Jacal In

8/23/2019 Jacal In

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C l i n . e x p . I m m u n o l . ( 1 9 9 0 ) 8 0 , 4 2 0 - 4 2 5

J a c a l i n : a l e c t i n m i t o g e n i c f o r human CD4 T lymphoctyesN . PINEAU, P . AUCOUTURIER, J . C . BRUGIER & J . L . PREUD'HOMMEL a b o r a t o r y o f I m m u n o l o g y a n d I m m un o p a t h o l og y (CNRS URA 1 1 7 2 ) , P o i t i e r s U n i v e r s i t y H o s p i t a l , P o i t i e r s , France

( A c c e p t e d f o r p u b l i c a t i o n 4 D e c e m b e r 1 9 8 9 )

SUMMARYT h e m a j o r p r o t e i n component o f s e e d s f r o m j a c k f r u i t i s t h e l e c t i n j a c a l i n . J a c k f r u i t c r u d e e x t r a c t s areknown t o s t i m u l a t e human l y m p h o c y t e s , b u t t h e m i t o g e n i c p r o p e r t i e s o f p u r i f i e d j a c a l i n h a v e no tb e e n s t u d i e d i n d e t a i l s o f a r . S t u d y o f t h e p r o l i f e r a t i v e r e s p ons e o f c e l l p o p u l a t i o n s f r o m n o r m a lhuman p e r i p h e r a l b l o o d t o p u r i f i e d j a c a l i n s h o w e d i t t o b e m i t o g e n i c t h r o u g h an i n t e r a c t i o n w i t hl y m p h o c y t e s b y i t s l e c t i n - b i n d i n g s i t e , as s h o w n b y i n h i b i t i o n b y I g A . J a c a l i n f a i l e d t o s t i m u l a t e Bc e l l s t o p r o l i f e r a t e a n d t o u n d e r g o p l a s m a c e l l m a t u r a t i o n . I t i n d u c e d a p r o l i f e r a t i o n o f CD4 ( a n d no tCD8) l y m p h o c y t e s , as s h o w n b y p h e n o t y p i c a n a l y s i s o f c e l l s r e c o v e r e d a f t e r c u l t u r e a n d b y s t u d i e s o ft h e r espon se o f i s o l a t e d T c e l l s u b p o p u l a t i o n s . T h e p r o l i f e r a t i v e r e s p o n s e t o j a c a l i n was a u t o l o g o u sm o n o c y t e - d e p e n d e n t . T h e k i n e t i c s o f j a c a l i n - i n d u c e d DNA s y n t h e s i s , e x p r e s s i o n o f CD25 a n di n t e r l e u k i n - 2 s e c r e t i o n was s h i f t e d b y c o mp a r i s o n w i t h t h a t i n d u c e d b y p h y t o h a e m a g g l u t i n i n . Ther eas on f o r t h e r e s t r i c t e d r e s p o n s i v e n e s s o f CD4 T c e l l s i s p r e s e n t l y u n c l e a r ; j a c a l i n bound t o a l l b l o o dc e l l s a n d d i d n o t s i g n i f i c a n t l y c o- cap w i t h C D l , C D 2 , C D3 , C D 4 , CD 8 a n d C D 3 8 , a n d j a c a l i nr espon se w as n e i t h e r e n h a n c e d no r i n h i b i t e d b y a n t i b o d i e s t o t h e s e s u r f a c e a n t i g e n s .K e y w o r d s human CD4 l y m p h o c y t e s p r o l i f e r a t i v e r e s p o n s e l e c t i n j a c a l i n

INTRODUCTIONT h e m a j o r p r o t e i n c o m p o n e n t o f s e e d s f r o m j a c k f r u i t ( A r t o -c a r p u s h e t e r o p h y l l u s ) , i s a G a l f l - 1 - + 3 G a l N A C s p e c i f i c l e c t i n ,j a c a l i n , w h o s e r e a c t i v i t y w i t h human i m m u n o g l o b u l i n s , e s p e -c i a l l y I g A I a n d I g D , i s w e l l d o c u m e n t e d ( r e v i e w e d b y A u c o u t u r -i e r e t a l . , 1 9 8 9 ) . T h e m i t o g e n i c p r o p e r t i e s o f t h i s l e c t i n w e r e l e s ss t u d i e d . J a c k f r u i t s e e d c r u d e e x t r a c t ( J C E ) w a s f i r s t r e p o r t e d t oi n d u c e b o t h human l y m p h o c y t e ( m o s t l y T c e l l ) p r o l i f e r a t i o na n d B c e l l t e r m i n a l d i f f e r e n t i a t i o n ( B u n n - M o r e n o & C a m p o s -N e t o , 1 9 8 1 ) . More r e c e n t l y , JCE w a s f o u n d t o s t i m u l a t e o n l y Tc e l l s a n d t o i n h i b i t i m m u n o g l o b u l i n p r o d u c t i o n , p o s s i b l y b ya c t i v a t i n g s u p p r e s s o r T l y m p h o c y t e s ( S a x o n , T s u i & M a r t i n e z -M a z a , 1 9 8 7 ; G a t t a s s , G h o b r i a l & B u n n - M o r e n o , 1 9 8 8 ) . JCEa l s o e n h a n c e s t h e p r o d u c t i o n o f i n t e r f e r o n - g a m m a ( I F N - y ) b yhuman T c e l l s ( C r a n e e t a l . , 1 9 8 4 ) . JCE c o n t a i n s j a c a l i n a n d av a r i e t y o f o t h e r m o l e c u l e s ( A u c o u t u r i e r e t a l . , 1 9 8 7 , 1 9 8 9 ) . Too u r k n o w l e d g e , t h e r e h a s b e e n n o s t u d y o f t h e m i t o g e n i cp r o p e r t i e s o f p u r i f i e d j a c a l i n , a m o l e c u l e o f a b o u t 5 0 k D , o fknown a m i n o a c i d a n d c a r b o h y d r a t e c o n t e n t , made u p o f t wot y p e s o f n o n - c o v a l e n t l y l i n k e d s u b u n i t s , a n u n g l y c o s y l a t e d1 2 k D a n d a g l y c o s y l a t e d 1 5 k D s u b u n i t ( A u c o u t u r i e r e t a l . ,1 9 8 7 ) . JCE c a n b e f r a c t i o n a t e d b y d i e t h y l a m i n o e t h y l ( D E A E )c h r o m a t o g r a p h y ( M o r e i r a & A i n o u z , 1 9 8 1 ) i n t o f r a c t i o n sc o n t a i n i n g v a r i a b l e p r o p o r t i o n s o f j a c a l i n w i t h d i f f e r e n t r a t i o s

C o r r e s p o n d e n c e : J . L . P r e u d ' h o m m e , CNRS URA 1 7 2 , CHUR L aM i l e t r i e , BP 5 7 7 , F 8 6 0 2 1 P o i t i e r s C e d e x , F r a n c e .

o f t h e g l y c o s y l a t e d a n d u n g l y c o s y l a t e d s u b u n i t s , JCE f r o md i f f e r e n t g e o g r a p h i c o r i g i n s b e i n g p o s s i b l y n o n - i d e n t i c a l( A u c o u t u r i e r e t a l . , 1 9 8 7 , 1 9 8 8 ) . We t h e r e f o r e s t u d i e d t h em i t o g e n i c p r o p e r t i e s o f p u r i f i e d j a c a l i n .

MATERIALS AND METHODSP u r i f i c a t i o n o f j a c a l i nJ a c a l i n w a s p u r i f i e d f r o m j a c k f r u i t s e e d s c o l l e c t e d i n t h e I n d i a nO c e a n i s l a n d L a R e u n i o n , b y D E A E - T r i s a c r y l ( I B F , V i l l e n e u v eL a G a r e n n e , F r a n c e ) c h r o m a t o g r a p h y a s p r e v i o u s l y d e s c r i b e d( A u c o u t u r i e r e t a l . , 1 9 8 7 , 1 9 8 8 , 1 9 8 9 ) . P u r i t y w a s c o n t r o l l e d b ySDS-PAGE f o l l o w e d b y C o o m a s s i e b r i l l i a n t b l u e a n d s i l v e r( B i o - R a d , R i c h m o n d , C A ) s t a i n i n g a n d b y W e s t e r n b l o ta n a l y s i s u s i n g p e r o x i d a s e - c o u p l e d F ( a b ' ) 2 f r a g m e n t s o f p u r i f i e da n t i - j a c a l i n r a b b i t I g G a n t i b o d i e s .I s o l a t i o n o f m o n o n u c l e a r c e l l p o p u l a t i o n sP e r i p h e r a l b l o o d m o n o n u c l e a r c e l l s ( P B M C ) f r o m h e a l t h ya d u l t s w e r e i s o l a t e d b y F i c o l l ( L y m p h o p r e p ; N y c o m e d , O s l o ,N o r w a y ) c e n t r i f u g a t i o n . B c e l l s w e r e e n r i c h e d b y two T c e l ld e p l e t i o n s t e p s u s i n g t h e 2 - a m i n o e t h y l i s o t h i o u r o n i u m h y d r o -b r o m i d e ( S i g m a , S t L o u i s , MO) a c t i v a t e d s h e e p r e d b l o o d c e l lr o s e t t e m e t h o d ( S a x o n e t a l . , 1 9 7 6 ) . T h e p e r c e n t a g e o f r e s i d u a lC D 3 - p o s i t i v e c e l l s was a l w a y s b e l o w 1 % . T e n r i c h e d c e l l s w e r eo b t a i n e d a f t e r o n e c y c l e o f E r o s e t t i n g . T h e y c o n t a i n e d v i r t u a l l yn o s u r f a c e i m m u n o g l o b u l i n ( S I g ) b e a r i n g B c e l l s a n d 2-5%m o n o c y t e s . B l o o d l y m p h o c y t e s f r o m f o u r p a t i e n t s a f f e c t e d w i t h

4 2 0

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Human CD4 c e l l s t i m u l a t i o n b y j a c a l i nc h r o n i c l y m p h o c y t i c l e u k a e m i a ( C L L ) a n d h i g h l y m p h o c y t e sc ou n ts w e r e a l s o s t u d i e d . T h e s e c e l l s w e r e m o n o c l o n a l S I g -b e a r i n g B c e l l s a n d t h e p e r c e n t a g e o f C D 3 - p o s i t i v e l y m p h o c y t e si n t h e c e l l s u s p e n s i o n s o b t a i n e d f r o m t h e s e p a t i e n t s w a s b e l o w1 % .

M o n o c y t e s w e r e e l i m i n a t e d f r o m PBMC b y t h r e e s t e p s( W e r n e t & K u n k e l , 1 9 7 3 ; M o s s a l a y i e t a l . , 1 9 8 5 ) : PBMC w e r ea p p l i e d t o a S e p h a d e x Gl O ( P h a r m a c i a , U p p s a l a , S w e d e n )c o l u m n a n d i n c u b a t e d a t 3 7 0 C f o r 3 0 m i n . T h e c e l l s r e c o v e r e d b yw a s h i n g w i t h warm m e d i u m w e r e i n c u b a t e d f o r 4 0 m i n a t 2 5 0 Cw i t h 5 mML - l e u c i n e m e t h y l e s t e r ( S i g m a ) i n m e d i u m RPMI 1 6 4 0a n d w a s h e d . F i n a l l y , t h e c e l l s u s p e n s i o n w a s i n c u b a t e d a t 3 7 0 Cf o r 1 h i n P e t r i d i s h e s c o a t e d w i t h f e t a l c a l f s e r u m ( F C S ) . N o n -a d h e r e n t c e l l s w e r e r e c o v e r e d . T h e y c o n t a i n e d l e s s t h a n 1 %m o n o c y t e s . M o n o c y t e - e n r i c h e d s u s p e n s i o n s w e r e o b t a i n e d b ya d h e r e n c e o n F C S - c o a t e d P e t r i d i s h e s ( 1 h a t 3 7 C ) a n dr e s u s p e n s i o n b y f l u s h i n g w i t h a P a s t e u r p i p e t t e .CD4 a n d CD8 e n r i c h e d c e l l p o p u l a t i o n s w e r e i s o l a t e d b yi n c u b a t i o n w i t h a n t i - C D 4 o r a n t i - C D 8 a n t i b o d y ( O K T 4 ,OKT8; O r t h o , R a r i t a n , N J ) a n d p a n n i n g o n P e t r i d i s h e s c o a t e dw i t h r a b b i t a n t i - m o u s e I g G a n t i b o d i e s a d s o r b e d o n human I g G ,a c c o r d i n g t o W y s o c k i & S a t o ( 1 9 7 8 ) . I n a d d i t i o n , T c e l l sd e p l e t e d i n CD4 l y m p h o c y t e s b y p a n n i n g w e r e s t u d i e d .C e l l c u l t u r e sC e l l s w e r e c u l t u r e d f o r 1 t o 7 d a y s i n m e d i u m RMPI 1 6 4 0s u p p l e m e n t e d w i t h 1 0 % F C S , 2 5 mm H E P E S , 2 mM L -g l u t a m i n e , 1 0 0 U / m l p e n i c i l l i n a n d 1 0 0 j g / m l s t r e p t o m y c i n( G I B C O , G r a n d I s l a n d , N Y ) , i n 9 6 - w e l l m i c r o t i t r e p l a t e s i n a 5%C O 2 i n c u b a t o r . P r o l i f e r a t i v e r e s p o n s e s i n d u c e d b y j a c a l i n ( 2 t o2 0 0 0 M g / m l ) , p o k e w e e d m i t o g e n (PWM, 1 0 M g / m l ) a n d p h y t o -h a e m a g g l u t i n i n ( P H A , 1 0 p g / m l ) ( G I B C O ) w e r e m e a s u r e d b y 3 H -t h y m i d i n e i n c o r p o r a t i o n . P r e l i m i n a r y e x p e r i m e n t s s h o w e d t h eo p t i m a l j a c a l i n c o n c e n t r a t i o n t o b e 2 0 0 M g / m l a n d t h e t i m e o fc u l t u r e t h a t y i e l d e d t h e m o s t r e p r o d u c i b l e r e s u l t s t o b e 4 d a y s .H e n c e , e x p e r i m e n t s d e s c r i b e d b e l o w w e r e p e r f o r m e d u n d e rt h e s e c o n d i t i o n s , e x c e p t w h e r e s p e c i f i c a l l y s t a t e d . A l l s a m p l e sw e r e t e s t e d i n t r i p l i c a t e .I n h i b i t i o n o f j a c a l i n - i n d u c e d p r o l i f e r a t i o n b y a n t i b o d i e s t os u r f a c e a n t i g e n s w a s s e a r c h e d f o r b y p r e - i n c u b a t i n g PBMC i nm i c r o p l a t e s ( 2 x 1 0 5 c e l l s / w e l l ) e i t h e r f o r 3 0 m i n a t roomt e m p e r a t u r e o r f o r 1 h a t 3 7 C w i t h m o n o c l o n a l a n t i b o d i e s( M o A b s ) ( O r t h o ) e x t e n s i v e l y d i a l y s e d a g a i n s t RMPI m e d i u ma n d a d j u s t e d a t 5 M g / m l . T h e f o l l o w i n g MoAbs w e r e u s e d : a n t i -CD1 ( O K T 6 ) , CD2 (OKT 1 1 ) , CD 3 ( O K T 3 ) , C D 4 , CD8 a n dCD38 ( O K T 1 O ) . T h e n , t h e c e l l s w e r e c u l t u r e d f o r 4 d a y s i n t h ep r e s e n c e o f j a c a l i n a s a b o v e . To s t u d y t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e nt h e l e c t i n - b i n d i n g s i t e a n d l y m p h o c y t e a c t i v a t i o n , PB MC w e r ep r e - i n c u b a t e d f o r 3 0 m i n a t room t e m p e r a t u r e w i t h i n c r e a s i n gc o n c e n t r a t i o n s o f t w o d i f f e r e n t p u r i f i e d m o n o c l o n a l I g A 1 a n dc u l t u r e d f o r 4 d a y s w i t h j a c a l i n .

I L - 2 p r o d u c t i o n w a s m e a s u r e d w i t h PB MC c u l t u r e d i nmedium RPMI 1 6 4 0 c o n t a i n i n g 2% FCS i n t h e p r e s e n c e o fj a c a l i n o r PHA. A f t e r 1 t o 7 d a y s , s u p e r n a t a n t s w e r e c o l l e c t e da n d t e s t e d f o r I L - 2 a c t i v i t y b y t h e CTLL2 c e l l a s s a y , a c c o r d i n gt o G i l l i s e t a l : ( 1 9 7 8 ) , u s i n g r e c o m b i n a n t I L - 2 a s a s t a n d a r d .L y m p h o c y t e m a r k e r sT h e n u m b e r o f c y t o p l a s m i c i m m u n o g l o b u l i n ( c I g ) c o n t a i n i n gc e l l s w a s d e t e r m i n e d i n 7 d a y j a c a l i n a n d P W M - s t i m u l a t e dc u l t u r e s o f u n s e p a r a t e d PB MC b y i m m u n o f l u o r e s c e n c e w i t h

t e t r a m e t h y l r h o d a m i n e ( T R I T C ) c o n j u g a t e d r a b b i t F ( a b ' ) 2 f r a g -m e n t s p o l y v a l e n t f o r human i m m u n o g l o b u l i n ( p r e p a r e d i n o u rl a b o r a t o r y ) . S I g - b e a r i n g c e l l s w e r e c o un t e d u s i n g t h e s a m e a n t i -i m m u n o g l o b u l i n c o n j u g a t e , a s p r e v i o u s l y d e s c r i b e d ( P r e u d ' -homme & L a b a u m e , 1 9 7 6 ) . T h e c e l l s w e r e s t u d i e d f o r T c e l la n t i g e n s u s i n g t h e MoAbs l i s t e d a b o v e a n d a n a n t i - C D 2 5M oA b ( a n t i - T a c , a k i n d g i f t o f P r o f e s s o r T . A . W a l d m a n n ) b yi n d i r e c t i m m u n o f l u o r e s c e n c e w i t h T R I T C - c o n j u g a t e d F ( a b ' ) 2f r a g m e n t s o f r a b b i t I g G a n t i - m o u s e I g G ( e x t e n s i v e l y a d s o r b e do n human i m m u n o g l o b u l i n , . p r e p a r e d i n o u r l a b o r a t o r y ) .D i f f e r e n t i a l r e d i s t r i b u t i o n e x p e r i m e n t s w e r e p e r f o r m e d a s p r e -v i o u s l y d e s c r i b e d ( P r e u d ' h o m m e e t a l . , 1 9 7 2 ) : PBMC w e r es t a i n e d a t 0 C b y F I TC - c o n j ug a t e d j a c a l i n , t h en i n cu b a te d a t3 7 C f o r 1 h , a n d r e s t a i n e d a t 0 C w i t h a n t i - C D l , C D 2 , C D 3 ,C D 4 , CD8 a n d CD38 M oA b s f o l l o w e d b y t h e TRITC-c o n j u g a t e d a n t i - m o u s e I g G F ( a b ' ) 2 f r a g m e n t s . I n t h e r e c i p r o c a le x p e r i m e n t s , t h e c e l l s w e r e f i r s t s t a i n e d i n t h e c o l d f o r t h e s ev a r i o u s T c e l l a n t i g e n s , i n c u b a t e d f o r 1 h a t 3 7 C , a n d r e s t a i n e da t 0 C b y F I T C - c o n j u g a t e d j a c a l i n .

RESULTST h e m i t o g e n i c r e s p o n s e o f n o r m a l u n s e p a r a t e d PBMC t oj a c a l i n w a s 3 3 7+15 x 1 0 3 c t / m i n ( c t / m i n i n u n s t i m u l a t e dc o n t r o l c u l t u r e s s u b t r a c t e d , m e a n s a n d s . d . f r o m 5 2 e x p e r i -m e n t s ) . T h i s r e s p o n s e w a s r e l a t e d t o t h e I g A - b i n d i n g p r o p e r t yo f j a c a l i n s i n c e i t w a s i n h i b i t e d b y I g A 1 i n a d o s e - d e p e n d e n tm a n n e r .B-T c e l l s p e c i f i c i t y o f j a c a l i n s t i m u l a t i o nT c e l l e n r i c h e d c e l l s ( w h i c h c o n t a i n e d a s m a l l p e r c e n t a g e o fm o n o c y t e s ) d i s p l a y e d a p r o l i f e r a t i o n s i m i l a r t o t h a t o f w h o l ePBMC ( n o t s h o w n ) . T c e l l d e p l e t e d c e l l s f a i l e d t o p r o l i f e r a t e .S i n c e T c e l l d e p l e t e d c e l l s a r e e n r i c h e d i n m o n o c y t e s w h i c h c o u l dh a v e b e en i n e x c e s s a n d p l a y a n i n h i b i t o r y r o l e , t h e y w e r e f u r t h e rd e p l e t e d o f m o n o c y t e s a n d t h e r e s p o n s e o f B c e l l s s u p p l e m e n t e dw i t h known p e r c e n t a g e s ( 1 % , 5 % , 1 0 % , 20 % a n d 5 0 % ) o fm o n o c y t e s w a s a s s a y e d . No p r o l i f e r a t i v e r e s p o n s e w a s o b s e r v e da t a n y m o n o c y t e c o n c e n t r a t i o n . CL L B l y m p h o c y t e s di d n otr e s p o n d t o j a c a l i n e i t h e r . T h e n u m b e r o f c I g - c o n t a i n i n g c e l l sw a s d e t e r m i n e d a f t e r c u l t u r e o f PBMC i n t h e p r e s e n c e o fv a r i a b l e a m o u n t s o f j a c a l i n . No s i g n i f i c a n t s t i m u l a t i o n o f B c e l lt e r m i n a l m a t u r a t i o n w a s o b s e r v e d , i n c o n t r a s t t o c o n t r o lc u l t u r e s i n t h e p r e s e n c e o f PWM ( T a b l e 1 ) .S t i m u l a t i o n o f T c e l l s u b p o p u l a t i o n s a n d m o n o c y t e r e q u i r e m e n tM o s t c e l l s r e c o v e r e d f r o m 7 - d a y c u l t u r e s o f u n s e p a r a t e d PBMCw i t h j a c a l i n w e r e C D 4 - p o s i t i v e T c e l l s ( T a b l e 2 ) . I n 4 - d a yc u l t u r e s , r e s u l t s w e r e s i m i l a r a n d C D 4 - p o s i t i v e c e l l s w e r e l a r g ec e l l s , w h e r e a s C D 8 - p o s i t i v e c e l l s w e r e s m a l l l y m p h o c y t e s . I nc o n t r a s t , PBMC s t i m u l a t e d b y PHA a n d , t o a l e s s e r e x t e n t ,t h o s e c u l t u r e d w i t h o u t m i t o g e n w e r e e n r i c h e d i n CD8 l y m p h o -c y t e s .M o n o c y t e d e p l e t i o n o f w h o l e PB MC r e s u l t e d i n a n a l m o s tc o m p l e t e a b r o g a t i o n o f t h e r e s p o n s e t o j a c a l i n . T c e l l s u b p o p u -l a t i o n s w e r e t h e r e f o r e e x a m i n e d w i t h a n d w i t h o u t m o n o c y t e s .A s s h o w n i n T a b l e 3 , CD4 a n d CD8 l y m p h o c y t e s o b t a i n e d b yp a n n i n g w i t h t h e r e l e v a n t m o n o c l o n a l a n t i b o d i e s a n d c o n t a i n -i n g 9 7 6+1 5 CD4 c e l l s a n d 2 - 7 + 1 4% CD8 c e l l s f o r CD4-e n r i c h e d c e l l s , a n d 92+1% CD8 a n d 1 0 6 + 4 . 7 CD4 c e l l s f o rC D 8 - e n r i c h e d c e l l s , r e s p e c t i v e l y , f a i l e d t o r e s p o n d t o j a c a l i n i nt h e a b s e n c e o f m o n o c y t e s . When i n c r e a s i n g p e r c e n t a g e s o f

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N . P i n e a u e t a l .T a b l e 1 . P e r c e n t a g e s o f c l g - c o n t a i n i n g c e l l s ( m e a n + s . d . ) i n j a c a l i n s t i m u l a t e d 7 - d a y c u l t u r e s o f u n f r a c t i o n a t e d PBMC

M i t o g e n J a c a l i nc o n c e n t r a t i o n PWM( p g / m l ) None 2 1 0 2 0 5 0 1 0 0 2 0 0 1 0

N o . o f e x p e r i m e n t s 9 3 9 3 1 1 1 2 1 1 7c I g 1 - 4 7 + 1 1 9 1 - 7 1 + 2 0 3 0 7 8 +0 3 205+ 1 7 1 55+143 190+209 1 0 2 + 1 - 6 1 0 - 8 + 5 - 5 3

c l g , c y t o p l a s m i c i m m u n o g l o b u l i n s .T a b l e 2 . S u r f a c e p h e n o t y p e o f j a c a l i n - s t i m u l a t e d PBMC ( 7 - d a y c u l t u r e s ,p e r c e n t a g e s , mean + s . d . )

C e l l s c u l t u r e d w i t hF r e s hc e l l s J a c a l i n PH A Medium a l o n e

CD2 9 2 - 5 + 1 - 9 9 8 2+ 3 5 9 8 7 +0 9 9 6 - 5 + 2 6( 4 ) ( 4 ) ( 4 ) ( 4 )

CD4 5 9 - 4 + 7 - 9 9 2 - 0 + 4 2 4 0 0 + 9 - 8 5 7 0+ 8 2( 7 ) ( 7 ) ( 7 ) ( 4 )

CD8 3 1 - 1 + 8 8 1 0 - 6 + 5 6 6 0 - 8 + 1 1 1 465+107( 7 ) ( 7 ) ( 7 ) ( 4 )S Ig 6 - 8 + 2 8 1 0 +0 0+0 0 - 7 + 0 6

( 6 ) ( 3 ) ( 3 ) ( 3 )Number o f e x p e r i m e n t s i s i n d i c a t e d i n p a r e n t h e s e s .

a u t o l o g o u s , b u t n o t o f a l l o g e n e i c m o n o c y t e s w e r e a d d e d , t h em i t o g e n i c r e s p o n s e o f CD4 l y m p h o c y t e s w a s r e s t o r e d . T h eo p t i m a l c o n c e n t r a t i o n o f m o n o c y t e s w a s 1 0 %. I n c o n t r a s t t oCD4 c e l l s , i s o l a t e d CD8 l y m p h o c y t e s d i d n o t r e s p o n d t o j a c a l i ni n t h e p r e s e n c e o f m o n o c y t e s , t h e m a r g i n a l s t i m u l a t i o n o b s e r v e dc o r r e s p o n d i n g l i k e l y t o c o n t a m i n a t i o n b y r e s i d u a l CD4 l y m -p h o c y t e s . C o n t r o l e x p e r i m e n t s w i t h PHA s h o w e d a s i g n i f i c a n tr e s p o n s e o f b o t h i s o l a t e d CD4 a n d CD8 l y m p h o c y t e s . T h i sm i t o g e n i c r e s p o n s e w a s f u r t h e r i n c r e a s e d b y t h e a d d i t i o n o fm o n o c y t e s .E f f e c t o f p r e - i n c u b a t i o n o f PBMC w i t h a n t i b o d i e s t o s u r f a c ea n t i g e n sPBMC p r e - i n c u b a t e d w i t h a n t i b o d i e s t o C D 1 , 2 , 3 , 4 , 8 o r 3 8w e r e c u l t u r e d f o r 4 d a y s w i t h a n d w i t h o u t j a c a l i n , w i t h o u tr e m o v a l o f t h e MoAb. A s e x p e c t e d , a n t i - C D 3 a n d a n t i - C D 3 8a n t i b o d i e s w e r e s t i m u l a t o r y . I n c u l t u r e s c o n t a i n i n g j a c a l i n , nos i g n i f i c a n t a d d i t i v e e f f e c t c o u l d b e d e t e c t e d n o r a n y i n h i b i t i o n o ft h e j a c a l i n r e s p o n s e . P r e - i n c u b a t i o n w i t h a m i x t u r e o f a n t i - C D 2a n d a n t i - C D 3 M o A b h a d n o e f f e c t on t h e j a c a l i n - i n d u c e dr e s p o n s e e i t h e r , i n c o n t r a s t t o PHA c o n t r o l s ( T a b l e 4 ) .D i f e r e n t i a l r e d i s t r i b u t i o n o f j a c a l i n a n d T c e l l s u r f a c e a n t i g e n sWhen PBMC s t a i n e d a t 0 C w i t h F I T C - c o n j u g a t e d j a c a l i n w e r ei n c u b a t e d a t 3 7 C f o r 1 h , c a p p i n g w a s o b s e r v e d o n mo s t c e l l s .R e s t a i n i n g i n t h e c o l d w i t h a n t i b o d i e s t o C D l , C D 2 , C D 3 , C D 4 ,CD8 a n d CD38 a n d T R I T C - t a g g e d a n t i - m u r i n e I g G F ( a b ' ) 2f r a g m e n t s d id n o t s h o w a n y s i g n i f i c a n t c o - c a p p i n g . T h e r e c i p r o -c a l e x p e r i m e n t s i n w h i c h t h e c e l l s w e r e f i r s t s t a i n e d f o r t h e s e

s u r f a c e a n t i g e n s , c a p p e d a n d r e s t a i n e d w i t h j a c a l i n y i e l d e ds i m i l a r n e g a t i v e r e s u l t s .E f f e c t o f j a c a l i n o n I L - 2 s e c r e t i o n a n d CD25 e x p r e s s i o nJ a c a l i n i n d u c e d b o t h t h e s e c r e t i o n o f I L - 2 a n d t h e e x p r e s s i o n o fC D 2 5 . C o m p a r i s o n o f t h e k i n e t i c s o f t h e r e s p o n s e s t o j a c a l i na n d PHA s h o w e d a o n e d a y s h i f t f o r DNA s y n t h e s i s a n d I L - 2s e c r e t i o n , w h i c h p e a k e d o n d a y 2 a n d d a y 3 , r e s p e c t i v e l y , i nP H A - s t i m u l a t e d c u l t u r e s a n d o n d a y 3 a n d d a y 4 a f t e rs t i m u l a t i o n b y j a c a l i n ( F i g . 1 ) . S i m i l a r l y , t h e p e r c e n t a g e o f c e l l se x p r e s s i n g CD25 p l a t e a u e d f r o m d a y 3 t o d a y 6 i n t h e PH Ac o n t r o l s w h e r e a s i t k e p t s l o w l y i n c r e a s i n g f r o m d a y 4 t o d a y 6w i t h j a c a l i n .

DISCUSSIONO n l y a f e w s t u d i e s p e r f o r m e d w i t h u n p u r i f i e d e x t r a c t s w e r ed e v o t e d t o j a c a l i n m i t o g e n i c a c t i v i t y . We t h e r e f o r e u n d e r t o o k as t u d y o f t h e r e s p o n s e o f n o r m a l human PBMC t o p u r i f i e dj a c a l i n . I t w a s f o u n d t o b e e s s e n t i a l l y a T l y m p h o c y t e a c t i v a t o ra n d we o b s e r v e d n o a c t i v a t i o n o f B c e l l s . T h i s i s a t v a r i a n c e w i t ht h e f i r s t r e p o r t ( B u n n - M o r e n o & C a m p o s - N e t o , 1 9 8 1 ) b u ta g r e e s w i t h a m o r e r e c e n t w o r k s h o w i n g a n i n h i b i t i o n o f B c e l lm a t u r a t i o n i n t o p l a s m a c e l l s ( S a x o n e t a l . , 1 9 8 7 ) . T h e r e a r es e v e r a l p o s s i b l e e x p l a n a t i o n s f o r t h e s e d i s c r e p a n c i e s . I t w a ss u g g e s t e d t h a t d i f f e r e n c e s i n t h e human i m m u n o g l o b u l i n b i n d -i n g s p e c i f i c i t y o f JCE c ou l d b e t h e c o n s e q u e n c e o f g e o g r a p h i cv a r i a b i l i t y ( K o b a y a s h i e t a l . , 1 9 8 8 ) a n d t h e s a m e m i g h t a p p l y t om i t o g e n i c s p e c i f i c i t y . B o t a n i c a l d i f f e r e n c e s may a l s o p l a y a r o l e .Among t h e s p e c i e s o f A r t o c a r p u s c u l t i v a t e d f o r t h e i r e d i b l ef r u i t s , t h e b o t a n i s t s c l e a r l y d i s t i n g u i s h t h e j a c k ( A . h e t e r o -p h y l l u s , m o s t common s y n o n y m s A . i n t e g r i f o l i a a n d A . i n t e g r a )f r o m t h e b r e a d f r u i t ( A . a l t i l i s ) a n d t h e c h a m p e d a k ( A . i n t e g e r )( Q u i s u m b i n g , 1 9 5 1 ; J a r r e t , 1 9 5 9 ; P u r s e g l o v e , 1 9 6 8 ; B a r r a u ,1 9 7 6 ) . H o w e v e r , i d e n t i f i c a t i o n o f t h e j a c k i s d i f f i c u l t a n d n a t u r a lo r a r t i f i c i a l h y b r i d i z a t i o n b e t w e e n t h e j a c k a n d t h e c h a m p e d a ki s known t o o c c u r . I t c o u l d r e s u l t i n s e e d e x t r a c t s w i t hi m m u n o l o g i c a l p r o p e r t i e s d i f f e r e n t f r o m t h o s e o f j a c k f r u i ts e e d s . I t m u s t a l s o b e p o i n t e d o u t t h a t t h e p r e s e n t s t u d y wasp e r f o r m e d w i t h p u r i f i e d j a c a l i n a n d n o t w i th c r u de e x t r a c t s . Wes h o w e d ( u n p u b l i s h e d r e s u l t s ) t h a t JCE c o n t a i n s m i t o g e n i cm o l e c u l e s o t h e r t h a n j a c a l i n ( u n r e a c t i v e w i t h I g A a n d a n t i -j a c a l i n a n t i b o d i e s a n d w i t h o u t t h e c h a r a c t e r i s t i c s u b u n i t com-p o s i t i o n o f j a c a l i n ) . C o n t r a r i l y t o j a c a l i n , t h e r e s p o n s e t o t h e s em o l e c u l e s w a s i n h i b i t e d b y a n t i - C D 2 a n d a n t i - C D 3 a n t i b o d i e sa n d t h e i r s u b p o p u l a t i o n s p e c i f i c i t y m i g h t b e d i f f e r e n t . V a r i a -t i o n s i n s u c h n o n - j a c a l i n m o l e c u l e s may e x p l a i n d i f f e r e n c e sb e t w e e n c r u d e e x t r a c t s .

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Human CD4 c e l l s t i m u l a t i o n b y j a c a l i nT a b l e 3 . P r o l i f e r a t i v e r e s p o n s e t o j a c a l i n ( c t / m i n x 1 0 3 , mean a n d s . d . ) o f CD4 a n d CD8 l y m p h o c y t e s w i t ha n d w i t h o u t m o n o c y t e s

M i t o g e nM o n o c y t e s N o . o fT c e l l s ( % ) e x p e r i m e n t s N o n e J a c a l i n PH ACD4 < 1 7 0 6 + 0 - 7 4+ 2 2 3 9+ 1 02 3 0 6 + 0 7 1 1 1+97 2 3 1+295 3 0 6 + 0 6 154+143 373+101 0 4 0 6 + 0 6 22+184 535+332

2 0 3 0 7 + 0 6 1 8 8 + 1 4 - 4 44+22C o r r e s p o n d i n g u n s e p a r a t e d PBMC ND 7 1 - 4 + 0 0 8 2 5 - 7 + 1 8 4 3 9 - 4 + 2 1 7CD8

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4 2 4 N . P i n e a u e t a l .i n CD4 l y m p h o c y t e s ; a n d ( i i i ) t h e r e s p o n s e t o j a c a l i n o f PB MCf r o m H I V - i n f e c t e d p a t i e n t s a t a l l c l i n i c a l s t a g e s c o r r e l a t e dp o s i t i v e l y w i t h t h e n u m b e r o f CD4 l y m p h o c y t e s a n d n e g a t i v e l yw i t h t h e p e r c e n t a g e o f CD8 l y m p h o c y t e s ( P i n e a u e t a l . , 1 9 8 9 ) .M o n o c y t e - d e p l e t e d CD4 a n d CD8 p o p u l a t i o n s b o t hs h o w e d a s i g n i f i c a n t r e s p o n s e t o PHA, w h i c h w a s i n c r e a s e dw h e n m o n o c y t e s w e r e a d d e d . A l t h o u g h i t i s c l a s s i c a l t h a t T c e l l sd o n o t p r o l i f e r a t e a f t e r m i t o g e n s t i m u l a t i o n i n t h e a b s e n c e o fm o n o c y t e s ( R o s e n s t r e i c h , F a r r a r & D o u g h e r t y , 1 9 7 6 ; Habu &R a f f , 1 9 7 7 ) o r o f o t h e r a c c e s s o r y c e l l s s u c h a s B c e l l s a n dm y e l o i d c e l l s ( T h i e l e & L i p s k y , 1 9 8 2 ; S c a l a e t a l . , 1 9 8 4 ;W a k a s u g i e t a l . , 1 9 8 4 ) , t h i s i s i n f a c t n o t s u r p r i s i n g s i n c em o n o c y t e - d e p l e t e d T c e l l s w e r e p r e v i o u s l y s h o w n t o r e s p o n d t oPH A w h e n c u l t u r e d u n d e r t h e s a m e t e c h n i c a l c o n d i t i o n s a s i nt h e p r e s e n t w o r k ( M i l l s e t a l . , 1 9 8 5 ) . T h i s c ou ld b e e x p l a i n e d b ya r o l e o f t h e s m a l l n u m b e r o f r e s i d u a l m o n o c y t e s o r b y t h er e c r u i t m e n t o f T c e l l s t h e m s e l v e s a s a c c e s s o r y c e l l s , a s d o c u -m e n t e d b y O u d r h i r i e t a l . ( 1 9 8 5 ) . I n c o n t r a s t , j a c a l i n - i n d u c e dr e s p o n s e w a s v i r t u a l l y a b o l i s h e d b y m o n o c y t e d e p l e t i o n . Mono-c y t e - T c e l l i n t e r a c t i o n s i n j a c a l i n r e s p o n s e a r e p r o b a b l y c o m -p l e x , s i n c e j a c a l i n - p r i m e d m o n o c y t e s d i d n o t s t i m u l a t e T c e l l sa n d s i n c e j a c a l i n h a d t o b e p r e s e n t i n t h e c u l t u r e f o r a t l e a s t t h ef i r s t t w o d a y s t o i n d u c e T c e l l p r o l i f e r a t i o n ( d a t a n o t s h o w n ) .T o g e t h e r w i t h i t s s t r o n g m o n o c y t e r e q u i r e m e n t a n d t h e s h i f t i nt h e k i n e t i c s o f DNA s y n t h e s i s , CD25 e x p r e s s i o n a n d I L - 2s e c r e t i o n , j a c a l i n a l s o d i f f e r s f r o m PH A i n t h i s r e s p e c t s i n c e av e r y s h o r t i n c u b a t i o n w i t h PH A i s s u f f i c i e n t t o i n d u c e ap r o l i f e r a t i v e r e s p o n s e ( F a g u e t , 1 9 7 7 ) .J a c a l i n b i n d s a l l b l o o d c e l l s , a s s h o w n b y i m m u n o f l u o r e s -c e n c e w i t h F I T C - t a g g e d j a c a l i n ( u n p u b l i s h e d r e s u l t s ) , a n d y e to n l y CD4 T c e l l s p r o l i f e r a t e u n d e r t h e p r e s e n t t e c h n i c a lc o n d i t i o n s . We o b s e r v e d n e i t h e r s i g n i f i c a n t c o - c a p p i n g o f a y e tl i m i t e d n u m b e r o f s u r f a c e a n t i g e n s a n d o f j a c a l i n - b i n d i n g s i t e s ,n o r a n y e n h a n c i n g o r i n h i b i t o r y e f f e c t o n t h e j a c a l i n r e s p o n s e o ft h e p r e i n c u b a t i o n o f PBMC w i t h t h e c o r r e s p o n d i n g M o A b s .S t u d y o f t h e i n t e r a c t i o n o f j a c a l i n w i t h o t h e r T c e l l s u r f a c ea n t i g e n s , e s p e c i a l l y t h o s e k n o w n t o b e i n v o l v e d i n T c e l la c t i v a t i o n , i s p r e s e n t l y u n d e r t a k e n . W h a t e v e r i t s m e c h a n i s m ,t h e o p e r a t i o n a l m i t o g e n i c s p e c i f i c i t y o f j a c a l i n f o r CD4 T c e l l sm a k e i t p o t e n t i a l l y a u s e f u l t o o l f o r a f u n c t i o n a l s t u d y o f t h i sl y m p h o c y t e s u b s e t .

ACKNOWLEDGMENTSWe t h a n k Dr A . L e Meau d e T a l e nc e a n d P r o f e s s o r T . A . Waldmann f o rt h e g i f t o f r e c o m b i n a n t I L - 2 a n d a n t i - T a c MoAb, r e s p e c t i v e l y ; D r s J . C .L e c r o n a n d P . G o u b e d e L a f o r e s t f o r t h e i r h e l p i n t h e s t u d y ; a n dP r o f e s s o r s J . B a r r a u a n d J . L . P o u s s e t f o r h e l p f u l d i s c u s s i o n s .

REFERENCESA U C O U T U R I E R , P . , M I H A E S C O , E . , M I H A E S C O , C . & P R E U D ' H O M M E , J . L .( 1 9 8 7 ) C h a r a c t e r i z a t i o n o f j a c a l i n , t h e human I g A a n d IgD b i n d i n gl e c t i n f r o m j a c k f r u i t . M o l e c . I m m u n o l . 2 4 , 5 0 3 .A U C O U T U R I E R , P . , D U A R T E , F . , M I H A E S C O , E . , P I N E A U , N . & P R E U D ' -

HOMME, J . L . ( 1 9 8 8 ) J a c a l i n , t h e human I g A l a n d IgD p r e c i p i t a t i n gl e c t i n , a l s o b i n d s I g A 2 o f b o t h a l l o t y p e s . J . i m m u n o l . M e t h o d s ,1 1 3 , 1 8 5 .A U C O U T U R I E R , P . , P I N E A U , N . , B R U G I E R , J . C . , M I H A E S C O , E . , D U A R T E ,F . , S K V A R I L , F . & P R E U D ' H O M M E , J . L . ( 1 9 8 9 ) J a c a l i n : a n e w t o o l i n

i m m u n o c h e m i s t r y a n d c e l l u l a r i m m u n o l o g y . J . c l i n . L a b . A n a l . 3 , 2 4 4 .B A R R A U , J . ( 1 9 7 6 ) B r e a d f r u i t a n d r e l a t i v e s . I n E v o l ut i o n o f C r o p P l a n t s( e d . b y N . W. S i m m o n s ) p . 2 0 1 . L o n g m a n , L o n d o n .

B U N N - M O R E N O , M.M. & C A M P o s - N E T O , A . ( 1 9 8 1 ) L e c t i n ( s ) e x t r a c t e df r o m s e e d s o f A r t o c a r p u s i n t e g r i f o l i a ( j a c k f r u i t ) : p o t e n t a n d s e l e c t i v es t i m u l a t o r ( s ) o f d i s t i n c t human T a n d B c e l l f u n c t i o n s . J . I m m u n o l .1 2 7 , 4 2 7 .

C R A N E , I . , L E U N G , H . , B A R W I C K , S . , P A R T I , S . & M A E G E R , A . ( 1 9 8 4 ) Thep r e p a r a t i o n o f i n t e r f e r o n g a m m a - p r o d u c i n g T - c e l l h y b r i d o m a s f r o mj a c a l i n - s t i m u l a t e d T l y m p h o c y t e s a n d t h e SH 9 T - c e l l l i n e . I m m u n o -l o g y , 5 3 , 8 5 5 .

F A G U E T , G . B . ( 1 9 7 7 ) M e c h a n i s m s o f l y m p h o c y t e a c t i v a t i o n . B i n d i n gk i n e t i c s o f p h y t o h e m a g g l u t i n i n t o human l y m p h o c y t e s . J . b i o l . C h e m .2 5 2 , 2 0 9 5 .G A T T A S S , C . R . , G H O B R I A L , I . & B U N N - M O R E N O , M.M. ( 1 9 8 8 ) S p e c i f i ci n h i b i t i o n o f OKT8 b i n d i n g t o p e r i p h e r a l b l o o d m o n o n u c l e a r c e l l s b yj a c a l i n . I m m u n o l . L e t t . 1 7 , 1 3 3 .G I L L I S , S . , F E R M , M . , O u , W. & S M I T H , K . A . ( 1 9 7 8 ) T c e l l g r o w t h f a c t o r

p a r a m e t e r s o f p r o d u c t i o n a n d a q u a n t i t a t i v e m i c r o a s s a y f o r a c t i v i t y .J . I m m u n o l . 1 2 0 , 2 0 2 7 .

H A B U , S . & R A F F , M. ( 1 9 7 7 ) A c c e s s o r y c e l l d e p e n d a n c e o f l e c t i n - i n d u c e dp r o l i f e r a t i o n o f m o u s e T l y m p h o c y t e s . E u r . J . I m m u n o l . 7 , 4 5 1 .J A R R E T , F . M . ( 1 9 5 9 ) S t u d i e s i n A r t o c a r p u s a n d a l l i e d g e n e r a . I I I . Ar e v i s i o n o f A r t o c a r p u s s u b g e n u s a r t o c a r p u s . J . A r n o l d A r b o r e t u m ,1 1 , 3 2 7 .K O B A Y A S H I , K . , KONDOH, H . , HAGIWARA, K . & V A E R M A N , J . P . ( 1 9 8 8 )

J a c a l i n : c h a o s i n i t s i m m u n o g l o b u l i n - b i n d i n g s p e c i f i c i t y . M o l e c .I m m u n o l . 2 5 , 1 0 3 7 .L E I V E S T A D , T . , H A L V O R S E N , R . , G A U D E R N A C H , G . & T H O R S B Y , , E . ( 1 9 8 8 )

R e q u i r e m e n t s f o r p h y t o h a e m a g g l u t i n i n a c t i v a t i o n o f r e s t i n g p u r eCD4+ a n d CD8+ T c e l l s . S c a n . J . I m m u n o l . 2 7 , 5 6 5 .M I L L S , G . B . , L E E , J . W . W . , C H E U N G , R . K . & G E L F A N D , E . W . ( 1 9 8 5 )

C h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e r e q u i r e m e n t s f o r human T c e l l m i t o g e n e s i s b yu s i n g s u b o p t i m a l c o n c e n t r a t i o n s o f p h y t o h e m a g g l u t i n i n . J . I m m u n o l .1 3 5 , 3 0 8 7 .

M O R E T T A , A . , P A N T A L E O , G . , M A G G I , E . & M I N G A R I , M . C . ( 1 9 8 4 )R e c e n t a d v a n c e s i n t h e p h e n o t y p i c a n d f u n c t i o n a l a n a l y s i s o f humanT l y m p h o c y t e s . S e m i n . H e m a t o l . 4 , 2 5 7 .

M O R E I R A , R . D . & A I N O U Z , I . L . ( 1 9 8 1 ) L e c t i n s f r o m s e e d s o f j a c k f r u i t( A r t o c a r p u s i n t e g r i o l i a L ) : i s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n o f t w o i s o l e c t i n sf r o m t h e a l b u m i n f r a c t i o n . B i o l . p l a n t . ( P r a g u e ) 2 3 , 1 8 6 .

M O S S A L A Y I , M . D . , GOUBE DE L A F O R E S T , P . , G U I L H O T , F . , K A L L I L , G . ,N T Y A M E , E . , L A R R O Q U E , V . , F E L L O U S , M. & T A N Z E R , J . ( 1 9 8 5 ) A g a rh u m a n T c e l l c o l o n y g r o w t h p r o m o t e d b y a B + n u l l d e r i v e dl y m p h o k i n e d i s t i n c t f r o m I L 2 . J . I m m u n o l . 1 3 4 , 2 4 0 0 .

O U D R H I R I , N . , F A R C E T , J . P . , G O U R D I N , M . F . , D I V I N E , M . , B O U Q U E T , J . ,F R A D E L I Z I , D . & R E Y E S , F . ( 1 9 8 5 ) M e c h a n i s m o f a c c e s s o r y c e l lr e q u i r e m e n t i n i n d u c i n g I L - 2 r e s p o n s i v e n e s s b y human T4 l y m p h o -c y t e s t h a t g e n e r a t e c o l o n i e s u n d e r PHA s t i m u l a t i o n . J . I m m u n o l .1 3 5 , 1 8 1 3 .

P I N E A U , N . , B R U G I E R , J . C . , B R E U X , J . P . , B E c Q - G I R A U D O N , B . , D E S -C A M P S , J . M . , A U C O U T U R I E R P . & P R E U D ' H O M M E , J . L . ( 1 9 8 9 ) S t i m u l a -t i o n o f p e r i p h e r a l b l o o d l y m p h o c y t e s o f H I V - i n f e c t e d p a t i e n t s b yj a c a l i n , a l e c t i n m i t o g e n i c f o r human CD4+ l y m p h o c y t e s . AIDS ( i np r e s s ) .

P R E U D ' H O M M E , J . L . & L A B A U M E , S . ( 1 9 7 6 ) D e t e c t i o n o f s u r f a c e immuno-g l o b u l i n s a n d on human c e l l s b y d i r e c t i m m u n o f l u o r e s c e n c e . I n : I nv i t r o M e t h o d s i n C e l l M e d i a t e d a n d Tumor I m m u n i t y ( e d . b y B . R .B l o o m & J . R . D a v i d ) p . 1 5 5 . A c a d e m i c P r e s s , NY .

P R E U D ' H O M M E , J . L . , N E A U P O R T - S A U T E S , C . , P I A T , S . , S I L V E S T R E , D . &K O U R I L S K Y , F . M . ( 1 9 7 2 ) I n d e p e n d a n c e o f HLA a n t i g e n s a n di m m u n o g l o b u l i n d e t e r m i n a n t s on t he s u rf a ce o f human l y m p h o i dc e l l s . E u r . J . I m m u n o l . 2 , 2 9 7 .

P U R S E G L O V E , I . W . ( 1 9 6 8 ) T r o p i c a l C r o p s . D i c o t y l e d o n s 2 . L o n g m a n s ,L o n d o n .

Q U I S U M B I N G E . ( 1 9 5 1 ) . M e d i c i n a l p l a n t s o f t h e P h i l i p p i n e s . R e p u b .P h i l i p p i n e s D e p . A g r i c u l . n a t l . R e s o u r c e s T e c h n i c . B u l l . 1 6 , 2 2 6 .R O S E N S T R E I C H , D . L . , F A R R A R , J . J . & D O U G H E R T Y , S . ( 1 9 7 6 ) A b s o l u t em a c r o p h a g e d e p e n d e n c y o f T l y m p h o c y t e a c t i v a t i o n b y m i t o g e n s . J .

I m m u n o l . 1 1 6 , 1 3 1 .

8/23/2019 Jacal In

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Human CD4 c e l l s t i m u l a t i o n b y j a c a l i n 4 2 5S A X O N , A . , F E L D H A U S , J . & R O B I N S , R . A . ( 1 9 7 6 ) S i n g l e s t e p s e p a r a t i o n

o f human T a n d B c e l l s u s i n g AET t r e a t e d SRBC r o s e t t e s . J . i m m u n o l .M e t h o d s , 1 2 , 2 8 5 .

S A X O N , A . , T s u i , F . & M A R T I N E Z - M A Z A , 0 . ( 1 9 8 7 ) J a c a l i n , a n I g A -b i n d i n g l e c t i n , i n h i b i t s d i f f e r e n t i a t i o n o f human B c e l l s b y b o t h d i r e c te f f e c t a n d b y a c t i v a t i n g T - s u p p r e s s o r c e l l s . C e l l . I m m u n o l . 1 0 4 , 1 3 4 .S C A L A , G . , K U A N G , D . , H A L L , R . A . , M U C H M O R E , A . V . & O P P E N H E I M ,J . J . ( 1 9 8 4 ) A c c e s s o r y c e l l f u n c t i o n o f human B c e l l s . I . P r o d u c t i o n o f

b o t h i n t e r l e u k i n - l - l i k e a c t i v i t y a n d i n t e r l e u k i n 1 i n h i b i t o r y f a c t o r b ya n E B V - t r a n s f o r m e d human B c e l l l i n e . J . e x p . M e d . 1 5 9 , 1 6 3 7 .

T H I E L E , D . L . & L I P S K Y , P . E . ( 1 9 8 2 ) T h e a c c e s s o r y f u n c t i o n o f p h ag o -c y t i c c e l l s i n human T c e l l a n d B c e l l r e s p o n s e s . J . I m m u n o l . 1 2 9 , 1 0 3 3 .W A K A S U G I , H . , H A R E L , A . , D I K H E L A R , M . C . , F R A D E L I Z I , D . & T U R S Z , T .( 1 9 8 4 ) A c c e s s o r y f u n c t i o n a n d i n t e r l e u k i n I p r o d u c t i o n b y humanl e u k e m i c c e l l l i n e s . J . I m m u n o l . 1 3 2 , 2 9 3 9 .W E R N E T , P . & K U N K E L , H . G . ( 1 9 7 3 ) A n t i b o d i e s t o a s p e c i f i c s u r f a c ea n t i g e n o f T c e l l s i n human s e r a i n h i b i t i n g m i x e d l e u k o c y t e c u l t u r er e a c t i o n s . J . e x p . M e d . 1 3 8 , 1 0 2 1 .

W Y S O C K I , L . J . & S A T O , V . L . ( 1 9 7 8 ) ' P a n n i n g ' f o r l y m p h o c y t e s : a m e t h o df o r c e l l s e l e c t i o n . P r o c . n a t l . A c a d . S c i . U S A , 7 5 , 2 8 4 4 .