“ ÁGUA “ FONTE DA VIDA 1. INTRODUÇÃO A água encontra-se disponível na natureza sob várias formas e é uma das substâncias mais comuns, cobrindo cerca de 70% da superfície do planeta. É encontrada principalmente no estado líquido, constituindo um recurso natural renovável por meio de ciclo. Cerca de 97,4% da água do planeta está presente nos oceanos e mares, 2% está armazenada nas geleiras e apenas 1% está disponível para o uso, armazenada nos lençóis subterrâneos, lagos, rios e na atmosfera. A água é essencial à vida, o que significa que todos os organismos vivos, incluindo o homem, dependem dela para sobrevivência. Mas é fundamental que os recursos hídricos apresentem condições físicas e químicas adequadas para utilização pelos organismos. Disponibilidade de água significa que ela esteja 1
TÉCNICA DE ANÁLISE DA POTABILIDADE DA ÁGUA ATRAVÉS DA TÉCNICA TUBOS MÚLTIPLOS
Welcome message from author
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
“ ÁGUA “ FONTE DA VIDA
1. INTRODUÇÃO
A água encontra-se disponível na natureza sob várias formas e é uma das
substâncias mais comuns, cobrindo cerca de 70% da superfície do planeta.
É encontrada principalmente no estado líquido, constituindo um recurso
natural renovável por meio de ciclo.
Cerca de 97,4% da água do planeta está presente nos oceanos e mares,
2% está armazenada nas geleiras e apenas 1% está disponível para o uso,
armazenada nos lençóis subterrâneos, lagos, rios e na atmosfera.
A água é essencial à vida, o que significa que todos os organismos
vivos, incluindo o homem, dependem dela para sobrevivência.
Mas é fundamental que os recursos hídricos apresentem condições
físicas e químicas adequadas para utilização pelos organismos.
Disponibilidade de água significa que ela esteja presente, não somente
em quantidade adequada em uma dada região, mas também que sua
qualidade seja satisfatória para suprir as necessidades de um determinado
conjunto de seres vivos.
Através dos séculos, a complexidade dos usos múltiplos da água pelo
homem aumentou e produziu enorme conjunto de degradação e poluição. Por
outro lado, os usos excessivos e as retiradas permanentes para diversas
finalidades têm diminuído muito a disponibilidade de água e produzindo
inúmeros problemas de escassez.
1
O desenvolvimento industrial, o crescimento demográfico e a ocupação
do solo de forma intensa e acelerada vêm provocando o comprometimento dos
recursos hídricos disponíveis para consumo humano, recreação e outras
atividades, aumentando consideravelmente o risco de doenças de transmissão
hídrica.
Um dos grandes problemas ambientais da atualidade é a qualidade da
água, que tem sido intensamente deteriorada em países desenvolvidos e em
desenvolvimento, apresentando, desta forma, um risco potencial de
comprometimento à saúde e ao bem-estar do homem.
Certamente, o melhor método de assegurar água adequada para
consumo consiste no desenvolvimento de políticas de proteção, evitando as
contaminações que podem ocorrer e a exposição das pessoas a riscos de
doenças.
A qualidade de vida dos seres humanos está diretamente ligada à água,
pois ela é utilizada para o funcionamento adequado de seu organismo, preparo
de alimentos, higiene de pessoas e utensílios.
A água usada para abastecimento doméstico deve apresentar
características sanitárias e toxicológicas adequadas, deve estar isenta de
organismos patogênicos e de substâncias tóxicas, para prevenir danos à saúde
e favorecer o bem estar das pessoas.
As doenças transmitidas pela água são responsáveis por mais da
metade das internações hospitalares no Brasil e por quase a metade das
mortes de crianças até um ano de idade.
2. OBJETIVO
O ensaio Presuntivo e Confirmativo realizado tem por objetivo analisar, detectar
e quantificar a presença/ausência do grupo Coliforme, sejam eles Totais ou
Termotolerantes (Fecais) em uma determinada amostra, utilizando-se da
Técnica dos Tubos Múltiplos e quantificação pelo NMP Número Mais Provável.
As águas de abastecimento apresentam o risco de serem poluídas por
águas residuárias e excretas de origem humana ou animal, podendo, desta
forma, conter organismos patogênicos, tornando-se assim um veículo de
transmissão de doenças.
Por isso, impõe-se a necessidade de exames rotineiros das mesmas,
2
para determinar seu grau de segurança do ponto de vista bacteriológico.
Embora já existam métodos desenvolvidos para detecção de vários
organismos patogênicos de veiculação hídrica, os mesmos não são aplicados
na rotina devido ao alto custo e necessidade de pessoal especializado.
Além disso, uma vez que o lançamento de organismos patogênicos nos
esgotos é intermitente e está na dependência das condições de saúde da
população, é possível que, em determinadas ocasiões, não se detectem esses
organismos na água, porém sua ausência não indica que a mesma seja
segura.
Para a avaliação das condições sanitárias de uma água, utilizam-se
bactérias do grupo coliforme, que atuam como indicadores de poluição fecal,
pois estão sempre presentes no trato intestinal humano e de outros animais de
sangue quente, sendo eliminadas em grandes números pelas fezes.
A presença de coliformes na água indica poluição, com o risco potencial
da presença de organismos patogênicos, e sua ausência é evidência de uma
água bacteriologicamente potável, uma vez que são mais resistentes na água
que as bactérias patogênicas de origem intestinal.
Como o grupo dos coliformes totais incluí gêneros que não são de
origem exclusivamente fecal, isto limita sua aplicação como indicador
específico de contaminação fecal.
O reconhecimento deste fato levou ao desenvolvimento de métodos de
enumeração de um subgrupo de coliformes denominados coliformes fecais
(coliformes termotolerantes), os quais são diferenciados dos coliformes totais
pela sua capacidade de fermentar a lactose em temperatura elevada (44,50C).
Embora a utilização dos coliformes fecais, em substituição aos totais,
tenha determinado uma melhoria significativa na detecção da contaminação
fecal, logo se tornou evidente a existência de outros coliformes
termotolerantes além de E.coli (principalmente Klebsiella), os quais, por não
serem de origem exclusivamente fecal, comprometiam a especificidade deste
subgrupo para a finalidade proposta.
Em decorrência disto, as tendências atuais se direcionam para a
detecção específica de E. Coli, que é o único componente do grupo coliforme
de origem exclusivamente fecal.
Como o grupo dos coliformes totais inclui gêneros que não são de
3
origem exclusivamente fecal, isto limita sua aplicação como indicador
específico de contaminação fecal.
O reconhecimento deste fato levou ao desenvolvimento de métodos de
enumeração de um subgrupo de coliformes denominados coliformes fecais
(coliformes termotolerantes), os quais são diferenciados dos coliformes totais
pela sua capacidade de fermentar a lactose em temperatura elevada (44,5°C).
A determinação do Número Mais Provável (NMP) de coliformes em
uma amostra é efetuada a partir de aplicação da técnica de tubos múltiplos.
Esta técnica é baseada no princípio de que as bactérias presentes em
uma amostra podem ser separadas por agitação, resultando em uma
suspensão de células bacterianas, uniformemente distribuídas na amostra.
Consiste na inoculação de volumes decrescentes da amostra em meio
de cultura adequado ao crescimento dos microrganismos pesquisados, sendo
cada volume inoculado em uma série de tubos.
Através de sucessivas diluições da amostra, são obtidos inóculos, cuja
semeadura fornece resultados negativos em pelo menos um tubo da séria em
que os mesmos foram inoculados e a combinação de resultados positivos e
negativos permite a obtenção de uma estimativa da densidade das bactérias
pesquisadas, através da aplicação de cálculos de probabilidade.
Para análises de águas, tem sido utilizado preferencialmente a fator 10
de diluição, sendo inoculados múltiplos e submúltiplos de 1 mL da amostra,
usando séries de 5 tubos para cada volume a ser inoculado.
3. DEFINIÇÕES
3.1 ORGANISMOS PATOGÊNICOS
Organismos patogênicos são aqueles que transmitem doenças pela
ingestão ou contato com água contaminada, como: bactérias, vírus, parasitas e
protozoários.
3.2 COLIFORMES TOTAIS
Grupo de bactérias constituído por bacilos· Gram-negativos, aeróbios ou
anaeróbios facultativos, não formadores de esporos, oxidase-negativos.
capazes de crescer na presença de sais biliares ou outros com postos ativos
4
de superfície (surfactantes), com propriedades similares de inibição de
crescimento, e que fermentam a lactose com produção de ácido e gás a 350C
em 24-48 horas.
No caso da técnica de tubos múltiplos, são considerados coliformes os
organismos que fermentam a lactose com produção de gás a 350C. O grupo
inclui os seguintes gêneros: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter e Klebsiella.
3.3 COLIFORMES FECAIS (TERMOTOLERANTES)
São os coliformes capazes de se desenvolver e fermentar a lactose com
produção de ácido e gás a temperatura de 44,5 +- O,20C em 24 horas.
O principal componente deste grupo é Escherichia coli, sendo que
alguns coliformes do gênero Klebsiella apresentam também essa capacidade.
3.4 ESCHERICHIA COLI
Bactéria do grupo coliforme que fermenta a lactose e manitol,
comprodução de ác ido e gás a 44 ,5 ± 0 ,2ºC em 24 horas
p roduz indo l a par t i r do t r ip to fano oxidase negativa, não hidrolisa a
ureia e apresenta atividade das enzimas ß-galactosidase e ß-glucoronidase,
sendo considerado o mais específico indicador de contaminação fecal
recente e de eventual presença de organismos patogênicos;
3.5 CALDO LACTOSADO(COM PÚRPURA DE BROMOCRESOL-C.L.)
(CONCENTRAÇÃO SIMPLES)
Meio de enriquecimento, no qual as concentrações de lactose e peptona
fornecem condições ótimas para o crescimento de bactérias do grupo
coliforme.
FÓRMULA: 5
INGREDIENTES QTDE
EXTRADO DE CARNE 3,0 g.PEPTONA 5,0 g.LACTOSE 5,0 g.ÁGUA DESTILADA 1000 mL
pH FINAL 6,9 +- 0,2 a 25oC
PREPARO:
Pesar 13,0 g do meio desidratado (Caldo Lactosado e 0,01 g de púrpura
de bromocresol e acrescentar 1 000 mL de água destilada fria, aquecer,
agitando frequentemente, até a completa dissolução do meio, tomando cuidado
para que não seja atingida a temperatura de ebulição.
Em tubos de ensaio de 16 mm x 150 mm, contendo em seu interior
tubos de Durharn invertidos. distribuir volumes adequados para que o volume
final, após esterilização, seja de 10 mL.
Tamponar e esterilizar em autoclave a 121oC, durante 15 minutos.
ARMAZENAMENTO:
O meio preparado poderá ser estocado à temperatura ambiente, em local
limpo e livre de poeira, durante, no máximo, urna semana.
3.6 CALDO LACTOSADO COM VERDE BRILHANTE E BILE A 2% (CLVBB)
Meio seletivo, em que ocorre inibição de bactérias Gram-positivas e de
bactérias esporuladas fermentadoras da lactose, permitindo um bom
desenvolvimento de bactérias do grupo coliforme.
FÓRMULA:
INGREDIENTES QTDE PEPTONA 10,0 g.LACTOSE 10,0 g.BILE DE BOI DESITRADA 20,0 g.
VERDE BRILHANTE0,013
3 g.
ÁGUA DESTILADA 1000mL
pH FINAL 7,2 +- 0,2 a 25ºC
6
PREPARO:
Pesar 40,0 g do meio desidratado Caldo lactosado com verde brilhante e
bile a 2% e acrescentar 1000 mL de água destilada fria, aquecer, agitando
frequentemente, até a completa dissolução do meio, to mando cuidado para
que não seja atingida a temperatura de ebulição.
Distribuir volumes de 10 mL em tubos de ensaio de 16 mm x 150 mm,
contendo em seu interior tubos de Durharn invertidos.
Tamponar e esterilizar em autoclave a 121°C, durante 15 minutos.
ARMAZENAMENTO:
O meio preparado poderá ser estocado à temperatura ambiente, em
local limpo e livre de poeira, durante, no máximo, uma semana.
3.7 MEIO EC
Meio seletivo para detecção de coliformes fecais, em que os sais biliares
inibem o crescimento de formas esporuladas e de Gram-positivas e cuja
incubação a 44,5 ± O,20C permite a seleção dos coliformes de origem fecal
(coliformes termotolerantes).
FÓRMULA:
INGREDIENTES QTDE TRIPTOSE OU TRIPTICASE 20,0 g.LACTOSE 5,0 g.MISTURA SAIS BILIARES 1,5 g.FOSFATO DIPOTÁSSICO ((K2HP04) p.a 4,0 g.FOSFATO MONOPOTÁSSICO 1,5 g.CLORETO DE SODIO 5,0 g.ÁGUA DESTILADA 1000 mL pH FINAL 6,9 +- 0,2 a 25oC
7
PREPARO:
Pesar 37,0 g do meio EC desidratado e acrescentar 1 000 mL de água
destilada fria, aquecer, agitando frequentemente, até a completa dissolução do
meio, tomando cuidado para que não seja atingida a temperatura de ebulição.
Distribuir volumes de 5 rnL. em tubos de ensaio de12 mm x 120 mm,
contendo em seu interior tubos de Durham invertidos.
Tamponar e esterilizar em autoclave a 121oC. durante 15 minutos
ARMAZENAMENTO:
O meio preparado poderá ser estocado à temperatura ambiente, em
local cal limpo e livre de poeira, durante, no máximo, uma semana.
3.9 NÚMERO MAIS PROVÁVEL (NMP)
É a estimativa da densidade de bactérias em uma amostra, calculada a
partir da combinação de resultados positivos e negativos, obtidos através da
aplicação da técnica de tubos múltiplos.
4. EQUIPAMENTOS & VIDRARIAS
4.1 BALANÇA
Com sensibilidade de, no mínimo, 0,1 g ao serem pesados 150 g.
4.2 BANHO-MARIA
Equipado com termostato e agitador de baixa velocidade para
promover a circulação da água e manter a temperatura uniforme (44,5 +- 0,20C)
em todos os pontos.
O nível de água no banho-maria deve ser mantido acima do nível do
meio de cultura nos tubos de ensaio imersos para incubação, sendo
8
recomendada a troca semanal dessa água para evitar a proliferação de fungos
e outros microrganismos.
4.3 DESTILADOR DE ÁGUA OU APARELHO PARA DESIONIZAÇÃO
Devem produzir água não tóxica, livre de substâncias que impeçam ou
interfiram na multiplicação bacteriana, cuja condutividade deve ser inferior a 2
µS/cm a 250C e o pH estar na faixa de 5,5 a 7,5.
Nota: A densidade de bactérias heterotróficas na água recém destilada deve
ser inferior a 1 000 unidades formadoras de colônias por mL UFC/mL) e
a 10000 UFC/mL na água destilada armazenada, devendo esse controle
ser efetuado com frequência mínima mensal.
4.4 EQUIPAMENTOS PARA ESTERILIZAÇÃO
4.4.1 AUTOCLAVE
É normalmente operada a uma pressão de 103.393 Pa (1,05 kgf/cm2 ou
15 lb/pol2 ), produzindo, em seu interior, uma temperatura de 121,60C ao nível
do mar.
Em seu funcionamento, deve-se observar a substituição por vapor de
todo o ar existente na câmara e a operação total desse equipamento deve
durar no máximo uma hora, sendo recomendável que a temperatura de
esterilização seja atingida em até 30 minutos.
9
4.4.2 ESTUFA DE ESTERILIZAÇÃO
Deve manter a temperatura de (170 +- 100C) durante o período de
esterilização (mínimo de 2 horas).
4.4.3 INCUBADORA BACTERIOLÓGICA TERMOSTATIZADA
Deve manter a temperatura na faixa de 35 +- 0,50C e a umidade relativa
entre 75 e 85% e ser colocada,em um local onde a temperatura permaneça na
faixa de 16 a 270C.
4.4.4 MEDIDOR DE PH
Deve fornecer exatidão mínima de 0,1 unidade de pH e sua calibração
deve ser feita pelo menos duas vezes ao dia, com. no mínimo, duas soluções-