UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA FALCULT AD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS y BIOQUÌMICA Informe de Laboratoro de C!r"o # M$robo%o&'a Tema # M(todo" de Co%ora$)n *rofe"or # +a$nto A%!mno" # LIMA,*ERU -./0, I M(todo" de Co%ora$)n Mar$o Te)r$o Co%ora$)n Sm1%e#
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Aquella coloración en la que se utiliza solo un colorante, el cual va a permitir visualizar la morfología de los
microorganismos.
Co%ora$)n Gram#
Es posiblemente la tinción más usada.
La diferenciación de Gram se basa en el color que adquieren las bacterias cuando se tratan con el colorante crist
violeta seguido por una solución yodoyodurada de potasio, para luego someterlas a una decoloración despus de
la cual se usa una coloración de contraste, casi siempre safranina. Las bacterias gram!positivas "coloración azumorada# son resistentes a la decoloración y conservan el comple$o cristal violeta!yodo, los microorganismos gram
negativos, toman la coloración de contraste "coloración rosa o ro$a#.
Co%ora$)nA$do,Re""tente2Co%ora$)n d3e4% Nee%"e
En este mto
de tinción, el
colorante
primario,
fucsina acida
se formula con fenol para permitir el pas
a travs de las paredes celulares de las
micobacterias. El portaob$eto se
calienta para facilitar la penetración y se utiliz
alco%ol etílico como decolorante. &in embarg
el reactivo se prepara con ácido
clor%ídrico para ayudar a la
decoloración de las clulas que no s
acido! resistentes.
Co%ora$)n de E"1ora"#
'ara la observación de espora, es necesario que el colorante penetre la pared de la espora, la cual es
relativamente impermeable, razón por la que se necesita de calentamiento.
Co%ora$)n Ne&at6a#
La tcnica de la tinción negativa incorpora materiales tales como la nigrosina o la tinta c%ina, que al estar
compuesta de partículas demasiado grandes para penetrar en una clula, permiten observar algunos
microorganismos que permanecen sin te(ir y que resaltan sobre un fondo oscuro, se utiliza principalmente para
apacita y adiestra al estudiante para que "el# "la#/
•
+ealice manualmente mtodos de tinción %abituales usados en la preparación de láminas de observación• 0escriba minuciosamente sus observaciones, al microscopio.
La tinción de Gram se basa en colocar como colorante primario cristal violeta, el cual tiene afinidad con elpeptidoglicano de la pared bacteriana. 'osteriormente, se coloca, lugol, el cual sirve como mordiente e impide lasalida del cristal violeta por la formación de un comple$o cristal violetayodo que satura los espacios delpeptidoglicano de la pared bacteriana alco%ol!acetona, la cual des%idrata la pared bacteriana y cierra los poros dela misma, tambin destruye la membrana e-terna de las bacterias Gram negativas debido a que sta es soluble ala acción de solventes orgánicos, como la mezcla de alco%olacetona.Las bacterias Gram positivas, al contener una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza estecomple$o, mientras que las Gram negativas no lo pueden retener por tener menos cantidad de peptidoglicano. 'o1ltimo, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de contratinción y sirve para te(ir lasbacterias que no pudieron retener el comple$o cristal violeta!yodo. 8ay bacterias de un mismo gnero que puedeobservarse en la misma muestra como Gram positivas y como Gram negativas, a este evento se le llama tinciónGram variable secundaria a alteración en nutrientes, temperatura, p8 o concentración de electrolitos.
Las endosporas poseen unas cubiertas e-clusivas que las %acen resistentes a los factores ambientales adversos
Además, estas cubiertas %acen que las esporas aparezcan en el microscopio óptico como estructuras refringente
y de difícil tinción. La tinción específica de esporas requiere dos colorantes/ ;.! =erde malaquita/ capaz de te(ir laesporas en caliente. 6.! &afranina/ colorante de contraste que ti(e las formas vegetativas. Las endosporas, tras la
primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo %arán las formas vegetativas, que quedará