kromosoomid karüotüüp, karüogramm kliiniline tsütogeneetika rakubioloogia praktikum okt. 2010 kati kuuse tsütogeneet ik
Jan 10, 2016
kromosoomid karüotüüp, karüogrammkliiniline tsütogeneetika
rakubioloogia praktikumokt. 2010
kati kuusetsütogeneetik
kromosoomi struktuurrakutsükkel
mitoosi metafaas
kromosoomide arv eri liikidel:
• inimene
• koer
• kass
• hobune
• toakärbes
• karpkala
• mugulsibul
• tomat
• kartul
Homo sapiens
Canis familiaris
Felis domesticus
Equus calibus
Musca domestica
Cyprinus carpo
Allium cepa
Lycopersicon esculentum
Solanum tuberosum
46
78
38
64
12
104
16
24
48
Karüotüüp – kromosoomide komplekt jagunevas rakus
Iseloomulik liigile/indiviidile/koele/rakule
kromosoomide arv ja morfoloogia (kuju, suurus)
kromosoomide suurus:
Spix macaw
oder
kromosoomide kuju:
telotsentriline:
vöödistuse muster
inimese kromosoomid - 46
1956.a Tijo ja Levan Rahvusvaheline klassifikatsioon: 1960
kromosoomide vöödistuse muster
1956.a 1969.a
rahvusvaheline tsütogeneetika nomenklatuur – ISCN
kromosoomide diferentsiaalvärving (banding):
kogu kromosoomi ulatuses:
Q-banding (quinakriin-dihüdrokloriid)
G-banding (trüpsiiniga töötlus)
R-banding (temperatuuriga töötlus)
high-resolution banding
teatud kromosoomipiirkonna värving:C-banding (tsentromeerid ja heterokromatiin)NOR-värving (tuumakese organisaatorpiirkond)
inimese karüogramm (G-banding):
karüotüüp:46,XY
A
B
C
DE
F
G
hakkame karüotüpeerima:
AB
C
D E
F
G
9
4
17
6
11
520
6
420
22 8
12
14
3
1
2
1110
13
18
18
15
1613
19
21
3
21
9 1012
7
5
X 8
17141
15 1916 22
X
Q-band C-band
rakkude kasvatamine koekultuuris
kromosoomide uurimiseks sobiv materjal:
• perifeerne veri• nahk• luuüdi
rakutsükli kontrollpunktid:
X
X
X mitogeen (PHA)
X kolhitsiin
• amnionivesi• koorion• loote nabaväädi veri
koekultuuriprotokoll (perifeerne veri)
• kultuuri initsiatsioon – mitogeen PHA (fütohemaglutiniin)
• käävi inhibiitor – kolhitsiin
• rakkude hüpotooniline töötlus – KCl, Na-tsitraat
• rakkude fikseerimine – metanool/jää-äädikas
• kromosoomipreparaadi valmistamine
OK vaatame
prepsi
rahvusvaheline tsütogeneetika nomenklatuur – ISCN 2009
7. kromosoom band level: 300 400 550 700 850
karüotüübi analüüs
*polümorfism e. normivariandid (qh+; p+; ps+; pstk+) 9qh+; Yqh+; 13p+; 21ps+; 21pss; 22pstk+
balansseeritud translokatsioon
mitte kõik muutused karüotüübis ei põhjusta haigust
*kromosoomide struktuuri balansseeritud muutused:
45,XY,t(14;15)(q10;q10)mat(Robertsoni translokatsioon)
46,XY,t(5;11)(p11;q12)mat
46,XY,t(7;8)(q31.3;p21.2)
kromosoomide struktuuri balansseeritud muutus
inversioon
inv(9)(p12q13)
inv(2)(p11q12)
46,XX,inv(13)(q14q22)mat(paratsentriline inversioon)
inv(7)(p22q11.2)(peritsentriline inversioon)
kromosoomihaigused e. sündroomid
• ei ole ravitavad
• diagnoosimine vajalik prognoosi ja kordusriski andmiseks
• võimalik diagnoosida enne sündi
tingitud kromosoomide arvu või struktuuri tasakaalustamata muutusest
kromosoomihaigused / autosoomide trisoomiadtrisoomia 21 e. Downi sündroomsagedus 1:600
• lihashüpotoonia• liigeste üliliikuvus• mongoloidne silmade lõige• epikantus e. kolmas
silmalaug• lai silmavahe• suur keel• väikesed düsplastilised
kõrvad• lame profiil• südamerike• tsöliaakia
kromosoomihaigusedDowni sündroom – 47,XY,+21
Downi sündroom: 46,XY,der(14;21)(q10;q10)
Eesti, 2009.a.
Downi sündroom: 46
sündis 14
8 valenegatiivset skriiningtesti
3 loobusid kromosoomianalüüsist
2 ei teinud skriiningtesti
1 sünnieelse diagnoosiga
32 sünnieelselt diagnoositud, rasedus katkestatud
autosoomide trisoomiad
trisoomia 18Edwardsi sündroomsagedus 1:7000
trisoomia 13Patau sündroomSagedus 1:10 000
Eestis 2009:tri18 – 4tri13 - 1
sugukromosoomide arvuanomaaliad
47,XXY Klinefelteri sündroom
45,X Turneri sündroom
45,X47,XXY
47,XYY
47,XXX Triplo-X sündroom
kromosoomide balansseerimata struktuurimuutused:
• deletsioon• duplikatsioon• insertsioon• translokatsioon
• ringkromosoom• lisa(marker)kromosoom• isokromosoom
47,XY,+mar
46,X,i(X)(q10)
molekulaarne tsütogeneetika – FISH-analüüs
kasutatakse fluorestsentsmärgisega DNA proove
• denaturatsioon• hübridisatsioon• signaali detekteerimine fluorestsentsmikroskoobiga
FISH-analüüs:
mikrodeletsioon 22q11.2 – DiGeorge sündroom
ish del(22)(q11.2q11.2)(TUPLE1-)
mikrodeletsioon 15. kromosoomi pikas õlas - Prader-Willi sündroom
ish del(15)(q11q13)
molekulaarne tsütogeneetika interfaasi tuumadel 13.kromosoomi DNA proov – roheline21.kromosoomi DNA proov - punane
18.kromosoomi DNA proov – sinine X-kromosoomi DNA proov – roheline Y-kromosoomi DNA proov - punane
molekulaarne ja klassikaline tsütogeneetika
47,XX,+21Downi sündroom
21
molekulaarne ja klassikaline tsütogeneetika
45,XTurneri sündroom
X
triploidia (69,XXX)
21 13 18 X21 13 18 X