UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERAFACULTAD DE INGENIERA
AMBIENTALMICROBIOLOGIA AMBIENTAL
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
INDICE:
I. OBJETIVOS ...................................................
2
II. FUNDAMENTO TEORICO ............... 2
III. MATERIALES DE LABORATORIO
........................................... 4
IV. PROCEDIMIENTO ......................... 5
V. RESULTADOS Y OBSERVACIONES .. 5
VI. DISCUSIONES
.................................................. 6
VII. CONCLUSIONES ................................ 7
VIII. RECOMENDACIONES ................... 7
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS . 8
X. ANEXO CUADRO INSTRUMENTOS DE LABORATORIO 8
XI. ANEXO - NORMAS DE SEGURIDAD ............. 14
XII. ALGUNOS SIMBOLOS DE SEGURIDAD 15
I. OBJETIVOS: Reconocimiento de los materiales de laboratorio de
microbiologa. Aprender a realizar el proceso de desinfeccin y
esterilizacin de los materiales. Aprender y aplicar las normas de
seguridad.
II. FUNDAMENTO TEORICO:Los microorganismos pueden ser
eliminados, inhibidos o muertos por agentes qumicos, fsicos o
procesos fsicos. Actualmente se dispone de una gran variedad de
tcnicas y agentes que actan de manera diferente y cada uno tiene su
aplicacin y lmite de uso. Algunos de estos procesos son:1.
Esterilizacin:
La esterilizacin consiste en la destruccin completa de todos los
microorganismos, incluidas las formas resistentes como las esporas
bacterianas, virus sin envoltura (no lpidos) y hongos. Ello puede
conseguirse mediante esterilizacin fsica, esterilizacin gaseosa y
esterilizacin qumica.
Los esterilizantes fsicos, como el calor hmedo y el calor seco
son los mtodos de esterilizacin ms usados para la mayora de los
materiales, con excepcin de los termosensibles o los que poseen
componentes qumicos txicos o voltiles. a) Esterilizacin por Calor
Hmedo (Vapor bajo Presin):
Este mtodo se emplea para esterilizar desechos biolgicos
peligrosos y objetos termoestables; con este fin se utiliza un
autoclave, que bsicamente es una gran olla de presin. El calor
hmedo bajo la forma de vapor saturado a una atmosfera de presin (
1,05 kg/cm2 = 15 psi [lb/pie2]), provoca la desnaturalizacin
irreversible de las enzimas y las protenas estructurales, el tipo
de esterilizador de vapor ms comn en el laboratorio microbiolgico
es el de desplazamiento por gravedad.
b) Esterilizacin por Calor Seco:
Este mtodo requiere un periodo de exposicin ms prolongado (1,5 3
horas) que el calor hmedo y temperaturas superiores (160 180 grados
centgrados), se utilizan estufas de calor seco para esterilizar
elementos como material de vidrio, aceite, vaselina o polvos.
El esterilizante gaseoso utilizado ms a menudo es el xido de
etileno, aunque es muy eficiente, se trata de una sustancia
inflamable, explosiva y cancergena y existen unas estrictas
regulaciones que restringen su utilizacin. Los vapores de perxido
de hidrgeno tambin constituyen unos esterilizantes eficaces como
consecuencia de la naturaleza oxidante del gas. El perxido de
hidrgeno se utiliza para la esterilizacin de instrumentos.
Tambin existen esterilizantes qumicos como el cido paraactico y
el glutaraldehido. El cido paraactico es un agente oxidante con
actividad excelente y origina productos secundarios no txicos (p.
ej., cido actico y oxgeno).Por el contrario, la utilizacin de
glutaraldehdo supone diversos problemas de seguridad, por lo que
se deben tomar siempre precauciones al manipular este compuesto
qumico.
2. Desinfeccin:
Los microorganismos tambin pueden ser destruidos mediante
procedimientos de desinfeccin, aunque los ms resistentes pueden
sobrevivir. Existe un cierto grado de confusin entre esterilizacin
y desinfeccin. Ello se debe a que los procesos de desinfeccin se
han dividido en varios grados (alto, intermedio y bajo). La
desinfeccin de alto grado por regla general posee una eficacia
semejante a la de la esterilizacin, mientras que las esporas pueden
sobrevivir tras una desinfeccin de grado intermedio; asimismo,
numerosos microorganismos pueden seguir siendo viables despus de
una desinfeccin de bajo grado.
Los desinfectantes de alto grado se utilizan para objetos
empleados en procedimientos invasivos que no pueden soportar los
mtodos de esterilizacin (p. ej., ciertos tipos de endoscopios, los
instrumentos quirrgicos de plstico u otros componentes que no se
pueden someter a la accin del autoclave).
Los desinfectantes de grado medio (p. ej., alcoholes, compuestos
yodados, compuestos fenlicos) se utilizan para la limpieza de
superficies o instrumentos en los que es poco probable la
contaminacin por esporas bacterianas o microorganismos con un alto
grado de resistencia.
Los desinfectantes de grado bajo (p. ej., compuestos de amonio
cuaternario) se utilizan para tratar instrumentos y dispositivos
que no revisten una gran importancia.
III. MATERIALES DE LABORATORIO:
- Mechero Bunsen -Gradillas-Placas de Petri - Pinzas para tubo
de ensayo -Pinzas para crisol-Asas de siembra
-Bagueta -Termmetro-Balanzas
-Malla de asbesto -Escobillas-Pipetas de vidrio y plstico
-Probeta -Cubreobjetos-Asas de Digralsky
-Aceite de inversin -Portaobjetos-Vasos de precipitados
-Cubre objetos -Crisol-Matraces
-Fiola -Tubos de ensayo-Plancha de calentamiento
-Matraz Erlenmeyer -Vaso de precipitado-Estufa de incubacin
-Gotero - Esptula -Horno de Pasteur
-Mortero -Asa de kolle -Autoclave
-Encendedor -Mechero de alcohol-Frigorfico
-Microscopio ptico -Contador de colonias -Pera de succin
-Pizeta -Buretas
IV. PROCEDIMIENTO: El proceso que debemos seguir es el siguiente
(a pesar que no lo hicimos):
Lavar los materiales de vidrio (tubo de ensayo, matraz, vaso,
etc.). Escurrir y enjuagar con agua destilada. Volver a dejar
escurrir el material sobre una toalla (no por otro medio) Envolver
los materiales con papel craf, luego atar con un pabilo un conjunto
de tubos de ensayo, el matraz , vaso y etc. y colocarlas dentro del
recipiente metlico con tapa. Y colocarlos en el horno a 180C por 2
horas aproximadamente.
V. RESULTADOS Y OBSERVACIONES:Debido a que en este laboratorio
solo hemos obtenido informacin oralmente, tengo 1 observacin:
Se logr comprender el uso adecuado de cada material de
laboratorio para obtener buenos resultados en las siguientes
prcticas.
Pude notar que al desinfectar y esterilizar los materiales nos
da una mayor certeza de que al preparar un medio de cultivo, este
no est contaminado.
Tener conocimiento de las normas de seguridad para evitar
accidentes al momento de realizar cada practica de laboratorio y
asi evitar cualquier tipo de accidente.
Tambin tener conocimiento de los diferentes smbolos de peligro
en qumico en un laboratorio.
VI. DISCUSION DE RESULTADOS:
Las tcnicas de esterilizacin y desinfeccin son muy utilizados al
momento de realizar trabajos de laboratorio, pero estas tcnicas
tienen distintos mtodos los cuales cada uno es ms eficiente que
otro, pero hay que tener en consideracin que para cada objetivo
especfico, existe un mtodo de esterilizacin o desinfeccin
especifico, en nuestro caso se utiliz la esterilizacin con un mtodo
fsico de vapor a presin, ya que el calor mata a los microorganismos
porque coagula sus protenas cuando se encuentran en una zona
atmsfera hmeda, y en el caso del mtodo de desinfeccin usado fue el
de alto grado debido a que se desinfectaron tambin unos
instrumentos de plstico (probeta), el cual se estropeara por
esterilizacin.
Se observ sobre la mesa todos los materiales de laboratorio que
usaremos en todas las prcticas y se habl del uso de cada uno , pero
no se hablaron de sus restricciones o peligros.
Si los materiales no se desinfectan o esterilizan bien, nuestros
resultados analticos presentarn un error.
Obviamente si no tenemos en cuenta las normas de seguridad,
podran ocurrir accidentes.
Si al momento de autoclavar o desinfectar, no empleamos el
tiempo mnimo de esterilizacin los microorganismos podran quedar
vivos.
Y si empleamos ms del tiempo mximo, el cultivo morira.
VII. CONCLUSIONES:
Aprend a reconocer los materiales y saber los nombres de los
materiales de laboratorio as como su respectivo uso.
Aprend a usar los mtodos de desinfeccin y esterilizacin, en este
caso fue el mtodo de desinfeccin por gas hmedo.
Gracias a este primer laboratorio, se tom en cuenta ciertas
normas de seguridad con el fin de evitar cualquier accidente dentro
del laboratorio.
Aprendimos a reconocer algunos smbolos de peligro qumico para
tener un conocimiento mnimo de la peligrosidad de cada compuesto
que utilicemos.
Llegamos a entender los equipos e instrumentos de laboratorio
para desarrollar las prcticas en un laboratorio de microbiologa con
responsabilidad como Ingenieros Ambientales que seremos.
VIII. RECOMENDACIONES:
Tener siempre en cuenta las normas de seguridad en el
laboratorio.
Tratar de colocar las baguetas despus de desinfectar en un
contenedor y no sobre la mesa ya que se contaminaran de nuevo.
Abrir las placas de Petri de manera adecuada.
Cuando se coloquen los materiales al horno, hacerlo con mucho
cuidado y con sus respectivos guantes para no quemarse.
Saber los movimientos de diseminacin de la esptula.
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
Murray, Patrick R.; Rosenthal, Ken s. ; Pfaller, Michael A.
MICROBIOLOGA MDICA. Sexta edicin. Elsevier, Espaa, 2009. Pginas
89-94.
Mara de los Angeles Aquiahuatl Ramos; Mara de Lurdes Prez.
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL.
Editorial Universidad Autnoma Metropolitana. Pginas 13-16.
Alonso Urmeneta y otros: MANUAL DE PRACICAS DE MICROBIOLOGIA.
Segunda edicin. Editorial Masson. Pginas 1 y 2.
X. ANEXO CUADRO INSTRUMENTOS DE LABORATORIO.
Grfico NombreDescripcin
Balanza Analtica Es un aparato que tiene una gran sensibilidad,
algunas tienen hasta 1 diezmilsima de sensibilidad.
Autoclave Es un equipo que se utiliza para la esterilizacin de
material, tanto de limpio como contaminado, que se basa en la
produccin de vapor contenido a altas presiones.
Cintas de pHEs una cinta que permite medir el pH de las
sustancias cualitativamente por medio de una escala de colores.
Incubadora Se Usa para mantener a una temperatura constante los
cultivos microbiolgicos, y asegurar el crecimiento de los
microorganismos.
Horno Se usa para secar el material de vidrio usado en el
laboratorio, y guardar el material esterilizado.
FrigorficoSe usa para almacenar material limpio y conservar los
microorganismos. Tambin se emplea para conservar reactivos que
requieren bajas temperaturas.
Contador de Colonias Se utiliza para aumentar la vista de las
colonias en la placa de Petri, con el fin de facilitar la
identificacin microscpica y el conteo.
Plancha de calentamiento Es un aparato que permite calentar
sustancias.
Bao Mara Es un aparato que se utiliza para des gelificar los
medios de cultivo y mantenerlos a una temperatura constante.
Gradilla. Utensilio que sirve para colocar tubos de ensayo. Este
utensilio facilita el manejo de los tubos de ensayo.
Pinzas para crisolPermiten sujetar crisoles
Pinzas para tubo de ensayo. Permiten sujetar tubos de ensayo
Bagueta Estn hechos de varilla de vidrio y se utilizan para
agitar o mover sustancias..
Asa de siembras Se usan para inocular muestras o bacterias puras
en los medios de cultivo.
Pera de succin Se usa para absorber lquidos a travs de
pipetas.
Pipetas Pasteur Se usan para tomar pequeos volmenes de
sustancias.
Portaobjetos Se usan para depositar en ellos las muestras a
observar al microscopio.
Cubreobjetos Se usan para cubrir las muestras que estn sobre el
portaobjetos.
Placas de PetriSe usan para contener los medios de cultivo donde
posteriormente se realiza la siembra.
Crisol Permite realizar calentamiento de sustancias a altas
temperaturas.
Esptula Permite tomar sustancias qumicas y medios de
cultivo.
Mechero bunsen Son utensilios metlicos que permiten calentar
sustancias.
Mortero de porcelana. Se utilizan para triturar materiales de
poca dureza y los de gata para materiales que tienen mayor
dureza.
Termmetro Es un utensilio que permite medir la temperatura que
tienen algunas sustancias .
Malla de asbesto Son usadas cuando no se requiere calentamiento
a fuego directo, el asbesto es buen aislante del calor.
Escobillas Para el lavado del material de vidrio.
Fiola Son de vidrio que permiten realizar soluciones valoradas,
los hay de diversas medidas .
Pipetas. Este material existe en dos presentaciones: Pipetas
aforadas. Pipetas volumtricas. Las primeras permiten medir diversos
volmenes segn la capacidad de esta, las segundas no estn graduadas
y slo permiten medir un volumen nico.
Probeta. Este material permite medir volmenes, las hay de vidrio
y de plstico y de diferentes capacidades.
Frasco gotero. Permite contener sustancias que se necesitan
agregar en pequeas cantidades.
Vasos de precipitado
Permite calentar y contener sustancias
Matraces Son recipientes de vidrio, esfricos, de fondo redondo,
provistos de un cuello, sirven para calentar lquidos. Hay balones
con cuello ms largo y soldado a l un tubo estrecho inclinado
ligeramente hacia abajo (balones de destilacin).
Pizeta Es un recipiente que se utiliza para contener agua
destilada, este utensilio facilita la limpieza de electrodos.
Tubos de ensayo Estos utensilios sirven para hacer experimentos
o ensayos los hay en varias medidas y pueden ser de vidrio o de
plstico.
TrpodeAparato de 3 patas que sirve para estabilizar un
objeto.
Microscopio compuestoSirve para ver especialmente objetos
translucidos.
Asas de DigralskySe utilizan para la extensin de microorganismos
sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri.
XI. ANEXO - NORMAS DE SEGURIDAD:
El uso de la bata de laboratorio es indispensable para asistir a
la prctica. No se debe comer, fumar, ni beber en el
laboratorio.
Mantenga la mesa libre de todo lo que no sea esencial.
Limpiar y desinfectar la superficie de mesones antes y despus
del trabajo del da.
Lave sus manos con agua y jabn carbnico antes y despus de cada
prctica. Luego asegure de frotarse las manos con alcohol.
Llevar registro de sus anlisis indicando: Tipo de muestra,
procedencia, fecha, tipo de siembra o mtodo, cultivos empleados y
resultados obtenidos. No pipetear con la boca.
El material a examinar debe tocarse exclusivamente con
instrumentos estriles.
Flamear el asa antes y despus de usarla.
uso adecuado y cuidadosamente de los mecheros Bunsen.
Descarte todo el material usado en recipientes destinados para
tal fin por ningn motivo en los desages o lavatorios.
Tenga cuidado con las preparaciones teidas ya que puede salpicar
colorantes a mesones y pisos.
Tener en consideracin la ficha de seguridad de cada insumo
qumico a usar.
Al final de la prctica dejar el lugar limpio y ordenado.
XII. ALGUNOS SIMBOLOS DE PELIGRO: