La Enfermedad de Gumboro Importancia del …congreso.fmvz.unam.mx/pdf/memorias/Aves/LA ENFERMEDAD DE...Introducción ….. Uno de los desafíos más grandes de la industria avícola

La Enfermedad de

Gumboro Importancia del

Diagnóstico

M TAMAYO

Introducción …..

Uno de los desafíos más grandes de la industria avícola

, es el control de las enfermedades inmunodepresoras

que tienen un impacto directo o indirecto en el

desempeño del ave, así como en la parte económica..

Las enfermedades como Gumboro, Anemia y las

Micotoxinas tienen efecto en la bolsa de Fabricio que es

el principal órgano linfoide de las aves. Por lo tanto el

llevar acabo un estudio morfológico, anatómico y

funcional es extremadamente importante para mantener

la salud de las aves.

La Bursa de Fabricius

•Descubierta por Gerónimo de Fabricius

•Anatomista y Embriólogo Italiano (1537–1619)

•Paso gran parte de su tiempo observando el

desarrollo del embrión de pollo . Publicó dos

importantes obras, La formación del feto(1600) y

la formación del huevo y el pollo (1612), al hacer

estos estudios encontró el órgano que hoy lleva

su nombre.

Introducción

•La enfermedad de Gumboro se observo a partir de 1957 •Aves que adquieren la enfermedad,

– son más susceptibles a otras enfermedades – No responden adecuadamente a las vacunaciones

PRESENTACION

Variantes

Inmuno-supresión severa y no hay mortalidad

Rápida deplesión linfoidea y atrofia bursal sin inflamación previa

Hipervirulentos

Inmunosupresión y alta mortalidad

Fuerte depleción linfoide, además de lesiones histológicas en timo, bazo, médula ósea y tonsilas cecales 10 días pi. Proventriculítis

Expresión

clínica

Clásicos

Inmuno-supresión y baja mortalidad

Inflamación y deplesión linfoidea

Efectos en

Bursa

MANIFESTACION CLÍNICA

MANIFESTACION CLÍNICA

MANIFESTACION CLÍNICA

MANIFESTACION CLÍNICA

MANIFESTACION CLÍNICA

MANIFESTACION CLÍNICA

MANIFESTACION CLÍNICA

MANIFESTACION CLÍNICA

LESIONES

6/10/2015

EL VIRUS

EL VIRUS

• Familia Birnaviridae

• Tamaño: 55-65nm

• RNA: Bisegmentado

• Virión no envuelto

• Existen 2 serotipos: 1, 2

• Virus estable y persistente en campo

20

EPIDEMIOLOGIA

Diagnostico

22

Prevalencia

Que tan diseminada está la enfermedad (área, zona,

país)

75000 casos de IBD ( nuevo , viejo , pasado) de 60

millones de aves =0.116% de prevalencia

Incidencia

Riesgo de la enfermedad en un período específico de

tiempo 10000 nuevos casos de IBD de 60 millones de

aves =0.01%

Desafío Riesgo

Basado en el riesgo local de la enfermedad.

Conocimiento sobre vacunas disponibles.

Monitoreo….

Procedimiento..

FTA Cards – Contienen quimicos que inactivan cualquier bacteria o virus en la tarjeta.

– Estable a temperatura ambiente

– Una muestra por circulo para evitar contaminación cruzada de las muestras

• Se realizan perforacion en las tarjetas FTA para analisis

PCR

• PCR – reacción de la polimerasa en cadena– prueba

utilizda para detectar la secuencia de la DNA

• Transcriptasa reverse PCR (RT-PCR) – utilizada para

conocer la secuencia del RNA

• Sequenciación – determina el nucleotido especifico, así

como la secuencia del aminoacido para una muestra en

particular.

• PCR cuantitativo (qPCR) o PCR – prueba que detecta y

cuantifica una secuencia en específico

INFECTIOUS BURSAL

DISEASE

Procesamiento de Imagen… (IP) Tecnología desarrollada por Bruce Stewart Brown en Solvay ( Solvay.- Fort Dodge-Pfizer-Zoetis) Nos permite contar y determinar el porcentaje de linfocitos rpresentes en las muestras de bolsa A partir de un corte histologico de bolsa, la imagen es capturada por una camara óptica conectada a un microscopio. Las imagenes son digitalizadas utilizando un SOFTWARE específico (E-Bursa). El conteo de linfocitos nos da una información muy valiosa , y que nos permite cuantificar la acción de una vacuna/virus en la bolsa .

25% linfocitos

ANALISIS DE IMAGEN

•Que se muestrea

– Bursa fijada en formalina,laminillas

en tinción H&E

•Muestras cronologicas

• Determinan momento de desafío – Colectan5-6 bursas en 3 o 4 momentos.

(21, 28 & 35 dias)

• 21 dias - Determina efectividad de

la vacuna – t 5-6 bursas por parvada a los 21 días.

site

IBD – Analisis de Imagen • Bursas tienen una escala , basada en la tinción de los

linfocitos.

• Tres secciones son analizadas en cada una de las bursas.

• Cada sección se le da un score de 1-50

• 5-6 bursas se analizan por granja y por ave.

29%

Lymphocytes

41% linfocitos

IBD – Image Analysis

• Promedio de cada bursa se coloca en el reporte

• Los resultados se les da un color para rapidamente

identificar el status de la bursa

Table 1. Bursal imaging scores at selected ages

(days)

Flock Farm Name

Ag

e Avg. % B1 B2 B3 B4 B5

1 Farm 1 20 39 42 40 40 41 36

2 Farm 1 31 36 42 30 31 42 42

3 Farm 2 20 38 40 41 37 37 37

4 Farm 2 31 30 33 33 31 24 29

Azul – intacto, negro – depleción moderada , Rojo depleción importante

Muestras de bolsas

•Presionar la bursa dentro del

circulo

•Remover y dejar secar

•Almacenar a T° en un lugar seco

35

Análisis PCR

•Como trabaja el análisis de PCR para IBF

•Amplifica una secuencia de 743 pares de base en

la región hipervariable de la proteína viral 2 (VP2)

–Área critica donde se encuentran las diferencias

antigénicas

–Codifica para epítopes neutralizantes

•Las enzimas de restricción,¨buscan¨ específicas

secuencias de nucleótidos cortan al DNA

–El tamaño de las bandas es el resultado del

corte de la región hipervariable..

Tabla de referencia de PCR: Virus Vacunales y de Campo Daral J. Jackwood, Ph.D. The Ohio State University

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10 Gpo 2

Gpo 3'

Gpo 4

Gpo 5

Gpo 6

New Pattern

0

2

4

6

8 172200

370424

Análisis del Arbol (Familiar) Filogénetico Clasificación de los virus por su relación genética

•Un programa de computadora compara los códigos genéticos

•Se determina la relación de los virus basada en los códigos

•Se utiliza para determinar cuando/donde los diferentes virus se separan o divergen de uno a otro

•Los IBDV cercanos estarán más cercanos en el árbol

•Los IBDV distantes estarán en ramas diferentes

Secuenciación

•Las posiciones de los Aminoacidos

•La posición de los aminoacidos 253 y 284

son importantes para la adaptación del virus.

•La gran mayoría de las cepas variantes y de

los vvIBDVs tienen una sustitución en el

aminoacido Proline en la posición p222

(Peak A).

•La falta de prolina en el sitio 222-resulta en

un cambio en la estructura de la región

Amino

Acid 3-Letter 1 letter Amino Acid

3-

Letter 1 letter

Alanine Ala A Leucine Leu L

Arginine Arg R Lysine Lys K

Asparagin

e Asn N Methionine Met M

Aspartic

acid Asp D Phenylalanine Phe F

Cysteine Cys C Proline Pro P

Glutamic

acid Glu E Serine Ser S

Glutamine Gln Q Threonine Thr T

Glycine Gly G Tryptophan Trp W

Histidine His H Tyrosine Tyr Y

Isoleucine Ile I Valine Val V

Arbol filogénetico

• El virus se enlista por Pais, posteriormente los dos siguiente s digitos corresponden al

año de aislamiento.

Analisis filogenético de los amino-ácidos de la región

híper-variable de la proteína viral VP2 de IBDV.

Amino Acid Substitutions (x100) 0

23.9

5 10 15 20

AF133904_Del_E Maternavac_28_1

IBDV_210_201_Colombia M64285_Del_A

AY918948_Lukert AF498631_Brusine_2

AF498632_Bursine_Plus NC_004178_UK661

D00869_Faragher_52-70 ABC86601_2512

D00499_STC IBU30818_Serotype2_Ohio

Ultimos hallazgos.

•Resultados de estudios realizados en Colombia, Venezuela y Mexico demostraron la presencia de diferentes virus de Gumboro, mostrando la mayoría presentaba una secuencia de amino acidos , típica de virus variantes y clásicos

Posición de aminoácidos.

Classi

c 222P Prolina

249Q Glutamina

286T Treonina

318G Glicina

Variant 222T treonina

249K Lisina

286I Isoleucina

318D Ac

Aspártico

México 222T treonina

249Q Glutamina

286T Treonina

318D Ac

Aspártico

COL &

VZLA 222P Prolina

249K Lisina

286I Isoleucina

318G Glicina

Secuenciación de virus

Posicion 253 Posicion 284

Virus Clásico Glutamina Alanina

Virus Hipervirulento

Glutamina Alanina

Vacunas adaptadas a

cultivo celular Histidina Treonina

Vacuna derivada de bolsa..

Glutamina Alanina

UK661

Brazil 90

UK661

28-1

Del-A

Del- E

28-1

Del-A

Del- E

28-1

Del-A

Del- E

28-1

Del-A

Del- E

STC

IBDV types in Latin America

UK661, 28-1

Del-A , Del- E

28-1

Del-A

Del- E

28-1

Del-A

Del- E

UK661,Del-A ,

STC

Argentina

05A17

CONTROL

PREVENCION

•Es muy claro el ver los cambios (shifts) en el virus

de Gumboro en latino america. Existe la

prevalencia de los virus virulentos en Sud

America,

•El continuar con el estudio para IBD nos dara

bases importantes para poder establecer su

control ..

• Conocer la epidemiología del IBD y de otras

enfermedades inmunodepresivas contribuira a los

programas profilácticos a la medidas de las

compañías avícolas.

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