ITER DIAGNOSTICO ITER DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO DELLE MICROBIOLOGICO DELLE INFEZIONI DELLE BASSE VIE INFEZIONI DELLE BASSE VIE GENITALI FEMMINILI GENITALI FEMMINILI
ITER DIAGNOSTICO ITER DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO DELLE MICROBIOLOGICO DELLE
INFEZIONI DELLE BASSE VIE INFEZIONI DELLE BASSE VIE GENITALI FEMMINILIGENITALI FEMMINILI
Nella pratica quotidianaNella pratica quotidiana
Diagnosi clinica presuntaDiagnosi clinica presunta Esame microscopico a fresco raramente Esame microscopico a fresco raramente
eseguito in ambulatorioeseguito in ambulatorio Prelievi inadeguatiPrelievi inadeguati
(tecnica, conservazione, trasporto)(tecnica, conservazione, trasporto) Specie microbica non identificataSpecie microbica non identificata Antibiogramma/antimicogrammaAntibiogramma/antimicogramma
spesso eseguito in routinespesso eseguito in routine
Punti criticiPunti critici
Modalità di prelievoModalità di prelievo Valutazione del secreto vaginaleValutazione del secreto vaginale Trasporto e conservazione dei campioniTrasporto e conservazione dei campioni Mancanza di informazioni sulla pazienteMancanza di informazioni sulla paziente Mancanza di informazioni sul secreto Mancanza di informazioni sul secreto
vaginalevaginale Interpretazione dei risultatiInterpretazione dei risultati
Tampone di secrezione vaginale
• Introdurre il tampone fino al collo dell’utero
• Utilizzare uno speculo bivalve sterile monouso
• Evitare di toccare le zone esterne
1. Cervice
2. Vagina
3. Retto
4. Vescica
5. Tampone
6. Speculo
7. Utero
Modalità di prelievoModalità di prelievo
Vaginale
Vaginale
Modalità di prelievoModalità di prelievo
Non essere in periodo mestrualeNon essere in periodo mestruale Non eseguire irrigazioni vaginali nelle 24 ore Non eseguire irrigazioni vaginali nelle 24 ore
precedenti l’esameprecedenti l’esame Aver cessato qualsiasi terapia da almeno 5 giorniAver cessato qualsiasi terapia da almeno 5 giorni Introdurre il tampone fino al collo dell’utero, Introdurre il tampone fino al collo dell’utero,
evitando di toccar le zone esterneevitando di toccar le zone esterne
Norme a cui attenersi per rendereattendibile l’esito dell’esame:
Secreto vaginale:Secreto vaginale:potenziali agenti eziologicipotenziali agenti eziologici
• Stafilococchi coagulasinegativi
• Enterococchi• Enterobatteri
Solo in assenza di lattobacilli e con uno stato flogistico
testimoniato dalla presenzadi un elevato numero di
leucociti
• Gardnerella vaginalis (solo in caso di vaginosi) • Streptococcus agalactiae (solo in gravidanza)• Staphylococcus aureus ( TSS ??? )• Listeria spp (solo in gravidanza)• Anaerobi ( ma chi li richiede ???) • Streptococcus pyogenes (età pediatrica)• Haemophilus spp. (età pediatrica)• Miceti• Trichomonas vaginalis
Modalità di prelievoModalità di prelievo
inserire il tampone nell’endocerviceinserire il tampone nell’endocerviceper circa 1 cm per circa 1 cm
per la ricerca di Chlamydia trachomatis il tampone per la ricerca di Chlamydia trachomatis il tampone va inserito per 1.5 cm oltre la giunzione squamosava inserito per 1.5 cm oltre la giunzione squamosa
Cervicale
Cervicale
Prelievo effettuato a livello endocervicale previa introduzione di uno speculum bivalve sterile
Secreto cervicale:Secreto cervicale:potenziali agenti eziologicipotenziali agenti eziologici
Neisseria gonorrhoeaeNeisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatisChlamydia trachomatis AnaerobiAnaerobi Micoplasmi (> 10Micoplasmi (> 1044 UFCml) UFCml)
UretraleUretrale
Modalità di prelievoModalità di prelievo
non aver urinato da almeno 3 orenon aver urinato da almeno 3 ore il tampone deve essere introdotto per circa 1 cmil tampone deve essere introdotto per circa 1 cm
Prelievo effettuato introducendo un tampone sottile nell’uretra
Secreto uretrale:Secreto uretrale:potenziali agenti eziologicipotenziali agenti eziologici
Gardnerella vaginalis Gardnerella vaginalis Streptococcus agalactiae Streptococcus agalactiae Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus ee SNC SNC EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae Neisseria gonorrhoeaeNeisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatisChlamydia trachomatis MicoplasmiMicoplasmi MicetiMiceti Trichomonas vaginalisTrichomonas vaginalis
Informazioni necessarieInformazioni necessarieal Laboratorio al Laboratorio
Età Età SintomatologiaSintomatologia GravidanzaGravidanza Interruzioni di gravidanzaInterruzioni di gravidanza ContraccettiviContraccettivi Farmaci assunti nell’ultimo meseFarmaci assunti nell’ultimo mese pH vaginalepH vaginale ““Fishy odor”Fishy odor” test test Esame microscopico a frescoEsame microscopico a fresco
TrasportoTrasportoe conservazione dei campionie conservazione dei campioni
Utilizzare terreni di trasporto idoneiUtilizzare terreni di trasporto idoneiper le differenti ricerche per le differenti ricerche
Inviare al laboratorio di riferimentoInviare al laboratorio di riferimentonel più breve tempo possibilenel più breve tempo possibile
Esempi di terreni di trasportoEsempi di terreni di trasporto ““AmiesAmies” per la ricerca di germi comuni aerobi, ” per la ricerca di germi comuni aerobi,
G.vaginalisG.vaginalis, , ListeriaListeria spp, miceti spp, miceti ““ANA Porta-germANA Porta-germ” per la ricerca” per la ricerca
di anaerobidi anaerobi ““MTBMTB” per la ricerca di micoplasmi ” per la ricerca di micoplasmi ““GonocultGonocult” per la ricerca di ” per la ricerca di N.gonorrhoeaeN.gonorrhoeae Soluzione fisiologica sterile per la ricercaSoluzione fisiologica sterile per la ricerca
di di Trichomonas vaginalisTrichomonas vaginalis Concordare con il laboratorio il terrenoConcordare con il laboratorio il terreno
per la ricerca di per la ricerca di C.trachomatisC.trachomatis
Esami in ambulatorioEsami in ambulatorio
“Fishy odor” test
“Fishy odor” testa
frescoa
fresco
Test del pH
Test del pH
Esame microscopico a frescoEsame microscopico a fresco
stemperare subito il tampone in 0.5 mlstemperare subito il tampone in 0.5 mldi soluzione fisiologica steriledi soluzione fisiologica sterile
porre 2 gocce su un vetrino e coprireporre 2 gocce su un vetrino e coprirecon copri-oggettocon copri-oggetto
osservare con obiettivo 40Xosservare con obiettivo 40X
ESAME A FRESCO DELLE SECREZIONI VAGINALIESAME A FRESCO DELLE SECREZIONI VAGINALI
““Fishy odor Fishy odor “ test“ test
emulsionare la secrezione vaginaleemulsionare la secrezione vaginalecon una soluzione di KOH al 10%con una soluzione di KOH al 10%
se positivo: sviluppo del caratteristico se positivo: sviluppo del caratteristico odore di pesceodore di pesce
Test del pHTest del pH
Va misurato prima dell’inserimentoVa misurato prima dell’inserimentodello speculum sulle pareti vaginali dello speculum sulle pareti vaginali laterali utilizzando cartine indicatrici laterali utilizzando cartine indicatrici con range 3.5-5con range 3.5-5
VALUTAZIONE DEL Ph VAGINALEVALUTAZIONE DEL Ph VAGINALE
Ruolo del laboratorioRuolo del laboratoriodi Microbiologiadi Microbiologia
Ricevere il campione con richiesta specifica Ricevere il campione con richiesta specifica di sospetto clinicodi sospetto clinico
Esaminare i campioni biologici Esaminare i campioni biologici Isolare e identificare il microrganismo Isolare e identificare il microrganismo Valutarne il ruolo eziologicoValutarne il ruolo eziologico Eseguire il saggio di sensibilità in vitroEseguire il saggio di sensibilità in vitro
agli antimicrobici solo se necessario agli antimicrobici solo se necessario (secondo le Linee guida del NCCLS)(secondo le Linee guida del NCCLS)
Esami in laboratorioEsami in laboratorio
Esami colturaliEsami
colturaliColorazionedi Gram
Colorazionedi Gram
Biologia molecolar
e (?)
Biologia molecolar
e (?)
Colorazione di GramColorazione di GramFasi della colorazione Fasi della colorazione Struttura della parete
Gram-positivi
Gram-negativi
Esame microscopico Esame microscopico
Colorazionedi Gram
Gardnerella vaginalis (??)
Coccobacilli (Coccobacilli (Gardnerella vaginalisGardnerella vaginalis su su “clue cell”)“clue cell”)
• agar McConkey (Enterobatteri)
• agar sangue (G. vaginalis)
• agar cioccolato (Gonococco)
• agar sale mannite (Stafilococchi)
• agar sangue (Streptococchi )
Esame colturale per batteriEsame colturale per batteri
Gram-positivi
Gram-negativi
Gallerie API 20 EGallerie API 20 NEGallerie API NH
Prove biochimiche:TSI agar
Indolo e/oMobilità in SIM agar
Identificazione microbicaIdentificazione microbica
Batteri Gram-negativi
Gallerie API Staph (bioMérieux)
Identificazione microbicaIdentificazione microbica
Staphylococcus aureusMannite+ e Coagulasi+
Test coagulasi Test catalasi
Eziologia micoticaEziologia micotica
CandidaCandida spp spp Torulopsis Torulopsis (Candida)(Candida) glabrata glabrata Torulopsis Torulopsis (Candida)(Candida) inconspicua inconspicua Saccharomyces cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae
(Incubazione a 37° per 2-5 gg)
Lieviti: esame colturaleLieviti: esame colturale
Sabouraud dextrosio agar
• Germ tube (C.albicans)
• PDA agar (produzione clamidospore)
Lieviti: identificazioneLieviti: identificazionedi genere e speciedi genere e specie
Gallerie API(assimilazione zuccheri)
L’antibiogrammaL’antibiogramma
Non farlo in routine Non farlo in routine E’ necessario farlo solo in casi particolari E’ necessario farlo solo in casi particolari
(es. (es. S. agalactiaeS. agalactiae in donne in gravidanza) in donne in gravidanza)
Linee guida
Tre validi motivi per l’esecuzione Tre validi motivi per l’esecuzione dell’antimicogrammadell’antimicogramma
Determinare la causa del fallimento terapeutico Determinare la causa del fallimento terapeutico in pazienti con candidosi mucocutanee, che in pazienti con candidosi mucocutanee, che non traggono benefici dai trattamenti non traggono benefici dai trattamenti convenzionaliconvenzionali
Ceppi di Ceppi di C. albicansC. albicans isolati da pazienti isolati da pazienticon candidemia persistente o candidosi con candidemia persistente o candidosi disseminata progressiva, malgrado la terapiadisseminata progressiva, malgrado la terapia
Saggi periodici su ceppi di Saggi periodici su ceppi di Candida spp.Candida spp. isolati isolati da siti sterili sono utili per terapie empiricheda siti sterili sono utili per terapie empiriche