FACULTAD DE INGENIERIA, ARQUITECTURA, ARTES Y DISEOPROGRAMA DE
INGENIERA QUMICA
Reporte de laboratorio:
CULTIVO MICROBIANOS
Maria Camila Del Campo Victor Iguaran Pedro Villar Aura Mara
Zuleta Morales
Estudiantes de la asignatura de laboratorio de biotecnologa
Docente: Lersy Lopez
Cartagena, 05 de marzo de 2015
INTRODUCCION.Uno de los sistemas ms importantes para la
identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en
sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.
El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
elMedio de Cultivoy el crecimiento de los microorganismos es
elCultivo. Para determinar las caractersticas de una especie es de
mucha importancia el aislamiento.Para que las bacterias crezcan
adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una
serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante; Un cultivo puro representa las
condiciones artificiales para el desarrollo de las bacterias y
otros microorganismos.La mayora de las bacterias patgenas requieren
nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos
del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es
una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn
otros ingredientes.La velocidad de crecimiento de las bacterias es
directamente proporcional a la nutricin.El agar es un elemento
solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo.
Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se
solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no
tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado
por aquellas que crecen en l.los diferentes medios de cultivo se
encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de
carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de
Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones
de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos.
El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento
de los microorganismos menos resistentes.Tambin se aaden colorantes
que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin
de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no
de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH
bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como
inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las
bacterias Gram-positivas).A continuacin ponemos en prctica el mtodo
de cultivo por siembra en superficie el cual consiste en la siembra
de un volumen conocido de la dilucin de la muestra sobre la
superficie de un medio de cultivo en placa Petri. En este mtodo
todas las colonias crecen sobre la superficie del medio.
Generalmente se utiliza esta tcnica para el recuento de bacterias
aerobias.
OBJETIVO GENERALConocer las tcnicas de cultivo microbiano y las
caractersticas macroscpicas de las colonias que nos permiten
adquirir habilidad para realizar cultivos microbianos con
todas.
OBJETIVOS ESPECIFICOSRealizar de manera experimental el mtodo de
siembra en superficie.Observar los distintos comportamientos del
cultivo microbianos en diferentes condiciones.Adquirir los
conocimientos necesarios para el debido aprendizaje en la
asignatura Biotecnologa.
DESARROLLOCULTIVO MICROBIANOSMATERIALES: Muestra de alimentos.
Caja de Petri. Tubos de ensayos. Asas bacteriolgicas. Cultivos
microbianos. Pipeta automtica.EQUIPO:
Incubadora.PROCEDIMIENTO:METODO DE RECUENTO EN PLACA1. Siembra en
profundidad Realizar diluciones seriadas (10^-1, 10^-2, 10^-3) una
muestra de alimento. Adicionar 1ml de cada una de las diluciones
preparadas y adicionar en cajas de Petri estriles. Adicionar el
medio de cultivo especifico de 15-20 ml de cada caja de Petri,
mezclar en sentido contrario a las manecillas del reloj, hasta que
quede completamente homogenizada la muestra. Dejar solidificar e
incubar a la temperatura adecuada de acuerdo al microorganismo de
inters. 2. Siembre en superficie Realizar diluciones seriadas
(10^-1, 10^-2, 10^-3) una muestra de alimento. Adicionar 0,1ml de
cada dilucin y adicionar en la superficie del agar especifico para
el tipo de microorganismo a identificar o cuantificar. Extender el
inoculo con asa bacteriolgica en diferentes direcciones hasta
agotar la muestra en la superficie del agar. Incubar en la
temperatura adecuada de acuerdo al tipo de microorganismo.I.
Siembra por agotamiento Seleccionar los medios de cultivo de
acuerdo al tipo de microorganismo. Tomar una pequea cantidad de
inoculo con el asa redonda y sembrar por agotamiento en el agar
especifico, pasando por el mechero el asa para obtener colonias
aisladas.
II. Crecimiento de microorganismo en medios diferentes Describir
las caractersticas del crecimiento de los microorganismos en medios
especficos. Identificar gneros de bacterias a travs de
interpretacin de pruebas bioqumicas.
RESULTADOS/CONCLUSION.
Podemos ver claramente es crecimiento microbianos en las
distintas muestra y como es capaz de ir evolucionando en masa en un
tiempo corto en sus condiciones ptimas, observamos que la muestra
de 10^-2 tiene un mayor crecimiento aunque la diferencia no es
notoria con las dems muestra.Se puede concluir de manera
experimental que los microorganismos son capaces a reproducirse en
gran cantidad sin inconveniente alguno y son capaces de brindarnos
grandes ayuda en la parte industrial por ejemplo: los lcteos. A la
vez son muy econmico su obtencin.
INVESTIGACION.1. FUNDAMENTO DEL RECUENTO EN PLACA.Consiste en el
plaqueo de una muestra de volumen conocido del alimento que se
analiza. El resultado es funcin de una serie de factores como son
el mtodo de muestreo, el tipo de microorganismo, el tipo de
alimento y las caractersticas del medio de cultivo. Los cultivos
pueden hacerse tanto en masa como en superficie, aunque hay que
considerar que los cultivos en masa son letales para la flora
psicotrofa. Cada bacteria viable formar una colonia, el plaqueo
puede hacerse en una placa normal o por medio de un plaqueador en
espiral que va depositando concentraciones progresivamente ms
diluidas de la muestra.Medio de cultivo recomendado para el
recuento de bacterias aerbicas en aguas, aguas residuales,
productos lcteos y otros alimentos. Tambin es recomendado como
medio general para determinar poblaciones microbianas.La
productividad de este medio, est basada en el alto contenido
nutricional de sus componentes, que permite el desarrollo de las
bacterias presentes en la muestra. Cuando se analiza leche y
productos lcteos algunos autores recomiendan suplementarla con
leche descremada estril de uso bacteriolgico en una proporcin de 1
g por litro.
2. EJEMPLO DE MEDIOS DE CULTIVO MODERADAMENTE Y ALTAMENTE
SELECTIVOS.
Los Medios Selectivos generalmente el microorganismo patgeno
causante del cuadro infeccioso que se desea aislar a partir de la
muestra, no se encuentra puro sino que convive con otras especies
sin inters diagnstico. As por ejemplo es frecuente que las fecas,
orina, exudados, alimentos, agua, etc. estn altamente contaminadas
con bacterias saprfitas que por su desarrollo exuberante en los
medios de cultivo corrientes, inhiben el crecimiento o enmascaran
la presencia del agente patgeno buscado.Los medios selectivos se
caracterizan por estimular el desarrollo de ciertas especies
bacterianas y a la vez inhibir el desarrollo de otras especies, lo
que permite es aislamiento y diagnstico de las bacterias con
facilidad y rapidez. Estas caractersticas se obtienen por la adicin
de sustancias tales como colorantes de anilinas, sales biliares,
antibiticos, etc. Ejemplo: Agar Brucella, Caldo Selenito Cistina,
etc.Los antibiticos, el cloruro sdico en altas concentraciones,
colorantes y algunas sustancias qumicas son ejemplos de agentes
selectivos que se aaden a los medios para inhibir el crecimiento de
otros microorganismos diferentes al de inters.El agar SPS
(denominado de esta forma porque contiene sulfadiacina y sulfato de
polimixina) se utiliza para identificarClostridium botulinum,
agente causal de una grave intoxicacin alimentaria. El medio SPS
permite el crecimiento de esta bacteria, pero inhibe el de otras
especies deClostridium.Por ejemplo, los colorantes, que se aaden al
Agar, inhiben selectivamente determinados microorganismos, es el
caso del verde brillante (Agar verde brillante) utilizado para
determinar la presencia deSalmonellaen heces fecales ya que inhibe
las bacterias Gram positivas, y la mayora de las bacterias
intestinales.Para el caso de factores ambientales se manipula la
temperatura, el grado de humedad, el pH, la concentracin de oxgeno
o la intensidad de la luz. As el Agar glucosado de Sabouraud
ajustado a pH 5,6, se usa para el aislamiento de hongos, que a ese
pH crecen mejor que las bacterias. Son ejemplo de este tipo de
medios: Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis, Sacarosa (TCBS)
para cultivo de Vibrio y Agar Cetrimida para cultivo
dePseudomonas.
Un ejemplo de medio altamente selectivo debido a su alta
concentracin salina serian los estafilococos coagulasa positiva que
hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen
rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos
coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o
prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin
exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la
prueba de la coagulasa. En el medio de cultivo, el extracto de
carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono,
nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de
carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta
concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la
flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
BIBLIOGRAFIA.http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htmhttp://datateca.unad.edu.co/contenidos/201504/micro/3_4medios.htmhttp://es.slideshare.net/roberchavez/medios-de-cultivo-y-pruebas-bioquimica-presentation