bahan (lampiran 1) ditimbang sebanyak 62 gram, lalu dilarutkan menggunakan
akuades sebanyak 1000 ml, lalu dipanaskan agar media homogen dengan menggunakan
hot plate magnetic stirer. Setelah homogen, pH media diatur hingga 6,2 (ditambahkan
NaOH jika terlalu asam, dan ditambahkan HCl jika terlalu basa). Media MRSA yang sudah
jadi dituang ke dalam labu erlenmeyer, lalu disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu
121oC dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.
20
Lampiran 3. Komposisi dan Cara Pembuatan Media MRSB (Bridson, 1998)
Peptone 10 gram/liter
Lab-Lemco’powder 8 gram/liter
Yeast extract 4 gram/liter
Glucose 20 gram/liter
Sorbitan mono-oleate 1 ml
Dipotassium hydrogen phospate 2 gram/liter
Sodium acetate 3H2O 5 gram/liter
Triammonium citrate 2 gram/liter
Magnesium sulphate 7H2O 0,2 gram/liter
Magnesium sulphate 4H2O 0,05 gram/liter
Cara kerja :
Semua bahan (lampiran 2) ditimbang sebanyak 52 gram (tanpa penambahan agar), lalu
dilarutkan menggunakan akuades sebanyak 1000 ml, lalu dipanaskan agar media homogen
dengan menggunakan hot plate magnetic stirer. Setelah homogen, pH media diatur hingga
6,2 (ditambahkan NaOH jika terlalu asam, dan ditambahkan HCl jika terlalu basa). Media
MRSA yang sudah jadi dituang ke dalam labu erlenmeyer, lalu disterilisasi menggunakan
autoclave pada suhu 121oC dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.
21
Lampiran 4. Klasifikasi tanaman talas (Dalimarta, 2000)
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Monocotyledoneae
Bangsa : Arales
Suku : Araceae
Marga : Colocasia
Jenis : C. esculenta L Schott
22
Lampiran 5. Kandungan gizi talas per 100 gram
Kandungan Gizi Satuan Talas Mentah Talas Rebus
Energi Protein Lemak
Hidrat Arang total Serat Abu
Kalsium Fosfor
Besi Vitamin B1 Vitamin C
Air Bagian yang dimakan
Kal g g g g g
mg mg mg mg mg g %
120 1,5 0,3
28,2 0,7 0,8 31 67 0,7
0,05 2
69,2 85
108 1,4 0,4 25 0,9 0,8 47 67 0,7
0,06 4
72,4 100
Sumber : Slamet D.S dan lg. Tarkotjo (1990), majalah gizi jilid 4, hal 26. Pusat penelitian dan pengembangan kesehatan Depkes RI dalam Amirudin (2013).
23
Lampiran 6. Spesifikasi Peralatan dan Bahan
No Nama Bahan Spesifikasi Kegunaan
1 Alkohol 70% Disinfeksi meja kerja
2 Buffer Tris- HCl 0,05 M Larutan buffer
3 HCl 0,1 M Pelarut dalam pembuatan larutan standar
4 Buffer fosfat 0,5 M Larutan buffer
5 NaOH 1 N Uji titrasi asam laktat
6 Fenolftalin 0,1% Indikator warna uji asam laktat
Ket : Konsentrasi : F. Hitung < F. Tabel non signifikan Inkubasi : F. Hitung > F. Tabel signifikan Konsentrasi dan inkubasi : F. Hitung < F. Tabel non signifikan
26
Lampiran 8. Data penelitian
Inkubasi Perlakuan Jumlah log Bifidobacterium
sp.
Jumlah total Bifidobacterium
sp.
pH Total Asam Laktat
Gula Reduksi
48 Jam I0K1 8,52 3,28 x 108 4,39 1,2 0,12
I1K1 8,54 3,47 x 108 3,83 1,58 0,11
I2K1 8,48 3,01 x 108 3,84 1,5 0,1
I3K1 8,84 6,92 x 108 4,47 1,05 0,08
96 Jam I0K2 9,07 1,17 x 109 4,11 1,5 0,08
I1K2 9,06 1,15 x 109 3,42 1,65 0,08
I2K2 8,81 6,45 x 108 3,40 1,65 0,03
I3K2 8,85 7,15 x 108 3,90 1,35 0,01
144 Jam I0K3 8,32 2,07 x 108 3,96 1,65 0,14
I1K3 8,55 3,51 x 108 3,38 1,95 0,07 I2K3 8,56 3,62 x 108 3,35 1,95 0,06
I3K3 8,51 3,25 x 108 3,94 1,95 0,05
Reduksi Gula (Kurva Standar)
Konsentrasi 0 2 4
Abs 0,02 1,43 2,25
y = 0.5575x + 0.1183 R² = 0.9772
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10
abso
rbas
i
konsentrasi
Series1
Linear (Series1)
27
Lampiran 9. Jumlah Bifidobacterium sp. Rata-Rata pada Medium MRSB yang Ditambah Ekstrak Talas dengan Konsentrasi dan Waktu Inkubasi Berbeda
Lampiran 10. Kadar Asam Laktat Rata-Rata pada Medium MRSB yang Ditambah Ekstrak
Talas dengan Konsentrasi dan Waktu Inkubasi Berbeda